中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白在診斷腎性貧血及評估病情中的應(yīng)用價值

李曉亮, 張 黎

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院 輸血科, 安徽 巢湖, 238001;2.江蘇省疾病控制中心 分子診斷組, 江蘇 南京, 210009)

腎性貧血(RA)是慢性腎臟病的常見并發(fā)癥，是由促紅細(xì)胞生成素(EPO)缺乏、鐵代謝異常、骨髓造血功能抑制等因素引起的[1]。早期RA可無任何癥狀，但其進(jìn)展與臨床預(yù)后和生存質(zhì)量相關(guān)[2]。目前，中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)已用于急性腎損傷(AKI)和慢性腎臟病(CKD)的早期發(fā)現(xiàn)和療效評估[3], 但有關(guān)血NGAL在RA中的應(yīng)用研究則較少[4]。本研究分析血NGAL水平在CKD合并不同程度貧血患者中的變化情況及其與貧血指標(biāo)的相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年12月—2021年10月安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院收治的CKD合并貧血患者86例，所有患者均符合《中國腎性貧血診治臨床實踐指南》[5]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 初治患者，年齡>15周歲，一般臨床資料及實驗室數(shù)據(jù)完整; ② 血常規(guī)提示男性血紅蛋白(Hb)<130 g/L, 非妊娠期女性Hb<120 g/L, 妊娠期女性Hb<110 g/L; ③ 患者未合并其他導(dǎo)致貧血的疾病。依據(jù)中國貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)[6], 將86例患者按照貧血程度分為輕癥組(Hb≥90 g/L)54例、中重癥組(Hb<90 g/L)32例; 另選取同期CKD未合并貧血患者36例作為對照組。所有患者均符合CKD診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)(編號: KYXM-202201-002)。

1.2 儀器、試劑及檢測方法

全自動生化分析儀(SIEMENS，型號ADVIA Chemistry XPT)，試劑購自SIEMENS公司，采用肌氨酸氧化酶法檢測血肌酐(Scr), 脲酶法檢測血尿素氮(BUN); 全自動化學(xué)發(fā)光儀(北京熱景，型號C2000), 試劑購自九強生物技術(shù)有限公司，采用磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測血NGAL; 全自動血細(xì)胞分析儀(SYSMEX, 型號xn-2800), 試劑購自SYSMEX公司，檢測紅細(xì)胞(RBC)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、Hb。

所有患者均于清晨空腹8 h狀態(tài)下抽取7 mL靜脈血，其中5 mL置于黃色抗凝管，并以1 500 g離心5 min, 取上清用于血NGAL、Scr和BUN檢測; 剩余2 mL置于EDTA-2K抗凝管中充分混勻，用于RBC、HCT和Hb檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，不符合正態(tài)分布的計量資料采用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)表示; 應(yīng)用Kruskal-Wallis秩和檢驗進(jìn)行多組間差異比較; 采用Spearman進(jìn)行指標(biāo)間相關(guān)性分析; 多組間比較及受試者工作特征(ROC)曲線均應(yīng)用GraphPad Prism8進(jìn)行繪圖分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組CKD患者一般資料

在納入的122例CKD患者中，男65例，女57例，男、女比例為1.14∶1, 患者平均年齡為(63.6±14.3)歲; 按年齡段將患者劃分為青少年(≤40歲)8例，中年(41～65歲)59例，老年(≥66歲)55例。各組患者性別分布及年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組CKD患者一般資料[n(%)]

2.2 各組CKD患者血NGAL、Scr和BUN水平比較

中重癥組血NGAL、Scr、BUN水平高于輕癥組和對照組，輕癥組血NGAL、Scr、BUN水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

A: 各組血NGAL水平比較; B: 各組Scr水平比較; C: 各組BUN水平比較。

2.3 CKD合并貧血患者血NGAL與各項檢測指標(biāo)的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析顯示，CKD合并貧血患者的血NGAL與RBC、HCT和Hb呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05), 與Scr和BUN呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 CKD合并貧血患者血NGAL與各檢測指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.4 血NGAL在RA中的診斷價值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，血NGAL水平診斷RA的曲線下面積(AUC)為0.729, 靈敏度為80.2%(95%CI: 70.6～87.3), 特異度為61.1%(95%CI: 44.9～75.2), 最佳臨界值為134.62 ng/mL。見圖2。

