高效液相色譜-質譜法測定食品中安賽蜜的方法研究

孫 文，張慧芳

（山西省檢驗檢測中心食品與糧食檢驗技術研究所，山西太原 030012）

安賽蜜具有價格便宜、穩(wěn)定性好、甜度高、易溶解及用量少等優(yōu)點，備受食品生產廠青睞，但攝入過多對人體有害[1]。根據《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014），安賽蜜可用于飲料冷凍飲品、果醬、蜜餞、醬腌菜、糖果、焙烤食品、調味品、飲料和果凍等食品中，并規(guī)定了相應的最大使用量[2]，防止濫用甜味劑的現象發(fā)生。本方法采用高效液相色譜-質譜聯用法，可快速、簡便、準確地定性定量檢測食品中的安賽蜜，適用于實驗室進行大量檢測[3-4]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紅酒、果汁、糕點、蜜餞、牛奶及酸奶樣品均購于超市；安賽蜜標準溶液[證書編號為GBW(E)100171，北京海岸鴻蒙標準物質技術有限責任公司]；甲醇、乙腈、甲酸（Fisher公司，色譜純）；三氯甲烷、甲酸銨、三乙胺、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅（分析純，國藥集團）；HLB固相萃取柱（Waters oasis，6 mL）；實驗室一級超純水。

1.2 儀器與設備

LCMS-4500高效液相色譜質譜聯用儀（配ESI源，AB公司）；BSA124S-CW電子天平（精密度0.000 1 g，賽多利斯科學儀器有限公司）；IKA VORTEX 3渦旋混勻器；離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）；HSC-B水浴氮吹儀（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；KQ5200DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）等。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液配制

將濃度為1 000μg·mL-1的安賽蜜標準溶液分別用甲醇-水（體積比1∶1）稀釋成20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1和500 ng·mL-1的標準工作液。

1.3.2 樣品前處理

參照《出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法》（SN/T 3538—2013）進行處理。

1.3.3 儀器條件

（1）液相色譜條件。色譜柱：Eclipse Plus C18（100 mm×2.1 mm，3.5μm）；流動相：0.1%甲酸-5 mmol·L-1甲酸銨+乙腈，梯度洗脫，見表1；流速：0.5 mL·min-1；進樣量：2μL；柱溫：40 ℃。

表1 液相色譜的梯度洗脫條件

（2）質譜條件。離子化模式：ESI-；掃描模式：多反應監(jiān)測（MRM）；離子源溫度：550 ℃；電噴霧電壓（IS）：-4 500 V；氣簾氣（CUR）：35 Psi；碰撞氣（CAD）：9 Psi；霧化器（GS1）：50 Psi；輔助加熱器（GS2）：50 Psi；其他多反應監(jiān)測條件見表2。

表2 多反應監(jiān)測條件

2 結果與分析

2.1 色譜及質譜圖

由圖1可知，目標化合物峰型尖銳對稱、半峰寬符合要求，響應值可達5.5×104，信噪比遠大于10，定性與定量離子對穩(wěn)定存在，可有效確定該化合物為安賽蜜，從而進行準確的定性定量分析。

圖1 目標物色譜圖

2.2 線性范圍及定量限

以安賽蜜定量離子的峰面積為縱坐標（y），相應的質量濃度為橫坐標（x），在20～500 ng·mL-1線性關系良好，繪制的標準曲線方程：y=25 900x+40 800，相關系數r=1.000 0。

儀器定量限：當上機濃度為20 ng·mL-1時，儀器的信噪比為83.1。當信噪比為10時，對應的上機濃度為2.4 ng·mL-1。

方法定量限：當上機濃度為2.4 ng·mL-1，計算得牛奶和酸奶中安賽蜜的方法定量限為0.001 2 mg·kg-1，紅酒、果汁、糕點和蜜餞中安賽蜜的方法定量限為0.12 mg·kg-1，能滿足SN/T 3538—2013標準中0.01 mg·kg-1和1.0 mg·kg-1的定量限要求。

2.3 回收率與精密度

在不同基質的空白樣品中，分別添加1、2、5倍定量限濃度水平的標準溶液進行加標回收試驗，且分別在不同濃度下做6平行試驗，計算加標回收率和精密度RSD，結果見表3～表4。本方法準確度和精密度良好，滿足GB/T 27404—2008[5]的要求。

表3 紅酒、果汁、糕點、蜜餞基質中加標回收率及精密度

表4 牛奶、酸奶基質中加標回收率及精密度

3 結論

本文參照《出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法》（SN/T 3538—2013），對安賽蜜的液相分離條件及離子對的掃描條件進行了優(yōu)化，能準確檢測出不同基質中添加的安賽蜜含量，并從線性關系、重復性、定量限點的信噪比、不同濃度水平的加標回收率及精密度等方面做了大量試驗，結果表明，該方法測定不同基質中的安賽蜜，方法穩(wěn)定，準確可靠，為研究食品中安賽蜜的測定提供了一定的檢測依據。