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    藍(lán)莓花色苷抑菌活性及其在復(fù)合果蔬肉制品中的應(yīng)用

    2022-10-17 11:10:42路高勇陳智玲邊道剛馬艷弘
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2022年18期
    關(guān)鍵詞:肉制品花色冷藏

    路高勇,馬 劍,陳智玲,邊道剛,馬艷弘

    (1. 豐縣綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心,江蘇 徐州 221700;2. 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,江蘇 南京 210014;3. 徐州雙信食品有限公司,江蘇 徐州 221700)

    即食果蔬肉制品是在傳統(tǒng)即食肉制品基礎(chǔ)上,加入水果、蔬菜、大豆蛋白和調(diào)味料等輔料煮制而成的熟食復(fù)合肉制品。因其營養(yǎng)全面、風(fēng)味獨(dú)特、方便快捷等優(yōu)點(diǎn)備受市場(chǎng)青睞[1]。隨著人們對(duì)食品安全與營養(yǎng)健康認(rèn)知的提高,復(fù)合果蔬肉制品的綠色制造及其品質(zhì)提升技術(shù)已經(jīng)成為肉制品加工領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。但是,復(fù)合果蔬肉制品的貨架期短,在生產(chǎn)和銷售過程中極易被微生物污染而成為人類食源性疾病的載體[2-3]。因此,復(fù)合果蔬肉制品的貯藏保鮮技術(shù)是復(fù)合肉制品工業(yè)化生產(chǎn)中亟待解決的技術(shù)問題。

    藍(lán)莓是21 世紀(jì)功能性保健漿果,被聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO) 列為人類五大健康食品之一[4],具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和開發(fā)前景。藍(lán)莓含有多種活性物質(zhì),如花色苷、黃酮醇、酚酸等[5],具有免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)視力[6]、抗炎抗腫瘤、抗氧化[7]、抗衰老[8]、保護(hù)心血管[9]等多種藥理保健功能,在功能食品、生物醫(yī)藥、醫(yī)療美容等領(lǐng)域均具有良好的發(fā)展?jié)摿ΑF渲?,藍(lán)莓花色苷作為一種天然色素,被認(rèn)為是最有效的天然自由基清除劑[10]。有研究表明,藍(lán)莓花色苷對(duì)枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌、大腸桿菌等致病菌具有一定的抑制作用[11]。但迄今為止,藍(lán)莓花色苷在肉制品防腐保鮮方面的研究報(bào)道較為少見。因此,以藍(lán)莓渣為原料提取花色苷,通過研究其抑菌作用及其對(duì)復(fù)合果蔬肉制品的保鮮效果,旨在為天然植物保鮮劑的開發(fā)和藍(lán)莓渣的高值化利用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    藍(lán)莓渣,句容萬山紅遍生物科技有限公司提供;供試菌株:大腸埃希氏菌、單增李斯特菌、沙門氏菌,江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所提供;鮮豬肉、山藥、蘋果及調(diào)味料,購自蘇果超市;雞蛋皮、紅薯泥、蘋果汁、大豆蛋白,徐州雙信食品有限公司提供;BCA 蛋白測(cè)試盒,丙二醛(MDA) 試劑盒,南京建成生物工程研究所提供;蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、瓊脂,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供;其他試劑均為國產(chǎn)分析純級(jí)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    HPP600 MPa 型超高壓食品處理裝置,包頭科發(fā)高壓科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品;RE-5220 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品;HJ-6A 型多頭磁力攪拌器,常州國華儀器有限公司產(chǎn)品;ZD-F12 型真空冷凍干燥機(jī),南京載智自動(dòng)化設(shè)備有限公司產(chǎn)品;LRH-150 型生化培養(yǎng)箱,上海一恒科技有限公司產(chǎn)品;HH-2 型恒溫水浴鍋,金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品;Epoch 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀,BioTek 公司產(chǎn)品;D-B5 型紫外可見分光光度計(jì),上海奧析科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品;SW-CJ-1D 型單人凈化工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品;3K15 臺(tái)式冷凍離心機(jī),德國Sigma 公司產(chǎn)品。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 藍(lán)莓花色苷的制備

