基于神經外科培訓使用的一種腦組織標本固定方法初探

樊文科，朱克明，李文生

復旦大學基礎醫(yī)學院解剖與組織胚胎學系，臨床解剖中心，上海 200032

隨著臨床醫(yī)學和醫(yī)學教育的發(fā)展，臨床應用解剖學應運而生，并顯示出強大的生命力，它主要面向臨床研究生和臨床醫(yī)學繼續(xù)教育，在扎實掌握解剖結構的基礎上，運用所學解剖知識來分析和解決臨床問題，提高和培養(yǎng)醫(yī)學生的創(chuàng)新精神，同時也是適應當代“轉化醫(yī)學”研究熱潮的一種具體實踐[1]。在“國家醫(yī)療，健康中國”衛(wèi)生戰(zhàn)略背景下，我校解剖與組織胚胎學系以臨床解剖中心為平臺，以附屬中山醫(yī)院、華山醫(yī)院為依托，常年舉辦各類臨床解剖高級學習班。根據不同需求，對解剖標本的質量要求各有差異，傳統(tǒng)的甲醛灌注浸泡尸體標本固定技術簡單可靠，仍在實驗室中廣泛應用，但標本質地及形態(tài)由于蛋白質凝固，脫水而發(fā)生明顯皺縮[2]。而采用冷藏技術保存的標本由于反復冷凍及復溫導致標本變形明顯，且標本在實驗過程中發(fā)生緩慢變質[3]?；谂R床神經外科培訓對腦組織固定有較高的要求，我們對新鮮腦組織標本保存處理做了嘗試性改進，取得較為滿意的效果，現報道如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標本 選用新鮮頭部無外傷尸體標本16例，標本由上海紅十字會復旦大學遺體捐獻接收站提供。

1.1.2 器材 點動式壓力泵（河南傳碩信息技術有限公司），手工鋼鋸，手術刀，止血鉗，解剖剪，縫合線，0.5 cm 一頭尖玻璃管，0.4 cm 橡膠管。

1.1.3 試劑及其溶液配比 按每個標本2%福爾馬林1000 mL，30%甘油50 mL 作為固定液A 液。在混合固定液A 液基礎上加入2% 硝酸鉀溶液50 mL，麝香草酚10 g，30% 乙醇2500 mL 作為固定液B 液。

1.2 研究方法

1.2.1 實驗前準備 用自來水將材料沖洗干凈，將大體標本面朝上水平放置在解剖臺上，于第5 頸椎（C5）處用U 形枕木墊高。

1.2.2 取材和灌注 在C5上緣水平切取尸體頭頸部標本。橫行切開皮膚，切口斜向下前方，向兩側水平延伸達脊柱，離斷頸部肌群，橫斷椎骨，避開甲狀腺下極以避免灌注時自甲狀腺斷端流失灌注液，注意保持切口平整，處理血管時向外牽拉，盡可能保留較長的血管。表淺軟組織離斷后，再用鋼鋸鋸至頭頸部與軀干完全分離[4]。自來水沖洗干凈斷面，將頭部標本倒置，斷面朝上，修潔斷面，尋找頸總動脈和頸內靜脈，將連接壓力泵端的0.4 cm 橡膠管套進玻璃管一端，結扎。另一端插入頸總動脈，結扎。先用0.9%生理鹽水緩慢沖洗動靜脈，確保動靜脈暢通。用空氣增壓法排凈血管殘留液體。先以制備好的2%福爾馬林A 液用點動式壓力泵每個標本連續(xù)點動灌注1000 mL，后用保鮮袋結扎放置-14 ℃冰箱保存。15 d 后取出，流水解凍0.5 d 后重復上述方法灌注固定液B 液。灌注結束，將標本置于剩余固定液B 液中浸泡2 d 后即可取出使用，并達到理想狀態(tài)，如圖1A。未用完標本繼續(xù)于保存液中保存，無須反復冰凍、解凍。經過15 d 解剖操作，觀察標本形態(tài)，結構，腦實質等無明顯改變，使用良好，如圖1B。

圖1 改良標本固定方法處理后的腦標本A：內鏡下斜坡區(qū)解剖 1.垂體 2.腦橋 3.展神經 4.基底動脈 5.小腦下前動脈 6.椎動脈 B：內鏡下鞍底解剖1.直回2.視神經3.垂體Fig.1 Brain specimen treated by modified fixation methodA: Endoscopic anatomy of clivus region; 1, hypophysis; 2, pons; 3, abducent nerve; 4, basilar artery; 5,Anterior inferior cerebellar artery; 6, vertebral artery B: Endoscopic anatomy of sellar bottom; 1, gyrus rectus;2, optic nerve; 3,hypophysis

2 結果

通過改良標本灌注固定方法對新鮮尸頭標本進行處理，標本對眼、呼吸道基本無刺激，腦實質基本無自溶，腦部動靜脈無明顯變硬，顏色紅潤，容易區(qū)分，腦各部形態(tài)接近新鮮標本，保持一定的彈性和韌性（表1）?；緷M足臨床神經外科學習培訓使用，取得學習培訓單位的良好評價。

表1 改良標本固定液和傳統(tǒng)用福爾馬林對標本固定效果的比較Tab.1 Comparison of specimen results between modified fixation liquid and formalin fixation

3 討論

3.1 標本選擇

應選用新鮮、病歷資料顯示無外傷及重大腦部疾病的標本。新鮮程度決定腦實質的自溶狀態(tài)，而外傷及腦部重大疾病決定灌注液能否充分準確到達灌注目標部位，最終關系灌注保存和使用效果。

3.2 灌注體會

動靜脈內可能有血凝塊影響正常灌注，為此灌注前需要用生理鹽水進行沖洗，確保動靜脈暢通。為確保固定液到達顱腔各血管，而又不致血管爆裂，采用點動法灌注。

3.3 應用特點

目前常用防腐固定劑有單一型和混合型。改良固定保存液中加入2%福爾馬林能夠起到對標本加強防腐固定作用，與傳統(tǒng)5%～10%固定保存液相比能夠最大程度減小標本組織的收縮，同時減少刺激性有害氣體對人體的傷害。在混合防腐固定劑中，甘油是一種良好的選用藥物。利用它的防腐性、吸濕性和對某些無機鹽類藥物的特殊溶解力，所配成的溶液比較穩(wěn)定[5]。硝酸鉀常作為發(fā)色劑，護色劑，抗微生物防腐劑使用。麝香草酚對細菌、酵母和霉菌均有較強的抑制作用，是一種廣譜抑菌劑[6]，不僅增強防腐抗霉力和對標本護色作用，而且配方中加入一定比例的酒精，麝香草酚可以減少甲醛的強烈刺激氣味。

以往用于神經外科培訓的標本或經過多次冷藏解凍，或單純經甲醛灌注。實際應用過程中發(fā)現，均出現不同程度的組織脫水、自溶；傳統(tǒng)甲醛灌注，影響到對腦實質、腦部動靜脈、腦部小結構的觀察、操作，很難達到接近臨床的體驗。此法采用冰凍固定與濕法保存相結合，使上述問題得到一定解決，具明顯優(yōu)勢。