洋蔥醇提物總黃酮含量的測(cè)定及其降脂活性研究

樊孔明，田太成，王曉莉，陳 珍，巫道穎，張建武*，楊春艷*

(1.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 川北醫(yī)學(xué)院藥物研究所，四川 南充 637100;2.川北醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新研究平臺(tái)，四川 南充 637100;3.川北醫(yī)學(xué)院 形態(tài)研究所，四川 南充 637100)

洋蔥(AlliumcepaL.)為百合科蔥屬多年生草本植物[1]，是膳食黃酮類化合物最豐富的來(lái)源之一，為地中海飲食的重要組成部分[2]。洋蔥不僅含有多種維生素、礦物質(zhì)和氨基酸，還含有多酚、有機(jī)硫化合物和皂苷等生物活性成分[3]，具有抗氧化[4-5]、抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)[6]、防癌[7]、降脂、降壓、降血糖、減肥等藥理作用[8]，還可以有效改善非酒精性脂肪肝大鼠的病變[9]。目前，大多數(shù)研究?jī)H針對(duì)洋蔥粗提物進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，而對(duì)洋蔥活性成分的研究較少。

黃酮類化合物是以C6-C3-C6為基本結(jié)構(gòu)骨架的多酚類化合物，主要包括黃酮及黃酮醇類、二氫黃酮及二氫黃酮醇類、異黃酮類等。黃酮類化合物多以糖苷形式存在，在自然界中分布極其廣泛，且具有多種生物活性，如抗炎[10]、抗菌、抗病毒、抗腫瘤[11]、預(yù)防心血管疾病等，一直是藥物研發(fā)的熱點(diǎn)[12-13]。

黃酮類化合物可以和鋁鹽生成黃色絡(luò)合物，用于定量和定性分析?；诖耍髡咭匀然X-醋酸-醋酸鈉緩沖溶液為顯色劑，采用紫外分光光度法測(cè)定洋蔥醇提物總黃酮含量，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)與響應(yīng)面法優(yōu)化洋蔥醇提物總黃酮含量測(cè)定的顯色條件，并利用游離脂肪酸(FFA)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立肝脂肪變性模型評(píng)價(jià)其體外降脂活性。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

紫皮洋蔥，市售。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、脫脂的牛血清白蛋白(d-BSA)、棕櫚酸(PA)、油紅O染色試劑盒，北京索萊寶科技有限公司；三水合醋酸鈉、亞硝酸鈉、九水硝酸鋁、六水三氯化鋁，成都科隆化學(xué)品有限公司；冰醋酸，西隴科學(xué)股份有限公司；DPPH、過(guò)硫酸鉀、ABTS，Aladdin；HepG2細(xì)胞，川北醫(yī)學(xué)院分子生物學(xué)研究所；DMEM培養(yǎng)基、熱滅活的胎牛血清(FBS)，博士得生物工程有限公司；CCK-8試劑盒，碧云天生物技術(shù)有限公司；辛伐他汀，MedChemExpress公司；油酸(OA)，Sigma-Aldrich公司；二辛可寧酸(BCA)蛋白、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)分析試劑盒，南京建城生物工程研究所。

SP-756P型紫外分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司；AC211S型電子分析天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；超純水機(jī)，四川優(yōu)普科技有限公司；PHS-3C型pH計(jì)，上海晶磁儀器有限公司；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；SHB-Ⅲ型循環(huán)水真空泵，河南金傅儀器制造有限公司；AG-9620A型精密鼓風(fēng)干燥箱，上海柏欣儀器設(shè)備廠；MULTISKAN GO型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、Thermo 3111型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，Thermo Fisher公司；ECLIPSE TS100/TS100-F型倒置顯微鏡，尼康儀器上海有限公司。

1.2 洋蔥醇提物總黃酮含量的測(cè)定

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取10.0 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加適量70%乙醇充分溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，定容至刻度，即得0.4 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 顯色劑的制備