    參照李鵬等人[12]研究方法稍做修改,取藍(lán)莓渣干粉按1∶20(g∶mL) 的料液比加入60%乙醇溶液(V/V,pH 值3.0),轉(zhuǎn)入聚乙烯袋,封口后置于超高壓設(shè)備中于400 MPa 壓力下保壓9 min,然后離心,上清液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,再用AB-8 型大孔樹脂純化,50%乙醇溶液洗脫2 次,合并洗脫液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,真空冷凍干燥至恒質(zhì)量得藍(lán)莓花色苷,于-20 ℃下冷凍保藏備用。

    1.3.2 藍(lán)莓花色苷體外抑菌活性

    (1) 菌種活化及菌懸液的制備。取出保存的大腸桿菌、沙門氏菌、單增李斯特菌菌懸液于常溫下解凍,取100 μL 大腸桿菌和沙門氏菌菌懸液加入到100 mL LB 液體培養(yǎng)基中,100 μL 單增李斯特菌菌懸液加入到100 mL BHI 液體培養(yǎng)基中,均在溫度37 ℃,轉(zhuǎn)速 120 r/min 搖床培養(yǎng) 18~24 h,活化 2 次后置于4 ℃冰箱中待用。在超凈臺(tái)中,用無菌生理鹽水稀釋活化好的菌種,制備濃度為106~108CFU/mL的菌懸液,備用。

    (2) 抑菌活性的測(cè)定。參照李曉嬌等人[13]研究方法稍做修改。分別配置質(zhì)量濃度為0,2.5,5.0,10.0 mg/mL 的藍(lán)莓渣花色苷溶液。將活化的供試菌種100 μL 接種到100 mL 固體培養(yǎng)基中,搖勻,倒平板,待完全凝固后,用滅過菌的打孔器打出4 個(gè)直徑約為10 mm 的孔,吸取200 μL 花色苷溶液加入到孔中,無菌生理鹽水作為空白對(duì)照,放置于37 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。觀察是否出現(xiàn)抑菌圈,用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的直徑大小,并作記錄。

    (3) 最小抑菌(MIC) 濃度的測(cè)定。采用二倍稀釋法[14],分別配制30 mL 終質(zhì)量濃度為10.000,5.000,2.500,1.250,0.625,0.313 mg/mL 藍(lán)莓渣花色苷培養(yǎng)基,無菌水作為空白對(duì)照。將培養(yǎng)基倒入平皿中,待冷卻凝固后,將50 μL 菌懸液加入平皿中并涂布均勻。將供試菌置于培養(yǎng)箱中37℃下培養(yǎng)24 h,觀察有無可見菌落并計(jì)數(shù)。

    1.3.3 果蔬重組肉制品的制備

    (1) 工藝流程。原料肉混合→絞碎→混合拌料(加紅薯泥、蘋果汁、香菇丁、大豆蛋白、香辛料)→腌制→成型→蒸煮→冷卻→藍(lán)莓花色苷溶液浸漬→真空包裝→冷藏。

    (2) 操作要點(diǎn)。①原料肉去除筋膜,將2 份前腿肉,1 份五花肉混合絞碎,再加0.5 份紅薯泥和0.6 份蘋果汁,0.1 份香菇丁,0.05 份大豆蛋白、香辛料充分混勻,腌制40 min,裝入模具壓制成型,蒸煮熟化20 min,冷卻后放入藍(lán)莓花色苷溶液中浸漬1 min(溶液中花色苷添加量占復(fù)合肉制品的質(zhì)量濃度分別為0.5,1.0,2.0,4.0 mg/g),瀝去水分,真空包裝,于4 ℃下冷藏備用。②添加的香辛料(占復(fù)合肉制品的質(zhì)量百分比):食鹽1.5%,桂皮0.1%,八角0.1%,花椒0.15%,生姜0.35%,大蔥0.5%,醬油0.2%,白酒1%。

    1.3.4 感官評(píng)價(jià)

    將制備好的復(fù)合肉制品切片,選擇10 名受過專業(yè)訓(xùn)練成員組成的感官評(píng)價(jià)小組,在標(biāo)準(zhǔn)品嘗室進(jìn)行感官評(píng)價(jià)。

    產(chǎn)品感官質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

    表1 產(chǎn)品感官質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

    1.3.5 花色苷對(duì)復(fù)合果蔬肉制品的防腐保鮮效果分析

    以未用花色苷處理的樣品作對(duì)照,每隔2 d 取樣測(cè)定復(fù)合果蔬肉制品的TVB-N(揮發(fā)性氨基氮)、脂質(zhì)氧化(丙二醛) 值、細(xì)菌總數(shù)等指標(biāo)。

