QuEChERS-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定枸杞干果中新煙堿類農(nóng)藥殘留

陳慧斐，陽(yáng) 曦，劉 瑋，孟 敏，肖曉莉，婁 靖

（綿陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，四川綿陽(yáng) 621000）

枸杞是我國(guó)一種重要的藥食同源的農(nóng)產(chǎn)品。由于其具有生物活性物質(zhì)和保健功能，越來(lái)越受到大眾的歡迎。茍春林[1]分析了枸杞的質(zhì)量安全現(xiàn)狀，明確枸杞生產(chǎn)過(guò)程中農(nóng)藥殘留問(wèn)題仍較為突出。新煙堿類殺蟲劑既可用于莖葉處理，也可用于土壤或種子處理[2]。因此，測(cè)定枸杞中新煙堿類農(nóng)藥殘留具有重要的意義。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[3-5]定性檢查準(zhǔn)確、靈敏度較高、測(cè)定時(shí)間短，其應(yīng)用越來(lái)越普遍。本文采用QuEChERS結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的檢測(cè)方法，檢測(cè)枸杞干果中8種新煙堿類農(nóng)藥殘留，以滿足日常定性與定量檢驗(yàn)工作。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀4000 Q TRAP為美國(guó)AB SCIEX公司產(chǎn)品；電子天平為瑞士梅特勒-托利多有限公司產(chǎn)品。乙腈、甲酸（色譜純）購(gòu)于Fisher公司；乙酸銨、無(wú)水硫酸鎂均購(gòu)于成都市科龍化工試劑廠；C18和N-丙基乙二胺PSA均購(gòu)于北京振翔科技有限公司。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包括吡蟲啉、啶蟲脒、噻蟲啉、噻蟲嗪、噻蟲胺、呋蟲胺、烯啶蟲胺和氯噻啉，均采購(gòu)于曼哈格公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

用乙腈將標(biāo)準(zhǔn)品配制成10～100 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液?jiǎn)螛?biāo)，臨用時(shí)，用乙腈將單標(biāo)溶液稀釋成為1 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。取6份空白樣品，通過(guò)提取凈化處理后，加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成濃度為2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、15 ng·mL-1、25 ng·mL-1和50 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.2.2 樣品前處理

稱取粉碎均勻的試樣2 g，置于50 mL離心管中，加入5 mL水，加入5 mL乙酸-乙腈（1∶99）溶液，搖勻，渦旋混勻1 min后，超聲提取15 min，再加入5 g氯化鈉，振蕩5 min，8 000 r·min-1離心10 min，取上清液2 mL于預(yù)先裝有50 mg無(wú)水硫酸鎂、100 mg C18和150 mg PSA的塑料離心管，渦旋混勻后，10 000 r·min-1離 心5 min，取上 清 液1 mL，加 入1 mL水，混勻后經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾后，用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3 液相色譜條件

Thermo Acclaim C18色譜柱型號(hào)為3.0×100 mm；流動(dòng)相流速為0.4 mL·min-1；色譜柱柱溫為35 ℃；樣品進(jìn)樣量為5 μL；流動(dòng)相A為乙腈；流動(dòng)相B為0.1%甲酸水溶液；梯度洗脫程序：0～0.5 min，5%A；0.5～1 min，5%A→30%A；1～2 min，30%A；2～3 min，30%A→90%A；3～5 min，90%A；5～5.5 min，90%A→5%A；5.5～8 min，5%A。

1.2.4 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧電離源（ESI）；檢測(cè)器掃描方式：正離子（ESI+）；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple Reaction Monitoring，MRM）；氣簾氣壓力（CUR）：25 psi；離子化電壓（IS）：5 500 V；離子源溫度（TEM）：550 ℃；噴霧器壓力（GS1）：55 psi；輔助加熱器壓力（GS2）：50 psi；碰撞器（CAD）：Medium；碰撞室出口電壓（CXP）：12 V；碰撞室入口電壓（EP）：10 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

配制1 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)譜儀對(duì)其進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜掃描（Q1 MS），得到各化合物適配的母離子質(zhì)荷比。選擇掃描模式為碎片離子掃描Product lon(MS2)，得到碎片離子信息，選取其中2對(duì)離子作為離子對(duì)。優(yōu)化參數(shù)：去簇電壓（DP）和碰撞能量（CE），優(yōu)化結(jié)果及質(zhì)譜分析參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 8種新煙堿類農(nóng)藥的質(zhì)譜分析參數(shù)

2.2 流動(dòng)相的優(yōu)化

本試驗(yàn)采用電噴霧正離子掃描模式，加入0.1%甲酸于流動(dòng)相中，利于目標(biāo)物形成帶電離子。比較不同流動(dòng)相，8種農(nóng)藥的響應(yīng)強(qiáng)度及分離效果相近，但選擇乙腈作為流動(dòng)相的峰形優(yōu)于甲醇，利于目標(biāo)化合物分離。MRM色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 8種農(nóng)藥的MRM圖

2.3 方法的線性范圍及檢出限

準(zhǔn)確配制混合農(nóng)藥濃度為2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、15 ng·mL-1、25 ng·mL-1和50 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按照1.2試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法制作校準(zhǔn)曲線，線性良好（r2＞0.995），結(jié)果見(jiàn)表2。8種新煙堿農(nóng)藥檢出限（Limit of Detection，LOD）（以信噪比大于3計(jì)）為0.01～0.09 μg·kg-1，定量限（Limit of Quantitation，LOQ）（以信噪比大于10計(jì)）為0.02～0.30 μg·kg-1。

2.4 回收率及精密度

按3個(gè)水平的添加對(duì)空白干枸杞樣品進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，以測(cè)定該方法的回收率，加標(biāo)水平及相應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，8種農(nóng)藥回收率在72.1%～106.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為0.31%～3.97%，該測(cè)定方法具有良好穩(wěn)定性、準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

表2 8種新煙堿類殺蟲劑的檢出限、定量限、回收試驗(yàn)結(jié)果

2.5 實(shí)際樣品檢測(cè)

GB 2763—2021標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了枸杞（干）中吡蟲啉最大殘留量為1 mg·kg-1，啶蟲脒最大允許殘留量則為2 mg·kg-1，其他6種未作記錄。隨機(jī)抽取市售干枸杞共計(jì)10批次，按照上述研究方法分析，結(jié)果均未檢出。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了枸杞中8種新煙堿類農(nóng)藥殘留的QuEChERS-LCMS/MS檢測(cè)方法，采用MRM監(jiān)測(cè)模式，空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量，通過(guò)定性和定量分析了干枸杞中上述8種新煙堿類農(nóng)藥。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、檢出限低，可有效地滿足對(duì)枸杞中8種新煙堿類農(nóng)藥含量的測(cè)定。