• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    全乙?;頉]食子兒茶素沒食子酸酯的合成純化及生物活性研究進展

    2022-10-28 07:18:18劉苗苗黃峻榕曹云剛
    食品科學 2022年19期
    關鍵詞:乙?;?/a>小鼠生物

    劉苗苗,潘 越,范 鑫,黃峻榕,曹云剛

    (陜西科技大學食品科學與工程學院,陜西 西安 710021)

    表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)是未發(fā)酵茶葉中的主要活性成分,約占茶葉中兒茶素總量的50%~80%。諸多研究證實,EGCG富含酚羥基結構,具有抗氧化、抗紫外線、抑菌、抗動脈粥樣硬化、降血糖血脂、抗癌等廣泛的生物活性。但EGCG的多羥基結構使其存在化學性質不穩(wěn)定、極易氧化變質、脂溶性差、生物利用度低等問題,且其在體內易發(fā)生生物轉化或者被腸道菌群降解,因而限制了EGCG的深度開發(fā)利用。

    結構修飾是改善EGCG理化特性的有效手段,其中乙?;揎検墙鼇韨涫荜P注的修飾方法之一。研究表明,EGCG經(jīng)小分子乙?;–H—CO—或Ac—)酯化后,脂溶性、穩(wěn)定性及生物利用度均得到改善;同時相比其他修飾基團,乙酰基空間位陰效應較小,不會影響周圍酚羥基參與反應,因而生物活性得以有效發(fā)揮。全乙?;頉]食子兒茶素沒食子酸酯(total acetylated epigallocatechin gallate,AcEGCG)是在EGCG的8 個芳環(huán)氧原子上均引入乙?;纬傻孽ヮ惢衔?。由于EGCG的酚羥基最大程度地受到乙酰基的保護,因而AcEGCG的脂溶性和穩(wěn)定性顯著提高,其生物利用度更高,且在細胞內有效成分的濃度和半衰期也相對較高和較長。就生物活性而言,AcEGCG的抗紫外線、抗癌以及細胞損傷修復等功能均優(yōu)于EGCG。因此,AcEGCG在保健食品、抗癌藥物、化妝品等方面較EGCG更具應用潛力和開發(fā)前景。目前,AcEGCG的來源主要依靠化學手段合成,但受到工藝、成本及安全性多因素的制約,尚無較為成熟、綠色的制備方法。AcEGCG的生物活性已得到廣泛證實,進一步探究和明確其內在作用機制對于AcEGCG的科學應用至關重要。本文調研了大量文獻,對現(xiàn)有AcEGCG的合成純化方法進行綜述,論述其優(yōu)勢和不足;同時介紹AcEGCG的理化性質以及抗紫外線、細胞損傷修復、抗炎癥、抗癌等生物活性的研究進展,并對今后AcEGCG的研究及開發(fā)利用提出建議,以期為相關研究提供參考。

    1 AcEGCG的合成純化

    1.1 AcEGCG的合成純化機理

    EGCG分子結構中有多個反應活性基團和活性部位,其中酚羥基是最具特征性的活性基團。乙?;磻窃贓GCG芳環(huán)酚羥基的氧原子上引入乙?;?,即羥基氫原子被?;〈甚ヮ惢衔锏倪^程,因此也稱為酯化反應,屬于-?;?。該反應通常以乙酸酐((CHCO)O)為?;噭?,反應時必須加入路易斯酸或者質子酸等催化劑以增強酰化試劑的親電能力,使反應得以順利進行。通過控制反應物濃度比、催化劑、反應溶劑、反應時間等反應條件可以調控EGCG乙?;潭取.擡GCG芳環(huán)的8 個酚羥基被完全?;螅纯缮葾cEGCG。目前,AcEGCG的合成主要利用化學合成法,酶法合成尚處于部分乙?;A段。

    化學合成AcEGCG的反應體系中常包含吡啶、乙酸酐以及目標產(chǎn)物AcEGCG等物質,其組成復雜,因而需要經(jīng)過系列純化步驟(圖1)。在純化過程中,通常需要依次使用水、碳酸鈉/碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液、無水硫酸鈉等試劑。水可以終止反應,因為酸酐遇水生成對應的酸,且水也可以洗去催化劑吡啶。碳酸鈉/碳酸氫鈉溶液的主要目的是中和反應液中的酸類物質;飽和氯化鈉溶液可以吸收反應液中的水,使有機層澄明;無水硫酸鈉可吸收溶液中多余的水分,再經(jīng)濃縮、干燥得到初產(chǎn)物。初產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化后,即可得到純度較高的AcEGCG。

    圖1 化學合成法制備AcEGCG的主要過程[8,13-14]Fig. 1 Preparation of AcEGCG by chemical synthesis method[8,13-14]

    1.2 化學合成法

    AcEGCG的合成主要采用化學合成法,現(xiàn)有研究大多利用乙酸酐為EGCG的?;噭?,在吡啶催化下直接合成(圖1)。Kohri等于2001年報道了利用吡啶和乙酸酐合成AcEGCG的具體方法:向1 g EGCG(2.18 mmol)中加入14 mL吡啶和16 mL乙酸酐(157 mmol),45 ℃攪拌反應20 h。反應液經(jīng)預冷、攪拌、靜置、抽濾后得到白色沉淀,再經(jīng)洗滌、減壓干燥、硅膠柱層析后,獲得1.7 g AcEGCG(2.14 mmol),產(chǎn)物得率為98%。經(jīng)高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)檢測,樣品純度為99%。Lam等在此基礎上,以吡啶為催化劑,將EGCG和乙酸酐在室溫下攪拌過夜后得到AcEGCG,產(chǎn)物得率為82%。隨后Utenova等以N為保護劑,以30 mL二氯乙烷作為溶劑,向70 mg EGCG(0.15 mmol)中加入186 mg,-二甲氨基吡啶(1.52 mmol)和0.14 mL乙酸酐(1.52 mmol),于0 ℃和室溫下分別攪拌1 h和4 h。反應液經(jīng)50 mL三氯甲烷稀釋后,用30 mL硫酸銅洗滌4 次,30 mL飽和碳酸氫鈉溶洗滌2 次,濃鹽水洗滌1 次。經(jīng)無水硫酸鎂干燥后減壓蒸干,最后使用HPLC進行純化,共得到66 mg產(chǎn)物,產(chǎn)物得率為55%。

