黃體對牛胚胎移植效果的影響

黃榮春， 梁 淦， 譚正準(zhǔn)， 李 輝， 黃 健， 鄢勝飛， 鐘華配， 馮 超， 盧 瑛， 梁莎莎， 李廳廳， 覃廣勝

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西水牛研究所，廣西水牛遺傳繁育重點實驗室，南寧 530001)

胚胎移植是生物工程的一項基本技術(shù)，能將體內(nèi)外生產(chǎn)的早期良種母畜胚胎移植到同種相同生理狀態(tài)的母畜生殖道內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成新個體；能有效發(fā)揮良種母牛的遺傳和繁殖潛力，實現(xiàn)短時間內(nèi)培育出更多的良種母牛后代，是快速擴繁良種牛數(shù)量的一種較好手段[1]，具有潛在的巨大經(jīng)濟效益和社會效益。因而，胚胎移植技術(shù)越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的高度重視，但從目前的研究結(jié)果來看，胚胎移植的成敗受各種因素的限制，僅從一個或單獨幾個方面進行研究很難從根本上提高胚胎移植效果的。所以，在保證胚胎質(zhì)量和非手術(shù)移植操作技術(shù)水平的前提下，十分有必要對受體的狀態(tài)進行研究，而受體的生殖生理對繁殖性能的影響尤為突出；因此，從剖析受體的生殖生理出發(fā)，探究黃體對牛胚胎移植效果的影響顯得尤為重要。

黃體是一種動態(tài)的卵巢內(nèi)分泌結(jié)構(gòu)，通過其連續(xù)的形態(tài)和功能變化，幫助產(chǎn)生和分泌黃體酮[2]；黃體酮是決定母體子宮生理狀態(tài)的一種甾類激素，對控制發(fā)情周期、啟動發(fā)情行為和維持妊娠具有重要的作用[3]；所以，受體牛卵巢上的黃體是影響胚胎移植效果的一個重要因素[4-5]，其中正確檢查和判定黃體大小、位置和質(zhì)量是提高胚胎移植受胎率的關(guān)鍵。近年來，諸多學(xué)者在黃體對牛胚胎移植效果影響方面開展研究，并有著較多不同的報道[6]。所以，本文以探究黃體對牛胚胎移植效果的影響為主線，查閱大量文獻，歸納黃體的檢查和級別判斷方法，分別分析黃體大小、黃體位置、黃體質(zhì)量和黃體溶解過程激素水平與胚胎移植受胎率的關(guān)系，以期為生產(chǎn)上提高胚胎移植受胎率、獲取更大的生產(chǎn)效益提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 黃體檢查和級別判斷方法

正確檢查和判定黃體大小、位置和質(zhì)量是提高胚胎移植受胎率的關(guān)鍵。過去一般是通過直腸檢查時的感覺和經(jīng)驗來判斷黃體體積的大小，但徒手觸摸檢查時，往往僅摸到黃體凸出于卵巢表面的部分，對其嵌入部分很難觸摸來辨別它的質(zhì)地和大小，所以常常不同的檢查者可能因手感和經(jīng)驗不同而得到不同的結(jié)論[6]。如今在胚胎移植過程中，根據(jù)卵巢實質(zhì)組成和黃體的組織結(jié)構(gòu)密度不同，通過B超影像學(xué)上反射表現(xiàn)出差異的原理，用B超掃描受體牛卵巢，再結(jié)合直腸檢查法，判斷黃體大小并進行分級更準(zhǔn)確且易于掌握。通常在胚胎移植前1 d或移植當(dāng)天用B超對受體卵巢進行掃描，結(jié)合直腸檢查黃體的彈性和凸出狀，確定黃體的有無并根據(jù)黃體大小、質(zhì)地進行分級，各品種受體牛胚胎移植時(發(fā)情第7±1天)的黃體級別判斷可參考表1。

表1 受體牛發(fā)情第(7±1)天黃體級別判斷[7]

