基于神經(jīng)外科培訓(xùn)使用的一種腦組織標(biāo)本固定方法初探

樊文科，朱克明，李文生

復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院解剖與組織胚胎學(xué)系，臨床解剖中心，上海 200032

隨著臨床醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)教育的發(fā)展，臨床應(yīng)用解剖學(xué)應(yīng)運(yùn)而生，并顯示出強(qiáng)大的生命力，它主要面向臨床研究生和臨床醫(yī)學(xué)繼續(xù)教育，在扎實(shí)掌握解剖結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，運(yùn)用所學(xué)解剖知識(shí)來(lái)分析和解決臨床問題，提高和培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生的創(chuàng)新精神，同時(shí)也是適應(yīng)當(dāng)代“轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)”研究熱潮的一種具體實(shí)踐[1]。在“國(guó)家醫(yī)療，健康中國(guó)”衛(wèi)生戰(zhàn)略背景下，我校解剖與組織胚胎學(xué)系以臨床解剖中心為平臺(tái)，以附屬中山醫(yī)院、華山醫(yī)院為依托，常年舉辦各類臨床解剖高級(jí)學(xué)習(xí)班。根據(jù)不同需求，對(duì)解剖標(biāo)本的質(zhì)量要求各有差異，傳統(tǒng)的甲醛灌注浸泡尸體標(biāo)本固定技術(shù)簡(jiǎn)單可靠，仍在實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用，但標(biāo)本質(zhì)地及形態(tài)由于蛋白質(zhì)凝固，脫水而發(fā)生明顯皺縮[2]。而采用冷藏技術(shù)保存的標(biāo)本由于反復(fù)冷凍及復(fù)溫導(dǎo)致標(biāo)本變形明顯，且標(biāo)本在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)生緩慢變質(zhì)[3]。基于臨床神經(jīng)外科培訓(xùn)對(duì)腦組織固定有較高的要求，我們對(duì)新鮮腦組織標(biāo)本保存處理做了嘗試性改進(jìn)，取得較為滿意的效果，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 選用新鮮頭部無(wú)外傷尸體標(biāo)本16例，標(biāo)本由上海紅十字會(huì)復(fù)旦大學(xué)遺體捐獻(xiàn)接收站提供。

1.1.2 器材 點(diǎn)動(dòng)式壓力泵（河南傳碩信息技術(shù)有限公司），手工鋼鋸，手術(shù)刀，止血鉗，解剖剪，縫合線，0.5 cm 一頭尖玻璃管，0.4 cm 橡膠管。

1.1.3 試劑及其溶液配比 按每個(gè)標(biāo)本2%福爾馬林1000 mL，30%甘油50 mL 作為固定液A 液。在混合固定液A 液基礎(chǔ)上加入2% 硝酸鉀溶液50 mL，麝香草酚10 g，30% 乙醇2500 mL 作為固定液B 液。

1.2 研究方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 用自來(lái)水將材料沖洗干凈，將大體標(biāo)本面朝上水平放置在解剖臺(tái)上，于第5 頸椎（C5）處用U 形枕木墊高。

1.2.2 取材和灌注 在C5上緣水平切取尸體頭頸部標(biāo)本。橫行切開皮膚，切口斜向下前方，向兩側(cè)水平延伸達(dá)脊柱，離斷頸部肌群，橫斷椎骨，避開甲狀腺下極以避免灌注時(shí)自甲狀腺斷端流失灌注液，注意保持切口平整，處理血管時(shí)向外牽拉，盡可能保留較長(zhǎng)的血管。表淺軟組織離斷后，再用鋼鋸鋸至頭頸部與軀干完全分離[4]。自來(lái)水沖洗干凈斷面，將頭部標(biāo)本倒置，斷面朝上，修潔斷面，尋找頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)靜脈，將連接壓力泵端的0.4 cm 橡膠管套進(jìn)玻璃管一端，結(jié)扎。另一端插入頸總動(dòng)脈，結(jié)扎。先用0.9%生理鹽水緩慢沖洗動(dòng)靜脈，確保動(dòng)靜脈暢通。用空氣增壓法排凈血管殘留液體。先以制備好的2%福爾馬林A 液用點(diǎn)動(dòng)式壓力泵每個(gè)標(biāo)本連續(xù)點(diǎn)動(dòng)灌注1000 mL，后用保鮮袋結(jié)扎放置-14 ℃冰箱保存。15 d 后取出，流水解凍0.5 d 后重復(fù)上述方法灌注固定液B 液。灌注結(jié)束，將標(biāo)本置于剩余固定液B 液中浸泡2 d 后即可取出使用，并達(dá)到理想狀態(tài)，如圖1A。未用完標(biāo)本繼續(xù)于保存液中保存，無(wú)須反復(fù)冰凍、解凍。經(jīng)過15 d 解剖操作，觀察標(biāo)本形態(tài)，結(jié)構(gòu)，腦實(shí)質(zhì)等無(wú)明顯改變，使用良好，如圖1B。