    近年來,國內學者也對AcEGCG的化學合成方法進行了系統(tǒng)研究,酸酐用量、催化劑用量、反應時間、反應溫度等對AcEGCG的合成和純度均具有重要影響。劉曉輝在乙酸乙酯溶液(200 mL)中依次加入0.920 g質量分數(shù)98% ECCG、20 mL乙酸酐和2 mL吡啶,室溫下300 r/min攪拌反應5 h,經(jīng)稀酸、飽和碳酸氫鈉溶液洗滌后,產(chǎn)物純度為89.53%,經(jīng)柱層析再純化后,得到純度為96.04%的AcEGCG。王金妮等在500 mL乙酸乙酯中加入3.7 g EGCG、20 mL乙酸酐、20 mL吡啶,于30 ℃下反應12 h,經(jīng)體積分數(shù)0.5% HCl溶液、質量分數(shù)4%碳酸氫鈉溶液及蒸餾水洗滌,減壓蒸干溶劑后得到AcEGCG產(chǎn)物,經(jīng)HPLC檢測其純度為99%。葉敏通過研究發(fā)現(xiàn)合成AcEGCG的最適條件:184 mg EGCG溶于20 mL乙酸乙酯,酸酐用量是EGCG物質的量的80 倍,催化劑用量為100 μL,反應時間為5 h。反應液經(jīng)水、0.5 mol/L碳酸鈉溶液、飽和氯化鈉溶液反復洗滌,無水硫酸鈉過濾,真空濃縮及干燥處理后,得到AcEGCG。該條件下AcEGCG純度為98.42%。張建勇等也發(fā)現(xiàn)乙酸酐用量0.4~0.8 mL、吡啶用量0.1~0.2 mL、乙酸乙酯用量5~10 mL、反應溫度25~40 ℃、反應時間5~9 h的條件有利于取代度7~8的乙?;疎GCG生成。

    除以EGCG為反應底物與酸酐反應直接合成AcEGCG外,也可利用EGCG結構類似物來間接合成AcEGCG。Kuhn等以全芐基化保護的表沒食子兒茶素為原料,通過加入二氯甲烷、甲基化沒食子酰氯、二甲氨基吡啶、氫氧化鉛、甲醇、四氫呋喃、乙酸酐、吡啶等系列試劑,經(jīng)過3 步反應后最終生成AcEGCG。

    相比直接合成法,間接合成AcEGCG所用化學試劑較多,步驟繁瑣,不適宜工業(yè)化應用。直接化學合成AcEGCG的體系相對簡單,但也存在一定問題。直接化學合成法的合成路線較為單一、反應耗時長,且酰化位點不明確,導致反應所得到的產(chǎn)物多為不同酰化程度的EGCG衍生物的混合物,副產(chǎn)物較多,對產(chǎn)物的純化等后期處理要求較高;另外,酰化所用的吡啶等有毒化學試劑也給AcEGCG在食品和藥品領域的應用帶來不利影響。因此,探究AcEGCG的可控、定向、綠色的合成方法及酰化規(guī)律是具有潛力的研究方向。

    1.3 酶法合成法

    EGCG的酶法乙酰化修飾通常采用脂肪酶。朱松確立了以乙烯酯作為?;w的AcEGCG酶法合成路線,最優(yōu)反應條件如下:脂肪酶RM IM的添加量為2.1%(以底物質量計),反應溶劑體系為乙腈和異丙醇(質量比1∶1),EGCG與乙酸乙烯酯物質的量比為1∶1,40 ℃反應12 h。在該條件下,EGCG乙酰化轉化率為90.32%。經(jīng)高速逆流色譜純化,液相色譜-質譜聯(lián)用鑒定,乙?;疎GCG的反應產(chǎn)物為單-(5’’--乙?;鵈GCG)、二-(3’,5’-2--乙酰基EGCG)和三-(5’,3’,5’-3--乙?;?EGCG)取代乙酰化EGCG的混合物(圖2)。可見,目前利用脂肪酶進行EGCG乙?;瘍H能得到部分乙?;a(chǎn)物,鮮見利用酶法制備得到AcEGCG的研究報道。同時,酶法分子修飾EGCG的成本較高,產(chǎn)物的轉化率不高,后期分離純化困難,且對于?;稽c的確定也無規(guī)律性的結論。因此,酶法合成AcEGCG尚需系統(tǒng)深入研究。

    圖2 EGCG酶法乙?;a(chǎn)物[19]Fig. 2 Enzymatic acetylation products of EGCG[19]

    2 AcEGCG的理化性質

    2.1 基本理化性質

    固體AcEGCG為白色粉末狀物質。相比EGCG,AcEGCG的水溶性降低,幾乎不溶于水,油-水分配系數(shù)增大,脂溶性增強,易溶于有機溶劑,但溶解度與溶劑極性并不完全一致,由高到低為甲醚>二乙氧基乙醇>丙氧基乙醇>丁氧基乙醇>乙醇>丙醇>仲丁醇>甲醇>異丙醇>正丁醇>正戊醇>正己醇。在生物活性分析研究中,AcEGCG的常用溶劑為聚乙二醇300/乙醇/吐溫-80/水(2∶1∶0.98∶0.02,/)、二甲基亞砜/氫化蓖麻油/乙醇(60∶20∶20,/)等。另外,AcEGCG的光譜吸收特性較EGCG也發(fā)生顯著變化。紫外光譜全波長掃描結果顯示,EGCG在210 nm和280 nm波長處有較大吸收,而AcEGCG的最大吸收波長為250 nm。

