肉牛同期發(fā)情效果研究

柴 局，牛 峰，張良斌，張志強(qiáng)，張仙保，羅保華，徐海波，高振江，馮志遠(yuǎn)，魏 娟，張新杰★，馮立剛

（1.包頭市農(nóng)牧科學(xué)技術(shù)研究所，內(nèi)蒙古包頭 014000；2.包頭市達(dá)茂聯(lián)合旗百靈廟鎮(zhèn)綜合保和技術(shù)推廣中心，內(nèi)蒙古包頭 014000；3.呼倫貝爾市農(nóng)牧科學(xué)研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000；4.巴彥淖爾市烏拉特中旗農(nóng)牧和科技局畜牧業(yè)服務(wù)中心，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000）

內(nèi)蒙古依托豐富廣闊的草原資源，肉牛養(yǎng)殖在全國(guó)一直占據(jù)著非常重要地位。目前農(nóng)牧民養(yǎng)殖肉牛品種以西門(mén)塔爾牛及西門(mén)塔爾雜交牛為主，以適應(yīng)飼養(yǎng)和市場(chǎng)需求。西門(mén)塔爾牛原產(chǎn)于瑞士阿爾卑斯山，由于其產(chǎn)乳量高，產(chǎn)肉性能優(yōu)秀，役用性能也不錯(cuò)，是被稱(chēng)為“全能?！钡娜?、肉、役兼用的大型品種，備受我國(guó)農(nóng)牧民喜歡。又該品種牛對(duì)地方黃牛改良效果良好，因其雜交后代毛色漂亮、生長(zhǎng)快、早熟、屠宰率高、適應(yīng)性強(qiáng)、耐寒抗病等特點(diǎn)，很受養(yǎng)殖戶(hù)歡迎。為了提高養(yǎng)殖效益，人們開(kāi)始采用同期發(fā)情和人工冷配技術(shù)進(jìn)行人工繁殖。因內(nèi)蒙古地處西門(mén)塔爾肉牛及西門(mén)塔爾雜交牛養(yǎng)殖體量較大，體況差別較大，會(huì)對(duì)肉牛養(yǎng)殖繁育環(huán)節(jié)有一定影響。

目前通過(guò)藥物干預(yù)采用同期發(fā)情技術(shù)的途徑主要分為兩種：（1）采用黃體溶解，利用前列腺素類(lèi)的藥物對(duì)空懷母牛的處理，促使卵泡成熟排卵；（2）延長(zhǎng)母牛的黃體，采用孕酮類(lèi)藥物來(lái)處理，抑制卵巢的卵泡生長(zhǎng)發(fā)育，通過(guò)孕酮類(lèi)藥物延長(zhǎng)母牛的黃體，然后迅速停藥使卵泡成熟排出。

目前通過(guò)在肉牛繁育中推廣同期發(fā)情技術(shù)有很多優(yōu)點(diǎn)，（1）通過(guò)同期控制母牛發(fā)情，有利于在肉牛育種與繁殖中提高工作效率，推廣同期發(fā)情、人工授精技術(shù)縮短世代間隔、按照自然發(fā)情母牛3年2胎，通過(guò)該技術(shù)可以一年一胎，提高母牛繁殖效率；（2）便于生產(chǎn)上的管理，通過(guò)同期發(fā)情技術(shù)的推廣有利于控制母牛的配種期，有計(jì)劃地繁殖、生產(chǎn)和育肥，根據(jù)養(yǎng)殖場(chǎng)的情況合理安排配種、產(chǎn)犢的時(shí)間，做到生產(chǎn)與銷(xiāo)售相協(xié)調(diào)；（3）有利于養(yǎng)殖場(chǎng)設(shè)施和設(shè)備的合理使用，通過(guò)有計(jì)劃的繁育工作，統(tǒng)籌安排養(yǎng)殖場(chǎng)工作人員的工作，做好飼料生產(chǎn)、供應(yīng)與組織肉牛的存欄、出欄管理的相互配合協(xié)調(diào)工作。（4）大力提高繁殖力。用前列腺素處理因持久黃體存在而表現(xiàn)乏情的母牛，其黃體逐漸消散，繁殖力恢復(fù)，通過(guò)同期發(fā)情技術(shù)使卵巢靜止的母牛經(jīng)過(guò)孕激素類(lèi)藥物處理后，使其表現(xiàn)發(fā)情；（5）有利于推廣AI（人工授精冷配技術(shù)）。由于養(yǎng)殖戶(hù)分散AI推廣受到影響，通過(guò)同期發(fā)情技術(shù)肉牛養(yǎng)殖戶(hù)在短時(shí)間內(nèi)使母牛集中發(fā)情、排卵，按照計(jì)劃配種，方便AI的推廣。

