豬德爾塔冠狀病毒致病機(jī)理及防治研究進(jìn)展

胡湘云，潘鵬丞，吳倍儀，陳寶劍，覃兆鮮，謝炳坤

(廣西壯族自治區(qū)畜牧研究所，廣西家畜遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530001)

豬德爾塔冠狀病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)可引起豬嘔吐、水樣腹瀉、脫水甚至死亡，常與豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)等腸道冠狀病毒存在混合感染[1]。自2014年首次在美國暴發(fā)以來，先后在全球多個(gè)國家都檢測到PDCoV，目前已呈現(xiàn)全球性流行趨勢，嚴(yán)重沖擊了養(yǎng)豬業(yè)的有序發(fā)展[2]。相關(guān)報(bào)道顯示，PDCoV還可跨物種感染雞、牛[3-4]。2021年，研究人員在3名患有急性未分化發(fā)熱性疾病的海地兒童血漿樣品中檢測到PDCoV，這是首次在人類中發(fā)現(xiàn)該病毒，其快速傳播和潛在的跨物種傳播特性，給動物和人類健康安全帶來了巨大威脅[5]。由于PDCoV致病機(jī)制尚未探明，缺乏疫苗和特效藥物，已成為當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)疫病防控難點(diǎn)。筆者將從PDCoV的編碼蛋白功能、致病機(jī)理、診斷方法、疫苗開發(fā)及抗病毒治療所取得的進(jìn)展進(jìn)行梳理和闡述，以期加強(qiáng)對PDCoV的全面了解，為安全高效疫苗和防治藥物的研發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。

1 PDCoV編碼蛋白及功能

PDCoV是一種有囊膜的單股正鏈RNA病毒，基因組全長25 400 nt，PDCoV可編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白：棘突蛋白(spike，S)、膜蛋白(membrane，M)、包膜蛋白(envelope，E)和核衣殼蛋白(nucleocapsid，N)，15個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(nonstructural protein，nsp)和3個(gè)輔助蛋白(NS6、NS7和NS7a)。其中S、E和M蛋白是囊膜蛋白,N蛋白構(gòu)成病毒核衣殼，非結(jié)構(gòu)蛋白與病毒RNA合成有關(guān),輔助蛋白雖不是病毒增殖的必需蛋白但其能發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能，PDCoV編碼蛋白的具體結(jié)構(gòu)特征和功能見表1。

表1 PDCoV編碼蛋白及功能Table 1 PDCoV encoding proteins and their functions

續(xù)表

2 PDCoV致病機(jī)理

PDCoV侵入宿主體內(nèi)并引起發(fā)病是復(fù)雜的多種機(jī)制共同作用的過程，其通過與宿主細(xì)胞膜上受體結(jié)合侵入細(xì)胞，以頡頏IFN反應(yīng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞自噬、抑制細(xì)胞焦亡等途徑逃避宿主免疫應(yīng)答以維持自身增殖，同時(shí)還有細(xì)胞分子和宿主蛋白共同參與致病過程。

2.1 侵入細(xì)胞的受體和途徑

研究發(fā)現(xiàn)，豬氨基肽酶N (porcine aminopeptidase N，pAPN)是PDCoV侵入細(xì)胞的受體，PDCoV通過S1亞基C-端結(jié)構(gòu)域(carboxy-terminal domain,CTD)與pAPN的種間保守結(jié)構(gòu)域Ⅱ結(jié)合感染豬、雞和人類等細(xì)胞，且該受體通過內(nèi)吞途徑促進(jìn)PDCoV侵入細(xì)胞并完成復(fù)制[23-24]。然而，特異性抑制pAPN的表達(dá)不能完全阻斷PDCoV感染豬上皮細(xì)胞(IPI-2I)，說明PDCoV還可能使用其他受體侵入細(xì)胞[25]。隨后，唾液酸(sialic acid,SA)被證實(shí)也是PDCoV的結(jié)合受體，SA參與PDCoV S1亞基的受體結(jié)合與病毒中和作用，且S1亞基的domain A(即NTD或S1A)與SA互作有關(guān)，PDCoV利用SA作為侵入細(xì)胞的受體的結(jié)合能力受胰蛋白酶影響[26-27]。研究發(fā)現(xiàn),PDCoV還能通過巨胞飲作用(不需要特定受體)和網(wǎng)格蛋白(需低pH環(huán)境和動力蛋白)介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入豬回腸上皮細(xì)胞，通過小窩介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑進(jìn)入豬睪丸細(xì)胞(ST)和豬腎細(xì)胞 (LLC-PK1)[28]。

