芪參還五膠囊對大鼠帕金森病核受體相關(guān)因子1表達(dá)的影響及機(jī)制*

鄭建彪， 王雯， 邱志新， 景海芳

(1.滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 腦病二科, 河北 滄州 060001； 2.滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 神經(jīng)康復(fù)二科, 河北 滄州 060001)

帕金森病(parkinson's disease，PD)是老年人常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，臨床主要表現(xiàn)為運動系統(tǒng)功能紊亂，如靜止性震顫、運動遲緩和僵硬[1]，PD的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚[2]。核受體相關(guān)因子1(nuclearreceptor relatedfactor 1,Nurr1)基因是核受體超家族的轉(zhuǎn)錄因子，包括脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)結(jié)合域、配體結(jié)合域和AFL結(jié)合域，AFI結(jié)合域可通過促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)途徑激活，在調(diào)節(jié)多巴胺能神經(jīng)元發(fā)育中有重要作用[3]；研究證實Nurrl在中腦多巴胺能神經(jīng)元的發(fā)育、遷移和存活中起著重要作用[4-5]；在對人外周血淋巴細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，PD患者的Nurr1基因信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid，mRNA)含量明顯低于正常人，因此可將Nurrl作為PD潛在的、新的治療靶點[6]。研究顯示，在補陽還五湯的基礎(chǔ)上，以人參、驅(qū)蟲藥、冰片為主要成分的芪參還五膠囊在臨床治療急性缺血性中風(fēng)方面有良好的療效[7]，還能改善血管性認(rèn)知障礙非癡呆患者的認(rèn)知功能，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、緩解減輕炎癥反應(yīng)、促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)[8-9]。因此，本研究通過內(nèi)側(cè)前腦束單位點注射6-羥基多巴胺(6-OHDA)建立PD大鼠模型，采用不同劑量的芪參還五膠囊進(jìn)行治療，觀察PD大鼠Nurr1表達(dá)水平，報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究材料

1.1.1實驗動物 (1)SPF級健康雄性SD大鼠10只，用于預(yù)實驗，體質(zhì)量182～219 g、平均(200.65±6.12)g，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)；(2)SPF級健康雄性SD大鼠30只用于分組實驗，體質(zhì)量180～220 g、平均(201.32±5.42)g，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)；大鼠均購于湖北省實驗動物研究中心，許可證號SCXK(鄂)20210042，研究中動物處理符合《ethical issues in animal experimentation》[10]標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2主要設(shè)備與試劑 (1)設(shè)備：大鼠腦立體定位儀(51650，美國Stoelting公司)，高速顱骨鉆(ZH-GSZ，美國Stoelting公司)；(2)試劑：芪參還五膠囊(河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院的院內(nèi)制劑，冀藥制字Z20050798)，胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)，含各種氨基酸和葡萄糖培養(yǎng)基(dulbecco's modified eagle medium，DMEM)，電化學(xué)發(fā)光(electrochemiluminescence，ECL)液(美國賽默飛公司)，總RNA提取試劑(Trizol，美國invitrogen公司)，實時熒光定量(real time flurocent qualitative，PCR)試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，RNase-free H2O(大連TakaRa公司)，谷胱甘肽(glutathione，GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase system，GSH-Px)、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶(glutathione -S transferase，GSH-ST)試劑盒、細(xì)胞增殖及毒性檢測(cell counting kit-8，CCK-8)試劑(中國碧云天)，磷酸化蛋白激酶B(phosphorylase kinase B，p-AKT)，蛋白激酶B(protein kinase B，AKT)抗體，辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)-山羊抗兔(中國中杉金橋生物技術(shù)有限公司，引物(美國invitrogen公司)。