    2.2 穩(wěn)定性

    表1 AcEGCG和EGCG的穩(wěn)定性Table 1 Stability of AcEGCG and EGCG

    在模擬人體環(huán)境的培養(yǎng)基質(pH 8、溫度37 ℃)中,EGCG在20 min內很快降解消失,而AcEGCG在2 h內才完全降解,穩(wěn)定性較EGCG提高約5 倍。在人工模擬胃液中,AcEGCG和EGCG均能保持一定的穩(wěn)定性,處理2 h后二者的降解率均維持在10%左右;在人工模擬腸液中,EGCG則迅速發(fā)生變化,處理1 h后在設定的HPLC檢測條件下幾乎檢測不到,而AcEGCG在處理2 h后,剩余含量仍在50%以上。相比EGCG,AcEGCG的穩(wěn)定性明顯提高,可抵抗光照、溫度、pH值、氧氣等體外環(huán)境以及體內腸道環(huán)境的破壞作用,從而有利于機體吸收。

    2.3 生物利用度

    “利平斯基規(guī)則”指出,一個化合物違背以下任意兩條就很難被生物體吸收:相對分子質量在500以下;油-水分配系數(shù)小于5;氫鍵供體不超過5 個;氫鍵受體不超過10 個。EGCG分子結構中含氫鍵供體8 個,氫鍵受體11 個,且其極性分子表面區(qū)域較大,因而很難被生物體吸收利用。Nakagawa等研究證實,EGCG的生物利用度極低,小鼠口服EGCG 56 mg 30 min、人口服EGCG 97 mg 1 h后,吸收率僅分別為0.012%和0.32%。除分子結構原因導致的生物利用度低外,EGCG在體內(如肝臟、結腸等)還會受到葡萄糖醛酸化、甲基化和硫酸化以及微生物降解等作用,進一步導致有效含量的降低。Lu Hong等發(fā)現(xiàn),在人尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶(uridine diphosphate-glucuronosyltransferase,UDPGT或UGT)作用下,EGCG在體內可轉化為EGCG-4’--葡糖苷酸、EGCG-3’--葡糖苷酸、EGCG-7--葡糖苷酸等物質;且3 種人UGT同工酶(UGT 1A1、1A8、1A9)的催化活性均較高。陳欣發(fā)現(xiàn),EGCG在腸道菌群作用下含量迅速下降,代謝轉化為沒食子酸、3--甲基沒食子酸或4--甲基沒食子酸、對羥基苯丙酸及表兒茶素沒食子酸酯等物質。因此,通過改善EGCG的理化性質或減少其生物轉化的化學修飾可能有助于提高其生物利用度。

    AcEGCG的脂溶性較好,能夠透過雙脂層細胞膜,在靶向作用點大量聚集,因而生物利用度高于EGCG。Lambert等研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG在KYSE150人食管癌細胞和HCT116結腸癌細胞內的濃度是相同處理下EGCG的2.8~30.0 倍,可見其體內生物利用度大幅提高。同時,AcEGCG可以抑制脂多糖刺激引起的小鼠RAW264.7巨噬細胞一氧化氮的產(chǎn)生及花生四烯酸的釋放,抑制能力分別是EGCG的4.4 倍和2.0 倍。對小鼠進行灌胃實驗發(fā)現(xiàn),AcEGCG組小鼠血漿中血藥質量濃度-時間曲線下面積(area under concentration-time curve,AUC)(反映藥物在體內的暴露特性)(AUC=465.0 μg/(mL·min)顯著高于EGCG組(AUC=194.6 μg/(mL·min);小腸和結腸組織中AcEGCG組AUC分別是EGCG組的2.8 倍和2.4 倍。這充分說明AcEGCG在小鼠體內的生物利用度高于EGCG。綜上,乙?;梢栽鰪奅GCG的生物效價及生物利用度。

    3 AcEGCG的生物活性

    3.1 生物安全性

    EGCG在低濃度時具有較好的生物活性,但濃度過高則表現(xiàn)出一定生理毒性。王東旭研究發(fā)現(xiàn),小鼠多次腹水注射55 mg/kg和75 mg/kgEGCG(亞急性模型)以及單次腹水注射200 mg/kgEGCG(急性毒性模型)后,出現(xiàn)昏睡、立毛、弓背和活動減少等毒癥現(xiàn)象;解剖發(fā)現(xiàn)肝臟出現(xiàn)白斑、淤血等損傷變化,且高劑量下更加明顯,表明高濃度EGCG可以引起小鼠肝毒性。雖然按照GB 15193.3—2014《食品安全國家標準 急性經(jīng)口毒性試驗》規(guī)定,EGCG屬于低毒范圍,但其生理毒性在一定程度上影響其開發(fā)應用。

    AcEGCG的生物安全性也受到關注。王金妮等對小鼠連續(xù)灌胃AcEGCG和EGCG 14 d,結果發(fā)現(xiàn)AcEGCG組小鼠無死亡,病理檢查結果與正常對照組無差異,最大耐受量為8 300 mg/kg,而EGCG組小鼠給藥后第1~5天出現(xiàn)死亡,半數(shù)致死量為761.5 mg/kg。Ou Bingning等在細胞水平探究了AcEGCG的生理毒性,結果表明AcEGCG對BEL-7402/5-FU的細胞毒低于EGCG??梢姡珹cEGCG的生物安全性高于EGCG,因此更具開發(fā)應用潛力。