    菌落總數(shù)的測(cè)定:根據(jù)GB 4789.2—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》[15],采用傾注平皿計(jì)數(shù)法測(cè)定樣品菌落總數(shù)變化。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):熟肉制品中微生物安全限量標(biāo)準(zhǔn)為5 lgCFU/g[16]。

    揮發(fā)性鹽基氮(TVB-N) 值的測(cè)定:根據(jù)GB 5009.208—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定》[17]。即取5 g 均質(zhì)樣品,加入25.0 mL三氯乙酸溶液振搖1 min,靜置15 min 待蛋白沉淀后過濾,采用凱氏定氮儀進(jìn)行蒸餾,5 mL 硼酸加2 滴指示劑用于接收蒸餾液,最后以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(0.010 mol/L) 滴定至終點(diǎn)。

    脂質(zhì)氧化(丙二醛) 值的測(cè)定:采用硫代巴比妥酸法測(cè)定脂質(zhì)氧化程度[18]。結(jié)果以丙二醛(MDA)表示。準(zhǔn)確稱取樣品2.0 g,加入8 mL 生理鹽水,冰水浴條件下超聲破碎2 min 制成樣品懸液,檢測(cè)MDA 含量。具體按照細(xì)胞丙二醛(MDA) 測(cè)試試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    所有試驗(yàn)均重復(fù)3 次,結(jié)果取平均值。采用Origin 8.5.0 進(jìn)行繪圖和數(shù)據(jù)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 藍(lán)莓花色苷的抑菌能力分析

    2.1.1 藍(lán)莓渣花色苷的抑菌能力

    藍(lán)莓渣花色苷的抑菌效果見圖1,藍(lán)莓渣花色苷的抑菌能力見表2。

    圖1 藍(lán)莓渣花色苷的抑菌效果

    由圖1 和表2 可知,與對(duì)照組相比,加入藍(lán)莓渣花色苷的小孔均出現(xiàn)明顯的抑菌圈,表明藍(lán)莓渣花色苷對(duì)3 種供試菌均具有抑菌效果[11],且抑菌圈直徑隨著藍(lán)莓渣花色苷質(zhì)量濃度的增加而增大。藍(lán)莓渣花色苷對(duì)3 種致病菌的抑菌作用強(qiáng)弱的依次為沙門氏菌>大腸桿菌>單增李斯特菌。當(dāng)花色苷質(zhì)量濃度為10 mg/mL 時(shí),沙門氏菌出現(xiàn)的抑菌圈最大,直徑達(dá)到20.07±1.10 mm,而大腸桿菌和單增李斯特菌的抑菌圈直徑分別為19.93±1.90,17.47±1.50 mm。說明,藍(lán)莓花色苷中的錦葵色素和矢車菊素對(duì)3 種食品中常見的致病菌有著良好的抑制作用,通過改變菌體的細(xì)胞膜通透性達(dá)到抑菌的效果。

    表2 藍(lán)莓渣花色苷的抑菌能力

    2.1.2 最小抑菌質(zhì)量濃度(MIC) 的測(cè)定

    藍(lán)莓渣花色苷的最小抑菌質(zhì)量濃度見表3。

    表3 藍(lán)莓渣花色苷的最小抑菌質(zhì)量濃度

    由表3 可知,與對(duì)照組相比,藍(lán)莓渣花色苷對(duì)3 種致病菌的生長均具有一定的抑制作用,且抑制能力隨著花色苷質(zhì)量濃度的增大而增大。對(duì)于不同菌種,花色苷的抑制效果不同,對(duì)大腸桿菌、單增李斯特菌和沙門氏菌的最小抑菌質(zhì)量濃度分別為5,10,5 mg/mL,表明藍(lán)莓花色苷對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌有較強(qiáng)的抑菌作用,而對(duì)單增李斯特菌的抑制效果相對(duì)較弱。藍(lán)莓花色苷對(duì)于食品中常見的有害菌都存在一定的一致作用,對(duì)于藍(lán)莓花色苷在復(fù)合果蔬肉質(zhì)品種的應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ),具有廣闊的開發(fā)前景。

