王運盛,王叢菊,徐 ,范昕淋,趙素芬,蔣 鵬,國欣欣,盧 巖★
(1.北京動物園管理處,北京 100044;2.圈養(yǎng)野生動物技術(shù)北京市重點實驗室,北京 100044;3.歐樂堡動物王國,山東 德州 251104)
疾病防治在野生動物飼養(yǎng)管理工作中占有舉足輕重的作用和意義。然而,在野生動物疾病診斷工作中,病理學技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)階段還較為薄弱。近年來,隨著國內(nèi)圈養(yǎng)野生動物數(shù)量的增加以及野生動物診療工作的深入,野生動物發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的跡象。如何將病理學診斷盡快應(yīng)用于野生動物疾病診斷中,成為了現(xiàn)階段需要關(guān)注的問題。麋鹿屬于國家一級保護動物,世界自然保護聯(lián)盟(IUCN)物種紅色名錄將其瀕危等級定為野外滅絕(EW),原產(chǎn)于中國,是中國特有珍稀瀕危物種。北京動物園獸醫(yī)院于2022年初收到外單位死亡麋鹿樣本,通過組織病理學方法對麋鹿進行病理學診斷,以期為今后麋鹿的病理學診斷提供對應(yīng)思路和基礎(chǔ)資料。
1.1 病料(病例概述) 麋鹿,雌性,2021年5月29日出生于歐樂堡動物王國,臨床表現(xiàn)為食欲差、弓腰;糞便潛血、稀軟;鼻頭干燥。治療過程中曾使用速可生、拜有利、復合維生素B、安痛定、止血敏等未見好轉(zhuǎn),最后死亡。死前極度虛弱、消瘦。
1.2 試驗方法
1.2.1 血樣化驗室診斷 麋鹿發(fā)病后進行血樣采集,采血前1天進行隔離觀察,禁食16h,采血后進行外周血生化檢測。
1.2.2 病理樣本采集 麋鹿死后立即解剖,取材后內(nèi)臟組織迅速投入10%的福爾馬林液,進行病理組織切片前處理。
1.2.3 H.E.染色 石蠟切片分別經(jīng)二甲苯I、II脫蠟5min,之后浸入無水乙醇/二甲苯(1:1)混合液中5min,依次經(jīng)無水乙醇I、無水乙醇II、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度復水,下行至雙蒸水中,蘇木精染色10 min,1%鹽酸酒精分色數(shù)秒,水洗返藍15min,再依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水后,伊紅染色1 min,95%乙醇洗滌3次,再經(jīng)無水乙醇I、II各5min,二甲苯I、II各透明5min,最后用中性樹膠封片。切片放置于37℃溫箱內(nèi)過夜烘干后鏡檢。光學顯微鏡下觀察麋鹿組織病理學變化情況。
2.1 麋鹿血液生化指標檢測結(jié)果 經(jīng)化驗室診斷發(fā)現(xiàn)麋鹿肌酐(432.7)、尿素氮(25.79)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(525)指標顯著高于參考范圍,其余指標基本在參考范圍上下浮動。結(jié)合動物臨床癥狀,麋鹿疑似出現(xiàn)急性腎炎與肝功能不全(見表1)。
表1 麋鹿生化參數(shù)檢測
2.2 麋鹿臨床剖檢病觀察 麋鹿尸重70kg,舌左右側(cè)和舌根有潰瘍灶。心肌塌陷,心外膜可見點狀出血,心肌質(zhì)軟,心包積液約50mL。氣管內(nèi)較為干燥,肺表面可見出血,邊緣氣腫。瘤胃內(nèi)可見食糜,胃底有大面積出血斑。小腸粘膜出血。肝臟腫大,背膜顏色不均,質(zhì)地較脆,脾臟質(zhì)軟,按壓有捻發(fā)感,表面可見出血。腎污黃色,表面有多個潰瘍灶,腎臟腫大,皮髓質(zhì)界限不清(見圖1)。
圖1 麋鹿臨床剖檢觀察