    3.2 抗紫外線

    紫外線對機體的損傷主要體現(xiàn)在:一方面,紫外線作為光能量易被DNA、蛋白質等直接吸收,造成DNA鏈的損傷及蛋白質空間結構的破壞;另一方面,機體在紫外線誘導下會產(chǎn)生大量活性氧(reactive oxygen species,ROS),ROS積累可直接攻擊DNA、蛋白質、脂質等生物大分子,造成氧化損傷,進而引起一些氧化應激類疾病。研究表明,AcEGCG能夠預防和修復紫外線造成的機體損傷。在修復模式中,AcEGCG可抑制因紫外線照射引起的HaCaT細胞存活率下降,且10 μmol/L AcEGCG修復效果顯著優(yōu)于同濃度EGCG。在預防模式中,紫外線輻射前施加EGCG和AcEGCG均可有效抑制因紫外線照射導致的細胞存活率下降,顯著提高細胞內的抗氧化酶活性,抑制脂質過氧化產(chǎn)物丙二醛的產(chǎn)生,且一定濃度下,AcEGCG的保護效果顯著優(yōu)于同濃度EGCG。因此,AcEGCG在紫外線損傷預防及修復方面具有應用潛力。

    3.3 保護黑色素細胞

    黑色素細胞損傷、功能消退或數(shù)量減少在白癜風的發(fā)生發(fā)展中占據(jù)重要地位。研究表明,在氧化應激條件下,人表皮黑色素細胞的存活率降低,胞內乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)泄漏量增加,胞內ROS水平明顯升高,Caspase-9和Caspase-3表達量升高。目前認為ROS引起的氧化應激參與了白癜風的發(fā)病,而抗氧化治療是防治白癜風的有效途徑之一。Wang Siyu等研究發(fā)現(xiàn),40 μmol/L AcEGCG可以提高HO處理下黑色素細胞存活率(91%),顯著高于同濃度EGCG(黑色素細胞存活率67.6%)、全丙?;疎GCG及全丁?;疎GCG。Ning Weixuan等研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG對HO誘導的黑色素細胞氧化應激損傷有顯著的保護作用。AcEGCG能夠提高細胞存活率,降低LDH泄漏量、細胞內ROS產(chǎn)生量以及Caspase-9和Caspase-3表達量,且其活性顯著高于EGCG,提示AcEGCG能夠通過抗氧化應激和抗凋亡作用保護人黑素細胞。同時,初步臨床觀察顯示,AcEGCG和EGCG治療白癜風療效與商用藥物愛寧達相當,但AcEGCG起效快、作用濃度低、安全性更佳。因此,AcEGCG可能成為治療白癜風的新藥。

    3.4 抗炎癥、抗癌活性

    AcEGCG的抗癌活性已得到廣泛證實,其對人子宮內膜癌、食管癌、結腸癌、乳腺癌、宮頸癌、肺癌、肝癌等均展示出較好的抑制活性,且活性均高于EGCG(表2)。AcEGCG的抗癌機制涉及多個方面,包括抑制蛋白酶體、誘導癌細胞凋亡、影響癌癥相關基因的表達、抑制血管生成等:1)泛素-蛋白酶體通路是蛋白質降解的重要途徑,該通路的陰斷可以影響細胞內多個短周期蛋白的降解,進而誘導癌細胞凋亡。Lam等研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG抑制蛋白酶體和誘導MCF7乳腺癌細胞凋亡的活性強于EGCG,是一種潛在的EGCG蛋白酶體抑制劑和抗癌的藥物前體。Landis-Piwowar等也發(fā)現(xiàn),相比EGCG,AcEGCG對人乳腺細胞MDA-MB-231蛋白酶體抑制活性、生長抑制活性及凋亡誘導活性大幅提高。2)在皮膚腫瘤形成的過程中,腫瘤干細胞標記物CD34的表達是干細胞激活和腫瘤形成所必需的,同時蛋白激酶D1(protein kinase D1,PKD1)對于角質細胞的增殖和分化過程均具有重要的調節(jié)作用。Chiou等研究發(fā)現(xiàn),在多期小鼠皮膚癌變模型中,AcEGCG能夠通過抑制CD34的表達和PKD1的激活有效預防皮膚癌變。3)血管生成對惡性腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉移產(chǎn)生重要作用,因此,抑制腫瘤血管生成是治療腫瘤的重要策略之一。血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)能夠促進血管內皮細胞進行有絲分裂,從而刺激血管的形成。而絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/細胞外調節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信號通路中磷酸化蛋白p-ERK1/2、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/絲氨酸/蘇氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)信號通路中磷酸化蛋白p-AKT的激活以及缺氧誘導因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α的高水平表達均可引起mRNA的過度表達。陳潤麗研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG通過降低p-ERK1/2、p-AKT以及缺氧條件下HIF-1α的高表達,減少VEGF的分泌,進而抑制人臍靜脈內皮細胞的生成,最終抑制人肝癌血管的生成,其抑制作用強于EGCG(表2)。Wang Jianzhang等發(fā)現(xiàn),AcEGCG一方面通過抑制PI3K/AKT/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/HIF-1α通路,減少VEGFA的分泌;另一方面通過下調細胞和趨化因子配體12的表達,限制巨噬細胞的遷移和分化,進而抑制腫瘤相關巨噬細胞分泌VEGFA,通過雙重作用抑制人子宮內膜癌血管的生成。