1.2 研究方法

1.2.1芪參還五膠囊劑量確定實驗 研究前期預(yù)實驗確定芪參還五膠囊對帕金森大鼠的劑量：10只SPF級健康雄性SD大鼠用0.50～5.00 g/(kg·d)劑量芪參還五膠囊溶液灌胃，每0.50 g/(kg·d)為一個階梯，觀察大鼠的炎性反應(yīng)情況和細(xì)胞活力，發(fā)現(xiàn)芪參還五膠囊低于0.50 g/(kg·d)時大鼠無明顯影響、劑量高于4.00 g/(kg·d)時大鼠死亡；同時結(jié)合芪參還五膠囊成人給藥劑量為2.4 g/d，根據(jù)人(60 kg)和大鼠按照體表面積折算的等效劑量比值換算出大鼠給藥劑量，設(shè)置本研究內(nèi)低劑量組、中劑量組、高劑量組大鼠所用芪參還五膠囊劑量。

1.2.2動物分組及造模 將30只SD大鼠均分為低劑量組、中劑量組、高劑量組、模型對照組和正常對照組，前4組大鼠參考文獻(xiàn)[11]的方法在大鼠內(nèi)側(cè)前腦束單位點注射6-OHDA建立帕金森病模型：大鼠腹腔注射4%水合氯醛(400 mg/kg)麻醉后、固定在腦立體定位儀上，剔除頭顱毛發(fā)，沿中線切開頭顱皮膚，顯露前、后囟，在前囟后2.20 mm、中線旁開2.10 mm、顱骨表面下8.5 ～8.7 mm處用微量注射器注射6-OHDA 1.5 μL，拔針縫合傷口，術(shù)后連續(xù)3 d注射8萬單位青霉素鈉；大鼠術(shù)后每周向頸部肌肉注射鹽酸阿撲嗎啡(0.5 mg/kg)，連續(xù)4周進(jìn)行旋轉(zhuǎn)試驗，如果轉(zhuǎn)速>7 r/min則認(rèn)為模型成功，如果旋轉(zhuǎn)試驗時旋轉(zhuǎn)方向不正確或旋轉(zhuǎn)次數(shù)不足，則視為造模失敗；正常對照組大鼠手術(shù)鉆孔、但不注射6-OHDA。低劑量組、中劑量組、高劑量組大鼠造模成功第2天分別給予0.93、1.87及3.75 g/(kg·d)劑量芪參還五膠囊灌胃，模型對照組和正常對照組給予等量生理鹽水灌胃，各組均灌胃7 d。

1.2.3黑質(zhì)紋狀體組織勻漿制備及黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞培養(yǎng) 造模后第7天和第14天時，每組分別各取3只大鼠麻醉后斷頭處死，分離腦組織于冰上的托盤，用眼鑷將受損側(cè)黑質(zhì)紋狀體分離并冷生理鹽水中反復(fù)沖洗，并用濾紙干燥，均分為3份，一份置于5 mL燒杯中，加入2倍組織體積的勻漿介質(zhì)，用眼科剪刀快速切碎黑質(zhì)紋狀體組織，倒入玻璃勻漿管勻漿后4 000 r/min離心15 min，用于后續(xù)實驗；另一份參考文獻(xiàn)[10]進(jìn)行黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞培養(yǎng)；第三份參考文獻(xiàn)[12]進(jìn)行黑質(zhì)紋狀體組織學(xué)切片，觀察神經(jīng)突觸及微觀結(jié)構(gòu)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1比色法檢測GSH、GSH-Px、GSH-ST含量 采用比色法檢測，取大鼠黑質(zhì)紋狀體組織勻漿上清液，用721分光光度計測定勻漿中GSH、GSH-Px、GSH-ST吸光度值。

1.3.2白細(xì)胞介素-4(interleukin-4，IL-4)、轉(zhuǎn)化生長因子 (transforming growth factor-β，TGF-β)、Nurr1 mRNA水平 采用RT-PCR法檢測，首先用Trizol法從大鼠黑質(zhì)紋狀體勻漿中提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增條件為95 ℃預(yù)變性3 min，95 ℃變性45 s、59 ℃退火 45 s、72 ℃延伸60 s，共35個循環(huán)，以β-肌動蛋(β-actin)為內(nèi)參照，計算IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA相對表達(dá)水平。IL-4上游引物序列為-AAGGCTGGCGGATTACTGCC，下游引物序列為-GATGCTGCTGGTGATGTACT；TGF-β上游引物序列為-GGAGTTTATCATCACCGCGGAAATACTGAGAG，下游引物序列為-TATTTCACTGACAGGCAATACCGTCCAAGG；Nurr1上游引物序列為-CTTTCGATGGTAGGATAGTGGCCT，下游引物序列為-CAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCT。

