多發(fā)性硬化患者血清和腦脊液IL-33的表達(dá)及其臨床意義

韓靜賢， 龐 麗， 王 勇

（1.鄭州市第七人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000；2.林州市腫瘤醫(yī)院，河南 林州 456550）

多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘為主要特征的自身免疫性疾病。免疫細(xì)胞進(jìn)入MS患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)后，會引發(fā)炎癥，促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)常駐免疫細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素33（interleukin-33，IL-33）[1]。星形膠質(zhì)細(xì)胞IL-33表達(dá)增加可激活小膠質(zhì)細(xì)胞在不同狀態(tài)下產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子或抗炎細(xì)胞因子。IL-33還能夠直接作用于少突膠質(zhì)細(xì)胞，在髓鞘損傷和修復(fù)中起關(guān)鍵作用[2]。目前，國內(nèi)外已有大量IL-33與實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎關(guān)系的相關(guān)研究，但對于IL-33與MS的關(guān)系的研究甚少，IL-33水平與MS之間的確切關(guān)系尚不清楚。為此，本研究擬探討IL-33在MS中的表達(dá)作用。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年3月—2020年4月鄭州市第七人民醫(yī)院MS患者122例（MS組），其中男42例、女80例，年齡（35.36±10.95）歲。所有患者均符合2017年McDonald成人MS診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，治療前3個月未服用免疫抑制劑或干擾素類藥物。排除其他免疫性疾病、腫瘤等患者。122例MS患者中，病程≤1年者39例，病程＞1～＜5年者68例，病程≥5年者15例。另選取同期鄭州市第七人民醫(yī)院非炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者122例（對照組），其中男42例、女80例，年齡（36.11±12.36）歲，包括偏頭痛62例、癲癇25例、緊張性頭痛35例。2個組之間年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。將MS患者和對照患者按年齡分為≤30歲（15例）、31～40歲（23例）、41～50歲（44例）、≥51歲（40例）4個年齡段。本研究經(jīng)鄭州市第七人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方案 依據(jù)MS患者的病情給予以下治療方案：（1）甲基潑尼松龍靜脈注射1 g/d， 持續(xù)3～5 d；（2）肌肉注射30 μg β-干擾素（interferon-beta，IFN-β），每周1次，持續(xù)治療＞3個月以上；（3）復(fù)發(fā)期采用甲基潑尼松龍治療，緩解期采用IFN-β肌肉注射。

1.2.2 擴(kuò)展殘疾狀態(tài)量表（expanded disability status scale，EDSS）評分[4]和MS分型 對所有患者進(jìn)行EDSS評分，按評分分為≤5分組和＞5分組。按《多發(fā)性硬化診斷和治療中國專家共識（2018版）》[5]將MS分為復(fù)發(fā)緩解（relapsing remitting multiple sclerosis，RRMS）型、繼發(fā)進(jìn)展（secondary progressive multiple sclerosis，SPMS）型和原發(fā)進(jìn)展（primary progressive multiple sclerosis，PPMS）型。

1.2.3 血清和腦脊液 IL-33水平檢測 采集所有對象清晨空腹外周血10 mL，離心后分離血清。根據(jù)患者意愿，采集30例復(fù)發(fā)期MS患者和30例對照者的腦脊液。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測腦脊液和血清IL-33水平，試劑盒購自英國Abcam公司，線性范圍為11.72～750.00 pg/mL，批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別為2.7%、3.2%，標(biāo)準(zhǔn)曲線r2=0.99。檢測儀器為Synergy LX多功能微孔板檢測儀（美國BioTek公司）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。呈正態(tài)分布的計量資料以x±s表示，2個組之間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。采用Pearson 相關(guān)分析評估各項(xiàng)指標(biāo)之間的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MS組與對照組血清和腦脊液IL-33水平比較

MS組血清和腦脊液IL-33水平均顯著高于對照組（P＜0.01）。女性MS患者血清IL-33水平顯著高于男性（P＜0.05）；腦脊液 IL-33水平男性、女性之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 MS組與對照組不同性別患者血清和腦脊液IL-33 水平比較

