基于一測多評法的當(dāng)歸藥材質(zhì)量控制研究

李小陽，翟小林，王 丹，范 晶，裴紋萱，董 玲，孫 裕，宋學(xué)斌，王晶娟*

基于一測多評法的當(dāng)歸藥材質(zhì)量控制研究

李小陽1, 4，翟小林1，王 丹1，范 晶1，裴紋萱2，董 玲2，孫 裕3，宋學(xué)斌3，王晶娟1*

1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488 2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，北京 100029 3. 蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730046 4. 中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)藥信息研究所，北京 100700

建立一測多評法（quantitative analysis of multi-components by a single marker，QAMS）同時(shí)測定當(dāng)歸中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞的含量。采用Waters X-Select CSH色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.085%磷酸-水溶液（A）-乙腈（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫，體積流量1.0 mL/min，柱溫40 ℃，檢測波長265 nm。在線性范圍內(nèi)各成分線性良好（2＞0.999）。以藁本內(nèi)酯為內(nèi)標(biāo)，阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯和丁烯基苯酞的相對校正因子分別為1.073 4、0.564 8、0.468 1、0.926 2、1.083 5；同時(shí)采用外標(biāo)法測定這6個(gè)成分的含量，將2種方法進(jìn)行分析比較，結(jié)果沒有明顯差異。建立了當(dāng)歸藥材中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞6個(gè)成分的QAMS法，該法可用于當(dāng)歸的質(zhì)量控制。

當(dāng)歸；一測多評法；阿魏酸；洋川芎內(nèi)酯I；洋川芎內(nèi)酯H；阿魏酸松柏酯；藁本內(nèi)酯；丁烯基苯酞

當(dāng)歸，又名文無，是傘形科植物當(dāng)歸(Oliv.) Diels.的干燥根。味甘、辛，性溫，歸肝、心、脾經(jīng)，有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效[1]。目前，對于當(dāng)歸化學(xué)成分及藥理作用的研究已經(jīng)較為全面。當(dāng)歸中的化學(xué)成分主要包括苯酞類、香豆素類、黃酮類、有機(jī)酸類及其他成分[2-3]。它的藥理作用廣泛，既能作用于心血管系統(tǒng)和血液系統(tǒng)，還有抗炎、抗氧化和增強(qiáng)免疫的功效[4-9]。

阿魏酸是當(dāng)歸中的主要活性成分，以游離型或結(jié)合型存在于藥材中。阿魏酸與松柏醇結(jié)合形成的阿魏酸松柏酯是最主要的結(jié)合形式之一[10]。阿魏酸松柏酯有很高的生物活性，它不僅是當(dāng)歸揮發(fā)油中抗氧化活性的來源[11]，還是谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的強(qiáng)抑制劑，對潛在腫瘤多藥耐藥有逆轉(zhuǎn)作用[12]。但它不穩(wěn)定，極易在光和高溫的條件下分解為阿魏酸[10]。目前，《中國藥典》2020年版中對當(dāng)歸的要求為阿魏酸含量不得少于0.05%。有文獻(xiàn)建議，由于結(jié)合型阿魏酸與游離型阿魏酸之間的轉(zhuǎn)化關(guān)系，應(yīng)當(dāng)將總阿魏酸含量作為當(dāng)歸的質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)[13]。除此以外，藥典中并未對當(dāng)歸中的另一主要活性成分藁本內(nèi)酯的含量加以控制?；诒菊n題組對當(dāng)歸的前期研究[14-15]，以及當(dāng)歸中苯酞類成分之間的相互轉(zhuǎn)化作用[16-17]，本課題組建立了一測多評法（quantitative analysis of multi-components by a single marker，QAMS）同時(shí)測定[18-19]當(dāng)歸中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞的含量測定方法，為中藥當(dāng)歸質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的制定提供一種方法和手段。

1 材料

BSA124S型、CPA225D型電子分析天平，德國Sartorius公司；SB5200T型超聲儀，寧波新芝生物公司；2998PDA型Waters液相色譜儀（檢測器），美國Waters公司。色譜純甲醇、乙腈、甲酸和磷酸為Fisher公司生產(chǎn)。

