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    高壓微射流均質(zhì)法制備二十二碳六烯酸藻油脂質(zhì)體及其性質(zhì)分析

    2022-10-28 07:17:54逄曉陽(yáng)張書文呂加平
    食品科學(xué) 2022年19期
    關(guān)鍵詞:油脂質(zhì)量

    李 暢,薛 璐,蘆 晶,逄曉陽(yáng),張書文,呂加平,*

    (1.天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院,天津 300134;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,北京 100193)

    二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)是一種長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸。研究表明,DHA具有預(yù)防心血管疾病、促進(jìn)大腦發(fā)育、緩解阿爾茨海默病等多種生理功能。相比于DHA魚油,DHA藻油受到的污染少、魚腥味弱、資源更加豐富,且研究發(fā)現(xiàn)DHA藻油食用更加安全,藻類中的DHA很少引起胃腸道不適。然而,DHA不飽和度高,容易受到光、熱、氧等不同因素的影響,極易氧化產(chǎn)生氫過(guò)氧化物,失去其功能活性及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,這種不穩(wěn)定性限制了其應(yīng)用范圍。

    脂質(zhì)體是由脂類兩親性物質(zhì)如磷脂組成的具有類細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的一種閉合類球狀囊泡,由一層或多層磷脂包裹而成。最早是在1965年由英國(guó)科學(xué)家Bangham等發(fā)現(xiàn),而后迅速發(fā)展成為一種運(yùn)載體系。將DHA藻油制備成脂質(zhì)體不僅對(duì)DHA能夠起到保護(hù)作用,且與微米級(jí)載體相比,納米級(jí)載體提供了更大的表面積、更好的擴(kuò)散滲透性,還具有靶向性、長(zhǎng)效性等特點(diǎn)。此外,由于被包封后發(fā)揮特定作用所需的藥物量要比未包封時(shí)少,因此可以屏蔽不良味道,大幅提高被包封物質(zhì)的生物利用度及感官可接受性。脂質(zhì)體的制備方法多樣,其中,高壓微射流均質(zhì)技術(shù)近年來(lái)不斷發(fā)展并得以應(yīng)用,利用這項(xiàng)技術(shù)制備的脂質(zhì)體具有粒徑小、分散性均勻、避免使用有毒有機(jī)試劑、可實(shí)現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)。目前高壓微射流均質(zhì)技術(shù)已實(shí)現(xiàn)了對(duì)高油酸棕櫚油、酶制劑、蝦油等營(yíng)養(yǎng)或功能物質(zhì)的包埋,提高了這些物質(zhì)的利用率。

    近年來(lái),隨著對(duì)脂質(zhì)體包埋脂溶性物質(zhì)相關(guān)研究的不斷深入,DHA脂質(zhì)體相關(guān)的研究也逐步展開(kāi)。Rasti等通過(guò)薄膜分散法將-3多不飽和脂肪酸包埋進(jìn)脂質(zhì)體,并將其與未包埋的魚油分別添加進(jìn)食品,通過(guò)考察保留率、過(guò)氧化值等指標(biāo),證明了脂質(zhì)體的穩(wěn)定性與適用性。Han Chenlu等利用薄膜分散-超聲法制備得到DHA脂質(zhì)體,通過(guò)體內(nèi)及體外消化實(shí)驗(yàn),證實(shí)了脂質(zhì)體這一運(yùn)載形式可提高小腸對(duì)DHA的吸收?;诖耍狙芯坎捎帽∧し稚⑴c高壓微射流均質(zhì)技術(shù)結(jié)合的方法,以DHA藻油脂質(zhì)體的平均粒徑、包封率為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行DHA藻油脂質(zhì)體制備的單因素試驗(yàn)及響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),并考察DHA藻油脂質(zhì)體物理穩(wěn)定性、貯藏穩(wěn)定性及氧化穩(wěn)定性,旨在開(kāi)發(fā)一種低粒徑、較高載量、穩(wěn)定性好的脂質(zhì)體運(yùn)載體系,以便DHA藻油在藥品、食品實(shí)際加工生產(chǎn)中的應(yīng)用。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    DHA藻油(DHA純度≥40%) 廈門匯盛生物有限公司;大豆磷脂(磷脂酰膽堿純度≥45%) 上海麥克林生化科技有限公司;膽固醇、吐溫-80 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS) 北京索萊寶科技有限公司;其他試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    BSA124S-CW電子天平 德國(guó)Sartorius公司;MVS-1渦旋混合器 北京金北德工貿(mào)有限公司;RE 52-05真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化有限公司;AMH-3高壓微射流均質(zhì)機(jī) 安拓思納米技術(shù)(蘇州)有限公司;Zetasizer Nano ZS納米粒度分析儀 英國(guó)馬爾文儀器公司;U-3010UV紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)TEM-7500透射電子顯微鏡 日本日立公司;DSC 8000差示掃描量熱儀 美國(guó)PE公司;Turbiscan穩(wěn)定性分析儀法國(guó)Formulaction公司;ZDJ-4A自動(dòng)電位滴定儀 上海雷磁股份有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 DHA藻油脂質(zhì)體的制備