圖1 改良標(biāo)本固定方法處理后的腦標(biāo)本A：內(nèi)鏡下斜坡區(qū)解剖 1.垂體 2.腦橋 3.展神經(jīng) 4.基底動(dòng)脈 5.小腦下前動(dòng)脈 6.椎動(dòng)脈 B：內(nèi)鏡下鞍底解剖1.直回2.視神經(jīng)3.垂體Fig.1 Brain specimen treated by modified fixation methodA: Endoscopic anatomy of clivus region; 1, hypophysis; 2, pons; 3, abducent nerve; 4, basilar artery; 5,Anterior inferior cerebellar artery; 6, vertebral artery B: Endoscopic anatomy of sellar bottom; 1, gyrus rectus;2, optic nerve; 3,hypophysis

2 結(jié)果

通過改良標(biāo)本灌注固定方法對(duì)新鮮尸頭標(biāo)本進(jìn)行處理，標(biāo)本對(duì)眼、呼吸道基本無(wú)刺激，腦實(shí)質(zhì)基本無(wú)自溶，腦部動(dòng)靜脈無(wú)明顯變硬，顏色紅潤(rùn)，容易區(qū)分，腦各部形態(tài)接近新鮮標(biāo)本，保持一定的彈性和韌性（表1）?；緷M足臨床神經(jīng)外科學(xué)習(xí)培訓(xùn)使用，取得學(xué)習(xí)培訓(xùn)單位的良好評(píng)價(jià)。

表1 改良標(biāo)本固定液和傳統(tǒng)用福爾馬林對(duì)標(biāo)本固定效果的比較Tab.1 Comparison of specimen results between modified fixation liquid and formalin fixation

3 討論

3.1 標(biāo)本選擇

應(yīng)選用新鮮、病歷資料顯示無(wú)外傷及重大腦部疾病的標(biāo)本。新鮮程度決定腦實(shí)質(zhì)的自溶狀態(tài)，而外傷及腦部重大疾病決定灌注液能否充分準(zhǔn)確到達(dá)灌注目標(biāo)部位，最終關(guān)系灌注保存和使用效果。

3.2 灌注體會(huì)

動(dòng)靜脈內(nèi)可能有血凝塊影響正常灌注，為此灌注前需要用生理鹽水進(jìn)行沖洗，確保動(dòng)靜脈暢通。為確保固定液到達(dá)顱腔各血管，而又不致血管爆裂，采用點(diǎn)動(dòng)法灌注。

3.3 應(yīng)用特點(diǎn)

目前常用防腐固定劑有單一型和混合型。改良固定保存液中加入2%福爾馬林能夠起到對(duì)標(biāo)本加強(qiáng)防腐固定作用，與傳統(tǒng)5%～10%固定保存液相比能夠最大程度減小標(biāo)本組織的收縮，同時(shí)減少刺激性有害氣體對(duì)人體的傷害。在混合防腐固定劑中，甘油是一種良好的選用藥物。利用它的防腐性、吸濕性和對(duì)某些無(wú)機(jī)鹽類藥物的特殊溶解力，所配成的溶液比較穩(wěn)定[5]。硝酸鉀常作為發(fā)色劑，護(hù)色劑，抗微生物防腐劑使用。麝香草酚對(duì)細(xì)菌、酵母和霉菌均有較強(qiáng)的抑制作用，是一種廣譜抑菌劑[6]，不僅增強(qiáng)防腐抗霉力和對(duì)標(biāo)本護(hù)色作用，而且配方中加入一定比例的酒精，麝香草酚可以減少甲醛的強(qiáng)烈刺激氣味。

以往用于神經(jīng)外科培訓(xùn)的標(biāo)本或經(jīng)過多次冷藏解凍，或單純經(jīng)甲醛灌注。實(shí)際應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)，均出現(xiàn)不同程度的組織脫水、自溶；傳統(tǒng)甲醛灌注，影響到對(duì)腦實(shí)質(zhì)、腦部動(dòng)靜脈、腦部小結(jié)構(gòu)的觀察、操作，很難達(dá)到接近臨床的體驗(yàn)。此法采用冰凍固定與濕法保存相結(jié)合，使上述問題得到一定解決，具明顯優(yōu)勢(shì)。