    表2 AcEGCG和EGCG的抗癌活性Table 2 Anti-cancer activity of AcEGCG and EGCG

    除抗癌活性外,AcEGCG還可通過抗炎作用實現(xiàn)對癌癥的預防。諸多研究證實,體內炎癥是癌變的重要誘因之一,因此炎癥的防控治療是預防癌癥發(fā)生的重要途徑。Chiou等研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG對炎癥性腸病和可能與結腸炎相關的結腸癌具有潛在的預防效果。相比EGCG,AcEGCG對右旋糖酐硫酸鹽鈉刺激引起的小鼠結腸縮短、異常隱窩灶和淋巴樣結節(jié)的形成具有更好的預防作用。從分子水平看,AcEGCG可以通過抑制組蛋白3賴氨酸殘基9位乙?;?、下調PI3K/Akt/NF-κB磷酸化和p65乙酰化、激活ERK1/2信號通路和乙?;艘蜃覧2相關因子2、上調血紅素加氧酶-1的表達量,最終降低促炎介質水平及抑制結腸炎的發(fā)生。進一步的研究也證實,飼喂AcEGCG可以顯著降低小鼠結腸炎驅動的結腸癌。

    在癌癥治療中,AcEGCG能夠增強癌細胞的藥物敏感性、逆轉癌癥多藥耐藥性。Heyza等在H460肺癌腫瘤移植小鼠模型中發(fā)現(xiàn),60 mg/kgAcEGCG可以顯著增強順鉑的抗癌活性,在研究周期內(24 d)小鼠體內的腫瘤幾乎未生長。葉敏發(fā)現(xiàn),AcEGCG可以顯著提高阿霉素對癌細胞的抑制作用。Ou Bingning等研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG聯(lián)合5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的抑瘤率為40.53%,與EGCG聯(lián)合5-FU(30.87%)相比具有顯著性差異;在一定劑量范圍內,AcEGCG聯(lián)合柔紅霉素對人肝癌細胞SMMC-7721的增敏作用較EGCG強。因此AcEGCG在與抗癌藥物協(xié)同作用方面較EGCG更具潛力。

    同時,AcEGCG還可緩解抗癌藥物的毒性,減輕臟器損傷。柔紅霉素常用于治療抗腫瘤藥耐藥的急性淋巴細胞或粒細胞白血病,但其心臟毒性可以導致機體心律失常,使血清心肌酶譜和高敏肌鈣蛋白T水平明顯升高,血清和心肌超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性降低,丙二醛含量增多,并造成心肌超微結構損傷。在小鼠模型中,AcEGCG可拮抗上述變化,對柔紅霉素所致的心臟毒性具有保護作用,其作用機制可能與增強SOD活力和抗脂質過氧化有關。環(huán)磷酰胺對惡性腫瘤具有較好的療效,但其毒副作用常導致骨髓抑制、出血性膀胱炎、生殖毒性、心臟毒性和肝毒性等。杜亞俊研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG和EGCG對環(huán)磷酰胺引起的肝臟組織損傷有一定的保護作用,且在低劑量時AcEGCG比EGCG的作用更明顯。

    3.5 降糖、保護視力、抗氧化(體外)、抑菌等活性

    -葡萄糖苷酶和-淀粉酶可以將食物中的糖類化合物降解為單糖,促進其吸收利用。但糖尿病患者則需要適當抑制該類酶的活性,減緩糖類代謝,維持血糖平衡。葉敏研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG對-葡萄糖苷酶和-淀粉酶具有較高的抑制活性,IC分別為58.73、101.4 μg/mL,高于EGCG(IC分別為291.3、125.0 μg/mL)。脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)由脈絡膜毛細血管過度生長以及視網(wǎng)膜色素上皮向Bruch膜擴散形成,常見于許多眼部疾病,與視力下降密切相關?;贏cEGCG高效的血管生成抑制作用,其對于CNV引起的眼部疾?。ㄈ缋夏晷渣S斑變性)也具有較好的緩解作用。Xu Jiaowen等研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG通過抑制HIF-1α/VEGF/VEGFR2途徑和M1型巨噬細胞/小膠質細胞極化,減少血管內皮細胞增殖、遷移和血管的形成,最終減緩小鼠眼部CNV的形成。因此,AcEGCG在糖尿病、眼部疾病的預防及治療中具有一定應用潛力。

    EGCG含有酚羥基結構,能夠為氧化過程中的自由基R·提供H·,結束自由基的傳播而終止氧化反應,因而具有較強的抗氧化性。而AcEGCG的酚羥基被酰化,從結構分析看,其抗氧化活性應該低于EGCG。王偉偉等研究發(fā)現(xiàn),AcEGCG清除自由基活性與其取代度有一定關系,總抗氧化活性、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性和羥自由基清除活性隨著取代度增加而逐漸減弱,超氧陰離子自由基清除活性隨著取代度的增加呈先升高后降低趨勢。Utenova等發(fā)現(xiàn),AcEGCG的DPPH自由基清除活性顯著低于EGCG。因此,從結構-活性的角度,特別是從自由基清除活性方面考慮,AcEGCG是否存在修飾過當?shù)膯栴}仍有待探究。但值得注意的是,AcEGCG的脂溶性高于EGCG,因而對其抗氧化能力的評價還需考慮所用的溶劑體系及評價方法。朱松利用過氧化值法和Rancimat儀法探究了部分乙?;疎GCG在油脂中的抗氧化活性,結果發(fā)現(xiàn)在相同添加量(200 mg/kg)下,部分乙酰化EGCG在油脂中的抗氧化活性高于EGCG以及二丁基羥基甲苯,證實乙?;疎GCG在油脂類食品中的抗氧化潛力。因此,可以推測AcEGCG在油脂(非水相)體系中具有潛在抗氧化活性,但還需進一步研究證實。