1.3.3細(xì)胞活力 采用四甲基偶氮唑鹽比色(methylthiazolyl tetrazolium test，MTT)法測定。于96孔板的每孔加入MTT溶液20 μL，37 ℃下孵育4 h，加入DMSO 150 μL搖動10 min，于酶標(biāo)儀上檢測490 nm處的吸光度值。參考文獻(xiàn)[12]計算細(xì)胞活性。

1.3.4細(xì)胞侵襲能力 將大鼠黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞濃度調(diào)整為2×107個細(xì)胞/L，將細(xì)胞懸液接種于包被或不包被Matrigel膠的Transwell上室中，培養(yǎng)液添加到下室，培養(yǎng)24 h，用多聚甲醛(4%)固定，結(jié)晶紫染色(0.1%)，顯微鏡下觀察5個隨機(jī)視野內(nèi)結(jié)晶紫染色細(xì)胞數(shù)為細(xì)胞浸潤數(shù)。

1.3.5細(xì)胞凋亡 采用流式細(xì)胞儀檢測，將5×105對數(shù)生長的大鼠黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶(75 mL)內(nèi)，收集懸浮和貼壁細(xì)胞，在Annexin V-FITC488和PI溶液中室溫避光孵育15 min，測定3次計算平均值。

1.3.6神經(jīng)突觸及微觀結(jié)構(gòu) 剝離黑質(zhì)紋狀體后，取1 mm3組織，在電鏡固定液中固定24 h，常規(guī)鋨酸固定，在CH型(OlyⅡlpus)透射電鏡下染色，觀察并拍照。每只大鼠選擇3個區(qū)域(×8 200)計算突觸數(shù)目，用游標(biāo)卡尺測量突觸活動區(qū)的長度和突觸后膜致密物質(zhì)的厚度(postsynaptic density，PSD)。

1.3.7AKt、p-AKt蛋白水平 采用蛋白印跡(Western blot)法檢測，提取細(xì)胞總蛋白并進(jìn)行處理，用聚氰基丙烯酸正丁酯法測定蛋白濃度，調(diào)平各組細(xì)胞的濃度，并取40 μg蛋白樣品于聚丙烯酰胺凝膠電泳，在275 mA地電流下轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯(poly vinyli dene fluoride，PVDF)膜上(2 h)，封閉，加入p-AKT、AKT抗體(1 ∶1 000)，4 ℃孵育過夜，加二抗(1 ∶800)，室溫下培養(yǎng)2 h，行化學(xué)發(fā)光顯影。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 GSH、GSH-Px、GSH-ST含量

結(jié)果顯示，造模后第7天和第14天時，低、中、高劑量組及模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體組織勻漿中GSH、GSH-Px、GSH-ST含量均較正常對照組降低，低、中劑量組及模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體GSH、GSH-Px、GSH-ST含量均較高劑量組降低，且造模后第14天時低、中、高劑量組大鼠的黑質(zhì)紋狀體GSH、GSH-Px、GSH-ST含量隨著芪參還五膠囊劑量的升高而升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 造模后第7天和第14天時各組大鼠黑質(zhì)紋狀體GSH、GSH-Px、GSH-ST含量Tab.1 Comparison of GSH, GSH-Px, and GSH-ST in rat substantia nigra and striatum on the 7thand 14th day after modeling in each group

2.2 IL-4、TGF-β及Nurr1 mRNA相對表達(dá)

結(jié)果顯示，造模后第7天和第14天時，低、中、高劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA相對表達(dá)水平均較正常對照組升高，低、中劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA相對表達(dá)水平均較高劑量組升高，且造模后第14天時低、中、高劑量組大鼠的黑質(zhì)紋狀體IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA相對表達(dá)水平隨著芪參還五膠囊劑量的升高而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2、圖1。

