• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    毛萼乙素通過Wnt/β-catenin通路抑制結(jié)腸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化Δ

    2022-10-14 09:08:56匡微鄭銀彬李雨奇田平平蘇強(qiáng)向小聰川北醫(yī)學(xué)院附屬南充市中心醫(yī)院組織工程與干細(xì)胞研究所四川南充67000川北醫(yī)學(xué)院附屬南充市中心醫(yī)院心胸外科四川南充67000安徽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院合肥060川北醫(yī)學(xué)院附屬南充市中心醫(yī)院藥學(xué)部四川南充67000
    中國藥房 2022年19期
    關(guān)鍵詞:乙素遷移率結(jié)腸癌

    匡微,鄭銀彬,李雨奇,田平平,蘇強(qiáng),向小聰(.川北醫(yī)學(xué)院附屬南充市中心醫(yī)院組織工程與干細(xì)胞研究所,四川南充 67000;.川北醫(yī)學(xué)院附屬南充市中心醫(yī)院心胸外科,四川南充 67000;.安徽醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院,合肥 060;4.川北醫(yī)學(xué)院附屬南充市中心醫(yī)院藥學(xué)部,四川南充 67000)

    結(jié)腸癌是一種高異質(zhì)性疾病,盡管其早期患者可以通過手術(shù)和輔助方案治療,但治療后仍有部分患者容易復(fù)發(fā)[1―2],且大多數(shù)患者在診斷時(shí)已經(jīng)處于中晚期階段,常規(guī)療法已經(jīng)很難有效[3―4],亟需尋找新的有效治療方案。目前,結(jié)腸癌細(xì)胞的高轉(zhuǎn)移特性是導(dǎo)致結(jié)腸癌預(yù)后不良的主要原因,其中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要因素。因此,開發(fā)可有效抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT的藥物尤為重要。

    毛萼乙素是從疏花毛萼香茶菜中提取的一種具抗癌活性的二萜類化合物,已有報(bào)道顯示,其在急性髓系白血病[5]、乳腺癌[6]、胰腺癌[7]等惡性腫瘤中發(fā)揮了較好的治療作用,但其是否可用于治療結(jié)腸癌尚不明確。目前已有研究發(fā)現(xiàn),異常的Wnt/β-聯(lián)蛋白(β-catenin)激活可直接驅(qū)動(dòng)結(jié)腸癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[8―10],但毛萼乙素是否可通過該信號(hào)通路治療結(jié)腸癌尚不明確?;诖耍P者以結(jié)腸癌細(xì)胞HT29、HCT116為研究對(duì)象,探討毛萼乙素對(duì)上述2種細(xì)胞侵襲、遷移的影響,并基于Wnt/β-catenin信號(hào)通路初探毛萼乙素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞EMT的作用,以期為毛萼乙素治療結(jié)腸癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所用主要儀器有TS100F型熒光倒置顯微鏡(日本Nikon公司)、DMi8型倒置顯微鏡(德國Leica公司)、810FUGE型低溫高速離心機(jī)(美國Thermo Fisher Scientific公司)、TD-5Z型臺(tái)式低速多管架離心機(jī)(四川蜀科儀器有限公司)、DYY-6D型電泳儀(北京六一生物科技有限公司)、Gel Doc XR+全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)(上海艾研生物科技有限公司)等。

    1.2 主要藥品與試劑

    毛萼乙素(貨號(hào)84745-95-9)購自云南西力生物技術(shù)股份有限公司;Licl(Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活劑)購自北京伊諾凱科技有限公司(貨號(hào)A53473);XAV939(Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑)購自美國MCE公司(貨號(hào)284028-89-3);兔源原癌基因蛋白質(zhì)c-myc、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、β-catenin、T細(xì)胞因子4(TCF4)、細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)、鋅指轉(zhuǎn)錄抑制因子Snail、β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)均購自山東華安生物科技有限公司(貨號(hào)分別為HA721182、ET107-37、ET1607-15、ET1601-5、R1401-11、ER0722、EM1706-65、ET1701-80);羊抗免疫球蛋白G二抗購自美國Sigma公司(貨號(hào)A6154);ECL化學(xué)發(fā)光試劑購自上海雅酶生物科技有限公司(貨號(hào)SQ201);McCoy’s 5A培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Gibco公司(貨號(hào)分別為16600108、10100147)。