2 黃體大小與胚胎移植受胎率的關(guān)系

在黃牛的有關(guān)研究報道上，國內(nèi)外學(xué)者對受體牛黃體大小是否影響胚胎移植受胎率有著不同的觀點[6]。有的認為胚胎移植受胎率會隨著黃體的體積增大而升高[8]，甚至因受體的黃體體積小而不做移植；也有的認為不同黃體大小的移植受胎率沒有明顯差別[9]。盧全晟通過對不同黃體大小的受體牛進行移植效果比較，發(fā)現(xiàn)黃體直徑為1.2 cm的受體牛組的流產(chǎn)數(shù)、難產(chǎn)數(shù)最高，分別為16.13%和12.9%，但是受體牛的黃體直徑不同對流產(chǎn)數(shù)、難產(chǎn)數(shù)的影響差異不顯著(P>0.05)[10]。在水牛方面相關(guān)研究仍甚少，陳明棠等對234頭水牛受體進行移植，結(jié)果顯示：黃體直徑在1.5 cm以上的受胎率為27.27%，黃體直徑在0.8～1.5 cm之間的受胎率為19.23%，黃體直徑在0.8 cm以下的受胎率為22.73%，而不作黃體分級，有新生黃體即行移植的對照組受胎率為20.00%，得出不同黃體大小的受胎率無明顯差異[6]。倉明等以中國荷斯坦奶牛受體為研究對象，發(fā)現(xiàn)黃體為A級的受體牛的受胎率為28.6%，黃體為B級的受體牛的受胎率為42.9%，黃體為C級的受體牛的受胎率為0?？梢?，利用黃體觸診法選擇受體牛雖然有非量化的弊端，但是實際生產(chǎn)操作中仍是可行的[11]。方東輝等以西雜母牛作為受體進行胚胎移植，發(fā)現(xiàn)受體母牛的黃體直徑在0.8 cm，1.0 cm和1.2 cm的，其妊娠率分別為33.33%，35.71%和36.36%；而黃體在1.5 cm及以上的受體母牛的妊娠率更高(達50.00%)，建議黃體質(zhì)量好且略大的受體母牛，優(yōu)先進行胚胎移植[12]。張建軍等對安格斯牛進行胚胎移植時，發(fā)現(xiàn)黃體直徑為0.8 cm的，與黃體直徑為1 cm和1.2 cm的受體母牛所得的移植受胎率差異不明顯，而黃體直徑在1.5 cm和1.8～2.0 cm以上的受體母牛的移植受胎率明顯較高。說明，受體母牛子宮正常，具有0.8 cm以上質(zhì)地良好的黃體，均適合進行胚胎移植[13]。

從上述各學(xué)者研究結(jié)果可見，不同品種受體牛黃體大小對胚胎移植受胎率產(chǎn)生了不同程度的影響，但不同直徑黃體的胚胎移植受胎率差異不顯著，所以，在參考黃體大小的選擇標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)適當(dāng)放寬，如果選擇過嚴(yán)，用于移植的受體母牛數(shù)量將大大減少。不僅移植人員的工作量過大，也大大影響了母牛的正常配種，給養(yǎng)殖戶們帶來了許多不便。

3 黃體位置與胚胎移植受胎率的關(guān)系

胚胎移植過程中，移植部位不同給胚胎移植受胎率帶來了不同影響。有關(guān)胚胎移植位置的研究報道，移植單胚時，移植到黃體同側(cè)子宮角的受胎率要比移植到黃體對側(cè)的高得多(43%～55%)；也有的研究表明，移植到黃體同側(cè)比移植到黃體對側(cè)的受胎率高14%。盡管所得的結(jié)果不太相同，總體認為，移植到黃體同側(cè)子宮角的受胎率均比移植到黃體對側(cè)的受胎率高[14]，這可能是因為移植到黃體對側(cè)的胚胎促黃體分泌及抗黃體溶解的信號很難達到黃體，所以影響了它的受胎率。且牛胚胎附植部位一般是子宮角內(nèi)血管稠密、營養(yǎng)充足的部位，所以，通常移植到黃體同側(cè)子宮角深部1/2～1/3處，原則在不造成子宮角損傷的前提下盡可能靠前，越深越好[15]。

孫鳳俊[16-19]等人研究發(fā)現(xiàn)左側(cè)黃體受體牛受胎率略高于右側(cè)，但差異不顯著(P>0.05)，但付靜濤[20-21]等人研究認為移植左側(cè)黃體受體牛的受胎率顯著高于移植右側(cè)黃體受體牛的受胎率。之所以造成左右側(cè)黃體受體牛的移植受胎率不同，可能是跟移植操作人員的左右手操作習(xí)慣，以及不同群體有關(guān)。