稱取12.131 3 g六水三氯化鋁，用蒸餾水溶解并稀釋至500 mL，即得0.1 mol·L-1AlCl3溶液，再轉(zhuǎn)移至棕色瓶中保存，備用。稱取6.799 5 g三水合醋酸鈉，用蒸餾水溶解并稀釋至250 mL，即得0.2 mol·L-1醋酸鈉溶液；量取1.15 mL冰醋酸，用蒸餾水稀釋至100 mL，加入到0.2 mol·L-1醋酸鈉溶液中，調(diào)節(jié)pH值至5.2，即得HAc-NaAc緩沖溶液，再轉(zhuǎn)移至棕色瓶中保存，備用。稱取亞硝酸鈉0.508 0 g，用蒸餾水溶解并稀釋至10 mL，即得5%亞硝酸鈉溶液。稱取1.760 6 g九水硝酸鋁，用蒸餾水溶解并稀釋至10 mL，即得10%硝酸鋁溶液。稱取1.013 6 g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解并稀釋至25 mL，即得4%氫氧化鈉溶液。

1.2.3 供試溶液的制備

稱取新鮮洋蔥5 kg，于45 ℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥后，用粉碎機(jī)粉碎。稱取2 175.00 g洋蔥粉末，按料液比1∶10(g∶mL，下同)用70%乙醇回流提取3次，得洋蔥醇提物1 634.50 g，于4 ℃冰箱保存，備用[14]。精確稱取洋蔥醇提物0.281 4 g，用70%乙醇溶解并稀釋至100 mL，常溫(25 ℃)超聲溶解20 min，過(guò)濾，即得供試溶液。

1.2.4 最大吸收波長(zhǎng)的確定

三氯化鋁-醋酸-醋酸鈉緩沖溶液顯色法：分別移取0.25 mL 0.4 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和1.0 mL供試溶液置于5 mL容量瓶中，加入0.25 mL 0.1 mol·L-1AlCl3溶液和0.5 mL HAc-NaAc緩沖溶液，用70%乙醇稀釋至刻度；常溫下顯色15 min后，在300～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。

亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色法：分別移取0.1 mL 0.4 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.16 mL供試溶液置于5 mL容量瓶中，加入0.15 mL 5%亞硝酸鈉溶液，靜置6 min；然后加入0.15 mL 10%硝酸鋁溶液，靜置6 min；再加入2 mL 4%氫氧化鈉溶液，用70%乙醇稀釋至刻度，靜置12 min；常溫下顯色完畢后，在300～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。

1.2.5 顯色條件的優(yōu)化

1.2.5.1 單因素實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確量取供試溶液1.0 mL于5 mL容量瓶中，加入0.1 mol·L-1AlCl3溶液和HAc-NaAc緩沖溶液，用70%乙醇稀釋至刻度，顯色。采用單因素實(shí)驗(yàn)分別考察顯色溫度(25 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃)、顯色時(shí)間(7 min、12 min、17 min、22 min、27 min、32 min)、0.1 mol·L-1AlCl3溶液用量(0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL、1.25 mL)和HAc-NaAc緩沖溶液用量(0.50 mL、0.70 mL、0.90 mL、1.10 mL、1.30 mL)對(duì)洋蔥醇提物總黃酮含量測(cè)定的影響。

1.2.5.2 響應(yīng)面法

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取顯色時(shí)間(A)、0.1 mol·L-1AlCl3溶液用量(B)、HAc-NaAc緩沖溶液用量(C)為考察因素，設(shè)計(jì)3因素3水平響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化洋蔥醇提物總黃酮含量測(cè)定的顯色條件。

1.2.6 含量測(cè)定

洋蔥醇提物中主要黃酮類成分為異槲皮苷和槲皮素。參照文獻(xiàn)[14]，從洋蔥樣品中提取、分離、純化得到異槲皮苷，采用HPLC法測(cè)定洋蔥醇提物中異槲皮苷和槲皮素含量。

1.3 體外降脂活性評(píng)價(jià)

1.3.1 溶液的制備

精密稱取0.042 3 g洋蔥醇提物(總黃酮提取率75.15%，與洋蔥總多酚對(duì)比換算)，加入1 mL DMEM培養(yǎng)基，50 ℃水浴2 h，即得42.3 mg·mL-1洋蔥醇提物溶液，經(jīng)0.22 μm除菌過(guò)濾器除菌，于-20 ℃冰箱保存；稱取0.005 0 g辛伐他汀，加入122 μL無(wú)水乙醇和190 μL 0.1 mol·L-1NaOH溶液，50 ℃水浴2 h，用HCl溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，經(jīng)0.22 μm無(wú)菌濾頭過(guò)濾，得16 mg·mL-1辛伐他汀溶液，于-20 ℃冰箱保存。參照文獻(xiàn)[15-16]配制5 mmol·L-1游離脂肪酸(10 mmol·L-1OA∶5 mmol·L-1PA=2∶1，5%d-BSA)，同時(shí)配制5%d-BSA，均經(jīng)0.22 μm無(wú)菌濾頭過(guò)濾，分裝，于-20 ℃保存。