    1.3 細(xì)胞

    結(jié)腸癌細(xì)胞HT29、HCT116購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。

    2 方法

    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

    將HT29細(xì)胞或HCT116細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的McCoy’s 5A完全培養(yǎng)基中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

    2.2 毛萼乙素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移能力的影響

    將6孔板背面用記號(hào)筆畫3條橫穿過孔的直線,然后將HT29或HCT116細(xì)胞以1.5×105個(gè)/孔接種于6孔板中,待細(xì)胞完全貼壁后,使用槍頭在細(xì)胞生長面垂直于背后直線劃痕,并用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗掉落的細(xì)胞。將上述2種細(xì)胞分為對(duì)照組和毛萼乙素不同濃度組(1.0、1.5 μmol/L,濃度參考文獻(xiàn)[5]設(shè)置),每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)0、24、48 h后,采用倒置顯微鏡觀察劃痕的愈合情況,并拍照。采用Image J v1.8.0軟件測(cè)量劃痕的距離,計(jì)算細(xì)胞遷移率[細(xì)胞遷移率=(0 h劃痕寬度-不同時(shí)間點(diǎn)劃痕寬度)/0 h劃痕寬度×100%]。

    2.3 毛萼乙素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響

    2.3.1 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長期的HT29、HCT116細(xì)胞,制成細(xì)胞密度為5×105mL-1的無血清細(xì)胞懸液,分別給予0(對(duì)照組)、1.0 μmol/L(濃度根據(jù)“2.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置,下同)的毛萼乙素刺激,每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。取上述細(xì)胞懸液200 μL加到Transwell小室上層,下層中加入含20%胎牛血清的McCoy’s 5A培養(yǎng)基600 μL。將細(xì)胞侵襲小室置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,然后以4%多聚甲醛固定30 min,再用1%結(jié)晶紫染色30 min后,于倒置顯微鏡下觀察穿過基底膜的侵襲細(xì)胞數(shù)。每個(gè)樣本觀察5個(gè)視野,取平均值作為檢測(cè)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,然后計(jì)算細(xì)胞侵襲率[細(xì)胞侵襲率=(對(duì)照組侵襲數(shù)-實(shí)驗(yàn)組侵襲數(shù))/對(duì)照組侵襲數(shù)×100%]。

    2.3.2 Transwell遷移實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)前,在Transwell小室內(nèi)膜上均勻鋪入稀釋后的Matrigel 50 μL,待其凝結(jié)后,取對(duì)數(shù)生長期的HT29、HCT116細(xì)胞,制成細(xì)胞密度為1×106mL-1的無血清細(xì)胞懸液,分別給予0(對(duì)照組)、1.0 μmol/L的毛萼乙素刺激,每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。其余操作同“2.3.1”項(xiàng),然后計(jì)算細(xì)胞遷移率[細(xì)胞遷移率=(對(duì)照組遷移數(shù)-實(shí)驗(yàn)組遷移數(shù))/對(duì)照組遷移數(shù)×100%]。

    2.4 毛萼乙素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

    采用Western blot法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取HT29細(xì)胞或HCT116細(xì)胞按2×105個(gè)/孔接種于6孔板后分為對(duì)照組和毛萼乙素0.5、1.0、1.5 μmol/L組。培養(yǎng)24 h后,收集細(xì)胞,加入RIPA裂解液裂解20 min,離心,取上清液,經(jīng)BCA法檢測(cè)蛋白濃度后,進(jìn)行變性、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和轉(zhuǎn)膜;以5%脫脂奶粉溶液封閉1 h,PBST緩沖液清洗5 min×3次后,加入E-cadherin、N-cadherin、Snail、β-actin一抗(稀釋度均為1∶500)孵育過夜;以PBST緩沖液清洗5 min×3次,加入二抗(稀釋度為1∶5 000)孵育1 h;加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑顯色,以全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)成像,采用Image J v1.8.0軟件進(jìn)行分析,以目的蛋白與內(nèi)參(β-actin)的灰度值比值表示其表達(dá)水平。