    將一定量的大豆磷脂、膽固醇、DHA藻油脂溶性物質(zhì)加入到適量無(wú)水乙醇中,用磁力攪拌器攪拌均勻,在45 ℃、真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去無(wú)水乙醇形成薄膜,將吐溫-80加入到0.01 mol/L、pH 7.2的PBS中攪拌均勻,再將PBS倒入裝有薄膜容器中振蕩水合得到脂質(zhì)體,用高壓微射流均質(zhì)機(jī)在一定壓力下處理若干次得到DHA藻油脂質(zhì)體。

    1.3.2 單因素試驗(yàn)

    設(shè)置大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為6∶1,大豆磷脂與DHA藻油的質(zhì)量比為8∶1,吐溫-80用量占大豆磷脂質(zhì)量的15%,PBS(0.01 mol/L,后同)的pH值為7.2,高壓微射流均質(zhì)壓力為120 MPa,均質(zhì)次數(shù)為3,考察磷脂質(zhì)量濃度在5、10、20、30、40 mg/mL條件下對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體包封率和平均粒徑的影響。

    設(shè)置大豆磷脂質(zhì)量濃度為20 mg/mL,大豆磷脂與DHA藻油的質(zhì)量比為8∶1,吐溫-80用量占大豆磷脂質(zhì)量的15%,PBS的pH值為7.2,高壓微射流均質(zhì)壓力為120 MPa,均質(zhì)次數(shù)為3,考察大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比在4∶1、5∶1、6∶1、7∶1、8∶1條件下對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體包封率和平均粒徑的影響。

    設(shè)置大豆磷脂質(zhì)量濃度為20 mg/mL,大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為6∶1,吐溫-80用量占大豆磷脂質(zhì)量的15%,PBS的pH值為7.2,高壓微射流均質(zhì)壓力為120 MPa,均質(zhì)次數(shù)為3,考察大豆磷脂與DHA藻油的質(zhì)量比在4∶1、6∶1、8∶1、10∶1、20∶1條件下對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體包封率和平均粒徑的影響。

    設(shè)置大豆磷脂質(zhì)量濃度為20 mg/mL,大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為6∶1,大豆磷脂與DHA藻油的質(zhì)量比為8∶1,PBS的pH值為7.2,高壓微射流均質(zhì)壓力為120 MPa,均質(zhì)次數(shù)為3,考察吐溫-80用量占大豆磷脂質(zhì)量0%、5%、10%、15%、20%條件下對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體包封率和平均粒徑的影響。

    設(shè)置大豆磷脂質(zhì)量濃度為20 mg/mL,大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為6∶1,大豆磷脂與DHA藻油的質(zhì)量比為8∶1,吐溫-80用量占大豆磷脂質(zhì)量的15%,PBS的pH值為7.2,高壓微射流均質(zhì)次數(shù)為3,考察均質(zhì)壓力在0、80、100、120、140、160 MPa條件下對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體包封率和平均粒徑的影響。

