2019—2021 年銅仁市手足口病原構(gòu)成及柯薩奇病毒A6 臨床特征調(diào)查研究

楊愛梅，劉莉

貴州省銅仁市人民醫(yī)院兒科，貴州銅仁 554300

手足口病是一種由腸道病毒引起的兒童常見傳染病，發(fā)病率高，重癥患者病死率高。手足口病的主要傳播途徑是糞-口途徑，亦可通過呼吸道、接觸等方式傳播，傳染性強，易導致流行或暴發(fā)，高發(fā)于5 歲以下兒童，以發(fā)熱和手、足、口腔、肛周皰疹為主要特征[1-2]。病毒還可以侵犯呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等引起肺水腫、肺出血、腦炎、遲緩性麻痹、心肌炎等，進展較快，甚至發(fā)生死亡[3-4]。手足口病分布極為廣泛，多個地區(qū)均有病例，在熱帶和亞熱帶地區(qū)四季均可發(fā)病，溫帶地區(qū)以夏秋兩季更為多見[5-6]。據(jù)相關(guān)報告，我國北方每年7月手足口發(fā)病率最高，而南方地區(qū)，每年的5 月和9—10月發(fā)病率將達到峰值[7-8]。該病主要包括柯薩奇病毒A6型、A10 型、A16 型以及EV71 等，2012 年柯薩奇A6 高發(fā)感染趨勢在江浙滬等地出現(xiàn),而近年來發(fā)現(xiàn)腸道病毒中柯薩奇病毒A6 型成為手足口病主要流行病原[9]。故此現(xiàn)以貴州省銅仁市人民醫(yī)院兒科2019 年1 月—2021年11 月收集到的手足口病病例4 330 例為臨床標本，分析病原體詳細構(gòu)成和柯薩奇病毒A6 臨床特征，為銅仁市手足口病防控預警提供詳實數(shù)據(jù)支撐，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在本院就診的患兒中共檢出手足口病病毒陽性標本4 330 例（均為咽拭子標本），將采集完成的標本放入病毒采樣管，存放溫度為4℃，48 h 以內(nèi)送往檢測室完成病原體檢測。

1.2 納入與排除標準

納入標準：所有患兒均為首次發(fā)病且入院前未接受過任何相關(guān)治療；臨床資料完整，并已通知家屬本次取樣研究。排除標準：合并急疹、水痘、帶狀皰疹以及嚴重性細菌感染患兒；先天性心臟病、臟器功能不全、其他傳染性疾病攜帶患兒。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 采集患兒發(fā)病3 d 內(nèi)的咽試子樣本，采用專用采樣棉簽，單獨分裝，檢測人員手部消毒，手持采樣棉簽尾部適度用力拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應避免觸及舌部，采樣完畢后迅速將棉簽放入裝有3～5 mL 保存液（生理鹽水或病毒營養(yǎng)液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。所有檢測完成后，統(tǒng)一送往檢測室。

1.3.2 實驗原理 試劑盒利用一步法實時熒光PCR 技術(shù)，分別以腸道病毒通用型、71 型、柯薩奇病毒A6 型、柯薩奇病毒xA16 型、柯薩奇病毒A10 型、腸道病毒基因編碼區(qū)的高度保守區(qū)為靶區(qū)域，設(shè)計特異性引物及熒光探針，進行一步法RT-PCR 多重擴增，用于樣本中腸道病毒RNA 以及腸道病毒71 型、柯薩奇病毒A6 型、柯薩奇病毒A16 型、柯薩奇病毒A10 型RNA 的同步定性檢測。另外，本試劑盒帶有內(nèi)標物質(zhì)，用于對核酸提取過程及PCR 擴增過程的監(jiān)控，可減少假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。

1.3.3 儀器與試劑 儀器為AFD4800 實時熒光定量PCR 儀、全自動醫(yī)用PCR 分析儀SLAN-969、臺式高速離心機、混勻器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外燈，試劑為手足口病毒腸道病毒VE71/A16/EV/A10/A6核酸檢測試劑盒。

1.3.4 資料收集方法 通過電子病歷系統(tǒng)，收集患兒人口統(tǒng)計學信息（包括年齡、性別、發(fā)病時間、住院時間）、臨床癥狀（發(fā)熱、皮疹、各系統(tǒng)受累情況）以及檢測陽性病例數(shù)及各組病原數(shù)、柯薩奇病毒A6 人口學資料和臨床資料（包括臨床癥狀表現(xiàn)、生化指標）。

1.4 觀察指標

詳細記錄全部手足口病病毒陽性標本檢測出的不同病原體類型、數(shù)量、總占比以及柯薩奇病毒A6 臨床特征的表現(xiàn)和癥狀占比。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 26.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料以[n（%）]表示。