1.3.2 細(xì)胞存活率的測(cè)定

使用89%高糖DMEM培養(yǎng)基、10%熱滅活FBS、1%青霉素(100 U·mL-1)及鏈霉素(100 μg·mL-1)配制完全培養(yǎng)基，在5%CO2、37 ℃、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)HepG2細(xì)胞；將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞以每孔3 000～4 000個(gè)的密度接種至96孔板中，培養(yǎng)24 h，作為陰性對(duì)照組(NC)；然后棄培養(yǎng)液，分組實(shí)驗(yàn)，模型組(FFA)為加入1 mmol·L-1FFA(使用培養(yǎng)液稀釋且d-BSA終濃度為1%，下同)，低濃度洋蔥醇提物組(ACE-L)為加入1 mmol·L-1FFA和總黃酮終濃度為111.17 μg·mL-1的洋蔥醇提物，中濃度洋蔥醇提物組(ACE-M)為加入1 mmol·L-1FFA和總黃酮終濃度為222.34 μg·mL-1的洋蔥醇提物，高濃度洋蔥醇提物組(ACE-H)為加入1 mmol·L-1FFA和總黃酮終濃度為333.52 μg·mL-1的洋蔥醇提物，陽(yáng)性對(duì)照組(PC)為加入1 mmol·L-1FFA和2 μg·mL-1辛伐他汀，每孔溶液總體積均為100 μL；24 h后，棄每孔液體，加入CCK-8溶液(基礎(chǔ)培養(yǎng)基與CCK-8按體積比10∶1配制)110 μL，37 ℃孵育1.5 h后，采用酶標(biāo)儀在450 nm處進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定吸光度(OD)。按下式計(jì)算細(xì)胞存活率：

1.3.3 降脂活性的評(píng)價(jià)

將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞2 mL(約每孔5×105個(gè))接種至6孔板中，待細(xì)胞密度達(dá)到60%～70%(24 h后)，吸出培養(yǎng)液，PBS緩沖液清洗2次；以1 mmol·L-1FFA作用24 h誘導(dǎo)肝脂肪變性模型[15]，按1.3.2分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，加入溶液總體積為2 mL；建模的同時(shí)加藥處理，24 h后根據(jù)試劑盒說(shuō)明分別進(jìn)行油紅O染色，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和總膽固醇含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與討論

2.1 最佳顯色劑和最大吸收波長(zhǎng)的確定(圖1)

從圖1可以看出，標(biāo)準(zhǔn)品-亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色體系的紫外吸收光譜多刺不光滑，且吸收峰個(gè)數(shù)較多，不適合作為洋蔥醇提物總黃酮含量測(cè)定的顯色劑。故采用三氯化鋁-醋酸-醋酸鈉緩沖溶液顯色劑，最大吸收波長(zhǎng)為414 nm。

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖2)

從圖2可以看出，當(dāng)顯色溫度、顯色時(shí)間、0.1 mol·L-1AlCl3溶液用量、HAc-NaAc緩沖溶液用量分別為25 ℃、22 min、0.75 mL、1.10 mL時(shí)，吸光度最高。

圖2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.2 Results of single-factor experiments

故顯色溫度、顯色時(shí)間、0.1 mol·L-1AlCl3溶液用量、HAc-NaAc緩沖溶液用量分別選取25 ℃、22 min、0.75 mL、1.10 mL較為適宜。

2.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果(表1)

表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

對(duì)表1數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得到回歸模型方程為：Y=0.3934-0.0020A+0.0290B+0.0001C-0.0069AB-0.0016AC-0.0030BC-0.0057A2-0.0102B2-0.0017C2。

回歸模型的方差分析見(jiàn)表2。

表2 回歸模型的方差分析

從表2可以看出，模型F=18.91，P=0.0004<0.01，極顯著；失擬項(xiàng)P=0.5761，不顯著，表明模型有意義。R2=0.9605，表明模型擬合較好。