    設(shè)置大豆磷脂質(zhì)量濃度為20 mg/mL,大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為6∶1,大豆磷脂與DHA藻油質(zhì)量比為8∶1,吐溫-80用量占大豆磷脂質(zhì)量的15%,PBS的pH值為7.2,高壓微射流均質(zhì)壓力為120 MPa,考察均質(zhì)1、2、3、4、5、6 次對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體包封率和平均粒徑的影響。

    1.3.3 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

    在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,利用Design Expert軟件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)的設(shè)計(jì)與分析。以平均粒徑為響應(yīng)值,采用Box-Behnken Design選定三因素三水平進(jìn)行試驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。在得到的DHA藻油脂質(zhì)體最優(yōu)制備工藝條件下進(jìn)行3 次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,并在4 ℃條件下保存樣品。

    表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素及水平Table1 Codes and levels of independent variables used in response surface design

    1.3.4 DHA藻油脂質(zhì)體性質(zhì)表征

    1.3.4.1 平均粒徑、多分散指數(shù)的測(cè)定

    使用Zetasizer Nano ZS納米粒度分析儀分別測(cè)定平均粒徑、多分散指數(shù)(polydispersity index,PDI),用蒸餾水將DHA藻油脂質(zhì)體稀釋至合適的質(zhì)量濃度,平行測(cè)定3 次取平均值。

    1.3.4.2 包封率的測(cè)定

    DHA藻油-正己烷溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精確稱取1 000.0 mg的DHA藻油溶于正己烷,在100 mL容量瓶中定容得到10.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,配制一系列不同質(zhì)量濃度的DHA藻油-正己烷溶液(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL),以正己烷為空白,在288 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以DHA藻油的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    采用有機(jī)溶劑萃取法并稍作修改以對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體的包封率進(jìn)行測(cè)定。取1 mL脂質(zhì)體于離心管中,加入4 mL正己烷,渦旋混合2 min后機(jī)械振蕩10 min,3 500 r/min離心10 min,取上清液在288 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。根據(jù)DHA藻油-正己烷溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算游離DHA藻油的質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次取平均值。通過(guò)下式計(jì)算包封率。

    式中:為未被包封進(jìn)脂質(zhì)體中的游離DHA藻油的質(zhì)量/g;為制備脂質(zhì)體時(shí)加入的DHA藻油質(zhì)量/g。

    1.3.4.3 微觀形態(tài)觀察

    采用透射電子顯微鏡對(duì)經(jīng)高壓微射流均質(zhì)處理的脂質(zhì)體(以下簡(jiǎn)稱MF-L)及未經(jīng)高壓微射流均質(zhì)處理的脂質(zhì)體(以下簡(jiǎn)稱C-L)的微觀形態(tài)進(jìn)行觀察。參照Chaves等的方法并稍作修改,將脂質(zhì)體稀釋適當(dāng)倍數(shù)至半透明狀態(tài),用飽和的醋酸鈾酰負(fù)染色法制備觀測(cè)樣品。

    1.3.4.4 差示掃描量熱分析

    用差示掃描量熱(differential scanning calorimetry,DSC)法對(duì)MF-L及C-L相變溫度進(jìn)行測(cè)定。參照Wang Qianqian等的方法并稍作修改,以空鋁鍋?zhàn)鳛閰⒄?,平均樣品質(zhì)量為(10±5)mg,在密封鋁鍋中加熱,溫度范圍為20~170 ℃,氮?dú)饬魉贋?0 mL/min,加熱速率為10 ℃/min。

    1.3.5 穩(wěn)定性分析

    1.3.5.1 物理穩(wěn)定性

    利用Turbiscan穩(wěn)定性分析儀對(duì)兩種DHA藻油脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性進(jìn)行快速分析。取20 mL樣品于樣品瓶中,溫度設(shè)定為25 ℃,每1 h掃描一次,掃描24 h,記錄穩(wěn)定性指數(shù)(turbiscan stability index,TSI)。

