新生兒上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染的流行病學(xué)分析

龔唯鳴，唐 紅，肖曉冬

（深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院兒科，廣東 深圳 518081）

解脲支原體（ureaplasma urealyticum，UU）是一種無(wú)細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，可在體外培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖。有研究指出，解脲支原體能在泌尿生殖道及呼吸道黏膜表面定植和復(fù)制，可引起早產(chǎn)、呼吸道感染和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染等疾病[1]。B 族鏈球菌（Group B Streptococcus，GBS）又叫無(wú)乳鏈球菌，其主要是定植在胃腸道和生殖道，屬于條件致病菌。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)其與新生兒腦膜炎、新生兒敗血癥及新生兒肺炎密切相關(guān)[2]。在本文中，筆者主要是分析新生兒上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染的流行病學(xué)特征。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018 年1 月至2021 年6 月在深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院新生兒科住院的新生兒1206 例，其中有男孩590 例、女孩616 例，其日齡為0 ～28 d。這些新生兒均為高危兒、早產(chǎn)兒或被確診患有新生兒敗血癥、新生兒高膽紅素血癥、低血糖、新生兒窒息、羊水吸入綜合征、臍炎等疾病。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的采集 采用兩支一次性的無(wú)菌咽拭子輕柔、迅速地擦拭患兒的兩腭弓、咽及扁桃體，將一支無(wú)菌咽拭子插入塑料管中，貼上患者的標(biāo)簽條碼，立即送檢或保存于-20℃的冰箱中待檢（用于檢測(cè)解脲支原體DNA），另一支放入無(wú)乳鏈球菌增菌培養(yǎng)液中進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)鑒定。

1.2.2 DNA 的提取 向咽拭子標(biāo)本管內(nèi)加入1 mL 滅菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，擠干棉拭子。將上述標(biāo)本生理鹽水混合物倒入1.5 mL 的離心管內(nèi)，以12 000 rpm 的速度離心5 min。吸去上清液，在沉淀物中加入滅菌生理鹽水1 mL。對(duì)沉淀物進(jìn)行吹打混勻，以12 000 rpm的速度離心5 min。再次吸去上清液，在沉淀物中加入DNA 提取液50 μL，并充分混勻。以100℃恒溫處理（10±1）min。以12 000 rpm 的速度離心5 min，取上清液作為DNA 模板。

1.2.3 PCR 擴(kuò)增 每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品，與臨床未知標(biāo)本同時(shí)上機(jī)擴(kuò)增檢測(cè)。在每管PCR 反應(yīng)體系內(nèi)均加入DNA 模板2 μL，PCR循環(huán)反應(yīng)條件為：93℃預(yù)變性2 min ；93℃變性45 s，55℃延伸60 s，共10 個(gè)循環(huán)；93℃變性30 s，55℃延伸45 s，共擴(kuò)增30 個(gè)循環(huán)，收集熒光信號(hào)。

1.2.4 結(jié)果判定 樣本檢測(cè)值低于檢測(cè)下限5.00×102基因拷貝/mL 且擴(kuò)增曲線呈S 形判定為有反應(yīng)性。在弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)值允許范圍為2.5×104～4.0×105基因拷貝/mL、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)值允許范圍為2.5×106～4.0×107基因拷貝/mL 的條件下，陰性質(zhì)控結(jié)果應(yīng)為陰性（且擴(kuò)增曲線不呈S 形），弱陽(yáng)性和陽(yáng)性質(zhì)控結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性（且擴(kuò)增曲線呈S 形）。上述要求需在同批次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿(mǎn)足，否則該實(shí)驗(yàn)為無(wú)效，需要重新檢測(cè)。

1.2.5 細(xì)菌培養(yǎng)鑒定 對(duì)采樣咽拭子進(jìn)行增菌處理后將其置于血培養(yǎng)基中，置入37℃的培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)24 h，挑選可疑菌落進(jìn)行GBS 鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1206 例患兒上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染的分布情況

