高效液相色譜法測(cè)定組胺的方法驗(yàn)證

陳瑾 （哈密市食品藥品檢驗(yàn)所）

張勇 （哈密市檢驗(yàn)檢測(cè)中心）

0 引言

食品檢驗(yàn)是食品安全管控的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。食品檢驗(yàn)主要依據(jù)相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，以及一些非標(biāo)準(zhǔn)方法和自制方法。在RB/T 214—2017《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià) 檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通用要求》4.5.14方法的選擇、驗(yàn)證和確認(rèn)中規(guī)定：“在使用標(biāo)準(zhǔn)方法前應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證”。這種驗(yàn)證不僅需要識(shí)別相應(yīng)的人員、設(shè)施設(shè)備和環(huán)境等技術(shù)能力滿足要求，還應(yīng)通過試驗(yàn)證明結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，如精密度、回收率、線性范圍、正確度、檢出限和定量限等。

秦曉娟等在保健食品中鈣含量測(cè)定時(shí)，選用5種不同的方法計(jì)算檢出限，結(jié)果發(fā)現(xiàn)應(yīng)用空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法可信度較高。孫明坤在測(cè)定生活飲用水及其水源中氯化物時(shí)通過測(cè)定其精密度、準(zhǔn)確度、線性方程、方法檢出限等參數(shù)進(jìn)行了方法驗(yàn)證。張麗琴對(duì)食品中總酸測(cè)定時(shí)采用同一種檢測(cè)方法的精密度實(shí)驗(yàn)和同一種樣品的不同檢驗(yàn)方法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的比較進(jìn)行新標(biāo)準(zhǔn)的確認(rèn)及方法驗(yàn)證。本文以葡萄酒中組胺的測(cè)定為例，參照GB/T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》附錄F和HJ 168—2020《環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)導(dǎo)則》檢測(cè)方法確認(rèn)的技術(shù)要求分別對(duì)組胺測(cè)定的方法檢出限、準(zhǔn)確度、精密度、加標(biāo)回收等特性指標(biāo)進(jìn)行了方法驗(yàn)證試驗(yàn)，以期為食品檢驗(yàn)人員在方法驗(yàn)證工作中提供借鑒和參考。

1 試驗(yàn)方法及過程

葡萄酒中組胺的測(cè)定采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.208—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中生物胺的測(cè)定》。試驗(yàn)用儀器設(shè)備為高效液相色譜儀。試驗(yàn)用試劑、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置、色譜條件、樣品處理、含量計(jì)算等均嚴(yán)格按GB 5009.208—2016標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性試驗(yàn)

分別配制低、中、高系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為 1.0 mg/L、2.0 mg/L、2.5 mg/L、4.5 mg/L、5.5 mg/L；4.5 mg/L、5.5 mg/L、7.5 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L；7.5 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/L、50.0 mg/L，按照樣品方法衍生化后分析，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)化合物的峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。所得方程分別為=0.0005-0.0005,相關(guān)系數(shù)=0.9946；=0.0005-0.0006，相關(guān)系數(shù)=0.9958；=0.0006-0.0006，相關(guān)系數(shù)=0.9992，均滿足GB 27404—2008標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99的要求。線性關(guān)系圖見圖1至圖3。

圖1 低濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液線性關(guān)系圖

圖2 中濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液線性關(guān)系圖

圖3 高濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液線性關(guān)系圖

2.2 加標(biāo)回收驗(yàn)證試驗(yàn)

表1 加標(biāo)回收測(cè)試數(shù)據(jù)

2.3 精密度與準(zhǔn)確度驗(yàn)證試驗(yàn)

表2 方法精密度、準(zhǔn)確度測(cè)試數(shù)據(jù)

2.4 方法檢出限、定量限驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

表3 方法檢出限、定量限測(cè)試數(shù)據(jù)

3 結(jié)果

本方法采用高效液相色譜法分別對(duì)其方法檢出限、準(zhǔn)確度、加標(biāo)回收等特征指標(biāo)進(jìn)行了方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明本方法使用設(shè)備的檢出限、定量限均優(yōu)于GB 5009.208—2016標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。低、中、高三個(gè)濃度的加標(biāo)回收率為：99.3%～101.8% ,低、中、高三條校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)分別為=0.9946；=0.9958；=0.9992，精密度為 0.24%～0.73%,準(zhǔn)確度為-1.28%～0.02% ,均滿足GB/T 27404—2008的相關(guān)要求，該方法可以使用。