圖2 血NGAL診斷RA的ROC曲線

3 討 論

RA在慢性腎臟病中普遍存在，各期均可出現(xiàn)，且多表現(xiàn)為輕度至中度貧血[8]。一項橫斷面調(diào)查[9]顯示, CKD患者的貧血患病率高達(dá)51.5%, 且隨著病情發(fā)展，患病率會逐漸增高。隨著貧血程度的不斷加重, RA患者會發(fā)生心血管并發(fā)癥、貧血并發(fā)癥以及腎衰竭，甚至?xí)?dǎo)致死亡[10]。

NGAL是脂質(zhì)沉積蛋白超家族中的一種25 kDa蛋白，這種蛋白在各種病理狀態(tài)下由免疫細(xì)胞、肝細(xì)胞和腎小管細(xì)胞表達(dá)和分泌[11]。研究[12]表明，血NGAL與貧血有關(guān)聯(lián)，是其重要的調(diào)控因素。本研究中, CKD合并貧血患者的血NGAL水平顯著高于未合并貧血患者，且貧血患者的血NGAL水平隨著貧血程度的加重而顯著升高，提示血NGAL水平升高是導(dǎo)致RA的關(guān)鍵因素，其水平高低與貧血輕重程度密切相關(guān)。血NGAL作為一種鐵代謝調(diào)節(jié)因子，長期升高可通過抑制RBC生長和破壞鐵穩(wěn)態(tài)而導(dǎo)致貧血的產(chǎn)生[13]。當(dāng)機體出現(xiàn)貧血時，會上調(diào)NGAL的表達(dá)，導(dǎo)致骨髓前體中NGAL增多，進(jìn)一步抑制RBC的生成，從而加重貧血[14]。本研究發(fā)現(xiàn), RA患者的Scr和BUN水平顯著升高，且隨著貧血程度的加重而逐步上升，提示患者貧血程度加重不僅受血NGAL水平上升影響，還受腎功能減退的影響。YIN P等[15]報道CKD患者發(fā)生貧血的同時會出現(xiàn)腎功能損傷。醫(yī)學(xué)調(diào)查[16]顯示, CKD患者貧血會加劇腎功能惡化，而腎功能惡化又會加重貧血。RA的發(fā)生發(fā)展與血NGAL水平和患者腎功能情況有著密切的聯(lián)系，其可能機制是CKD患者患病初期出現(xiàn)腎功能損傷，腎臟局部炎癥刺激腎小管細(xì)胞分泌NGAL, 進(jìn)而導(dǎo)致貧血的發(fā)生。隨著病情逐漸發(fā)展，腎小管上皮不斷受損并大量分泌NGAL, NGAL通過抑制RBC生成、破壞鐵穩(wěn)態(tài)等方式加重貧血。隨著腎功能的不斷減退，患者容易出現(xiàn)惡心、嘔吐、食欲減退等癥狀，導(dǎo)致造血原料攝入不足; 此外，尿毒癥患者體內(nèi)產(chǎn)生的毒素會干擾紅細(xì)胞的正常代謝，抑制骨髓造血，也會進(jìn)一步加重貧血。

YANG H等[17]研究顯示, NGAL是一種可以評價腎功能損傷程度的生物學(xué)標(biāo)志物。本研究也發(fā)現(xiàn)血NGAL與Scr和BUN呈正相關(guān)，表明血NGAL水平能間接反映患者的腎功能損傷情況。從目前RA的臨床診斷情況來看，其診斷指標(biāo)有Hb、RBC、HCT等，但多數(shù)CKD患者在透析前或發(fā)病早期忽視了血常規(guī)檢測，且患者早期Hb未出現(xiàn)明顯異常，因此經(jīng)常被忽視。有學(xué)者[18]提出，血NGAL對評估CKD貧血有一定的價值，且其在CKD常規(guī)檢測中應(yīng)用較廣，或可用于CKD非透析患者的貧血篩查。本研究中, ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)血NGAL對RA有良好的診斷能力，血NGAL診斷RA的最佳臨界值為134.62 ng/mL, 臨床上可以通過檢測血NGAL水平來輔助診斷RA。

本研究仍存在一定的不足，例如調(diào)研時間較短、樣本數(shù)量偏少，尤其是重度貧血患者數(shù)量較少; 患者多為中老年人，青少年人群較少，年齡分布不夠平衡。因此，后續(xù)研究應(yīng)進(jìn)一步擴大范圍、均衡年齡后進(jìn)行深入論證。

綜上所述，血NGAL是RA發(fā)生和病情發(fā)展的關(guān)鍵因素，其水平與貧血程度密切相關(guān)，血NGAL對RA有良好的診斷能力，動態(tài)監(jiān)測血NGAL水平可為RA的臨床診斷和病情評估提供參考依據(jù)。