實(shí)驗(yàn)所收集的當(dāng)歸樣品均經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院鑒定系王晶娟副教授鑒定為傘形科植物當(dāng)歸(Oliv.) Diels.的干燥根。樣品信息見表1。阿魏酸（批號H25M6L1）對照品購于源葉生物，洋川芎內(nèi)酯I（批號180428）、洋川芎內(nèi)酯H（批號180121）、丁烯基苯酞（批號171004）、藁本內(nèi)酯（批號170804）對照品購于北京四面體生物科技發(fā)展有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%。對照品阿魏酸松柏酯（171216）購于北京四面體生物科技發(fā)展有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于95%。

表1 當(dāng)歸樣品信息

Table 1 Information of Angelicae Sinensis Radix

批號采集時(shí)間產(chǎn)地批號采集時(shí)間產(chǎn)地 12015岷縣西寨鎮(zhèn)劉家堡村172016岷縣喇嘛村 22015岷縣蒲麻鄉(xiāng)化力溝村182016漳縣尖子村 32015岷縣西寨鎮(zhèn)192016漳縣金鐘鎮(zhèn) 42015渭源縣祁家廟鄉(xiāng)瓦樓村202016漳縣寨子川村 52015渭源縣祁家廟鄉(xiāng)212016漳縣曾家河村 62015渭源縣祁家廟鄉(xiāng)煙霧溝村222016漳縣四族鄉(xiāng)年家門村 72015漳縣金鐘鎮(zhèn)大石門村232017湖北恩施紅土鄉(xiāng)石窯村 82015漳縣大草灘新聯(lián)村242017岷縣清水鎮(zhèn)清水村 92015漳縣尖子村252017岷縣十里鎮(zhèn)甘寨村 102015漳縣寨子川村262017岷縣梅川鎮(zhèn)馬家溝村 112015漳縣四族鄉(xiāng)年家門村272017渭源縣蓮峰鎮(zhèn)簸箕灣村 122015漳縣喇嘛村282017云南沾益縣播樂鄉(xiāng) 132016岷縣西寨鎮(zhèn)劉家堡村292017漳縣殪虎橋鎮(zhèn)東橋村 142016岷縣西寨鎮(zhèn)302017漳縣金鐘鎮(zhèn)尖子村 152016岷縣禾馱鄉(xiāng)甘灘村312017甘肅（燕京飲片廠） 162016岷縣蒲麻鄉(xiāng)化力溝村

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Waters X-Select CSH（250 mm×4.6 mm，5 μm）。進(jìn)樣量10 μL，檢測波長265 nm，體積流量1.0 mL/min，柱溫40 ℃，流動(dòng)相為0.085%磷酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～20 min，15%～26%B；20～23 min，26%～46%B；23～45 min，46%B；45～50 min，46%～90%B；50～55 min，90%B。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞對照品適量，分別置棕色量瓶中，加甲醇稀釋定容置刻度線，得到的溶液質(zhì)量濃度依次為3.2、4.1、0.7、13.9、80.4和8.4 μg/mL。由于本實(shí)驗(yàn)使用的對照品多數(shù)性質(zhì)不穩(wěn)定，制備后應(yīng)立即使用，臨時(shí)保存可置于?20 ℃冷凍，但再次使用前需重新標(biāo)定含量。

2.3 供試品溶液的制備

取當(dāng)歸粉末（過三號篩）約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入95∶5甲醇甲酸20 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用95∶5甲醇甲酸補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 色譜條件的優(yōu)化

為保證被定量化合物良好的分離度和適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r(shí)間，本實(shí)驗(yàn)對流動(dòng)相梯度程序、柱溫和檢測波長進(jìn)行了考察。本實(shí)驗(yàn)用PDA檢測器的高效液相色譜儀對樣品進(jìn)行全波長掃描，在265 nm處各主要吸收峰強(qiáng)度較大，且各峰與在260 nm和270 nm處的吸收度差別較小，故選擇了265 nm為掃描波長，圖1為255、265、275、285和300 nm下的色譜圖；為提高藁本內(nèi)酯和相鄰色譜峰丁烯基苯酞的分離度，本實(shí)驗(yàn)嘗試了多個(gè)流動(dòng)相梯度，最后確定為上述的梯度程序。應(yīng)用以上所建立的色譜條件進(jìn)行分析，所得到的對照品和樣品的色譜圖見圖2，圖中，6個(gè)被測化合物都實(shí)現(xiàn)了良好的分離。色譜圖中的6個(gè)待測化合物的鑒別是通過對比保留時(shí)間以及加入對照品的方法完成的。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察、檢測限和定量限測定 精密吸取對照品貯備液分別稀釋至6個(gè)不同濃度，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測定阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞的峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表2。當(dāng)信噪比（/）為3時(shí)的被測物濃度為檢測限，/為10時(shí)的被測濃度為定量限，據(jù)此測得6個(gè)成分的檢測限和定量限見表2。