2.3.2 響應(yīng)面分析

各因素交互作用對(duì)吸光度影響的響應(yīng)面圖及等高線圖如圖3所示。

從圖3可以看出，殘差的正態(tài)概率分布圖及預(yù)測(cè)值與實(shí)際值的分布圖接近一條直線，殘差與預(yù)測(cè)值的分布圖無(wú)序排列，僅顯色時(shí)間與0.1 mol·L-1AlCl3溶液用量的交互作用影響較顯著，響應(yīng)面模型有意義。

圖3 各因素交互作用對(duì)吸光度影響的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.3 Response surface plots and contour plots for effects of interaction between various factors on absorbance

根據(jù)回歸模型得到最佳顯色條件為：顯色時(shí)間27 min、0.1 mol·L-1AlCl3溶液用量1.00 mL、HAc-NaAc緩沖溶液用量0.90 mL。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

分別精密量取0.075 mg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL、0.8 mL、0.6 mL、0.4 mL、0.3 mL、0.2 mL于5 mL容量瓶中，加入1.00 mL 0.1 mol·L-1AlCl3溶液和0.90 mL HAc-NaAc緩沖溶液，用70%乙醇定容至刻度，常溫下顯色27 min，測(cè)定414 nm處吸光度。以蘆丁濃度 (c，mg·L-1)為橫坐標(biāo)、吸光度(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖4)，擬合得線性回歸方程為A=0.0606c+0.0214，R2=0.9958。表明，蘆丁濃度在3.0～15.0 mg·L-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

圖4 蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Standard curve of rutin

2.4.2 精密度

分別吸取5份3.84 mg·mL-1供試溶液各1 mL于5 mL容量瓶中，在最佳顯色條件下，測(cè)得414 nm處吸光度分別為0.550 6、0.545 3、0.549 2、0.550 1、0.551 7，計(jì)算得到總黃酮含量(mg·g-1)分別為8.545 1、8.459 5、8.522 5、8.537 0、8.562 8，RSD值為0.4646%。表明，儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性

分別吸取6份3.84 mg·mL-1供試溶液各1 mL于5 mL容量瓶中，加入1.00 mL 0.1 mol·L-1AlCl3溶液和0.90 mL HAc-NaAc緩沖溶液，用70%乙醇定容至刻度，在常溫下分別放置20 min、40 min、60 min、80 min、100 min、120 min，測(cè)得414 nm處吸光度分別為0.536 0、0.541 8、0.544 7、0.541 6、0.542 6、0.540 4，計(jì)算得到總黃酮含量(mg·g-1)分別為8.309 3、8.403 0、8.449 8、8.399 7、8.415 9、8.380 4，RSD值為0.5603%。表明，供試溶液在室溫下120 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性

分別精密稱取6份洋蔥粉末各1.0 g，按1.2.3方法制備供試溶液。取供試溶液0.6 mL于5 mL容量瓶中，在最佳顯色條件下，測(cè)得414 nm處吸光度分別為0.658 8、0.662 3、0.664 7、0.661 6、0.664 4、0.666 9，計(jì)算得到總黃酮含量(mg·g-1)分別為8.664 1、8.711 7、8.744 3、8.702 2、8.740 3、8.774 2，RSD值為0.4411%。表明，該方法的重復(fù)性較好。

2.4.5 加標(biāo)回收率

分別精密稱取6份洋蔥粉末各0.5 g，加入一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.3方法制備供試溶液，在最佳顯色條件下測(cè)定414 nm處吸光度，計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 加標(biāo)回收率結(jié)果

2.5 實(shí)際樣品中總黃酮含量測(cè)定

分別吸取3份3.84 mg·mL-1供試溶液各1 mL，在最佳顯色條件下，測(cè)得414 nm處吸光度分別為0.546 4、0.559 4、0.559 8，計(jì)算得到總黃酮含量(mg·g-1)分別為8.477 2、8.687 2、8.693 6，總黃酮平均含量為8.619 3 mg·g-1，與預(yù)測(cè)值(8.364 3 mg·g-1)的相對(duì)誤差為2.96%。

2.6 降脂活性

2.6.1 洋蔥醇提物對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性(圖5)

圖5 洋蔥醇提物對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性Fig.5 Cytotoxicity of alcohol extract of Allium cepa L.to HepG2 cells

從圖5可以看出，與正常培養(yǎng)的陰性對(duì)照組相比，加入FFA后的不同處理組的細(xì)胞存活率均略微下降；與模型組相比，中、高濃度洋蔥醇提物組的細(xì)胞存活率差別不大，低濃度洋蔥醇提物組的細(xì)胞存活率略微上升。表明，中、高濃度洋蔥醇提物和FFA共同作用24 h對(duì)HepG-2細(xì)胞毒性沒(méi)有明顯的抑制作用。