1206 例患兒解脲支原體的總感染率、無(wú)乳鏈球菌的總感染率分別為12.02% 和1.07%，男患兒與女患兒解脲支原體的感染率、無(wú)乳鏈球菌的感染率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 1206 例患兒上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染的分布情況

2.2 1206 例患兒中男、女患兒上呼吸道解脲支原體感染的發(fā)生率及治愈情況

1206 例患兒中男、女患兒上呼吸道解脲支原體感染的發(fā)生率及治愈率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2 1206 例患兒中男、女患兒上呼吸道解脲支原體感染的發(fā)生率及治愈情況

2.3 145 例上呼吸道解脲支原體感染患兒中男、女患兒DNA 檢測(cè)結(jié)果的分布情況

進(jìn)行解脲支原體感染DNA 檢測(cè)的結(jié)果顯示，145 例上呼吸道解脲支原體感染患兒中男患兒與女患兒的低拷貝率和高拷貝率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表3。

表3 145 例上呼吸道解脲支原體感染患兒中男、女患兒DNA 檢測(cè)結(jié)果的分布情況[%( 例)]

2.4 145 例上呼吸道解脲支原體感染患兒中男、女患兒低拷貝率與高拷貝率的比較

進(jìn)行解脲支原體感染DNA 檢測(cè)的結(jié)果顯示，145例上呼吸道解脲支原體感染患兒中男、女患兒的低拷貝率均低于高拷貝率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見(jiàn)表4。

表4 145 例上呼吸道解脲支原體感染患兒中男、女患兒低拷貝率與高拷貝率的比較[%( 例)]

2.5 上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染在不同疾病中的分布情況

145 例解脲支原體感染患兒中早產(chǎn)兒、新生兒敗血癥患兒、新生兒高膽紅素血癥患兒、高危兒和其他疾病患兒的占比相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。13例無(wú)乳鏈球菌感染患兒中早產(chǎn)兒、新生兒敗血癥患兒、新生兒高膽紅素血癥患兒、高危兒和其他疾病患兒的占比相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表5。