1-阿魏酸 2-洋川芎內(nèi)酯I 3-洋川芎內(nèi)酯H 4-阿魏酸松柏酯 5-藁本內(nèi)酯 6-丁烯基苯酞

1-阿魏酸 2-洋川芎內(nèi)酯I 3-洋川芎內(nèi)酯H 4-阿魏酸松柏酯 5-藁本內(nèi)酯 6-丁烯基苯酞

表2 6種化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測限及定量限

Table 2 Liner correlation, limit of detection and limit of quantitation of six components

化合物回歸方程線性范圍/(μg·mL?1)R2檢測限/ng定量限/ng 阿魏酸Y＝13 106 X－3 508.41.58～12.630.999 426.7289.06 洋川芎內(nèi)酯IY＝23 996 X－4 150.42.03～16.250.999 613.9146.37 洋川芎內(nèi)酯HY＝29 926 X－1 8320.37～2.930.999 511.7339.09 阿魏酸松柏酯Y＝14 943 X－14 8936.95～55.580.999 423.2177.36 藁本內(nèi)酯Y＝13 975 X－58 66440.21～321.700.999 524.3080.99 丁烯基苯酞Y＝12 544 X－8 568.94.21～33.710.999 627.8792.90

2.5.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)下方法連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞保留時(shí)間的RSD分別為1.14%、0.99%、0.97%、0.52%、0.80%和0.82%，峰面積的RSD分別為1.98%、1.77%、2.00%、1.03%、0.68%和0.79%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，室溫下放置，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測定峰面積，阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞峰面積的RSD分別為0.95%、0.40%、0.44%、0.32%、0.29%和1.11%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 重復(fù)稱取同一供試品6份，約0.2 g，精密稱定，按“2.1”項(xiàng)下方法制備樣品，測定，阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞RSD均小于2%。表明該方法的重復(fù)性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 重復(fù)稱取當(dāng)歸藥材粉末6份，每份約0.1 g，精密稱定，分別精密加入含阿魏酸（0.104 μg）、洋川芎內(nèi)酯I（0.122 μg）、洋川芎內(nèi)酯H（0.024 μg）、阿魏酸松柏酯（0.431 μg）、藁本內(nèi)酯（2.413 μg）和丁烯基苯酞（0.211 μg）的對照品溶液，照“2.1”項(xiàng)下方法制備，測定并計(jì)算加樣回收率，阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞的平均加樣回收率分別為98.45%、97.04%、97.57%、100.24%、102.25%和101.34%，RSD分別為2.37%、2.89%、2.47%、1.46%、1.93%和2.02%。

2.6 相對校正因子（fs/i）的計(jì)算

精密吸取混合對照品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，進(jìn)樣4次，記錄各化合物的色譜峰面積，根據(jù)s/i計(jì)算公式[18]，以藁本內(nèi)酯為內(nèi)標(biāo)，計(jì)算阿魏酸對藁本內(nèi)酯的校正因子1，洋川芎內(nèi)酯I對藁本內(nèi)酯的校正因子2，洋川芎內(nèi)酯H對藁本內(nèi)酯的校正因子3，阿魏酸松柏酯對藁本內(nèi)酯的校正因子4和丁烯基苯酞對藁本內(nèi)酯的校正因子5的平均值，分別為1.078 7、0.565 3、0.466 9、0.950 1、1.156 9。

s/i＝s/f＝(s/s)/(A/C)

s為藁本內(nèi)酯內(nèi)標(biāo)物的峰面積，s為藁本內(nèi)酯內(nèi)標(biāo)物的濃度，A為被測指標(biāo)組分的峰面積，C為被測指標(biāo)組分的濃度

2.7 f的重復(fù)性考察

2.7.1 不同儀器及色譜柱對RCF的影響 取“2.2”項(xiàng)下的混合對照品溶液，分別精密吸取10 μL，分別采用Waters X-Select CSH-1、Waters X-Select CSH-2、Waters X-Select CSH-3色譜柱，在WATERS2998 PDA和島津SPD-20A高效液相色譜儀上進(jìn)樣檢測，求算以藁本內(nèi)酯作為參照成分時(shí)，5種成分的s/i，結(jié)果說明s/i在使用不同儀器時(shí)的耐用性良好，結(jié)果見表3。

表3 不同儀器和色譜柱測得相對校正因子

Table 3 RCFs determined by different instruments and columns.