2.3 麋鹿病理變化 鏡下觀察,麋鹿腸道結(jié)構(gòu)完整,腸絨毛上皮輕微出血(圖2A)。脾組織水腫明顯,脾背膜增厚,白髓可見生發(fā)中心明顯;高倍鏡下白髓內(nèi)淋巴細胞腫脹(圖2B)。肺組織結(jié)構(gòu)完整,肺間質(zhì)輕微增寬,肺間質(zhì)充血、出血,可見少量淋巴細胞(圖2C)。腎組織水腫、輕微出血,腎小囊間隙增寬,腎小囊內(nèi)可見蛋白滲出。腎小管內(nèi)可見少量蛋白滲出(圖2D)。心肌輕微出血,心肌細胞結(jié)構(gòu)完整,心肌間可見少量絮狀滲出(圖2E)。肝組織淤血,脂肪變性明顯,高倍鏡下肝細胞腫脹,肝索變窄,肝細胞內(nèi)可見脂滴(圖2F)。
經(jīng)組織病理學診斷,送檢麋鹿患有腸絨毛出血、脾增生、肺水腫、心肌滲出、亞急性腎小球腎炎、脂肪肝。結(jié)合臨床剖檢觀察以及動物背景資料,該麋鹿由于營養(yǎng)不良,引起脂肪肝以及腎小球腎炎的發(fā)生,最后導致死亡。
作為重要的物質(zhì)代謝器官,肝臟對脂類的消化、吸收、分解、合成及運輸過程中起重要作用。一旦發(fā)生肝功能不全,首先會引起糖類代謝異常,導致肝糖原減少,機體代償性的將體內(nèi)脂肪分解,運至肝臟。由于大量脂類物質(zhì)在肝臟含量增高,導致脂肪肝的發(fā)生。病情進一步發(fā)展,將會引發(fā)門靜脈循環(huán)障礙與膽汁淤積。門靜脈循環(huán)障礙導致胃腸道粘膜出現(xiàn)水腫、淤血、甚至出血與潰瘍。從而引起胃腸道功能的改變,表現(xiàn)為食欲不振、營養(yǎng)不良以及消瘦的而膽汁淤積后,膽汁鹽會對心臟傳導系統(tǒng)產(chǎn)生毒性刺激,最終引起心力衰竭,而心力衰竭又會引起肺水腫,進一步加重病情惡化。
圖2 麋鹿病理學觀察
腎小球腎炎是以腎小球的炎癥病理變化為診斷依據(jù)的腎炎。病變通常開始于腎小球,根據(jù)病理變化,腎小球腎炎主要分為三類,即:急性腎小球腎炎、亞急性腎小球腎炎和慢性腎小球腎炎。腎小球腎炎在病理學診斷可以觀察到腎小球腫脹、出血、滲出;腎小囊中可見上皮細胞、白細胞、紅細胞、纖維素等物質(zhì);以及腎間質(zhì)出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)。急性腎小球腎炎與亞急性腎小球腎炎在臨床剖檢中的區(qū)別主要體現(xiàn)在腎外觀上:急性腎小球腎炎表現(xiàn)為腎腫大、充血,俗稱“大紅腎”;亞急性腎小球腎炎表現(xiàn)為腎腫大、色澤蒼白或淡黃色,俗稱“大白腎”;慢性腎小球腎炎則為腎縮小,質(zhì)地變硬,俗稱“皺縮腎”。腎小球腎炎的發(fā)展會引起腎功能不全,若無有效治療,最后會導致尿毒癥的發(fā)生。
作為大型鹿類動物,麋鹿是我國特有的濕地物種,麋鹿屬哺乳綱,偶蹄目,鹿科,麋鹿屬。目前,麋鹿在我國境內(nèi)種群數(shù)量已達到8000余只,國內(nèi)建立的麋鹿保護場所也超過50個。因此,隨著麋鹿種群規(guī)模的不斷擴大,與麋鹿相關(guān)的疾病診治工作壓力也逐年增加。而在麋鹿患病后的診斷工作中,由于物種本身的特殊性以及可參考的資料過少,診治工作更多的需要依靠臨床獸醫(yī)個人經(jīng)驗。同時,缺乏專業(yè)的野生動物病理診斷工作,也嚴重制約了麋鹿診斷技術(shù)進一步完善。在本文中,死亡麋鹿的肝、腎病理變化最為明顯;脂肪肝、慢性腎小球腎炎的發(fā)生導致麋鹿肝、腎功能的不全,由于上述器官病情的發(fā)展,麋鹿出現(xiàn)心力衰竭、心包積液、肺水腫、以及胃腸道出血、營養(yǎng)不良等臨床病理變化。最后導致了麋鹿的死亡。
本研究采用病理學技術(shù),結(jié)合臨床病理變化及系統(tǒng)病理學觀察,對死亡麋鹿進行病理學診斷,分析得出死亡麋鹿患有脂肪肝、肺水腫。此病例的完成,為今后野生動物相關(guān)疾病的診斷以及治療工作提供了較為可靠的病理經(jīng)驗和方案。