佛手散的藥理作用研究進(jìn)展

劉飔晗，付新

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040)

目前，關(guān)于佛手散的整體研究較少，筆者通過綜述其指標(biāo)成分以及對子宮內(nèi)膜異位癥、先兆流產(chǎn)、原發(fā)性痛經(jīng)、腦中風(fēng)、神經(jīng)退行性疾病、血虛、血瘀和肝微粒酶活性的藥理作用，以期為佛手散進(jìn)一步的研究提供理論依據(jù)。

1 指標(biāo)成分

根據(jù)2020版中國藥典記載，阿魏酸是當(dāng)歸和川芎含量測定的指標(biāo)成分[9]，但是以單一成分來評估方劑質(zhì)量卻有失妥當(dāng)。有研究以同時測定阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯Ⅰ、洋川芎內(nèi)酯A和藁本內(nèi)酯確定其質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)具有良好的重現(xiàn)性[10]。賈智若等[11]以綠原酸、咖啡酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯為指標(biāo)物，采用HPLC法測定兩種煎液的指標(biāo)物含量，結(jié)果顯示，合煎液的5種有效成分含量均高于分煎液。LI等[12]同時定量當(dāng)歸、川芎和佛手散中的3種芳香酸(綠原酸、咖啡酸、阿魏酸)和6種酞類化合物(洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、洋川芎內(nèi)酯A、丁基苯酞、藁本內(nèi)酯和丁基苯酞)的含量，發(fā)現(xiàn)合煎中發(fā)生了藥物的相互作用。由此可見，方劑的質(zhì)量需從多個維度入手，不應(yīng)是單味藥指標(biāo)成分的簡單加和。

2 對婦科疾病的作用

2.1 對子宮內(nèi)膜異位癥的作用

子宮內(nèi)膜異位癥(EMS)多發(fā)于生育年齡的女性，病理表現(xiàn)為本應(yīng)生長在子宮腔上的內(nèi)膜細(xì)胞經(jīng)由輸卵管進(jìn)入盆腔異位生長。王小翠等[13]發(fā)現(xiàn)加味佛手(延胡索)散具有抑制EMS模型大鼠血管生成的作用，其機制可能是降低大鼠異位內(nèi)膜組織體積和微血管密度(MVD),并能夠抑制大鼠異位內(nèi)膜組織中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白的表達(dá), 降低大鼠血清和異位內(nèi)膜組織中前列腺素E2(PGE2)的含量, 促進(jìn)內(nèi)皮抑素(endostatin)蛋白的表達(dá)，而內(nèi)皮抑素可通過抑制異位病變血管生成和降低VEGF表達(dá)影響子宮內(nèi)膜異位組織的維持和生長[14]，并且有研究表明，內(nèi)皮抑素可以抑制EMS[15]。除此以外，內(nèi)皮抑素還具有抑制VEGF誘導(dǎo)的血管通透性和抗血管生成功能[16]，其抗血管生成作用在抑制癌細(xì)胞增殖和腫瘤遷移方面特別重要。大多數(shù)癌癥顯示出VEGF的高表達(dá)[17]，因此，臨床有利用靶向VEGF來治療癌癥的方法，如使用貝伐單抗來治療結(jié)直腸癌[18]。但是，這種方法太過單一，許多患者對抗血管生成藥物產(chǎn)生耐藥性導(dǎo)致療效下降，并且抗血管生成藥物價格昂貴還具有副作用[19]。佛手散可以抑制VEGF并且可以促進(jìn)內(nèi)皮抑素的含量，表明佛手散可能具有治療癌癥的潛力。

張瑩等[20]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析此類加味佛手散的作用靶點，發(fā)現(xiàn)其可能調(diào)控MMP2、MMP9、TIMP1等66個關(guān)鍵靶點以及相關(guān)的115條信號通路，并且其中MMP/TIMP在通路中起關(guān)鍵作用，隨后又用實驗對MMP/TIMP靶點進(jìn)行了驗證。結(jié)果表明加味佛手散可以顯著抑制大鼠子宮異位內(nèi)膜組織的生長，其機制是通過下調(diào)MMP-2和MMP-9, 上調(diào)TIMP-1表達(dá)實現(xiàn)的?；|(zhì)金屬蛋白酶-2和-9(MMP-2/-9)是關(guān)鍵的組織重塑酶，對腫瘤的愈合和進(jìn)展至關(guān)重要。MMP-2/-9會促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴散[21-22]，高表達(dá)的MMP-2/-9還會使神經(jīng)膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)預(yù)后差[23]。MMP-2/-9可能作為乳腺癌治療的標(biāo)志物[24]、膀胱癌早期檢測的預(yù)后標(biāo)志物[25]和基底細(xì)胞癌的預(yù)后因素[26]。除此以外，腫瘤細(xì)胞可能通過產(chǎn)生一些其他因素誘導(dǎo)鄰近基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶[27]。金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)水平升高通常與腫瘤發(fā)生增加有關(guān)，如乳腺癌[28]、胃癌[29]、結(jié)腸直腸癌[30]和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，并且TIMP-1/IL6軸可能是NSCLC中有價值的預(yù)后生物標(biāo)志物[31]。