    EGCG具有廣譜抑菌活性,可通過破壞細胞膜、干擾遺傳物質及蛋白質的合成、誘導胞內氧化應激等多層次作用抑制有害細菌的增殖。對EGCG進行乙?;揎棧湟志钚砸舶l(fā)生改變。Kalaiselvi等利用瓊脂稀釋法比較了EGCG和AcEGCG的抑菌活性,結果發(fā)現(xiàn),EGCG對枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌的最小抑菌質量濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)分別為130、150、200、250 μg/mL,而AcEGCG對這4 種細菌的MIC為100、120、150、200 μg/mL,可見EGCG經(jīng)全乙?;揎椇笠志钚燥@著提高。朱媛等以乙酸酐為?;瘎?,乙酸乙酯為溶劑,吡啶為催化劑,利用回流加熱得到茶多酚乙?;揎棶a(chǎn)物,經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)乙?;瓒喾訉Υ竽c桿菌的抑菌圈直徑為8.64 mm,MIC為0.1 mg/mL。抑菌活性顯著高于未改性的茶多酚(抑菌圈直徑小于6.5 mm,MIC=0.15 mg/mL)以及山梨酸鉀和苯甲酸鈉等防腐劑,進一步證實乙?;揎検翘岣叨喾右志ЯΦ挠行Х绞?。然而目前關于AcEGCG的抑菌作用及抑菌機制研究仍十分有限,其在食品體系中的實際應用也需系統(tǒng)探究。AcEGCG和EGCG的生物活性綜合比較分析見表3。

    表3 AcEGCG和EGCG的生物活性比較分析Table 3 Comparative analysis of AcEGCG and EGCG

    4 結 語

    EGCG廣泛的生物活性使其在食品加工與安全、人體疾病的預防與治療等方面意義顯著。隨著EGCG結構修飾研究的深入,乙?;疎GCG尤其是AcEGCG已經(jīng)引起研究者的關注。相比EGCG,AcEGCG的穩(wěn)定性、脂溶性及生物利用度顯著改善,且多種生物活性也得到顯著提升,因而是優(yōu)良的食品、化工原料及廣譜藥物。AcEGCG對機體細胞的保護作用使其在保健食品、白癜風類藥物、護眼藥物、修復類藥物、化妝品等的研發(fā)中具有良好的應用潛力。另外,AcEGCG顯著的抗炎癥、抗腫瘤、抗癌活性表明其對于癌癥的預防和治療有著積極的意義,是潛在的新型抗癌藥物。因此,不斷加大對AcEGCG合成技術的研究和改進力度,深化AcEGCG生物活性機制的探索,對于我國食品、醫(yī)藥及日用化工領域的發(fā)展均有著積極的促進作用。

    目前,AcEGCG的工業(yè)化生產(chǎn)及應用仍處于起步階段,建議對AcEGCG的后期研究從以下幾個方面開展:1)繼續(xù)開發(fā)綠色、可控、高效、可持續(xù)的AcEGCG合成方法,促使實驗研究向生產(chǎn)化的轉變,滿足規(guī)?;a(chǎn)的需要。2)進一步完善AcEGCG的生物活性,如探究AcEGCG在非水相體系、真實食品體系以及機體內的抗氧化、抑菌等作用,擴展其潛在的應用領域。3)AcEGCG的抗腫瘤、抗癌活性已得到大量證實,但其涉及的內在機制仍有待進一步研究,同時還須加強對臨床試驗的探索。4)AcEGCG為EGCG的乙?;苌铮錂C體內外的代謝和降解機制可能更為復雜,需要更深入系統(tǒng)的研究。5)更重要的是,需系統(tǒng)比較AcEGCG與部分乙?;蚱渌;?、其他修飾、或乙酰化與其他修飾聯(lián)合得到的EGCG衍生物特性與生物活性,以確證AcEGCG是否存在修飾過當?shù)膯栴},同時為EGCG衍生物的進一步研發(fā)、功效化和市場化提供科學依據(jù)。綜上,AcEGCG作為安全、有效的EGCG前體物質具有巨大的開發(fā)潛力。