2.2 逃避宿主免疫應(yīng)答

宿主天然免疫系統(tǒng)是抵抗病毒感染的第一道防線，通過IFN途徑、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬和細(xì)胞焦亡發(fā)揮抗病毒作用，諸多研究發(fā)現(xiàn)PDCoV已發(fā)展出多種免疫逃避機(jī)制來逃避宿主免疫應(yīng)答。

2.2.1 頡頏IFN反應(yīng) IFN在宿主先天免疫應(yīng)答中起著重要作用，其大量表達(dá)能幫助宿主頡頏病毒感染，PDCoV的多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白和輔助蛋白均通過各種策略頡頏宿主IFN反應(yīng)，抑制IFN表達(dá)，逃避宿主先天免疫應(yīng)答,PDCoV頡頏IFN反應(yīng)的作用機(jī)制見圖1。

N蛋白結(jié)合視黃酸誘導(dǎo)基因Ⅰ(retinoic acid-inducible gene Ⅰ，RIG-Ⅰ)阻礙后者識別雙鏈RNA，還能破壞RIG-Ⅰ激活劑(Riplet)和雙鏈RNA激活的蛋白激酶激活劑(double stranded RNA activated protein kinase-activating protein,PACT)結(jié)合RIG-Ⅰ來抑制RIG-Ⅰ K63連接的多泛素化，此外，它通過泛素-蛋白酶途徑促進(jìn)干擾素調(diào)節(jié)因子7(interferon regulatory factor 7，IRF7)降解，利用多種途徑抑制IFN-Ⅰ的生成[13,14,29]。

nsp5蛋白通過切割核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)必需調(diào)節(jié)劑——NEMO分子并降低其表達(dá)量，阻礙IFN生成；它還可通過裂解Janus激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活劑(Janus tyrosine kinase-signal transducer and activator of transcription 1，JAK/STAT)信號通路中的關(guān)鍵蛋白轉(zhuǎn)錄激活因子2(signal transducer and activator of transcription 2,STAT2)，抑制IFN下游信號分子的激活及抗病毒基因的轉(zhuǎn)錄，從而頡頏天然免疫應(yīng)答[19]。nsp10則通過削弱2種轉(zhuǎn)錄因子干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)和NF-κB p65亞基的磷酸化和核轉(zhuǎn)位，抑制IFN-β產(chǎn)生，nsp14和nsp16具有協(xié)同作用，能增強(qiáng)nsp10對IFN-β的抑制作用[21]。nsp15蛋白通過不依賴內(nèi)切核糖核酸酶活性的機(jī)制破壞NF-κB活化來抑制IFN-β產(chǎn)生，但不頡頏IRF3的活化[22]。

NS6蛋白與RNA識別受體RIG-Ⅰ和黑色素瘤分化相關(guān)基因5(melanoma differentiation-associated gene 5，MDA5)互作降低受體對雙鏈RNA的識別，頡頏IFN-β產(chǎn)生[15]。NS7a通過同時(shí)與IKKε的激酶結(jié)構(gòu)域和支架二聚化結(jié)構(gòu)域相互作用，與腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3(TNF receptor associated factors，TRAF3)和IRF3競爭結(jié)合IκB激酶(IκB kinase ε，IKKε)，頡頏視黃酸誘導(dǎo)基因Ⅰ樣受體(RIG-Ⅰ-like receptors，RLR)介導(dǎo)的IFN-β形成[17]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，PDCoV感染能減少過氧化物酶體(peroxisome)的數(shù)量進(jìn)而抑制IFN-Ⅲ反應(yīng)，這能規(guī)避宿主的抗病毒免疫，但不影響IRF1和線粒體抗病毒信號(mitochondrial antiviral signaling protein，MAVS)的表達(dá)水平[30]。