尚芳紅等[32]采用HPLC法測定此類加味佛手散在EMS模型大鼠血漿中的有效成分含量變化，結(jié)果顯示在EMS狀態(tài)下，川芎嗪的吸收速度加快，延胡索乙素的吸收明顯增加，而阿魏酸則沒有顯著的吸收差異。

2.2 對先兆流產(chǎn)的作用

先兆流產(chǎn)是指在妊娠28周之前，在尿液或血液妊娠試驗陽性，宮頸封閉的情況下，沒有受孕產(chǎn)物通過且沒有胎兒或胚胎死亡的證據(jù)的情況下，陰道出血。一些研究[33-34]發(fā)現(xiàn)佛手散可以降低正常妊娠大鼠的血液黏度，并且當(dāng)佛手散劑量達(dá)到一定濃度時，會使正常妊娠大鼠的血清及子宮、胎盤的腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度升高，從而導(dǎo)致妊娠大鼠自然流產(chǎn)。然而，在先兆流產(chǎn)模型大鼠中，佛手散的表現(xiàn)則相反[35]：佛手散會降低先兆流產(chǎn)模型大鼠血清及子宮胎盤組織中已經(jīng)升高的TNF-α濃度，從而改善流產(chǎn)的不良結(jié)局，且不同劑量間無顯著差異。黃俐華等[36]發(fā)現(xiàn)佛手散可以降低先兆流產(chǎn)模型大鼠的血液黏度，清除瘀血，從而降低模型大鼠的流產(chǎn)率。上述研究和《普濟(jì)本事方》[37]中的記載：“治婦人妊孕五七月……用此藥探之，若不損則痛止，子母俱安。若胎損立便逐下，此藥催生神妙?！笔窒嗨啤?/p>

3 抗氧化應(yīng)激

3.1 對原發(fā)性痛經(jīng)的作用

痛經(jīng)分原發(fā)性和繼發(fā)性兩種，經(jīng)過詳細(xì)婦科臨床檢查未能發(fā)現(xiàn)盆腔器官有明顯異常者，稱原發(fā)性痛經(jīng)，也稱功能性痛經(jīng)。佟昕等[38]使用由當(dāng)歸、川芎、血見愁、赤芍、黃芪組成的加味佛手散，發(fā)現(xiàn)其能夠抑制由縮宮素引起的原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠的離體子宮活力，其機制為降低血清中前列腺素F2α(PGF2α)的含量及MDA含量和提高谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)及超氧化物歧化酶(SOD)活性，表明其可以加速超氧自由基的消除, 減輕超氧自由基對子宮平滑肌的進(jìn)一步損傷。

3.2 對腦中風(fēng)的作用

腦中風(fēng)在臨床上表現(xiàn)為腦部缺血及出血性損傷癥狀，是全球死亡和殘疾的主要原因之一。賈智若等[39]采用線栓法建立大鼠腦內(nèi)動脈阻塞局灶性腦缺血再灌注(MCAO)模型，發(fā)現(xiàn)佛手散水煎液對MCAO大鼠的神經(jīng)行為學(xué)障礙、腦水腫水平以及腦梗死體積有著顯著改善作用。此外，他們還采用連二亞硫酸鈉合并缺糖建立體外PC12細(xì)胞氧糖剝奪(OGD)損傷模型，發(fā)現(xiàn)佛手散水煎液可以提高SOD活性，減少細(xì)胞中的MDA和NO含量。無論是體內(nèi)還是體外實驗，佛手散均呈劑量依賴性。

氧化應(yīng)激增加是心血管疾病中潛在的病因之一?；钚匝?ROS)和抗氧化劑之間的良好平衡對細(xì)胞的正常功能至關(guān)重要，過量的ROS會對細(xì)胞大分子如DNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)造成損傷，最終導(dǎo)致細(xì)胞壞死和凋亡。氧化劑還能夠通過從多不飽和脂肪酸中提取烯丙基質(zhì)子來引發(fā)脂質(zhì)氧化，這一過程通過多個階段導(dǎo)致脂質(zhì)氫過氧化物的形成，是動脈粥樣硬化發(fā)展的一個已知因素[40]，并且MDA是脂質(zhì)過氧化的生物標(biāo)志物之一。然而，人體可以通過SOD、GSH-Px、過氧化氫酶(CAT)等多種酶的作用來防止活性氧的損傷。佛手散可以升高SOD和GSH-Px的水平并且降低MDA的含量，但是對于更深層次的機制還需進(jìn)一步的研究。

4 對神經(jīng)退行性疾病的作用

阿爾茨海默病(AD)和帕金森病(PD)是兩種最常見的神經(jīng)退行性疾病，且患病率隨著年齡的增長而明顯增加。對于PD，目前公認(rèn)的病理主要是黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)元缺失，導(dǎo)致紋狀體多巴胺耗竭，而β淀粉樣蛋白(Aβ)沉積和tau蛋白過度磷酸化是AD的主要病理特征。

