藏木香中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量測(cè)定方法的建立

歐霞，莫歌，宗詠花，林朝展

（1.西藏藏醫(yī)藥大學(xué)，拉薩 850000；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510000）

藏木香，藏文名“瑪奴”，亦為土木香，本為種在西藏及新疆地區(qū)以“土木香”之名作木香藥用，為菊科植物總狀土木香Inula racemosa Hook.f.的干燥根，是藏醫(yī)常用藥材之一。其味甘、辛、苦，性溫，具有健脾和胃、行氣止痛、安胎的功效，用于治療慢性胃炎、胃腸功能紊亂、肋間神經(jīng)痛、胸壁挫傷和岔氣作痛、胎動(dòng)不安等癥[1-3]。本實(shí)驗(yàn)建立藏木香中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量測(cè)定方法，為藏木香的開發(fā)利用、鑒別等提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)Millipore（德國Merck公司）；十萬分之一天平Denver TB-25（北京丹佛儀器有限公司）；安捷倫高效液相色譜儀Agilent 1260 Infinity（美國安捷倫公司）；Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱；電爐等。藏藥木香6批（由西藏藏醫(yī)藥大學(xué)提供）；標(biāo)準(zhǔn)品木香烴內(nèi)酯（純度99.56% HPLC，批號(hào)MUST-18101308），標(biāo)準(zhǔn)品去氫木香內(nèi)脂（純度99.20%HPLC，批號(hào)MUST-18101301）由成都曼斯特生物科技有限公司和中國科學(xué)院成都生物研究所研制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動(dòng)相：甲醇（B）-水（A），洗脫梯度0～10 min 10%～73%B，10～20 min 73%～78%B，20～25 min 78%～85%B，25～30 min 85%～100%B；流速0.6 mL/min；檢測(cè)波長：225 nm；柱溫箱25℃；進(jìn)樣量15μL。理論塔板數(shù)按照木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂計(jì)算應(yīng)不低于9000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定木香烴內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品5.43 mg，去氫木香內(nèi)脂標(biāo)準(zhǔn)品5.41 mg，置于10 mL容量瓶中，加入甲醇至刻度線，搖勻，制得對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液的制備

木香超聲提取供試品制備：精密稱定藥材粉末約2 g，加入100倍量的甲醇，浸泡0.5 h后，超聲提取40 min取出，過0.22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

采用色譜工作站ChemStation軟件處理系統(tǒng)適應(yīng)性（儀器性能）數(shù)據(jù)報(bào)告。理論塔板數(shù)以木香烴內(nèi)酯計(jì)算分別為：23043、23134、23541、23697、24222和24248，以去氫木香內(nèi)脂計(jì)算分別為40846、41797、42180、43001、43256和44118，均大于9000，符合要求；木香烴內(nèi)酯特征峰分離度均大于8，去氫木香內(nèi)脂分離度均大于3；木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂信噪比均大于100，符合定量檢測(cè)要求。詳見圖1。

圖1 木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂對(duì)照品（A）和藏木香藥材（B）HPLC色譜圖

木香烴內(nèi)酯（RT=25.904）、去氫木香內(nèi)脂（RT=27.794）

2.5 線性關(guān)系及方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系

精密吸取對(duì)照品溶液，稀釋成250、125、62.5、31.3、15.63、7.81μg/mL；依選定的色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（y，mAU）對(duì)進(jìn)樣量（x，μg）進(jìn)行線性回歸。回歸方程分別為：木香烴內(nèi)酯y=1295.9x+72.756（n=7），γ=0.9999，線性范圍0.117 μg～7.5 μg；去氫木香內(nèi)脂y=1787.9x+115.4（n=7），γ=0.9998，線性范圍0.117 μg～7.5 μg。2.5.2精密度試驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下設(shè)置的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，分別記錄色譜圖，計(jì)算可得木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂RSD分別為0.18%、0.32%，表明所用儀器在設(shè)置的條件下精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取木香待測(cè)樣品6份，按照“2.3”項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下設(shè)置的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算可得木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂RSD分別為0.94%和1.43%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算可得木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂RSD分別為0.49%和0.79%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的供試品（含木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)脂）樣品共6份，分別精密稱定，按照“2.3”項(xiàng)下的方法制成供試品溶液。分別精密稱定木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)脂若干，加入上述供試品溶液中，按照“2.1”項(xiàng)下設(shè)置的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.6 樣品測(cè)定結(jié)果

依照已確立的方法進(jìn)樣測(cè)定峰面積，代入線性回歸方程計(jì)算木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂含量，結(jié)果見表2。

表2 藏木香藥材中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂含量測(cè)定結(jié)果（n=6）

3 討論

本實(shí)驗(yàn)在系統(tǒng)分析文獻(xiàn)及前期化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上，采用HPLC方法對(duì)藏木中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)脂含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示在木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)脂含量在木香藥材中分別為3.203%和1.882%，二者總量為5.08%。根據(jù)2020版中國藥典一部（藥材與飲片）木香【含量測(cè)定】下規(guī)定，以甲醇-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長225 nm，木香藥材中木香烴內(nèi)酯（C15H20O2）和去氫木香內(nèi)酯（C15H18O2）的總量不得少于1.8%，川木香【含量測(cè)定】下規(guī)定以甲醇-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長225 nm，木香藥材中木香烴內(nèi)酯（C15H20O2）和去氫木香內(nèi)酯（C15H18O2）的總量不得少于3.2%。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藏木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的總量高于木香和川木香。表現(xiàn)出極高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，為今后藏木香的開發(fā)利用、鑒別供科學(xué)依據(jù)。