表5 上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染在不同疾病中的分布情況

3 討論

解脲支原體主要存在于人類(lèi)生殖腺及泌尿生殖道中，屬于條件致病菌，主要傳播途徑包括性傳播、母嬰垂直傳播和醫(yī)源性傳播。其中母嬰垂直傳播可誘發(fā)新生兒/ 胎兒免疫反應(yīng)，從而可導(dǎo)致低出生體重、早產(chǎn)、肺炎、支氣管肺發(fā)育不良、慢性肺疾病、腦膜炎、呼吸窘迫綜合征和敗血癥等相關(guān)疾病的發(fā)生[3]。有研究指出，新生兒感染解脲支原體還可引起腦室內(nèi)出血、視網(wǎng)膜病變和壞死性小腸結(jié)腸炎等疾病[4]。近年來(lái)，無(wú)乳鏈球菌感染的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，由其導(dǎo)致的新生兒敗血癥已引起醫(yī)學(xué)界的高度重視。本研究的結(jié)果顯示，1206 例患兒解脲支原體的總感染率為12.02%。這與Kwak DW 等[5]報(bào)道的62.5%差距較大。有研究指出，解脲支原體在成年妊娠女性生殖道中的定植率為40% ～80%[6]。本研究的結(jié)果顯示，1206例患兒中男患兒與女患兒解脲支原體的感染率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這說(shuō)明，新生兒感染解脲支原體的風(fēng)險(xiǎn)不受性別因素的影響。從本研究中的表2 和表4 可以看出，雖然新生兒感染解脲支原體后咽喉部所攜帶的病原體數(shù)量較多，但經(jīng)積極治療后治愈率較高。據(jù)統(tǒng)計(jì)，有18% ～55% 的圍生期解脲支原體感染是由母嬰垂直傳播引起的[7-9]。有研究指出，宮內(nèi)感染的傳播途徑可分為血行感染、上行感染和產(chǎn)時(shí)感染[4]。本研究的結(jié)果顯示，145 例解脲支原體感染患兒中早產(chǎn)兒、新生兒敗血癥患兒、新生兒高膽紅素血癥患兒、高危兒和其他疾病患兒的占比相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?？梢?jiàn)，解脲支原體感染能引起全身各系統(tǒng)的多種疾病，而非某種單一的特定疾病。鄭拉潔等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在＜34 周早產(chǎn)兒下呼吸道分泌物中檢出解脲支原體陽(yáng)性可能與其出生體質(zhì)量較低有關(guān)。有研究顯示，患有新生兒呼吸窘迫綜合征的極低出生體重兒其下呼吸道感染解脲支原體可增加其支氣管肺發(fā)育不良的發(fā)生率，下呼吸道感染解脲支原體與支氣管肺發(fā)育不良和新生兒先天性肺炎的發(fā)生有關(guān)[11]。Resch B 等[12]的研究表明，新生兒輕度腦損傷及肺疾病與解脲支原體感染有顯著的相關(guān)性, 發(fā)生解脲支原體感染會(huì)增加極低體重出生兒患支氣管肺發(fā)育不良的風(fēng)險(xiǎn)。有研究顯示，合并解脲支原體感染的孕婦其自發(fā)性流產(chǎn)、胎膜早破、早產(chǎn)、分娩低出生體重兒、死胎、死產(chǎn)的發(fā)生率均顯著高于未感染解脲支原體的孕婦[13]。國(guó)外有報(bào)道稱(chēng)，解脲支原體感染導(dǎo)致的早產(chǎn)是由微生物及其產(chǎn)物（如Toll 樣受體）相互作用形成炎性反應(yīng)引起的一種不良妊娠結(jié)局[14]。本研究的結(jié)果顯示，1206 例患兒無(wú)乳鏈球菌的總感染率僅為1.07%。這與金嫻等[15]報(bào)道的10.67% 相差甚遠(yuǎn)。這可能與標(biāo)本來(lái)源及檢測(cè)方法存在差異有關(guān)。陸月合等[16]研究發(fā)現(xiàn)，新生兒無(wú)乳鏈球菌感染主要是以Ⅲ、Ⅰb、Ⅴ型為主。劉玲等[17]發(fā)現(xiàn)，存在低出生體重、早產(chǎn)、經(jīng)陰道分娩及缺氧等因素的新生兒感染無(wú)乳鏈球菌的風(fēng)險(xiǎn)較大。從本研究中的表5 可以看出，無(wú)乳鏈球菌可引起早產(chǎn)、新生兒敗血癥等多種疾病，尤其易引起新生兒敗血癥。厲世笑等[18]發(fā)現(xiàn)，3月齡以下的嬰幼兒其發(fā)生無(wú)乳鏈球菌血流感染后病情較兇險(xiǎn)，應(yīng)早期使用抗生素進(jìn)行治療。楊鴻等[19]發(fā)現(xiàn)，新生兒無(wú)乳鏈球菌早發(fā)型敗血癥與晚發(fā)型敗血癥的臨床表現(xiàn)不同，且早發(fā)型敗血癥的病死率較高。本研究中所有感染病例在及時(shí)使用抗生素治療后均痊愈出院。這說(shuō)明，早篩查、早診斷和早治療對(duì)新生兒上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染患兒的預(yù)后至關(guān)重要。筆者認(rèn)為，全面了解新生兒上呼吸道解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染的流行病學(xué)特征，可為相關(guān)新生兒疾病的預(yù)防和診治提供參考依據(jù)。

綜上所述，新生兒上呼吸道感染解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌的傳播途徑主要是母嬰傳播，患兒感染解脲支原體后咽喉部所攜帶的病原體數(shù)量較多，且感染情況不受性別差異的影響。解脲支原體和無(wú)乳鏈球菌感染均可引起新生兒各系統(tǒng)的多種疾病，應(yīng)引起臨床重視，及時(shí)予以干預(yù)。