    1.3.5.2 貯藏穩(wěn)定性

    將新鮮制備的兩種DHA藻油脂質(zhì)體分別貯藏在4、25 ℃條件下,于第0、28天分別對(duì)平均粒徑、包封率進(jìn)行測(cè)定。

    1.3.5.3 氧化穩(wěn)定性

    將新鮮制備的兩種DHA藻油脂質(zhì)體分別貯藏在4、25 ℃條件下,于第0、7、14、21、28天采用GB 5009.227—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中過(guò)氧化值的測(cè)定》中的電位滴定法對(duì)過(guò)氧化值進(jìn)行測(cè)定。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,并通過(guò)SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,以<0.05表示差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    由圖1A可知,隨著大豆磷脂質(zhì)量濃度的增大,平均粒徑逐漸增大,包封率先升高后降低。低磷脂質(zhì)量濃度下雖然粒徑更小,但包封效果不理想。高磷脂質(zhì)量濃度雖然可以提高包封率,但過(guò)高的磷脂質(zhì)量濃度容易使體系不穩(wěn)定,產(chǎn)生絮沉,導(dǎo)致粒徑和PDI受到影響。綜合考慮,選擇20 mg/mL的大豆磷脂質(zhì)量濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    如圖1B所示,隨著大豆磷脂與藻油質(zhì)量比的增加,平均粒徑總體呈增大趨勢(shì),對(duì)包封率總體無(wú)明顯影響。當(dāng)磷脂與藻油質(zhì)量比為20∶1時(shí),脂質(zhì)體的雙層膜受到破壞,包封率減小至(80.6±11.5)%,原因可能與制備過(guò)程有關(guān),當(dāng)磷脂含量較多時(shí),在旋蒸過(guò)程中很難形成均一穩(wěn)定的薄膜,導(dǎo)致水合時(shí)磷脂析出??紤]到載藥量,磷脂與藻油的質(zhì)量比選擇4∶1。

    膽固醇是許多生物膜的主成分,對(duì)于脂質(zhì)體的作用主要是通過(guò)自身的親水、親油基團(tuán)增加雙層膜的剛性、厚度以及結(jié)構(gòu)的有序性。如圖1C所示,隨著磷脂與膽固醇質(zhì)量比的增加,平均粒徑逐漸減小,包封率逐漸增加。當(dāng)磷脂與膽固醇質(zhì)量比為8∶1時(shí),平均粒徑最小,包封率達(dá)到最高。

    吐溫-80的加入可提高脂質(zhì)體的包封率。吐溫-80通過(guò)物理吸附在脂質(zhì)體雙層膜表面,形成一定厚度的親水相,使脂質(zhì)體在體系中更加均勻、穩(wěn)定,并且在制備過(guò)程中有利于脂質(zhì)體的水化。如圖1D所示,當(dāng)不添加吐溫-80時(shí),包封率最低,平均粒徑最大。隨著吐溫-80用量的增加,平均粒徑逐漸減小,包封率明顯增加。但加入過(guò)多的表面活性劑可能溶解脂質(zhì)體囊泡,對(duì)脂質(zhì)體具有破壞作用,故選擇吐溫-80用量20%進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    如圖1E所示,在高壓微射流均質(zhì)技術(shù)處理粗脂質(zhì)體的過(guò)程中,隨著均質(zhì)壓力的增大,脂質(zhì)體平均粒徑逐漸減小,相比未經(jīng)該技術(shù)處理的脂質(zhì)體,其包封率明顯增加。但在140 MPa均質(zhì)壓力下,脂質(zhì)體的微囊發(fā)生破裂,藻油發(fā)生泄漏,包封率降低,這與邰克東等的結(jié)論相似。當(dāng)高壓微射流均質(zhì)壓力為120 MPa時(shí),脂質(zhì)體的平均粒徑為(74.93±0.61)nm,包封率為(94.2±0.8)%,較為理想,故選擇高壓微射流均質(zhì)壓力120 MPa進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    圖1F中,隨著均質(zhì)次數(shù)的增加,脂質(zhì)體的平均粒徑逐漸減小,包封率逐漸增大,均質(zhì)處理5~6 次對(duì)于平均粒徑無(wú)明顯影響。但脂質(zhì)體囊泡易因均質(zhì)次數(shù)的增加或時(shí)間的延長(zhǎng)而導(dǎo)致溫度升高,體系內(nèi)容易出現(xiàn)重新聚集現(xiàn)象,故選擇均質(zhì)處理次數(shù)5 次。