表2 造模后第7天和第14天時各組大鼠黑質(zhì)紋狀體IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA相對表達(dá)水平Tab.2 Comparison of IL-4, TGF- β, and Nurr1 mRNA in rat substantia nigra and striatum on the 7th and 14th day after modeling in each group

注：1、2為IL-4 mRNA第7天和第14天，3、4為TGF-β mRNA第7天和第14天，5、6為Nurr1 mRNA第7天和第14天。圖1 RT-PCR檢測各組大鼠黑質(zhì)紋狀體IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA電泳結(jié)果Fig.1 Electrophoresis result of IL-4, TGF- β, andNurr1 mRNA detected by RT-PCR

2.3 黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞活力、細(xì)胞侵襲能力及凋亡率

結(jié)果顯示，造模后第7天和第14天時，低、中、高劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞活力和細(xì)胞侵襲能力較正常對照組降低、凋亡率較正常對照組升高，低、中劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞活力和細(xì)胞侵襲能力較高劑量組降低、凋亡率較高劑量組升高，且造模后第14天時低、中、高劑量組大鼠的黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞活力、細(xì)胞侵襲能力隨著芪參還五膠囊劑量的升高而升高，凋亡率隨著芪參還五膠囊劑量的升高而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3、圖2。

表3 造模后第7天和第14天時各組大鼠黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞活力、細(xì)胞侵襲能力及凋亡率Tab.3 Comparison of cell viability, invasion, and apoptosis in rat substantia nigra and striatum on the 7th and 14th day after modeling in each group

2.4 神經(jīng)突觸數(shù)量、活性區(qū)長度及PSD水平

結(jié)果顯示，造模后第7天和第14天時，低、中、高劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體內(nèi)突觸個數(shù)、活性區(qū)長度、PSD水平均較正常對照組降低，低、中劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體內(nèi)突觸個數(shù)、活性區(qū)長度、PSD水平均較高劑量組降低，且造模后第14天時低、中、高劑量組大鼠的黑質(zhì)紋狀體內(nèi)突觸個數(shù)、活性區(qū)長度、PSD水平隨著芪參還五膠囊劑量的升高而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

2.5 p-AKt、AKt蛋白表達(dá)水平

結(jié)果顯示，造模后第7天和第14天時，低、中、高劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體內(nèi)p-AKt蛋白表達(dá)水平較正常對照組降低、AKt蛋白表達(dá)水平較正常對照組升高，較正常對照組降低，低、中劑量組和模型對照組大鼠黑質(zhì)紋狀體內(nèi)p-AKt蛋白表達(dá)水平和低劑量組大鼠黑質(zhì)紋狀體內(nèi)AKt蛋白表達(dá)水平均較高劑量組降低，中劑量組和模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體內(nèi)AKt蛋白表達(dá)水平均較高劑量組升高，且造模后第14天時，低、中、高劑量組大鼠的黑質(zhì)紋狀體內(nèi)p-AKt水平隨著芪參還五膠囊劑量的升高而升高，AKt水平隨著芪參還五膠囊劑量的升高而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表5、圖3。

圖2 不同時刻各組大鼠黑質(zhì)紋狀體的流式細(xì)胞結(jié)果Fig.2 Flow cytometry results of rat substantia nigra and striatum at different time points

表4 造模后第7天和第14天時各組大鼠黑質(zhì)紋狀體的神經(jīng)突觸數(shù)量、活性區(qū)長度及PSD水平Tab.4 Comparison of the numbers of synapses, the length of active length, and PSD in rat substantia nigra and striatum on the 7th and 14th day after modeling in each group

表5 造模后第7天和第14天時各組大鼠黑質(zhì)紋狀體的p-AKt、AKt蛋白表達(dá)水平Tab.5 Comparison of p-AKt and Akt protein expression in rat substantia nigra and striatum on the 7th and 14th day after modeling in each group

圖3 各組大鼠黑質(zhì)紋狀體AKt、p-AKt蛋白相對表達(dá)水平(Western blot)Fig.3 Relative protein expression levels of Akt and p-AKt (Western blot)