2.2.2 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 細(xì)胞凋亡又稱為程序性細(xì)胞死亡，病毒感染宿主后發(fā)揮凋亡作用可促進(jìn)病毒從感染細(xì)胞中釋放和傳播，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，PDCoV感染細(xì)胞通過凋亡效應(yīng)蛋白Bax募集或線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔打開來刺激線粒體外膜透化，導(dǎo)致線粒體中促凋亡分子細(xì)胞色素C(cytochrome C，Cyt c)釋放到細(xì)胞質(zhì)中，從而啟動caspase依賴的線粒體通路(內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑)[32]。此外，通過檢測PDCoV感染的細(xì)胞中的caspase3、caspase8和caspase9的活性發(fā)現(xiàn)，其活性隨病毒感染性增多而提高，證明PDCoV可同時(shí)激活內(nèi)源性(線粒體途徑)與外源性(死亡受體通路)細(xì)胞凋亡通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[33]。

2.2.3 調(diào)控細(xì)胞自噬 細(xì)胞自噬是一種細(xì)胞內(nèi)降解過程，可維持細(xì)胞的代謝平衡和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)，當(dāng)病毒感染宿主細(xì)胞后，一方面，宿主細(xì)胞利用細(xì)胞自噬將病毒送到溶酶體室進(jìn)行降解和消除，另一方面，很多病毒進(jìn)化出多種策略劫持自噬以進(jìn)行自身復(fù)制；PDCoV N蛋白和nsp6蛋白均可顯著上調(diào)自噬相關(guān)基因LC3-Ⅱ的表達(dá)來誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，說明PDCoV感染細(xì)胞能引起細(xì)胞自噬；隨后，使用自噬激活劑雷帕霉素誘導(dǎo)的LLC-PK1細(xì)胞和豬小腸上皮細(xì)胞的自噬均促進(jìn)PDCoV N蛋白表達(dá)水平顯著上升，使用氯喹抑制自噬后PDCoV N蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)，這證明PDCoV誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬能促進(jìn)病毒自身復(fù)制[34-35]。

2.2.4 抑制細(xì)胞焦亡 細(xì)胞焦亡又稱細(xì)胞炎性壞死，是宿主機(jī)體內(nèi)重要的天然免疫反應(yīng)，病毒感染后，炎性caspase-1被激活可切割消皮素D(gasdermin D，GSDMD)，造成細(xì)胞穿孔引起細(xì)胞死亡，其能通過清除病毒感染的細(xì)胞從而減少細(xì)胞內(nèi)病原體的存活和增殖；GSDMD是細(xì)胞凋亡的執(zhí)行蛋白，其抗病毒活性是通過促進(jìn)IFN-β的非經(jīng)典釋放和增強(qiáng)干擾素刺激基因(interferon-stimulated gene，ISG)反應(yīng)來介導(dǎo)[36]。PDCoV感染宿主細(xì)胞早期，nsp5蛋白可在Q193-G194連接處切割GSDMD，其切割片段在焦亡誘導(dǎo)中失活不能誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡，這證明PDCoV感染可抑制細(xì)胞焦亡進(jìn)而促進(jìn)PDCoV在宿主細(xì)胞初始階段的復(fù)制[37]。

2.3 影響PDCoV復(fù)制的其他機(jī)制

PDCoV感染宿主細(xì)胞后引起大多數(shù)與免疫、炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子上調(diào)。鈣離子(Ca2+)是細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的第二信使，能調(diào)控細(xì)胞的增殖分化、自噬、凋亡等過程，研究發(fā)現(xiàn)，多種病毒可通過調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的鈣通道或鈣水平來促進(jìn)自身感染與復(fù)制；PDCoV能調(diào)節(jié)鈣流入以促進(jìn)病毒復(fù)制，鈣通道阻滯劑鹽酸地爾硫卓能抑制PDCoV感染過程中的復(fù)制階段，而L型鈣離子通道電壓門控通道亞基(CACNA1S)的敲除抑制了PDCoV復(fù)制[38]。