試驗(yàn)?zāi)概ｏ曫B(yǎng)在內(nèi)蒙古達(dá)茂旗半牧半舍的草原地區(qū)，養(yǎng)殖場(chǎng)空懷期為80d，41頭母牛，試驗(yàn)前進(jìn)行為期10d的調(diào)整期后，被分為兩組，分別定為Ⅰ組和Ⅱ組，Ⅰ組21頭母牛，Ⅱ組20頭母牛。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，記錄體重和身體狀況評(píng)分，每組放置在大約1.5公頃的草場(chǎng)中。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源 試驗(yàn)動(dòng)物來(lái)自?xún)?nèi)蒙古包頭市達(dá)爾罕茂明安聯(lián)合旗草原路寶龍養(yǎng)殖場(chǎng)，經(jīng)度：110.3789496度、緯度：41.5187473度，海拔：1470 m。

試驗(yàn)牛體況：試驗(yàn)牛來(lái)自寶龍肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)產(chǎn)后80d以上無(wú)繁殖障礙性能的西門(mén)塔爾空懷母牛和西門(mén)塔爾與蒙古牛雜交的西蒙雜交牛。實(shí)驗(yàn)牛數(shù)量：西門(mén)塔爾空懷母牛20，與本地蒙古牛雜交的西蒙雜20頭，年齡為4～7歲。

1.2 試驗(yàn)獸用藥品 孕酮陰道栓(Cue-Mate)，加拿大Bioniche公司生產(chǎn)；戈那瑞林注射液（GnRH）寧波市三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，氨基丁三醇前列腺素F2α(PGF2α)，寧波市三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；促黃體素釋放激素(LHRH-A3)(規(guī)格50μg/支)，寧波市三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。5%酒精、生理鹽水、160萬(wàn)IU青霉素鈉等。天津云牧生物科技有限公司提供。

1.3 凍 精 凍精由包頭市農(nóng)牧科學(xué)技術(shù)研究所提供，品種為西門(mén)塔爾牛。

1.4 試驗(yàn)器材 永新顯微鏡（國(guó)產(chǎn)）、耐爾尼注射器（規(guī)格20mL裝、注射針頭16號(hào)）、蔣氏輸精槍?zhuān)?.25ML）、直檢長(zhǎng)臂手套、無(wú)菌脫脂棉球、博翔來(lái)B超測(cè)孕儀（BXL-V50）等。

2 試驗(yàn)方法

2.1 分 組 Ⅰ組：20頭西蒙塔爾空懷母牛和21頭雜交西門(mén)塔爾空懷母牛；Ⅱ組：21頭雜交西門(mén)塔爾牛。于7月份開(kāi)始試驗(yàn)。

2.2 發(fā)情方案篩選確定 試驗(yàn)開(kāi)始第1日上午8：30～9：30放栓，每頭試驗(yàn)牛肌肉注射戈那瑞林2支（4mL），做好記錄。第11日上午同一時(shí)段實(shí)驗(yàn)牛肌肉注射氯前列烯醇鈉注射液2支（4mL）和戈那瑞林2支（4mL）。第8日上午撤栓，撤栓時(shí)用生理鹽水與青霉素鈉配制液清洗母牛陰道。第10日上午肌肉注射促排3號(hào)4mL。并進(jìn)行人工授精(見(jiàn)表1)。