    2.5 毛萼乙素聯(lián)合Wnt/β-catenin信號(hào)通路激動(dòng)劑對(duì)該信號(hào)通路相關(guān)蛋白及N-cadherin蛋白表達(dá)的影響

    采用Western blot法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取HT29細(xì)胞或HCT116細(xì)胞按2×105個(gè)/孔接種于6孔板后,分為對(duì)照組、毛萼乙素組(1.0 μmol/L)、Licl[11]組(10 mmol/L)、毛萼乙素+Licl組(1.0 μmol/L毛萼乙素+10 mmol/L Licl)。培養(yǎng)24 h后,收集細(xì)胞,按“2.4”項(xiàng)下方法處理細(xì)胞并進(jìn)行電泳,然后加入β-catenin、c-myc、cyclin D1、TCF4、N-cadherin、β-actin一抗(稀釋度均為1∶500)孵育過夜;以PBST緩沖液清洗5 min×3次,加入二抗(稀釋度為1∶5 000)孵育1 h,按“2.4”項(xiàng)下方法進(jìn)行顯色及灰度值分析。

    2.6 毛萼乙素聯(lián)合Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移率及β-catenin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表達(dá)的影響

    將6孔板背面用記號(hào)筆畫3條橫穿過孔的直線,然后將HT29細(xì)胞或HCT116細(xì)胞按1.5×105個(gè)/孔接種于6孔板中,待細(xì)胞完全貼壁后,分別給予0(對(duì)照組)、1.0 μmol/L 的毛萼乙素以及 10 μmol/L XAV939[12]和 1.0 μmol/L毛萼乙素+10 μmol/L XAV939刺激,每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔,同“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行劃痕愈合實(shí)驗(yàn),并檢測(cè)培養(yǎng)24、48 h后的細(xì)胞遷移率。取HT29細(xì)胞或HCT116細(xì)胞按2×105個(gè)/孔接種于6孔板后分為對(duì)照組、毛萼乙素組(1.0 μmol/L)、XAV939組(10 μmol/L)、毛萼乙素+XAV939組(1.0 μmol/L毛萼乙素+10 μmol/L XAV939)。培養(yǎng)24 h后,收集細(xì)胞,按“2.4”項(xiàng)下方法處理細(xì)胞并進(jìn)行電泳,然后加入β-catenin、N-cadherin、E-cadherin、β-actin一抗(稀釋度均為1∶500)孵育過夜;以PBST緩沖液清洗5 min×3次,加入二抗(稀釋度為1∶5 000)孵育1 h,按“2.4”項(xiàng)下方法進(jìn)行顯色及灰度值分析。

    2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    所有數(shù)據(jù)使用GraphPad Prism 7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示,多組間比較采用單因素方差分析及SNK-q檢驗(yàn),組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

    3 結(jié)果

    3.1 毛萼乙素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移能力的影響結(jié)果

    與對(duì)照組比較,毛萼乙素1.0、1.5 μmol/L組2種結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移率均顯著降低(P<0.01),且呈一定濃度和時(shí)間依賴趨勢(shì)。結(jié)果見圖1。

    圖1 毛萼乙素對(duì)2種結(jié)腸癌細(xì)胞遷移能力的影響結(jié)果

    3.2 毛萼乙素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響結(jié)果

    與對(duì)照組比較,毛萼乙素1.0 μmol/L組2種結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲率及遷移率均顯著降低(P<0.01)。結(jié)果見圖2。

    圖2 毛萼乙素對(duì)2種結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響結(jié)果

    3.3 毛萼乙素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響結(jié)果

    與對(duì)照組比較,毛萼乙素1.0、1.5 μmol/L組2種結(jié)腸癌細(xì)胞中N-cadherin、Snail表達(dá)水平均顯著降低(P<0.01),E-cadherin表達(dá)水平均顯著升高(P<0.01);毛萼乙素0.5 μmol/L組HT29中E-cadherin表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),HCT116細(xì)胞中Snail表達(dá)水平顯著降低(P<0.05),表明毛萼乙素可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT。結(jié)果見圖3、表1。

    表1 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果(±s,n=3,%%)