病毒不能獨(dú)立在自然環(huán)境中生存，其需要依賴宿主的細(xì)胞進(jìn)行增殖。信號傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)是能與PDCoV相互作用的宿主蛋白，并能在PDCoV感染中起負(fù)調(diào)控作用，使用CRISPR/Cas9構(gòu)建STAT1缺失的LLC-PK1細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)其能導(dǎo)致病毒產(chǎn)量顯著增加，STAT1的缺失對病毒與細(xì)胞的附著影響不大，但卻能導(dǎo)致病毒內(nèi)化增加[39]。通過CRISPR/Cas9敲除系統(tǒng)對全基因組進(jìn)行篩選發(fā)現(xiàn)，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位相關(guān)的多次跨膜蛋白TMEM41B參與了PDCoV復(fù)制，進(jìn)一步利用小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)、過表達(dá)和敲除試驗(yàn)證明TMEM41B介導(dǎo)PDCoV復(fù)制復(fù)合體及雙層囊泡的形成,參與PDCoV的復(fù)制階段,進(jìn)而影響PDCoV的增殖[40]。

目前為止，雖然人們對于PDCoV侵入宿主體內(nèi)并引起發(fā)病的分子機(jī)制進(jìn)行了初步研究，但因其致病機(jī)理復(fù)雜多樣，PDCoV宿主體內(nèi)的感染機(jī)制，與宿主蛋白相互作用及頡頏天然免疫反應(yīng)方面還需更深入的研究和探討，可借鑒其他冠狀病毒致病機(jī)理的研究方法和進(jìn)展，從而為闡明PDCoV致病機(jī)理提供新方向。

3 PDCoV診斷方法

因?yàn)镻DCoV引起的臨床癥狀和病理變化與PEDV等其他腸道冠狀病毒具有很高相似性，還會出現(xiàn)混合感染的情況，需經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室診斷確診。目前PDCoV的實(shí)驗(yàn)室診斷方法分為核酸檢測和抗體檢測，因PDCoVS、M和N基因具有保守性和抗原性，常被用作檢測靶標(biāo)。核酸檢測方法主要有電子顯微鏡病毒顆粒檢測、病毒分離鑒定、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)等；抗體檢測方法主要有膠體金免疫層析技術(shù)、病毒中和試驗(yàn)(VN)、熒光微球免疫分析(FMIA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。在臨床實(shí)踐中，各檢測方法存在的自身優(yōu)勢和不足之處見表2，要合理利用診斷方法利于早期確診以達(dá)到防控目的。

表2 PDCoV 常用的檢測方法Table 2 Common detection methods of PDCoV

4 PDCoV疫苗開發(fā)及抗病毒治療

4.1 疫苗開發(fā)研究進(jìn)展

疫苗是控制病毒感染最有效的手段，目前尚無PDCoV商品化疫苗，研究人員正利用各類開發(fā)平臺和技術(shù)開展對PDCoV疫苗的研究，已在滅活病毒疫苗、減毒活病毒疫苗、重組載體疫苗、病毒樣顆粒疫苗、乳酸菌載體口服疫苗等研究上取得了一定的進(jìn)展。

4.1.1 滅活病毒疫苗 滅活病毒疫苗是對病原微生物使用化學(xué)或物理方法去除其感染性而仍保持其免疫原性，用β-丙內(nèi)酯滅活 PDCoV NH株第15代病毒制備PDCoV滅活疫苗，分別在妊娠母豬產(chǎn)前40和20 d用滅活疫苗進(jìn)行免疫，隨后在母乳及出生仔豬血清中發(fā)現(xiàn)IgG及中和抗體，新生仔豬采食初乳后在5日齡用105TCID50的PDCoV進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)PDCoV滅活疫苗為仔豬提供 87.1%的被動免疫保護(hù)率[50]。

4.1.2 減毒活疫苗 減毒活疫苗是一類將病原體經(jīng)過人工處理后，使病毒失去致病性，但保留了原有的增殖能力和免疫原性的疫苗，病毒毒力相關(guān)基因的缺失是一種有效的病毒致弱手段；PDCoV NS6蛋白能決定病毒毒力，研究人員用綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因替換PDCoV的全長感染性cDNA克隆的NS6基因，構(gòu)建rPDCoV-ΔNS6-GFP，其在體外和體內(nèi)病毒滴度均顯著降低，且感染的仔豬沒有臨床癥狀或腸道病變，表明NS6的缺失導(dǎo)致病毒毒力減弱，NS6缺失突變毒株是候選減毒活疫苗毒株[15]。