表1 Cue-Mate法誘發(fā)肉牛排雙卵處理程序

成年母牛1-8-9-10同期方案。

2.3 人工授精 觀(guān)察發(fā)情情況，做好發(fā)情記錄，并在試驗(yàn)的第10日8：00開(kāi)始人工授精，做好授精記錄，輸進(jìn)采用直腸把握法，進(jìn)行子宮頸深部輸精法早晚各一次。

2.4 妊娠檢查 人工授精35d后采用獸用B超儀（博翔來(lái)-BXL-V50）對(duì)試驗(yàn)牛只進(jìn)行直檢，確定妊娠情況并記錄。

3 試驗(yàn)結(jié)果

同期發(fā)情效果觀(guān)察，由表2可知，兩次試驗(yàn)的同期發(fā)情率分別為95%、85.75%，Ⅰ組高于Ⅱ組,但差異不顯著（P＞0.05）；受胎率分別為78.95%、61.11%，Ⅰ組組顯著高于Ⅱ組（P＜0.05），產(chǎn)雙胎率分別為33.33%、27.27%，Ⅰ組高于Ⅱ組，但差異不顯著（P＞0.05），兩組平均產(chǎn)雙胎率為30.77%，Ⅰ組產(chǎn)三胎率為6.67%，Ⅱ組出現(xiàn)流產(chǎn)1頭。

4 小結(jié)與討論

4.1 繁殖效率是影響牛犢和肉牛養(yǎng)殖業(yè)成功的重要因素之一，在繁殖技術(shù)較低的情況下，發(fā)展牛犢或肉牛產(chǎn)業(yè)受到很大的影響。20世紀(jì)50年代，冷凍牛精液被開(kāi)發(fā)出來(lái)，經(jīng)后代測(cè)定的公牛的人工授精被認(rèn)為是有效地促進(jìn)肉牛產(chǎn)業(yè)的重要技術(shù)。20世紀(jì)50～60年代，人工授精對(duì)肉牛的要求是肉牛發(fā)情的觀(guān)察判斷，因此，隨著人工授精技術(shù)的發(fā)展，進(jìn)一步控制發(fā)情和育種管理具有更大的利益和價(jià)值，尤其是對(duì)肉牛產(chǎn)業(yè)尤為重要。人為控制肉牛發(fā)情周期技術(shù)的也應(yīng)用而生，運(yùn)用同期發(fā)情技術(shù)對(duì)肉牛進(jìn)行處理，使其在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情、配種，提高生產(chǎn)效率。保障肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。利用同期發(fā)情技術(shù)程序控制，對(duì)產(chǎn)業(yè)化養(yǎng)殖場(chǎng)來(lái)場(chǎng)非常重要。