2.2 MS組和對照組不同年齡患者血清IL-33水平比較

MS組中，≤30歲、31～40歲、41～50歲患者血清IL-33水平依次升高，各年齡段之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；對照組各年齡患者段血清IL-33水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。MS組各年齡段患者血清IL-33水平均顯著高于對照組同年齡段患者（P＜0.05）。見圖1。

圖1 MS組和對照組不同年齡患者血清IL-33水平比較

2.3 不同病程和治療方案MS患者血清IL-33水平比較

MS患者中，病程≤1年者血清IL-33水平顯著低于病程≥5年者（P＜0.05）。使用不同治療方案的MS患者之間血清IL-33水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 不同病程和治療方案MS患者血清IL-33水平變化

2.4 不同EDSS評分和類型MS患者血清IL-33水平比較

EDSS評分＞5分的MS患者血清IL-33水平顯著高于EDSS評分≤5分者（P＜0.01）。SPMS型和PPMS型患者血清IL-33水平顯著高于RRMS型患者（P＜0.01、P＜0.05），SPMS型血清IL-33水平與PPMS型MS患者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

2.5 MS患者血清IL-33水平與EDSS評分、年齡、病程的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，MS患者血清IL-33水平與EDSS評分、年齡、病程均呈正相關(guān)（r值分別為0.724、0.285、0.537，P＜0.05）。

表3 不同EDSS評分和類型MS患者血清IL-33水平比較

3 討論

IL-33在神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞等多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞中表達(dá)，其中星形膠質(zhì)細(xì)胞是IL-33的重要來 源[6]。在MS發(fā)病過程中，IL-33的受體致瘤性抑制因子2（suppression of tumorigenicity 2，ST2）可通過少突膠質(zhì)細(xì)胞、軸突內(nèi)和軸突周圍表達(dá)，樹突狀細(xì)胞表面ST2缺失可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎病情加重[7]。IL-33與ST2結(jié)合能激活核因子-κB、髓樣分化因子88和促炎因子，如腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素1β等mRNA的表達(dá)，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病進(jìn)程。

由于IL-33在腦部和脊髓中呈高水平表達(dá)，因此其在免疫介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)病機(jī)制中的作用備受關(guān)注。JAFARZADEH等[8]的研究結(jié)果顯示，MS患者血清和脊髓中IL-33水平均升高，且MS病情越嚴(yán)重，血清IL-33水平越高。有研究結(jié)果顯示，與未接受干擾素治療的MS患者相比，采用IFN-β、甲基潑尼松龍或二者聯(lián)用進(jìn)行治療的MS患者血清IL-33水平顯著降低[9]。本研究結(jié)果顯示，MS患者血清和腦脊液中IL-33水平顯著升高，且女性患者升高尤為明顯，但腦脊液IL-33水平男性、女性之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），原因可能與腦脊液樣本量較小有關(guān)。另外，由于腦脊液樣本采集難度較大，且不易保存，導(dǎo)致本研究收集的樣本量很小，如按年齡、病程進(jìn)行分層分析，各組例數(shù)過少，因此未進(jìn)行年齡、病程等方面的對比研究，這也是本研究的不足之處。經(jīng)IFN-β、甲基潑尼松龍或二者聯(lián)用治療后，MS患者血清IL-33水平有所降低，但3種方案治療患者血清IL-33水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。IFN-β和甲基潑尼松龍對MS的治療作用可能是通過調(diào)節(jié)炎癥和免疫病理反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)的，IFN-β則可降低MS患者血漿和外周血單核細(xì)胞中IL-33的表達(dá)。

SHAJARIAN等[10]的研究結(jié)果顯示，MS患者血清IL-33水平與年齡呈正相關(guān)，而非炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者血清IL-33水平與年齡呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，不同年齡和不同類型的MS患者之間血清IL-33水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與文獻(xiàn)報道[10]基本一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，不同EDSS評分、病程的MS患者之間血清IL-33水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，MS患者血清IL-33水平與EDSS評分、年齡、病程均呈正相關(guān)（r值分別為0.724、0.285、0.537，P＜0.05）。

綜上所述，MS患者血清和腦脊液IL-33水平升高，與MS的嚴(yán)重程度有關(guān)。