4.1.3 重組載體疫苗 重組病毒載體疫苗是以病毒作為載體,將抗原基因重組到病毒基因組中,使用能表達(dá)抗原基因的重組病毒制成的疫苗，而豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作為重組活疫苗載體已被應(yīng)用于多種病毒疫苗的研發(fā)，通過CRISPR/Cas基因編輯和同源重組技術(shù)構(gòu)建了表達(dá)PDCoV S蛋白的重組偽狂犬病病毒(rPRVXJ-delgE/gI/TK-S)，將其免疫小鼠后能表現(xiàn)良好的安全性和免疫原性，能上調(diào)小鼠外周血中IFN-γ和白細(xì)胞介素4(IL-4)的表達(dá)水平，促進(jìn)小鼠脾臟中特異性T淋巴細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)高水平抗體的產(chǎn)生，在加強(qiáng)免疫后第7天，小鼠體內(nèi)檢測到了PRV gB和PDCoV S特異性抗體，且在免疫后第28天中和抗體水平達(dá)到最大值，該重組毒株可100%保護(hù)小鼠免受毒株的攻擊并降低小鼠體內(nèi)的PDCoV載量，因此有望成為PDCoV的候選重組疫苗[51]。

4.1.4 病毒樣顆粒疫苗 病毒樣顆粒(virus-like particles,VLPs)是通過一種或多種病毒結(jié)構(gòu)蛋白的體外或體內(nèi)自組裝合成的非遺傳多聚體納米顆粒，其在形態(tài)上保持了病毒抗原蛋白的天然構(gòu)象，但不帶有病毒遺傳物質(zhì)，因而沒有感染性，只有激發(fā)宿主免疫反應(yīng)的能力，VLPs可選取細(xì)胞、酵母、昆蟲等表達(dá)系統(tǒng)，制備成本低，可大規(guī)模生產(chǎn)。Guo等[52]首先合成冠狀病毒通用表位的噬菌體Qbeta外殼蛋白的嵌合VLP疫苗，之后用嵌合VLP疫苗對小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)免疫，收集其血清，通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)VLP疫苗在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)了針對PDCoV的特異性抗體反應(yīng)，并且抗體具有中和活性，這證明VLP具有良好的免疫原性和安全性，可以作為疫苗開發(fā)的理想候選者。

4.1.5 乳酸菌載體口服疫苗 乳酸菌是一類能利用發(fā)酵的碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌，具有較強(qiáng)的黏附定植腸道上皮的能力，誘發(fā)腸道黏膜免疫，作為疫苗遞送載體具有潛在應(yīng)用前景；PDCoV S1結(jié)構(gòu)域中有多個(gè)產(chǎn)生中和抗體的重要表位，是受體識別、結(jié)合細(xì)胞的關(guān)鍵部位，郝嘉翼等[53]選用優(yōu)化的PDCoVS1基因并將其克隆至乳桿菌NZ3900,獲得高含量的重組質(zhì)粒，之后電轉(zhuǎn)入植物乳桿菌LP18中高效表達(dá)，為口服疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。

4.2 抗病毒治療研究進(jìn)展

目前尚無特效藥物用于治療PDCoV，一些廣譜抗病毒藥物、抗病毒分子蛋白和新型抗病毒技術(shù)在PDCoV抗病毒研究中顯示了良好的應(yīng)用前景，這給PDCoV抗病毒藥物的研發(fā)提供新的思路。