4.2 西門(mén)塔爾牛與西蒙雜交牛效果比較 通過(guò)同期發(fā)情技術(shù)處理，西門(mén)塔爾牛的發(fā)情率明顯高于西雜牛，原因可能是因?yàn)殡s交牛發(fā)情體況及繁殖激素處理時(shí)間需要更長(zhǎng)時(shí)間，且西雜?？沙Ｄ臧l(fā)情，產(chǎn)仔后需經(jīng)過(guò)一段時(shí)間恢復(fù)，一般自然繁殖的肉牛在在產(chǎn)后2～3d內(nèi)子宮頸很快收縮，同期發(fā)情的機(jī)理主要為成年母牛的發(fā)情周期為18～24d，平均為21d，對(duì)于青年母牛的發(fā)情周期約為20d，在使用同期發(fā)起技術(shù)效果較好，20世紀(jì)80年代到21世紀(jì)初的研究使人們了解了卵巢卵泡的波動(dòng)，描述了卵泡的補(bǔ)充、選擇、優(yōu)勢(shì)和閉鎖的時(shí)間，這種研究對(duì)有效管理卵泡以達(dá)到成功的人工授精是必不可少的。在本研究結(jié)果中雜交牛受胎率相對(duì)低于西門(mén)塔爾純種牛，可能與雜交牛在年齡和體況上與西門(mén)塔爾牛有差別造成的，同期發(fā)情是根據(jù)卵巢上卵泡的生長(zhǎng)、成熟、排出及排卵后成為紅體、最后形成黃體的周期活動(dòng)來(lái)干擾周期中某個(gè)階段，讓牛群卵巢周期達(dá)到同步，群體卵巢上表現(xiàn)為兩個(gè)階段：這些研究成果發(fā)展了大量具有高效效益的、能夠滿(mǎn)足大多數(shù)牛奶企業(yè)育種管理需要的、具有良好同步性和育種管理方案。第一階段通過(guò)延長(zhǎng)黃體期，推遲卵泡期,為卵泡期；第二階段通過(guò)縮短黃體期，使卵泡期提前,為黃體期，本研究是通過(guò)二者結(jié)合起來(lái)一起使用，要想達(dá)到理想的發(fā)情同步，就要把卵泡期和黃體期的轉(zhuǎn)換有機(jī)結(jié)合起來(lái)，這需要以后進(jìn)一步研究。

表2 試驗(yàn)?zāi)概５耐诎l(fā)情、人工授精和產(chǎn)仔結(jié)果

4.3 母牛雙胎率效果 牛是單胎動(dòng)物，通常母牛卵子生產(chǎn)，受精，移植，懷孕正常，一頭母牛在最佳年齡產(chǎn)下第一頭小牛犢，之后每隔12～13個(gè)月產(chǎn)下一頭小牛犢。產(chǎn)后平均間隔時(shí)間為正常產(chǎn)犢69d，異常產(chǎn)犢71d。為了每年產(chǎn)仔，母牛需要在85～115d完成配種。發(fā)情周期持續(xù)時(shí)間為21d，交配非能育周期平均為37d，非交配周期平均為32d。排除32d或以上的發(fā)情周期，發(fā)情周期持續(xù)時(shí)間為21～22d。試驗(yàn)結(jié)果表明，應(yīng)用成母牛1-8-9-10同期方案，導(dǎo)母牛產(chǎn)雙胎是可行的，平均雙胎率達(dá)到30.77%。另外，母牛群產(chǎn)雙胎可能與母牛的體況、養(yǎng)水平、飼養(yǎng)管理技術(shù)、冷配技術(shù)水平有關(guān)。

4.4 超數(shù)排卵方案的選擇 關(guān)于牛羊超數(shù)排卵的最早報(bào)道來(lái)自美國(guó)的威斯康星州?；旧希傩韵偌に厥窃谇捌谡０l(fā)情之前幾天給予的，目的是誘導(dǎo)多次排卵。大約5d后(或發(fā)情開(kāi)始時(shí))，通常注射人絨毛膜促性腺激素(HCG)來(lái)誘導(dǎo)排卵。雖然有關(guān)于綿羊、馬、牛和豬前垂體制劑的研究報(bào)道，但使用馬絨毛膜促性腺激素(ECG或PMSG)已成為標(biāo)準(zhǔn)方法。李銘等在荷斯坦牛超數(shù)排卵研究中對(duì)CIDR+FSH+PGF2α超數(shù)排卵方法進(jìn)行了改進(jìn)，在促性腺激素誘導(dǎo)的持續(xù)性卵泡出現(xiàn)新卵泡波時(shí)開(kāi)始FSH治療?；蛘?，誘導(dǎo)小的有腔卵泡生長(zhǎng)和超排卵。平均每頭用“CIDR+FSH+PGF2α+LHRH-A3方法比CIDR+FSH+PGF2α的方法的可用胚胎數(shù)要多1.5枚左右”的效果。盧維在改進(jìn)超數(shù)排卵方案使用“CIDR+E2+P4+FSH+PGF2α+LHRHA3法”，試驗(yàn)?zāi)概５耐诎l(fā)情效果非常好。本試驗(yàn)在放置cue-Mate+PGF2α+LHRH-A3同時(shí)，通過(guò)聯(lián)合使用幾種外源激素，對(duì)試驗(yàn)?zāi)概＜∪庾⑸涓昴侨鹆? mg，放栓4mg，撤栓2mg，注射PGF2α，以便誘發(fā)其增大雙排、三排卵的比例，最終獲得較高的雙犢率。該方案操作方便簡(jiǎn)單，便于推廣應(yīng)用。本次試驗(yàn)中沒(méi)有使用E2、P4可能導(dǎo)致但雙胎率與盧維聯(lián)合使用的E2、P4效果無(wú)差異，說(shuō)明使用戈那瑞林也能加快卵巢黃體的成熟溶解，從而誘發(fā)卵巢波的發(fā)生。促排3號(hào)（LHRH-A3）是促黃體素釋放激素的類(lèi)似物，屬多肽類(lèi)激素，能促使動(dòng)物垂體前葉分泌(LH)和FSH，利于改善受精環(huán)境和提高胚胎質(zhì)量。