    猜你喜歡
    乙酰化小鼠生物
    生物多樣性
    天天愛科學(2022年9期)2022-09-15 01:12:54
    抑癌蛋白p53乙酰化修飾的調控網(wǎng)絡
    生物多樣性
    天天愛科學(2022年4期)2022-05-23 12:41:48
    上上生物
    小鼠大腦中的“冬眠開關”
    第12話 完美生物
    航空世界(2020年10期)2020-01-19 14:36:20
    米小鼠和它的伙伴們
    中國組織化學與細胞化學雜志(2016年4期)2016-02-27 11:15:53
    Avp-iCre轉基因小鼠的鑒定
    組蛋白去乙?;敢种苿┑难芯窟M展
    亚洲,欧美,日韩| 五月玫瑰六月丁香| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 欧美人与善性xxx| 日韩人妻高清精品专区| 久久久久久久午夜电影| 国产免费一区二区三区四区乱码| 伊人久久国产一区二区| 国产成人精品福利久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品一二三区在线看| a级一级毛片免费在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩大片免费观看网站| 亚洲av免费高清在线观看| 极品教师在线视频| 日本熟妇午夜| 美女主播在线视频| 免费观看无遮挡的男女| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久99热这里只频精品6学生| 久久精品夜色国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 欧美另类一区| 51国产日韩欧美| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲成人av在线免费| 久久精品国产自在天天线| 久久久久久久精品精品| 成人亚洲精品av一区二区| 在线精品无人区一区二区三 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 51国产日韩欧美| 久久久精品免费免费高清| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 精品久久久精品久久久| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲精品视频女| 亚洲欧洲日产国产| 久久99热6这里只有精品| 免费看不卡的av| 男女啪啪激烈高潮av片| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产 精品1| av专区在线播放| 午夜福利高清视频| 久久久精品94久久精品| 精品人妻熟女av久视频| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲精品亚洲一区二区| 丰满乱子伦码专区| 成人美女网站在线观看视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产一区亚洲一区在线观看| 水蜜桃什么品种好| 午夜免费男女啪啪视频观看| av播播在线观看一区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩av免费高清视频| 五月天丁香电影| 欧美97在线视频| 国产成人精品久久久久久| 五月玫瑰六月丁香| 一级黄片播放器| 亚洲欧美成人精品一区二区| av国产免费在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 日日啪夜夜爽| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲国产欧美在线一区| av女优亚洲男人天堂| av.在线天堂| 日本wwww免费看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 中文字幕久久专区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 深爱激情五月婷婷| 中文字幕制服av| 白带黄色成豆腐渣| 黑人高潮一二区| 亚洲国产色片| 欧美+日韩+精品| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品久久久久久久末码| 男女那种视频在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 免费av不卡在线播放| 亚洲怡红院男人天堂| 欧美成人一区二区免费高清观看| 免费人成在线观看视频色| 久久精品人妻少妇| 黑人高潮一二区| 麻豆国产97在线/欧美| 国产91av在线免费观看| 青春草视频在线免费观看| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美xxⅹ黑人| 成人国产av品久久久| 国产伦在线观看视频一区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲自偷自拍三级| 免费大片18禁| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 嫩草影院新地址| a级毛色黄片| 赤兔流量卡办理| 欧美精品一区二区大全| 亚洲国产精品专区欧美| 国精品久久久久久国模美| 亚洲成人一二三区av| 麻豆成人av视频| 午夜福利在线在线| 亚洲最大成人av| 狂野欧美激情性bbbbbb| 天堂网av新在线| 日本黄大片高清| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品久久久久久精品电影| 美女国产视频在线观看| 一级二级三级毛片免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 中文天堂在线官网| 亚洲精品色激情综合| 免费观看的影片在线观看| 又爽又黄a免费视频| 亚洲成色77777| 国产黄频视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产成人精品婷婷| 亚洲国产精品成人久久小说| 成人美女网站在线观看视频| 全区人妻精品视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产淫片久久久久久久久| 青春草视频在线免费观看| 日本黄大片高清| 亚洲国产欧美在线一区| 一本一本综合久久| 丝袜喷水一区| 网址你懂的国产日韩在线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 观看美女的网站| 国产精品久久久久久久久免| 免费看光身美女| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 精品久久久久久久久av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产成人a区在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美日韩在线观看h| av免费在线看不卡| 亚洲综合精品二区| 久热久热在线精品观看| 麻豆成人av视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日韩av免费高清视频| 好男人在线观看高清免费视频| 97精品久久久久久久久久精品| 国产视频内射| 欧美日本视频| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品99久久99久久久不卡 | eeuss影院久久| 亚洲电影在线观看av| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 夫妻午夜视频| 在线免费十八禁| 超碰97精品在线观看| kizo精华| 免费看光身美女| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲最大成人av| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 99久久精品热视频| 插阴视频在线观看视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人精品福利久久| 国产精品一及| 91在线精品国自产拍蜜月| 免费黄网站久久成人精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 黄片wwwwww| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 极品教师在线视频| 成人亚洲精品一区在线观看 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品女同一区二区软件| 免费黄色在线免费观看| 免费看不卡的av| 中文欧美无线码| 嫩草影院新地址| 久久久久久久国产电影| h日本视频在线播放| 少妇人妻久久综合中文| 国产免费一区二区三区四区乱码| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产 一区精品| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 高清午夜精品一区二区三区| 99久久精品热视频| 免费观看的影片在线观看| 成人综合一区亚洲| 免费av不卡在线播放| 久久久久精品久久久久真实原创| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人妻一区二区av| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 春色校园在线视频观看| 99热这里只有是精品50| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久久久伊人网av| 在现免费观看毛片| 亚洲国产精品999| 一区二区av电影网| 久久久色成人| 国产成人a区在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚州av有码| 插阴视频在线观看视频| 日本三级黄在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 在线观看av片永久免费下载| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 美女内射精品一级片tv| 久久久久久久久久成人| 一级a做视频免费观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 精品人妻视频免费看| 久久久色成人| 国产精品久久久久久久电影| 六月丁香七月| 在线精品无人区一区二区三 | 亚洲欧美一区二区三区国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 五月伊人婷婷丁香| 欧美3d第一页| 亚洲av中文av极速乱| 午夜老司机福利剧场| 人妻一区二区av| 大片电影免费在线观看免费| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美日韩在线观看h| 在线免费十八禁| 欧美日韩综合久久久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美97在线视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成年免费大片在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 性插视频无遮挡在线免费观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚州av有码| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 精品一区二区免费观看| 亚洲国产精品成人综合色| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 中文天堂在线官网| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲内射少妇av| 国产精品伦人一区二区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品一区二区性色av| 一边亲一边摸免费视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 成人黄色视频免费在线看| videossex国产| 欧美潮喷喷水| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 国产 一区 欧美 日韩| 久久久亚洲精品成人影院| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美高清性xxxxhd video| 免费观看av网站的网址| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 