4.2.1 廣譜抗病毒藥物 瑞德西韋(Remdesivir,RDV)是一種腺苷類似物的單磷酰胺酸鹽前藥，其通過在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為三磷酸形式活化物(triphosphate form of remdesivir,RTP)，與天然三磷酸腺苷競爭結(jié)合病毒的依賴RNA型RNA聚合酶(RNA-dependent RNA-polymerases，RdRp)，之后插入RNA合成鏈，阻斷病毒RNA的復(fù)制，并抑制RdRp酶活性，以發(fā)揮對RNA病毒的抗病毒活性，研究發(fā)現(xiàn)在含胰蛋白酶和無血清培養(yǎng)基的人肝癌細(xì)胞(Huh7)中，瑞德西韋以劑量依賴性方式減少PDCoV的復(fù)制，半最大效應(yīng)濃度(concentration for 50% of maximal effect,EC50)為0.02 μmol/L[54]。因此未來可將瑞德西韋作為治療PDCoV的潛在廣譜抗病毒藥物。

4.2.2 抗病毒分子蛋白 抗病毒藥物設(shè)計(jì)的策略可從直接殺滅病毒、干擾病毒侵入宿主細(xì)胞、抑制病毒核酸復(fù)制、組裝和釋放等方面著手，筆者總結(jié)了多種抗病毒分子蛋白通過靶向病毒本身或宿主因子來發(fā)揮抗病毒作用的具體途徑(表3)，這些分子蛋白有望成為抗PDCoV治療的新研究靶點(diǎn)，為PDCoV的抗病毒藥物研發(fā)提供新依據(jù)和新方向。

表3 抗PDCoV蛋白及作用途徑Table 3 Antiviral protein and its function pathway

4.2.3 抗病毒技術(shù) RNA干擾(RNA interference,RNAi)是由雙鏈RNA在細(xì)胞體內(nèi)誘導(dǎo)靶向目的基因mRNA降解，從而使目的基因表達(dá)下降或沉默的現(xiàn)象，同時(shí)其還可作為一種新型技術(shù)手段用于抗病毒治療，通過構(gòu)建PDCoV的N基因的短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)質(zhì)粒，能在體外試驗(yàn)沉默基因的表達(dá)，抑制PDCoV的復(fù)制，對細(xì)胞抗PDCoV保護(hù)率達(dá)到92.7%，在仔豬體內(nèi)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其能顯著保護(hù)腸組織抵御PDCoV感染所引起的特異性病變，提示采用RNAi治療PDCoV的潛力和可行性[62]。

綜上，雖然當(dāng)前尚無PDCoV的商品化疫苗和特效治療藥物，但人類近年來應(yīng)對其他冠狀病毒的藥物研發(fā)技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)對PDCoV疫苗和治療藥物的研發(fā)具有重要借鑒意義。

5 展 望

近年來，對PDCoV蛋白功能、致病機(jī)理、診斷方法、疫苗開發(fā)、抗病毒治療等方面有了一定進(jìn)展，但還有很多尚未解決的問題和難點(diǎn)，今后的研究重點(diǎn)可從以下幾個(gè)方面展開：①繼續(xù)研究PDCoV編碼蛋白的功能，可參考其他腸道冠狀病毒的蛋白功能研究PDCoV蛋白，有助于明確病毒的致病機(jī)理；②加強(qiáng)商品化疫苗的研發(fā)，疫苗接種是預(yù)防和控制傳染病的有效手段，目前尚未有商品化的疫苗問世，全球各地PDCoV毒株核苷酸同源性高，因此針對某一毒株進(jìn)行研發(fā)能給全球PDCoV防控做好疫苗儲備；③發(fā)展快速即時(shí)高效的診斷技術(shù)，PDCoV凝集兔紅細(xì)胞的能力有助于PDCoV診斷方法的研發(fā)[63]。此外，可借助可視化、微流控芯片技術(shù)、納米材料生物傳感器等新技術(shù)開發(fā)新的診斷方法。

隨著幾種冠狀病毒跨越物種壁壘感染人類，新的冠狀病毒不斷出現(xiàn)，因此，需提高對冠狀病毒的警惕，加強(qiáng)對PDCoV的流行情況、致病機(jī)制及病原生物學(xué)的前瞻性研究，同時(shí)及時(shí)建立PDCoV的監(jiān)測預(yù)警機(jī)制讓監(jiān)管關(guān)口前移，從源頭阻斷疫病的傳播路徑，切實(shí)筑牢動物防疫生物安全屏障。