儀器色譜柱相對校正因子 f阿魏酸/藁本內(nèi)酯f洋川芎內(nèi)酯I/藁本內(nèi)酯f洋川芎內(nèi)酯H/藁本內(nèi)酯f阿魏酸松柏酯/藁本內(nèi)酯f丁烯基苯酞/藁本內(nèi)酯 Waters2998 PDAWaters X-Select CSH-11.121 4 0.568 4 0.465 9 0.946 0 1.159 6 Waters X-Select CSH-21.107 6 0.562 3 0.493 4 0.944 1 1.132 0 Waters X-Select CSH-31.092 7 0.555 2 0.467 7 0.942 3 1.132 3 島津SPD-20AWaters X-Select CSH-11.052 8 0.571 4 0.461 6 0.908 1 1.024 3 Waters X-Select CSH-21.024 1 0.567 2 0.459 6 0.911 7 1.026 0 Waters X-Select CSH-31.041 7 0.564 2 0.460 6 0.904 9 1.026 8 平均值1.073 4 0.564 8 0.468 1 0.926 2 1.083 5 RSD/%3.661.012.732.145.92

2.7.2 測定不同體積流量對值的影響 用同一臺(tái)液相色譜儀，分別在0.95、1.00、1.05 mL/min的體積流量下測定阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞的峰面積，計(jì)算的平均值分別為1.125 0、0.578 1、0.474 5、0.960 3、1.153 9，RSD分別為0.82%、1.63%、7.75%、2.50%和1.27%。結(jié)果表明在同一臺(tái)高效液相色譜儀上，體積流量變化的影響不大。

2.7.3 測定不同柱溫對值的影響 用同一臺(tái)液相色譜儀，分別在柱溫為35、40、45 ℃的條件下測定阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞的峰面積，計(jì)算的平均值分別為1.120 3、0.569 4、0.473 3、0.947 5、1.139 9，RSD分別為2.88%、1.60%、1.46%、0.70%和1.76%。結(jié)果表明在同一臺(tái)高效液相色譜儀上，柱溫的變化對值的影響不大。

2.8 樣品的含量測定

采用常規(guī)對照品外標(biāo)法和QAMS法分別測定了31批當(dāng)歸中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、阿魏酸松柏酯、藁本內(nèi)酯和丁烯基苯酞的含量，見表4。結(jié)果顯示2種方法所測得的含量無明顯差異。

表4 當(dāng)歸樣品中6種化合物的含量 (n＝3)

Table 4 Contents of investigated compounds in Angelicae Sinensis Radix (n＝3)