3 討論

PD是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，其主要臨床表現(xiàn)為運動障礙，如步態(tài)快速、四肢僵硬、故意減少運動、靜止性震顫、緩慢運動和智力低下，在嚴(yán)重的情況下，可能會出現(xiàn)譫妄，這在老年人中較為常見[13]。在PD中，典型的現(xiàn)象是黑質(zhì)多巴胺(dopamine ,DA)神經(jīng)元的退化，對人類外周血淋巴細(xì)胞中神經(jīng)營養(yǎng)素水平的測量結(jié)果顯示，PD綜合征患者的神經(jīng)營養(yǎng)素水平顯著降低[14]。研究表明，成年小鼠Null+/-變化與中腦邊緣和中腦皮質(zhì)的DA水平降低有關(guān)，但紋狀體的DA水平無明顯變化[15]。這些小鼠也更容易受到1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine Hydrochloride ，MPTP)誘導(dǎo)的黑質(zhì)損傷。Maryam等[16]的研究也發(fā)現(xiàn)，老年Null+/-小鼠相比于正常的Null+/+小鼠和Null+/-小鼠，表現(xiàn)出明顯的旋轉(zhuǎn)和運動能力的下降。這些異?；顒优c黑質(zhì)紋狀體DA水平降低、黑質(zhì)DA神經(jīng)元和Nurr1表達(dá)減少以及DA轉(zhuǎn)運體減少有關(guān)[17]。目前西醫(yī)和外科治療PD僅限于控制患者癥狀，但不能延緩或阻止患者黑質(zhì)病變的發(fā)展，因此中藥有望成為最佳治療方案之一。

由人體代謝所產(chǎn)生的氧自由基生理狀態(tài)可被酶系統(tǒng)清除，以達(dá)到緩解氧化損傷的效果。機(jī)體酶系統(tǒng)主要包括GSH-Px、GSH-ST等，PD患者腦內(nèi)抗氧化系統(tǒng)和自由基清除系統(tǒng)功能低下，黑質(zhì)-紋狀體中GSH、GSH-Px、GSH-ST的含量均有程度不同的減少，自由基產(chǎn)量增加，對神經(jīng)元造成嚴(yán)重?fù)p傷，因此GSH具有緩解氧化損傷的效果。黑質(zhì)內(nèi)GSH含量減少50%，則腦的清除自由基能力下降。若GSH-Px活力降低，則GSH-ST只有清除脂質(zhì)過氧化物的作用。而氧化應(yīng)激作為造成黑質(zhì)細(xì)胞損傷的主要原因，其對神經(jīng)元損傷、裂解、凋亡過程均有一定作用，可通過減少多巴胺的分泌，誘發(fā)PD的發(fā)生。因此本研究中觀察大鼠黑質(zhì)紋狀體GSH、GSH-Px、GSH-ST含量可了解PD的發(fā)生。其次，IL-4、TGF-β作為臨床常用的炎性因子，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時，IL-4、TGF-β水平異常，而大量炎性因子浸潤，可促進(jìn)蛋白酶分泌增加，促進(jìn)氧化中間產(chǎn)物的發(fā)生，進(jìn)而誘發(fā)PD的發(fā)生。因此本研究中觀察黑質(zhì)紋狀體IL-4、TGF-βmRNA水平也可了解PD的情況。近年來在6-羥基多巴誘導(dǎo)的PD模型中，川芎嗪類似物CXC195通過激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B /糖原合成酶激酶3β(phosphatidylin-ositol-3-kinase/protein kinase B/Glycogen synthase kinase3β，PI3K/Akt/GSK3β)保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元免于凋亡[18-19]。一些研究還發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與PD的炎癥機(jī)制密切相關(guān)，E3泛素連接酶C-CB1抑制與PI3K/Akt信號通路相關(guān)的小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥，p-Akt蛋白在炎癥反應(yīng)中顯著降低，PI3K/Akt信號通路受到抑制，與其他文獻(xiàn)結(jié)果相似[20]。本研究中，結(jié)果顯示芪參還五膠囊可通過抑制PI3K/Akt信號通路，改善黑質(zhì)紋狀體的氧化還原反應(yīng)，減輕炎癥，降低細(xì)胞活力和侵襲能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這是因為Nurr1是多巴胺能神經(jīng)元形成的關(guān)鍵基因，其表達(dá)增強(qiáng)在體內(nèi)外均有一定的抗炎作用。