    圖1 大豆磷脂質(zhì)量濃度(A)、磷脂與DHA藻油質(zhì)量比(B)、磷脂與膽固醇質(zhì)量比(C)、吐溫-80用量(D)、高壓微射流均質(zhì)壓力(E)、高壓微射流均質(zhì)次數(shù)(F)對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體平均粒徑、包封率的影響Fig. 1 Effects of soy lecithin concentration (A), lecithin to DHA-rich algae oil mass ratio (B), lecithin to cholesterol mass ratio (C), Tween-80 dosage (D), homogenization pressure (E), and number of homogenization cycles (F) on mean particle size and encapsulation efficiency of DHA-rich algae oil liposomes

    2.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以平均粒徑為響應(yīng)值,選擇磷脂與膽固醇質(zhì)量比、吐溫-80用量、高壓微射流均質(zhì)壓力作三因素三水平響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Box-Behnken design with response variable

    對(duì)上述試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸擬合分析,得到以平均粒徑()為因變量,磷脂與膽固醇質(zhì)量比()、吐溫-80用量()、高壓微射流均質(zhì)壓力()為自變量的二次多項(xiàng)回歸方程:=91.39+14.40-5.92-7.40-0.787 5+5.90+3.39-1.45-11.64-9.18。

    方差分析結(jié)果見(jiàn)表3,模型=0.001 3<0.01,表明模型極顯著。失擬項(xiàng)=0.217 0>0.05,差異不顯著,同時(shí)模型決定系數(shù)=0.978 0,說(shuō)明該模型與實(shí)際情況擬合程度很好,可用于制備DHA藻油脂質(zhì)體工藝優(yōu)化的分析及預(yù)測(cè)。從分析結(jié)果中可知,、、對(duì)響應(yīng)值影響極顯著,與影響極顯著,的交互作用影響顯著,交互作用響應(yīng)面3D圖見(jiàn)圖2。其他因素及其相互作用對(duì)響應(yīng)值的影響不顯著。

    表3 回歸模型的方差分析Table 3 Analysis of variance of regression model

    圖2 磷脂與膽固醇質(zhì)量比、均質(zhì)壓力交互作用對(duì)DHA藻油脂質(zhì)體平均粒徑的影響Fig. 2 Response surface plot showing interactive effect of soy lecithin to cholesterol mass ratio and homogenization pressure on mean particle size of DHA-rich algae oil liposomes

    根據(jù)上述方程可計(jì)算最佳制備工藝:磷脂與膽固醇質(zhì)量比11.9∶1、吐溫-80用量15%、高壓微射流均質(zhì)壓力138 MPa,平均粒徑理論預(yù)測(cè)值為55.50 nm,使用優(yōu)化后的工藝制備DHA藻油脂質(zhì)體并進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),得到平均粒徑為(59.35±3.05)nm,PDI為0.189±0.025,包封率為(94.2±2.9)%。由此可見(jiàn),利用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)建立的響應(yīng)曲面模型優(yōu)化可行。與黃茜等通過(guò)薄膜分散單一方法制備得到的DHA藻油脂質(zhì)體以及涂宗財(cái)?shù)韧ㄟ^(guò)乙醇注入法結(jié)合動(dòng)態(tài)高壓微射流法制備得到的魚油脂質(zhì)體相比,本研究中制備所得DHA藻油脂質(zhì)體的平均粒徑、包封率更為理想,說(shuō)明薄膜分散結(jié)合高壓微射流均質(zhì)法的使用有效提高了脂質(zhì)體的性能。

    2.3 DHA藻油脂質(zhì)體的表征

    2.3.1 微觀結(jié)構(gòu)