2.6.2 細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和總膽固醇的含量

FFA誘導(dǎo)肝脂肪變性24 h后，通過(guò)油紅O染色判斷是否建模成功。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與陰性對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累明顯，洋蔥醇提物組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累均降低。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得線性回歸方程：甘油三酯，y=0.0129x+0.0941，R2=0.9932；總膽固醇，y=0.0029x+0.0563，R2=0.9905；總蛋白，y=0.0001x+0.1608，R2=0.9978。計(jì)算細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和總膽固醇的含量，結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和總膽固醇含量均顯著增加，洋蔥醇提物組則以劑量依賴方式抑制FFA誘導(dǎo)的甘油三酯和總膽固醇積累(圖6)。

注：與模型組比較，*表示P<0.05、**表示P<0.01、

2.7 討論

由于亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色劑不僅能與黃酮類化合物反應(yīng)，還能與酚酸、原花色素等非黃酮類化合物反應(yīng)，干擾測(cè)定結(jié)果，專屬性不強(qiáng)。因此，本研究選擇三氯化鋁-醋酸-醋酸鈉緩沖溶液作顯色劑，與陳愛(ài)洋等[17]選擇的顯色劑一致。王彩虹等[18]以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用三氯化鋁-亞硝酸鈉-氫氧化鈉顯色劑測(cè)定的洋蔥總黃酮含量為8.35 mg·g-1。本研究在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步通過(guò)響應(yīng)面法[19-20]優(yōu)化顯色條件，測(cè)得洋蔥醇提物總黃酮含量為8.619 3 mg·g-1。

黃酮醇是洋蔥的主要黃酮類化合物，包括槲皮素、山萘酚、異鼠李素、楊梅黃酮及其衍生物[21-22]。研究表明，黃酮類化合物具有抗氧化、降脂以及改善代謝性綜合征等作用[8,23]。氧化應(yīng)激的產(chǎn)生是脂質(zhì)代謝紊亂的一大誘因，增加抗氧化劑的攝入量可能會(huì)降低肥胖的發(fā)生率[24]。Nuutila等[25]、Prakash等[26]已報(bào)道了洋蔥通過(guò)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和清除自由基發(fā)揮抗氧化作用；作者所在課題組前期也證明了洋蔥醇提物及洋蔥皮醇提物具有一定的抗氧化作用[27-28]。此外，NAFLD的臨床病理特征是肝脂肪變性和脂肪堆積，Emamat等[9]和El-Din等[29]均研究發(fā)現(xiàn)，給大鼠喂食高脂肪飲食誘導(dǎo)NAFLD后，實(shí)驗(yàn)組食用洋蔥可以正調(diào)節(jié)與NAFLD疾病相關(guān)的生化和組織學(xué)標(biāo)志物。本研究中，通過(guò)FFA誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立肝脂肪變性模型，油紅O染色表明建模成功；進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明洋蔥醇提物在一定濃度范圍內(nèi)有降低細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和總膽固醇含量的作用。并且，作者所在課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，洋蔥醇提物可以通過(guò)下調(diào)HMGCR和上調(diào)LDLR來(lái)緩解SD大鼠的高脂血癥[14]。

3 結(jié)論

以三氯化鋁-醋酸-醋酸鈉緩沖溶液為顯色劑，采用紫外分光光度法測(cè)定洋蔥醇提物總黃酮含量，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面法優(yōu)化洋蔥醇提物總黃酮含量測(cè)定的顯色條件，確定最佳顯色條件為：顯色溫度25 ℃、顯色時(shí)間27 min、0.1 mol·L-1AlCl3溶液用量1.00 mL、HAc-NaAc緩沖溶液(pH值5.2)用量0.90 mL，在該顯色條件下，洋蔥醇提物總黃酮含量為8.619 3 mg·g-1，與預(yù)測(cè)值(8.364 3 mg·g-1)的相對(duì)誤差為2.96%。體外降脂實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，洋蔥醇提物使細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和總膽固醇含量降低，且高濃度組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。洋蔥醇提物含有較豐富的黃酮類化合物，其降脂活性可能是黃酮類化合物異槲皮苷、槲皮素等與其它活性成分協(xié)同作用的結(jié)果，有望進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)用來(lái)防治非酒精性脂肪肝。