一区二区三区乱码不卡18| 精品一区二区三卡| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成年人午夜在线观看视频| 插逼视频在线观看| 亚洲国产精品国产精品| eeuss影院久久| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产高潮美女av| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美三级亚洲精品| 大香蕉97超碰在线| 日本黄大片高清| 国产在视频线精品| 免费av不卡在线播放| 国精品久久久久久国模美| 国产毛片在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产成人午夜福利电影在线观看| 欧美另类一区| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美潮喷喷水| 国国产精品蜜臀av免费| 美女被艹到高潮喷水动态| xxx大片免费视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 日韩伦理黄色片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| av国产免费在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲自拍偷在线| 少妇熟女欧美另类| 亚洲真实伦在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| av网站免费在线观看视频| 亚洲av免费高清在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久6这里有精品| 国产探花极品一区二区| 国产av国产精品国产| 日韩国内少妇激情av| 偷拍熟女少妇极品色| 熟女av电影| 国产精品爽爽va在线观看网站| 成年女人在线观看亚洲视频 | 内射极品少妇av片p| 成人特级av手机在线观看| 秋霞伦理黄片| 97在线视频观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 男女国产视频网站| 尾随美女入室| 在线观看美女被高潮喷水网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 综合色丁香网| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 综合色丁香网| 国产成人精品福利久久| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲欧美日韩东京热| 国产黄片视频在线免费观看| 国产毛片a区久久久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产一区二区三区综合在线观看 | 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲av成人精品一二三区| 内地一区二区视频在线| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲精品一区蜜桃| 各种免费的搞黄视频| 免费黄频网站在线观看国产| 精品午夜福利在线看| 日本一本二区三区精品| 久久久国产一区二区| 成人一区二区视频在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美性感艳星| 九草在线视频观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 黑人高潮一二区| 成人美女网站在线观看视频| 男女边吃奶边做爰视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产高清国产精品国产三级 | 国产黄频视频在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久久久久伊人网av| 丝袜喷水一区| 亚洲欧洲日产国产| 中国美白少妇内射xxxbb| 免费大片18禁| 成人免费观看视频高清| 精品久久久精品久久久| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产美女午夜福利| 国产黄频视频在线观看| 久久久久久久国产电影| av免费在线看不卡| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲av福利一区| 精品久久久噜噜| 精品久久国产蜜桃| 亚洲无线观看免费| 91久久精品国产一区二区成人| 波野结衣二区三区在线| 婷婷色综合www| 1000部很黄的大片| a级毛色黄片| 日本色播在线视频| 日日啪夜夜爽| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲性久久影院| av国产精品久久久久影院| 白带黄色成豆腐渣| 精品久久久精品久久久| 欧美精品一区二区大全| 久久精品久久久久久久性| 美女主播在线视频| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩大片免费观看网站| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 天美传媒精品一区二区| 亚洲经典国产精华液单| 色婷婷久久久亚洲欧美| 免费高清在线观看视频在线观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 久久久久久久大尺度免费视频| 少妇人妻 视频| 涩涩av久久男人的天堂| 色哟哟·www| 国产伦理片在线播放av一区| 国产成人免费无遮挡视频| 国产av码专区亚洲av| 色婷婷久久久亚洲欧美| av在线观看视频网站免费| 成人二区视频| 亚洲av男天堂| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av在线播放精品| .国产精品久久| 日本欧美国产在线视频| 神马国产精品三级电影在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产成人免费观看mmmm| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 午夜精品一区二区三区免费看| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产精品99久久久久久久久| 天天躁日日操中文字幕| 性色av一级| 日本午夜av视频| 久久久久久久久久久丰满| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 免费av观看视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 老司机影院毛片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 一级av片app| 久久99热这里只有精品18| 国产色婷婷99| 深爱激情五月婷婷| 亚洲成人av在线免费| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日本色播在线视频| 真实男女啪啪啪动态图| 久久久精品欧美日韩精品| 国产一区二区三区综合在线观看 | 夜夜爽夜夜爽视频| 中国国产av一级| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 毛片女人毛片| 街头女战士在线观看网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产男女内射视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 插阴视频在线观看视频| freevideosex欧美| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲内射少妇av| 在线精品无人区一区二区三 | 欧美一级a爱片免费观看看| 久久久久久久久大av| 成人欧美大片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 免费观看av网站的网址| 色视频www国产| 少妇人妻久久综合中文| 国产精品国产av在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲av日韩在线播放| 欧美3d第一页| 亚洲精品乱久久久久久| 中文资源天堂在线| 久久午夜福利片| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 女人久久www免费人成看片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品人妻视频免费看| 国产 一区 欧美 日韩| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲经典国产精华液单| 久久精品夜色国产| 99久久精品热视频| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美成人一区二区免费高清观看| 中文字幕av成人在线电影| 国产爽快片一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 久久久久国产网址| 在线免费十八禁| 3wmmmm亚洲av在线观看| 联通29元200g的流量卡| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲国产成人一精品久久久| 九色成人免费人妻av| 人妻制服诱惑在线中文字幕| av女优亚洲男人天堂| 久久精品国产自在天天线| 欧美97在线视频| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 777米奇影视久久| 日本熟妇午夜| 久久久久精品性色| av国产免费在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 欧美激情在线99| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲人成网站在线播| 夫妻午夜视频| av天堂中文字幕网| 秋霞在线观看毛片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日韩成人伦理影院| 国产亚洲精品久久久com| 欧美日韩视频精品一区| 联通29元200g的流量卡| 久久韩国三级中文字幕| 男女边摸边吃奶| 国产乱人偷精品视频| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产精品人妻久久久久久| 亚洲国产最新在线播放| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 观看美女的网站| 成人毛片60女人毛片免费| 国产爽快片一区二区三区| 精品一区在线观看国产| 熟女电影av网| 久热久热在线精品观看| 国产精品三级大全| 久久久久久久久久人人人人人人| 韩国高清视频一区二区三区| 黑人高潮一二区| 久久久久国产网址| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久久久久久大av| 久久久久久久久久成人| 麻豆成人午夜福利视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精品不卡视频一区二区| 久久久久九九精品影院| 日本午夜av视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 一级毛片我不卡| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产高清三级在线| 69人妻影院| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产乱人偷精品视频| 超碰av人人做人人爽久久| 夫妻性生交免费视频一级片| 免费观看的影片在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲精品成人av观看孕妇| av播播在线观看一区| 欧美 日韩 精品 国产| 日韩制服骚丝袜av| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 色吧在线观看| 久久久精品免费免费高清| 日韩av免费高清视频| 国产午夜精品一二区理论片| 久久久久久久午夜电影| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美性感艳星| 岛国毛片在线播放| 97精品久久久久久久久久精品| 各种免费的搞黄视频| 女人久久www免费人成看片| a级毛色黄片| 久久久国产一区二区| 在线a可以看的网站| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产精品三级大全| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 白带黄色成豆腐渣|