同時，芪參還五膠囊具有益氣活血、疏通散瘀、開竅醒腦的作用，方劑中川芎具有活血、氣血、祛風(fēng)止痛的功效[21]。冰片能延長小鼠耐缺氧時間，藥代動力學(xué)研究表明，冰片口服5 min后可穿過血腦屏障，并在中樞神經(jīng)系統(tǒng)蓄積，還可促進(jìn)其他藥物通過血腦屏障[22]。地龍、水蛭、白僵蠶等藥物有祛風(fēng)、化痰、祛結(jié)節(jié)的作用，這些動物藥中含有大量的溶栓因子，如水解蛋白酶，不僅能溶解血栓和動脈粥樣硬化斑塊，還能軟化血管，恢復(fù)動脈彈性，從而改善急性缺血性中風(fēng)患者的腦循環(huán)，幫助建立側(cè)支循環(huán)，具有雙向調(diào)節(jié)作用[23-24]。當(dāng)歸既能促進(jìn)血液循環(huán)，又能養(yǎng)血，能釋放多余的血熱，消除血瘀，產(chǎn)生血液；黃芪具有益氣養(yǎng)血、強(qiáng)身健體、消除病因、提高免疫力、增強(qiáng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性等作用，其利尿作用對急性缺血性腦卒中引起的腦水腫有調(diào)節(jié)作用[25]。因此有文獻(xiàn)指出，芪參還五膠囊在治療急性缺血性中風(fēng)時能明顯改善神經(jīng)功能缺損程度，提高臨床療效，同時還能改善患者的脂代謝紊亂，有效預(yù)防糖尿病的發(fā)生，且無不良反應(yīng)或副作用。而本研究中模型對照組造模第7天和第14天時，黑質(zhì)紋狀體GSH、第7天時的GSH-Px、GSH-ST、細(xì)胞活力、突觸個數(shù)、AKt蛋白表達(dá)及第14天時的活性區(qū)長度并未與低劑量組、中劑量組和高劑量組表現(xiàn)出明顯差異，可能是因本文所設(shè)置樣本量較少所致，同時一些實驗變量的控制也可能對結(jié)果產(chǎn)生影響，但總體結(jié)果趨勢并未受到明顯影響，今后應(yīng)進(jìn)一步提高實驗嚴(yán)謹(jǐn)性，確保所獲取結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本研究結(jié)果顯示，低、中、高劑量組及模型對照組大鼠的黑質(zhì)紋狀體GSH、GSH-Px、GSH-ST含量、細(xì)胞活力、侵襲能力、突觸個數(shù)、活性區(qū)長度、PSD含量、p-AKt蛋白表達(dá)水平與正常對照組相比均降低；IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA水平，細(xì)胞凋亡率和AKt蛋白表達(dá)水平均顯著升高，且在造模后第14天時低、中、高劑量組大鼠的黑質(zhì)紋狀體GSH、GSH-Px、GSH-ST含量、細(xì)胞活力、細(xì)胞侵襲能力、突觸個數(shù)、活性區(qū)長度、PSD含量、p-AKt蛋白表達(dá)水平隨著芪參還五膠囊劑量的升高而升高，IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA水平、細(xì)胞凋亡率、AKt蛋白表達(dá)水平隨著芪參還五膠囊劑量的升高而降低。

綜上所述，芪參還五膠囊可通過抑制PI3K/AKt信號通路而改善大鼠黑質(zhì)紋狀體氧化還原反應(yīng)，緩解炎癥反應(yīng)，降低細(xì)胞活力和侵襲，促進(jìn)凋亡，保護(hù)神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)完整性及良好的超微結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。