4.5 同期發(fā)情技術(shù)中營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)超數(shù)排卵和受胎率的效果 母牛營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)超數(shù)排卵與發(fā)情率和受胎率受影響較大。母牛高、低攝入量均可改變體內(nèi)和卵泡液激素水平。相對(duì)于飲食的影響，藥物超數(shù)排卵的效果更大，涉及卵泡液激素濃度和卵母細(xì)胞形態(tài)異常的顯著增加。反芻動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)與生殖之間的關(guān)系是復(fù)雜的，反應(yīng)往往是多變的和不一致的。肉牛低攝入量可以降低排卵率，而高能量和高蛋白質(zhì)的日糧可以提高體質(zhì)差的肉牛的排卵率，但不會(huì)使核仁組織中的染色質(zhì)顆粒脫落。這些結(jié)果表明，高和低攝入量都可以改變體內(nèi)和卵泡液激素的濃度。相對(duì)于飲食的影響，超數(shù)排卵的效果更大，涉及卵泡液激素濃度和卵母細(xì)胞形態(tài)異常的顯著增加。

張立等研究結(jié)果表明，較高的營(yíng)養(yǎng)水平飼喂與藥物處理相協(xié)調(diào)對(duì)提高母牛同時(shí)發(fā)情是有效的，因此提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)水平增加超數(shù)排卵發(fā)情率和受胎率是一種非常重要的手段。內(nèi)蒙古屬高寒草原地區(qū)，冬季寒冷風(fēng)大，特別是陰山北麓，對(duì)肉牛繁殖有一定影響，因此養(yǎng)牛場(chǎng)在進(jìn)行同期發(fā)情技術(shù)前，為飼喂較高營(yíng)養(yǎng)飼草料可以提高其發(fā)情率和受胎率，添加微量元素和維生素，以確保其較好的繁殖機(jī)能。

從本次試驗(yàn)及盧維等的報(bào)道來(lái)看，用FSH或PMSG處理，結(jié)合人工授精技術(shù)是可以誘發(fā)肉牛產(chǎn)雙胎的，排雙卵或產(chǎn)雙胎的程序主要在于如何選擇外源激素并掌握它的用量。本實(shí)驗(yàn)相對(duì)于前者的研究雖然在處理程序上優(yōu)化了，但在用外源激素誘發(fā)肉牛排雙卵時(shí)，多次肌肉注射激素對(duì)母牛本身會(huì)造成了一定的應(yīng)激反應(yīng)，一定程度上也影響了最終的效果，今后在誘發(fā)肉牛超排時(shí)應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)處理程序簡(jiǎn)化或降低處理應(yīng)激等方面的研究。