編號阿魏酸/(mg·g?1)洋川芎內(nèi)酯I/(mg·g?1)洋川芎內(nèi)酯H/(mg·g?1)阿魏酸松柏酯/(mg·g?1) QAMS外標(biāo)法QAMS外標(biāo)法QAMS外標(biāo)法QAMS外標(biāo)法 10.285 0.285 0.781 0.781 0.149 0.149 3.034 3.032 20.442 0.441 0.746 0.746 0.138 0.138 1.670 1.669 30.365 0.365 0.406 0.406 0.084 0.084 1.476 1.475 40.352 0.352 0.476 0.476 0.090 0.090 1.672 1.671 50.283 0.283 0.633 0.633 0.113 0.113 2.649 2.648 60.438 0.438 0.519 0.520 0.089 0.088 3.001 3.000 70.454 0.454 0.479 0.479 0.089 0.089 0.769 0.769 80.502 0.501 0.826 0.826 0.156 0.156 4.837 4.835 90.535 0.535 0.494 0.495 0.093 0.093 0.747 0.747 100.350 0.350 0.422 0.422 0.087 0.087 0.816 0.816 110.508 0.508 1.105 1.105 0.212 0.212 6.469 6.466 120.455 0.455 0.417 0.417 0.075 0.075 0.756 0.756 130.360 0.360 1.048 1.048 0.197 0.197 3.062 3.060 140.360 0.360 0.398 0.398 0.071 0.070 0.601 0.601 150.356 0.355 0.771 0.772 0.148 0.148 4.669 4.667 160.390 0.390 1.151 1.151 0.232 0.232 3.173 3.171 170.473 0.473 0.541 0.541 0.105 0.105 1.275 1.274 180.425 0.425 0.806 0.806 0.138 0.138 1.251 1.250 190.375 0.375 0.908 0.908 0.162 0.162 1.834 1.833 200.368 0.368 0.404 0.404 0.074 0.074 0.577 0.576 210.461 0.460 1.058 1.058 0.200 0.200 4.146 4.145 220.359 0.359 1.096 1.096 0.207 0.207 5.670 5.668 230.507 0.506 0.710 0.711 0.114 0.114 1.309 1.308 240.361 0.361 0.450 0.451 0.087 0.087 4.144 4.142 250.334 0.334 0.223 0.223 0.045 0.045 2.851 2.849 260.368 0.368 0.874 0.874 0.139 0.139 2.178 2.177 270.291 0.291 0.163 0.163 0.025 0.024 3.999 3.997 280.186 0.185 0.319 0.319 0.062 0.062 8.973 8.969 290.509 0.509 0.350 0.350 0.072 0.072 3.589 3.587 300.448 0.448 1.174 1.174 0.228 0.228 5.186 5.183 310.501 0.500 1.240 1.240 0.216 0.216 2.855 2.854

續(xù)表4

編號Z-藁本內(nèi)酯/(mg·g?1)Z-丁烯基苯酞/(mg·g?1)總阿魏酸/(mg·g?1)總苯酞/(mg·g?1) 外標(biāo)法QAMS外標(biāo)法QAMS外標(biāo)法QAMS外標(biāo)法 113.519 0.867 0.866 3.319 3.318 15.315 15.314 210.441 0.990 0.989 2.112 2.111 12.315 12.314 3 9.457 0.587 0.587 1.841 1.840 10.534 10.534 4 7.936 0.698 0.697 2.024 2.023 9.200 9.199 511.698 0.796 0.795 2.932 2.931 13.241 13.240 613.603 0.836 0.835 3.439 3.438 15.047 15.047 7 6.203 0.839 0.838 1.223 1.223 7.610 7.609 819.244 1.046 1.045 5.339 5.336 21.272 21.270 9 6.281 0.789 0.788 1.282 1.282 7.657 7.656 10 6.409 0.749 0.748 1.166 1.165 7.667 7.666 1129.650 1.455 1.453 6.977 6.974 32.422 32.420 12 6.516 0.781 0.780 1.211 1.210 7.790 7.789 1315.283 1.202 1.201 3.422 3.420 17.731 17.730 14 5.025 0.959 0.957 0.962 0.961 6.452 6.451 1519.051 1.034 1.033 5.025 5.022 21.004 21.003 1614.351 1.148 1.146 3.563 3.561 16.882 16.880 17 8.128 0.775 0.774 1.748 1.747 9.549 9.548 18 9.167 1.251 1.249 1.676 1.675 11.363 11.361 1910.702 1.045 1.044 2.209 2.208 12.817 12.816 20 5.799 0.817 0.816 0.944 0.944 7.094 7.093 2119.680 1.185 1.184 4.607 4.605 22.123 22.122 2224.250 1.190 1.189 6.030 6.027 26.743 26.742 2311.983 1.101 1.100 1.815 1.814 13.908 13.907 2418.081 0.796 0.795 4.505 4.503 19.415 19.415 2516.036 0.573 0.573 3.185 3.183 16.878 16.877 2612.463 1.317 1.316 2.546 2.545 14.794 14.792 2715.584 0.452 0.451 4.290 4.288 16.224 16.223 2831.470 0.698 0.697 9.159 9.155 32.549 32.549 2918.864 0.821 0.820 4.098 4.096 20.107 20.106 3021.847 1.354 1.352 5.634 5.631 24.603 24.602 3115.800 1.286 1.285 3.356 3.354 18.543 18.542