曹方引等[41]發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸揮發(fā)油聯(lián)用川芎揮發(fā)油可以顯著改善利血平引起的小鼠肛溫下降和運動不能模型。在體外酶活性實驗中，還發(fā)現(xiàn)這兩種揮發(fā)油對人單胺氧化酶-A(hMAO-A)和人單胺氧化酶-B(hMAO-B)均有競爭性抑制作用且配伍使用時對其活性的抑制作用明顯加強，表明佛手散在治療PD的機制可能與抑制hMAO活性有關(guān)。

魯佳[42]發(fā)現(xiàn)佛手散減少了APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠大腦中的Aβ沉積、脂多糖(LPS)和丙二醛(MDA)的水平、堿性磷酸酶(AP)的活性；降低了血清和肝臟中LPS和MDA的水平、AP活性；降低腸道中AP活性、MDA水平和大腸桿菌數(shù)量；降低了糞便中的LPS水平以及增加腸道中的乳酸桿菌數(shù)量，簡言之，佛手散可能通過調(diào)節(jié)腦-肝-腸軸的小分子從而緩解APP/PS1模型小鼠的認(rèn)知功能障礙。

5 對血虛血瘀證的作用

血虛證，指血液虧少，不能濡養(yǎng)臟腑、經(jīng)絡(luò)、組織。李偉霞等[43]聯(lián)合使用乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺復(fù)制小鼠血虛模型，對小鼠進(jìn)行佛手散給藥7 d后，通過代謝組學(xué)方法分析各組小鼠的血漿樣品，發(fā)現(xiàn)并鑒定了22個潛在生物標(biāo)志物及相關(guān)的硫胺代謝、花生四烯酸代謝、鞘脂類代謝等11條代謝通路。黃美艷等[44]發(fā)現(xiàn)佛手散的醇提物對此類血虛模型的小鼠的造血功能和免疫功能具有著改善作用，主要表現(xiàn)在增加體質(zhì)量、脾臟及胸腺的重量，降低肝臟腫脹水平，提高SOD活性和肝臟總抗氧化能力(T-AOC)能力，并且具有最佳效果的是40%濃度的乙醇。

血瘀證是中醫(yī)常見的證候，指的是阻塞的病理生理狀態(tài)血液循環(huán)和異常血流，是由全身或局部組織器官的缺血和缺氧、血液循環(huán)障礙和血液黏度異常引起的。研究發(fā)現(xiàn)采用冰水浴結(jié)合皮下注射鹽酸腎上腺素法復(fù)制急性血瘀大鼠模型，通過代謝組學(xué)方法對大鼠尿液進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)11個潛在生物標(biāo)志物和3條主要的代謝通路：鞘脂類代謝、苯丙氨酸代謝和色氨酸代謝[45]。魯建武等[46]發(fā)現(xiàn)佛手散能夠降低此類急性血瘀模型大鼠的紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞電泳指數(shù)和全血黏度等指標(biāo)。在正常大鼠中，佛手散還能降低血小板聚集率和血小板黏附率, 升高紅血小板數(shù)、細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白濃度，提示佛手散有顯著的活血化瘀及補血養(yǎng)血的作用。佛手散雖對血虛血瘀有著一定作用，但其詳細(xì)的作用機制卻不得知，其具體的機制有待進(jìn)一步的研究。

6 對肝微粒體酶活性的影響

佛手散除了以上研究外，對肝微粒體的影響亦有涉及。研究發(fā)現(xiàn)，增加了延胡索的加味佛手散膠囊對體外大鼠肝微粒體CYP2D6、CYP2D2、CYP2E1、CYP3A1/2、CYP3A4的酶活性有抑制作用，但單獨使用阿魏酸、川芎嗪、延胡索乙素則無抑制作用[47-50]；此復(fù)方在體外人肝微粒的實驗中，對CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4酶活性可能有抑制作用；在大鼠體內(nèi)實驗還能顯著增加CYP2C6、CYP2C9、CYP3A1/2、CYP1A2,、CYP3A4的酶活性。研究者還發(fā)現(xiàn)延胡索乙素與阿魏酸、川芎嗪聯(lián)合使用后，能顯著降低延胡索乙素對大鼠的肝毒性。然而，CYP3A4和CYP3A1/2在體外抑制，在大鼠體內(nèi)則是增強作用，尚芳紅等[50]認(rèn)為體外實驗是單次給藥, 體內(nèi)實驗則是多次給藥, 大鼠具有反饋調(diào)節(jié)機制，而CYP3A4在大鼠體內(nèi)的誘導(dǎo)和人肝微粒體外的抑制則有可能是由于人和大鼠有著物種差異。佛手散及其配伍的藥理作用和機制整理見表1。

表1 佛手散及其配伍的藥理作用和機制

7 結(jié)語

佛手散在婦科疾病、腦部疾病和血證相關(guān)的疾病上雖有藥理研究，但是卻不夠深入。除了上述疾病外，有關(guān)其他疾病的報道幾乎沒有。今后，研究人員可以進(jìn)一步探究佛手散對其他疾病的藥理作用及機制，深入探究其價值，不斷推進(jìn)中醫(yī)藥文化的發(fā)展。