    2.2 藍(lán)莓花色苷對(duì)復(fù)合果蔬肉制品感官評(píng)分的影響

    復(fù)合果蔬肉制品感官評(píng)定結(jié)果見圖2。

    圖2 復(fù)合果蔬肉制品感官評(píng)定結(jié)果

    由圖2 可知,除0.5 mg/g 花色苷處理組外,其他花色苷處理組的感官評(píng)分均顯著高于對(duì)照組(p<0.05),其中高含量2.0 mg/g 花色苷處理組的感官評(píng)分最高(93.3±3.67),但其與4.0 mg/g 花色苷處理組 (91.42±2.87) 無顯著性差異 (p>0.05),高含量的花色苷處理后,復(fù)合果蔬肉制品的色澤變得更加具有特點(diǎn),口感風(fēng)味更加突出,營養(yǎng)品質(zhì)保存較好,導(dǎo)致其感官評(píng)分較高;1.0 mg/g 處理組感官評(píng)價(jià)略低,可能是此時(shí)花色苷含量對(duì)樣品的口感影響較小,主要為色澤的改變,導(dǎo)致其感官得分的上升,表明一定含量的藍(lán)莓渣花色苷能有效提高復(fù)合果蔬肉制品的色澤和風(fēng)味。

    2.3 藍(lán)莓花色苷對(duì)復(fù)合果蔬肉制品脂質(zhì)抗氧化程度的影響

    丙二醛是評(píng)判肉類中脂肪氧化的良好指標(biāo),由動(dòng)物脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)化而生成[18]。

    復(fù)合果蔬肉制品冷藏過程中的MDA 值見圖3。

    圖3 復(fù)合果蔬肉制品冷藏過程中的MDA 值

    由圖3 可知,各組復(fù)合肉制品的MDA 含量隨貯藏期的延長而迅速增加,說明樣品中均發(fā)生了脂質(zhì)氧化反應(yīng)。復(fù)合肉制品的各組冷藏前4 d,MDA 上升速度緩慢,4 d 之后,各組MDA 含量快速升高。且在相同冷藏時(shí)間內(nèi),花色苷濃度越大,復(fù)合肉制品中MDA 含量越低,冷藏到第10 天時(shí),對(duì)照組MDA 含量 (6.57 nmol/mg pro)t 上升至初始值 (3.12 nmol/mg pro)t 的2 倍,說明脂質(zhì)氧化是肉制品貯藏過程中最易發(fā)生的反應(yīng),也是復(fù)合果蔬肉制品品質(zhì)下降的重要原因;而4.0 mg/g 花色苷處理組MDA 含量為4.87 nmol/mg prot,比對(duì)照組降低了25.88%,說明添加外源花色苷可以很好地抑制復(fù)合果蔬肉制品中脂質(zhì)反應(yīng)的發(fā)生,這是由于花色苷中具有很強(qiáng)的羥基清除能力和抗氧化能力。因此,藍(lán)莓花色苷在防止復(fù)合果蔬肉制品脂質(zhì)氧化方面作用突出,表現(xiàn)出極強(qiáng)的保鮮能力。

    2.4 藍(lán)莓花色苷對(duì)復(fù)合肉制品TVB-N 的影響

    揮發(fā)性鹽基氮是肉制品蛋白質(zhì)在微生物或內(nèi)源蛋白酶共同作用下生成的含氮降解產(chǎn)物,通常被作為評(píng)判肉制品新鮮程度的重要指標(biāo)[19]。

    復(fù)合果蔬肉制品冷藏過程中TVB-N 值見圖4。

    圖4 復(fù)合果蔬肉制品冷藏過程中TVB-N 值

    由圖4 可知,2 d 之內(nèi),各組揮發(fā)性鹽基氮含量相對(duì)平緩,2 d 之后,隨著貯藏期的延長,各組復(fù)合果蔬肉制品的揮發(fā)性鹽基氮含量均呈上升趨勢(shì),其中空白組的上升速度最快,說明其新鮮度最差[19]。同一貯藏期內(nèi),花色苷濃度越高,其復(fù)合果蔬肉質(zhì)品的TVB-N 的含量越低,表明花色苷能抑制樣品中微生物的產(chǎn)生,從而降低復(fù)合果蔬肉質(zhì)品的TVB-N 值。在第6 天時(shí),對(duì)照組的TVB-N 值達(dá)21.9 mg/100 g,已超過了國家規(guī)定的變質(zhì)肉標(biāo)準(zhǔn)(20 mg/100 g)。而4 mg/g 處理組在貯藏的第10 天時(shí)其揮發(fā)性鹽基氮值為17.12 mg/100 g,比對(duì)照組降低了39.58%,并低于國家標(biāo)準(zhǔn),表明用4 mg/g 處理后的復(fù)合果蔬肉制品保留新鮮程度較長,并且具有食用價(jià)值。由此可知,添加藍(lán)莓花色苷可有效延緩復(fù)合果蔬肉制品的腐敗程度,降低TVB-N 值的含量,從而延長保藏時(shí)間,達(dá)到保鮮目的。