    通過(guò)透射電子顯微鏡觀察到的MF-L與C-L大小、形態(tài)等信息如圖3所示,MF-L幾乎呈球體,分布均勻,與平均粒徑測(cè)定的結(jié)果一致。相比之下,C-L囊泡更大,部分粒徑接近1 μm,且均勻性較差。

    圖3 MF-L放大倍數(shù)為60 000×(A)、200 000×(B)和C-L放大倍數(shù)為20 000×(C)、12 000×(D)的透射電子顯微鏡圖Fig. 3 TEM images of MF-L at 60 000 × (A), 200 000 × (B) and C-L at 20 000 × (C), 12 000 × (D) magnifications

    2.3.2 DSC分析結(jié)果

    通過(guò)DSC分析儀對(duì)兩種脂質(zhì)體進(jìn)行相變溫度的分析。圖4中與C-L相比,MF-L提高了相變溫度,峰值溫度由95.49 ℃提高到111.67 ℃,并且具有更小的相變焓,因此磷脂雙層膜更加穩(wěn)定。Wang Qianqian等制備的魚油粗脂質(zhì)體通過(guò)DSC分析儀測(cè)得相變溫度為56.17 ℃,低于本研究中制備的DHA藻油脂質(zhì)體相變溫度。不同脂質(zhì)體制備相關(guān)研究中相變溫度的差異可能是由于制備時(shí)使用的磷脂種類不同。磷脂中脂肪酸鏈的長(zhǎng)度、飽和度直接決定了其相變溫度,一般脂肪酸鏈越長(zhǎng),相變溫度越高。

    圖4 MF-L和C-L的DSC分析曲線Fig. 4 DSC thermograms of MF-L and C-L

    2.4 穩(wěn)定性分析結(jié)果

    2.4.1 物理穩(wěn)定性

    通過(guò)Turbiscan快速穩(wěn)定性分析儀分析了兩種不同處理方式脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性,圖5為動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定性曲線。TSI越大,表明體系越不穩(wěn)定,相比之下C-L更容易發(fā)生聚沉,物理穩(wěn)定性較低。前12 h內(nèi),MF-L表現(xiàn)出了良好的穩(wěn)定性,TSI變化緩慢。12 h以后,雖然MF-L的變化幅度逐漸增大,但仍比C-L的TSI小。說(shuō)明脂質(zhì)體粒徑的降低對(duì)物理穩(wěn)定性的提高有促進(jìn)作用。本研究結(jié)果與邰克東等研究不同均質(zhì)壓力對(duì)脂質(zhì)體囊泡特性和物理穩(wěn)定性影響的結(jié)論相似。

    圖5 MF-L和C-L的動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定性曲線Fig. 5 Kinetic instability curves of MF-L and C-L

    2.4.2 貯藏穩(wěn)定性

    如圖6~8所示,在貯藏期28 d內(nèi),4、25 ℃條件下MF-L和C-L表現(xiàn)出了不同的穩(wěn)定特性,C-L在4 ℃下貯藏28 d后,平均粒徑由739.4 nm增大到942.7 nm(圖6),粒徑分布由雙重峰轉(zhuǎn)變成不規(guī)則的多重峰(圖7B、E),且藻油泄漏嚴(yán)重(圖8),油腥味加劇。兩種溫度下的C-L包封率呈現(xiàn)迅速下降的趨勢(shì),出現(xiàn)絮沉,逐漸失去納米特性,在25 ℃下貯藏的脂質(zhì)體絮沉程度比4 ℃下更加劇烈。MF-L在4 ℃條件下貯藏28 d后,平均粒徑與包封率無(wú)明顯變化(圖6、8),其在兩種溫度條件下的粒徑分布圖峰形平滑,幾乎呈單峰分布(圖7C、D),且從外觀觀察,4 ℃條件下比25 ℃變化差異更小,呈半透明狀態(tài)分布均勻,無(wú)絮沉現(xiàn)象。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明MF-L比C-L貯藏穩(wěn)定性更好,低溫條件下貯藏脂質(zhì)體更能維持其良好特性。