4 黃體質(zhì)量與胚胎移植受胎率的關(guān)系

受體牛黃體發(fā)育質(zhì)量是判斷能否移植的依據(jù)之一。有關(guān)研究報道，黃體發(fā)育好有彈性并柔軟的受體牛通常有較好的移植受胎率[14]。桑潤滋等研究表明，移植黃體狀況良好的受體得到妊娠率為63.5%，而移植黃體發(fā)育較差的受體得的結(jié)果僅為28.6%，差異懸殊。可見，受體的黃體質(zhì)量是影響移植妊娠率的主要因素之一[22]。盧春霞等也發(fā)現(xiàn)黃體的質(zhì)量越好，受胎率越高，以移植鮮胚為例，A級黃體的受胎率極顯著高于C級黃體(P<0.01)，B級黃體的受胎率顯著高于C級黃體(P<0.05)，而移植凍胚時，A、B、C級黃體的移植受胎率差別則不顯著(P>0.05)[23]。這可能與移植的凍胚多為A級胚胎有關(guān)，但在生產(chǎn)上，往往需要考慮胚胎生產(chǎn)成本而選擇C級胚胎移植C黃體，肯定會造成受胎率低。

在生產(chǎn)中，胚胎移植受胎率不僅與黃體質(zhì)量還與胚胎質(zhì)量有關(guān)，兼顧到胚胎生產(chǎn)的成本，要根據(jù)實際情況選擇C級黃體的受體要不要移植，如果胚胎屬于自己生產(chǎn)的，需要的成本低一些，為了充分利用胚胎和受體牛，C級黃體的受體是可以移植的；但如果胚胎是購買回來的，消耗的成本相對要高些，為了得到更好的受胎率，最好還是質(zhì)量好的胚胎選擇黃體質(zhì)量好的受體移植才能得到更高的受胎率。

5 黃體生成溶解過程激素水平與胚胎移植的關(guān)系

黃體生成、溶解過程中激素水平的變化對胚胎移植效果產(chǎn)生了重要的影響，通過測定血漿或奶中孕酮含量，是判斷黃體是否適合移植的更為準(zhǔn)確的手段。吳美文等認為受體牛排卵第6～8天以后，血漿孕酮濃度超過一定的水平，如大于5 ng/mL，小于11 ng/mL，黃體質(zhì)量就應(yīng)該沒有問題，胚胎移植后，均有可能妊娠[24]。另外，孕酮與雌二醇的比例高，妊娠率隨之升高。如果孕酮與雌二醇的比例變小，即使孕酮濃度超過5 ng/mL，同樣會降低其受胎率[13]。陳明棠等對水牛3個等級黃體與移植日孕酮含量進行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)A級(黃體直徑在1.5 cm以上)黃體的孕酮含量極顯著高于C級(黃體直徑在0.8 cm以下)黃體的孕酮含量(31.31 nmol/L>16.77 nmol/L，P<0.01)；B級(黃體直徑在0.8～1.5 cm之間)黃體的孕酮含量顯著高于C級(黃體直徑在0.8 cm以下)黃體的孕酮含量(19.47 nmol/L>16.77 nmol/L，P<0.05)[6]；可見黃體大小與孕酮含量有著密切的關(guān)系。

在生產(chǎn)上，受體胚胎移植后能否妊娠，與黃體分泌孕酮的能力，飼養(yǎng)管理，特別是維生素和礦物質(zhì)營養(yǎng)都有很大的關(guān)系，這些因素不僅會影響受體母牛的發(fā)情和排卵，還會影響以后的胚胎早期發(fā)育都有很大影響。

6 小 結(jié)

受體牛黃體發(fā)育和位置是判斷能否移植的依據(jù)，因此確認黃體等級及存在的位置是胚胎移植的重要環(huán)節(jié)之一，黃體發(fā)育好的移植效果才好。而牛的胚胎移植是一個系統(tǒng)的胚胎生物工程，受到多環(huán)節(jié)、多因素的影響，每一個環(huán)節(jié)、每一個因素都會牽一發(fā)而動全身，影響最終的胚胎移植效果。如果想提高胚胎移植效果，每一個細節(jié)都應(yīng)當(dāng)做到盡善盡美。