    2.5 藍(lán)莓花色苷對(duì)貯藏期復(fù)合肉制品菌落總數(shù)的影響

    微生物是導(dǎo)致肉制品腐敗的重要因素,降低微生物含量是延長肉制品貯藏期的重要技術(shù)手段。

    復(fù)合肉制品冷藏過程中菌落總數(shù)的變化見表4。

    表4 復(fù)合肉制品冷藏過程中菌落總數(shù)的變化

    由表4 可知,隨著冷藏時(shí)間的延長,各組復(fù)合肉制品中菌落總數(shù)都有所增加。同一時(shí)間內(nèi),花色苷處理組菌落總數(shù)低于對(duì)照組,高含量花色苷處理組菌落總數(shù)少于低含量花色苷處理組。貯藏到第8 天時(shí),對(duì)照組與0.5 mg/g 處理組的菌落總數(shù)均超過國家標(biāo)準(zhǔn)最低要求,而其他花色苷處理組的菌落總數(shù)均低于國家標(biāo)準(zhǔn)最低要求。其中4.0 mg/g 花色苷處理組在貯藏10 d 時(shí)仍具有食用價(jià)值,其菌落總數(shù)為4.732±0.059 lg(CFU/g),顯著低于其他處理組(p<0.05)。其中,比對(duì)照組的菌落總數(shù)降低了31.33%,表明較高含量的藍(lán)莓渣花色苷能抑制細(xì)菌的增殖,對(duì)復(fù)合肉制品具有一定的防腐保鮮作用。

    3 結(jié)論

    藍(lán)莓花色苷色澤誘人、食用安全性高,且具有較高的抗氧化活性和抑菌能力,在食品、藥品和化妝品等領(lǐng)域具有較高的應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)開發(fā)潛力。研究考查了藍(lán)莓花色苷對(duì)大腸桿菌、單增李斯特菌和沙門氏菌的抑菌效果。結(jié)果表明,藍(lán)莓花色苷對(duì)3 種菌均有抑菌作用,強(qiáng)弱順序?yàn)樯抽T氏菌>大腸桿菌>單增李斯特菌,當(dāng)花色苷質(zhì)量濃度為10 mg/mL 時(shí),直徑分別達(dá)到 20.07±1.10,19.93±1.90,17.47±1.50 mm,最小抑菌質(zhì)量濃度(MIC) 分別為5,5,10 mg/mL。進(jìn)一步將藍(lán)莓花色苷應(yīng)用于果蔬復(fù)合肉制品的保鮮,探討其對(duì)產(chǎn)品冷藏過程中品質(zhì)變化的影響。結(jié)果表明,2.0~4.0 mg/g 花色苷處理的復(fù)合果蔬肉制品色澤紅潤、香氣濃郁、口感細(xì)膩有嚼勁,感官評(píng)分較高。藍(lán)莓花色苷能有效降低復(fù)合肉制品的脂肪和蛋白質(zhì)氧化程度,抑制細(xì)菌生長。當(dāng)貯藏10 d 時(shí),與對(duì)照組相比,4.0 mg/g 花色苷處理組的MDA 含量 (4.87 nmol/mg pro)t 降低了25.88%,揮發(fā)性鹽基氮值降低了39.58%,菌落總數(shù)降低了31.33%,仍具有食用價(jià)值。說明藍(lán)莓花色苷不僅能有效改善復(fù)合果蔬肉制品的色澤和風(fēng)味,還能顯著抑制細(xì)菌的增殖并有效延緩復(fù)合果蔬肉制品的腐敗程度,從而延長保藏時(shí)間,且其防腐保鮮效果隨著花色苷濃度的增加而提升。

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