    圖6 MF-L和C-L在不同貯藏溫度與時(shí)間下的平均粒徑變化Fig. 6 Variation in mean particle size of MF-L and C-L at different storage temperatures and times

    圖7 第28天MF-L和C-L在不同貯藏溫度下的粒徑分布Fig. 7 Particle size distribution of MF-L and C-L after 28 days of storage at different temperatures

    圖8 MF-L和C-L在不同貯藏溫度與時(shí)間下的包封率變化Fig. 8 Variation in encapsulation efficiency of MF-L and C-L as a function of storage time at different temperatures

    2.4.3 氧化穩(wěn)定性

    通過(guò)過(guò)氧化值的測(cè)定評(píng)價(jià)DHA藻油脂質(zhì)體的氧化穩(wěn)定性。由圖9可知,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),4 ℃條件下MF-L和C-L的過(guò)氧化值都緩慢增長(zhǎng),且MF-L的過(guò)氧化值漲幅低于C-L。7~14 d,25 ℃下C-L過(guò)氧化值降低了0.031 mmol/kg,原因是脂質(zhì)氧化是一個(gè)連鎖反應(yīng)過(guò)程,脂質(zhì)體在初級(jí)氧化產(chǎn)物的基礎(chǔ)上會(huì)進(jìn)一步生成次級(jí)氧化產(chǎn)物。從第21天開(kāi)始,過(guò)氧化值呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì),25 ℃比4 ℃條件下過(guò)氧化值增長(zhǎng)速率更快,且C-L的漲幅更大。C-L在貯藏期間大量泄漏油脂,酸敗程度加劇。第28天時(shí),25 ℃下C-L具有最高的過(guò)氧化值,為(1.840±0.332)mmol/kg。與之相比,MF-L抗氧化能力更強(qiáng),且4 ℃貯藏效果最好,第28天時(shí)過(guò)氧化值為(0.353±0.106) mmol/kg。這可能是高壓微射流的作用使脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定,一方面減少了油脂泄漏量,限制了過(guò)氧化物的產(chǎn)生;另一方面磷脂雙層對(duì)藻油起到了很好的保護(hù)作用,防止其被氧化。同時(shí),溫度是貯藏過(guò)程中的關(guān)鍵影響因素,在低溫條件下貯藏脂質(zhì)體有益于產(chǎn)品功能的保持。

    圖9 MF-L和C-L在不同貯藏溫度與時(shí)間下的過(guò)氧化值Fig. 9 Peroxide values of MF-L and C-L as a function of storage time at different temperatures

    3 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)以平均粒徑、包封率為主要指標(biāo),采用響應(yīng)面法優(yōu)化了DHA藻油脂質(zhì)體的高壓微射流均質(zhì)制備工藝。得到制備的最佳工藝條件為:磷脂質(zhì)量濃度20 mg/mL、磷脂與藻油的質(zhì)量比4∶1、磷脂與膽固醇質(zhì)量比11.9∶1、吐溫-80用量15%、均質(zhì)壓力138 MPa、均質(zhì)次數(shù)5 次。在此條件下進(jìn)行制備,DHA藻油脂質(zhì)體平均粒徑為(59.35±3.05)nm,PDI為0.189±0.025,包封率(94.2±2.9)%。透射電子顯微鏡觀察結(jié)果表明,高壓微射流均質(zhì)DHA藻油脂質(zhì)體微觀結(jié)構(gòu)為球狀,分布均勻。通過(guò)與未經(jīng)高壓微射流技術(shù)處理的脂質(zhì)體對(duì)比,高壓微射流均質(zhì)制備的DHA藻油脂質(zhì)體相變溫度有所提高,并在保持穩(wěn)定性上有一定的優(yōu)勢(shì):28 d的貯藏期內(nèi),經(jīng)處理的DHA藻油脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性、氧化穩(wěn)定性良好,且在低溫條件下貯藏效果較為理想。本實(shí)驗(yàn)所用方法為實(shí)際加工中DHA藻油脂質(zhì)體的應(yīng)用提供了一定的技術(shù)支持,具有廣闊的應(yīng)用前景。

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