3 討論

由于當(dāng)歸中主要包括有機(jī)酸類、苯酞類以及香豆素類成分，為了能較全面地評價(jià)藥材質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)除了對色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，還對當(dāng)歸樣品提取條件進(jìn)行優(yōu)化，主要包括提取方式、提取溶劑和提取時(shí)間3個(gè)方面。本實(shí)驗(yàn)首先考察了回流提取和超聲提取的差異，發(fā)現(xiàn)由于阿魏酸松柏酯是阿魏酸的結(jié)合形式存在于藥材中，且易受熱分解為阿魏酸，因此其對提取方式的選擇最敏感。由于超聲提取效率較高，及其操作的便捷性，本實(shí)驗(yàn)選擇超聲提取作為當(dāng)歸的提取方法。在超聲提取時(shí)間的選擇上，本實(shí)驗(yàn)共篩選了超聲15、30、45、60 min 4個(gè)梯度。結(jié)果表明超聲15 min對總阿魏酸的提取效果最好，超聲30 min對苯酞類成分的提取效果最好，綜合考慮選擇超聲提取時(shí)間為30 min。

在提取溶劑方面，本實(shí)驗(yàn)考察了不同體積分?jǐn)?shù)的甲醇溶液：70%甲醇、80%甲醇、90%甲醇、純甲醇和95%甲醇-5%甲酸溶液[13]。70%、80%甲醇對阿魏酸提取率最高，而阿魏酸松柏酯在95%甲醇- 5%甲酸溶液中最穩(wěn)定，提取率最高。從總阿魏酸、藁本內(nèi)酯及丁烯基苯酞含量來看，最終選擇了95%甲醇-5%甲酸溶液作為當(dāng)歸的提取溶劑。最終確定的提取方法為95%甲醇-5%甲酸溶液超聲提取30 min。

本實(shí)驗(yàn)建立的高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了同時(shí)對當(dāng)歸中6個(gè)成分的含量測定，為提高當(dāng)歸質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)、簡便的方法。在藥典規(guī)定成分的基礎(chǔ)上，從阿魏酸改為總阿魏酸，并增加了苯酞類成分作為指標(biāo)，可以更加全面地控制當(dāng)歸藥材質(zhì)量，為當(dāng)歸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality control ofbased on quantitative analysis of multi-components by a single marker

LI Xiao-yang1,4, ZHAI Xiao-lin1, WANG Dan1, FAN Jing1, PEI Wen-xuan2, DONG Ling2, SUN Yu3, SONG Xue-bin3, WANG Jing-juan1

1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China 2. School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China 3. Lanzhou Foci Pharmaceutical Co., Ltd., Lanzhou 730046, China 4. Insttute of Information on Traditional Chineses Medicine, Chinese Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China

To establish a HPLC method for the determination of ferulic acid, senkyunolide I, senkyunolide H, coniferyl ferulate, ligustilide and butylidenephthalide in Danggui () using quantitative analysis of multi-components by a single marker (QAMS)．The analysis was performed on a Waters X-Select CSH column (250 mm×4.6 mm, 5 μm), with 0.085% phosphoric acid (A) and acetonitrile (B) as mobile phase at the flow rate of 1 mL/min for gradient elution, as well as the wavelength was 265 nm and the column temperature was 40 ℃.All calibration curves showed good linearity (2＞0.999) within the concentration range. Ligustilide was used as the internal reference standard, and five relative correction factors (RCF) of ferulic acid, senkyunolide I, senkyunolide H, coniferyl ferulate and butylidenephthalide to ligustilide were calculated, which were 1.073 4, 0.564 8, 0.468 1, 0.926 2 and 1.083 5, respectively. Their content inwas determined by both external standard method and QAMS method. There were no significant differences between two methods.The method of QAMS for six components determination inwas established, which can be used for the quality control of

(Oliv.) Diels.; QAMS; ferulic acid; senkyunolide I; senkyunolide H; coniferyl ferulate; ligustilide; butylidenephthalide

R286.2

A

0253 - 2670(2022)20- 6354 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.20.006

2022-03-03

國家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目“大黃等6種中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)”（ZYBZH-Y-GS-10-B）

李小陽，碩士，研究方向?yàn)槊褡逅帉W(xué)。Tel: 15810864572 E-mail: lxy@bucm.edu.cn

王晶娟，教授，研究方向?yàn)橹兴庤b定與質(zhì)量評價(jià)方法。Tel: 13691355913 E-mail: wangjj@bucm.edu.cn

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]