2 結(jié)果

2.1 2019—2021 年銅仁市手足口病原體時間分布

2019—2021 年手足口病柯薩奇A6 病原體檢出率最高，腸道病毒71 型（EV71）病原體檢出率最低，見表1。

表1 2019—2021 年銅仁市手足口病原體構(gòu)成[n(%)]

2.2 柯薩奇病毒A6 臨床特征比較

2019—2021 年以柯薩奇病毒A6 為病原體的手足口病患者，發(fā)熱癥狀人數(shù)占比最多，白細胞升高和CRP（C 反應蛋白）升高癥狀人數(shù)占比相對較少，見表2。

表2 2019—2021 年柯薩奇病毒A6 臨床特征[n(%)]

3 討論

手足口病由腸道病毒引起，是一種以手部、足部、口腔出疹為主要特征的急性傳染病，在世界范圍內(nèi)均有流行特征，我國將手足口病法定為丙類傳染病，主要傳染途徑為密切接觸和糞口傳播，可導致重大公共衛(wèi)生問題。該病主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱和手部、足部以及口腔黏膜、肛周等出現(xiàn)水性皰疹，存在重癥病例和病死率，嚴重危害兒童生命安全[10-11]。2008 年后，在法國和芬蘭小規(guī)模爆發(fā)的手足口疾病中主要以柯薩奇A10 和柯薩奇A6為主要病原體，其中柯薩奇A6 病原體感染的患兒發(fā)病臨床描述被確定為非典型[12-13]。根據(jù)我國2008 年后相關(guān)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，自我國流行的手足口病原體感染主要是腸道病毒71 型（EV71）和柯薩奇A16[14-15]。但是近年來全國各地的病原學均發(fā)生了變化，柯薩奇A6 的檢出率明顯高于既往檢測病原體，且多次發(fā)生區(qū)域性流行暴發(fā)[16-17]。而后在我國受柯薩奇A6 感染患兒的臨床癥狀較于普通型手足口病更加嚴重，部分病例持續(xù)高熱，皰疹可蔓延至患兒周身，皮疹分布及形態(tài)與經(jīng)典型有區(qū)別，皮損較重，且成年人中也存在一定病例[18-19]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2019—2021 年手足口病柯薩奇病原體分別為柯薩奇A16、柯薩奇A10、腸道病毒71 型（EV71）、腸道病毒通用型(EV)以及柯薩奇A6，其中柯薩奇A6 病原體檢出率最高，與當下全國多地手足口病病原構(gòu)成一致，說明銅仁市手足口病發(fā)病率仍高，且誘發(fā)該病的病原學均發(fā)生了顯著變化。2019—2021 年以柯薩奇病毒A6 為病原體的手足口病患者，均出現(xiàn)發(fā)熱、多形態(tài)皮疹、白細胞升高以及CRP 升高等癥狀，其中發(fā)熱癥狀占比最高，白細胞升高和CRP 升高癥狀人數(shù)占比相對較少。后期隨訪中部分患兒在患病后4 周左右出現(xiàn)脫皮、指甲脫落等癥狀。與任小梅[20]的研究中不同年齡段3 組嬰幼兒臨床癥狀發(fā)熱率最高，分別為86.38%、81.03%、76.92%的研究結(jié)果相一致。本院作為銅仁市僅有的一家開展手足口病病原學檢測的專業(yè)機構(gòu)，標本收集量足夠全面，可代表銅仁市手足口病原分布情況。而針對本市手足口病病原體構(gòu)成類型進行全面分析，可清晰了解當下該病具體情況，盡快確定當下感染的發(fā)生和性質(zhì)，及早進行診療、選擇適當?shù)闹委煼桨敢约安扇∮行У念A防措施，防止感染和傳播可能造成的廣泛性危害。本研究并總結(jié)主要病原體柯薩奇A6 的臨床特征，根據(jù)其實際情況，對全市兒科醫(yī)療機構(gòu)開展培訓，提高兒科醫(yī)師對該病的診治水平，做到早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，達到控制疾病流行的目的，避免發(fā)生大規(guī)模傳染病流行，以此全面提升本市對手足口病的診斷及救治能力，減輕家庭及社會負擔，避免兒童受到疾病侵擾。

綜上所述，本市檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)目前除未分型的病例外，柯薩奇A6 為主要病原體，其臨床癥狀以發(fā)熱和多形態(tài)皮疹為主，導致白細胞和C 反應蛋白超過正常值范圍，以及4 周左右可能出現(xiàn)脫皮、指甲脫落等癥狀，為手足口病的治療及預防和控制工作起到一定的指導作用。