    表1 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果(±s,n=3,%%)

    a:與對(duì)照組比較,P<0.01;b:與對(duì)照組比較,P<0.05

    組別對(duì)照組毛萼乙素0.5μmol/L組毛萼乙素1.0μmol/L組毛萼乙素1.5μmol/L組HCT116細(xì)胞134.18±2.78 118.52±5.21b 100.42±7.43a 92.84±5.41a E-cadherin HT29細(xì)胞52.56±2.01 65.88±3.22a 80.83±5.11a 95.12±4.32a HCT116細(xì)胞57.54±4.51 68.75±5.63 79.66±8.98a 87.84±4.74a N-cadherin HT29細(xì)胞102.21±10.52 88.45±3.51 22.01±2.41a 12.89±3.31a HCT116細(xì)胞25.68±2.57 24.14±3.10 11.39±4.22a 1.50±0.01a Snail HT29細(xì)胞82.93±2.41 77.72±2.54 58.49±3.21a 47.66±2.21a

    圖3 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的電泳圖

    3.4 毛萼乙素聯(lián)合Wnt/β-catenin信號(hào)通路激動(dòng)劑對(duì)該信號(hào)通路相關(guān)蛋白及N-cadherin蛋白表達(dá)的影響結(jié)果

    與對(duì)照組比較,毛萼乙素組2種結(jié)腸癌細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白(β-catenin、c-myc、cyclin D1、TCF4)及N-cadherin的表達(dá)水平均顯著降低(P<0.05或P<0.01);Licl組2種結(jié)腸癌細(xì)胞中上述幾種蛋白的表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。與毛萼乙素組比較,毛萼乙素+Licl組2種結(jié)腸癌細(xì)胞中上述幾種蛋白的表達(dá)水平被顯著逆轉(zhuǎn)(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見圖4、表2。

    表2 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白及N-cadherin蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果(±s,n=3,%%)

    表2 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白及N-cadherin蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果(±s,n=3,%%)

    a:與對(duì)照組比較,P<0.01;b:與對(duì)照組比較,P<0.05;c:與毛萼乙素組比較,P<0.05;d:與毛萼乙素組比較,P<0.01

    組別c-myc對(duì)照組毛萼乙素組Licl組毛萼乙素+Licl組β-catenin HT29細(xì)胞134.79±5.67 106.03±5.64a 149.65±4.21b 121.53±6.54c HCT116細(xì)胞104.24±5.47 82.62±8.12b 120.56±5.12b 101.08±8.12c HT29細(xì)胞40.64±1.53 19.68±4.57a 50.89±4.25b 35.31±3.21d HCT116細(xì)胞77.92±2.04 62.31±2.64b 106.10±4.25a 95.8±11.64d cyclinD1 HT29細(xì)胞18.85±3.21 12.39±1.19b 29.94±1.21a 24.79±3.92d HCT116細(xì)胞116.48±2.32 84.31±1.52a 128.66±3.41b 104.73±7.21d TCF4 HT29細(xì)胞69.07±5.21 18.00±3.11a 95.81±4.85a 64.95±3.47d HCT116細(xì)胞77.62±1.69 13.34±4.41a 86.54±2.21b 75.90±3.21d N-cadherin HT29細(xì)胞17.67±2.51 0.92±0.01a 23.68±0.95b 21.21±3.29d HCT116細(xì)胞25.15±4.21 7.86±0.59a 78.17±1.12a 28.15±3.13d

    圖4 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白及N-cadherin表達(dá)的電泳圖

    3.5 毛萼乙素聯(lián)合Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞遷移率和β-catenin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表達(dá)的影響

    與對(duì)照組比較,毛萼乙素組2種結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移率及β-catenin、N-cadherin表達(dá)水平均顯著降低(P<0.01),E-cadherin表達(dá)水平顯著升高(P<0.05或P<0.01)。與毛萼乙素組比較,毛萼乙素+XAV939組2種結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移率及β-catenin、N-cadherin表達(dá)水平均進(jìn)一步降低(P<0.05或P<0.01),E-cadherin表達(dá)水平進(jìn)一步升高(P<0.01)。結(jié)果見圖5、表3。

    表3 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中 β-catenin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果(±s,n=3,%%)

    表3 2種結(jié)腸癌細(xì)胞中 β-catenin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果(±s,n=3,%%)

    a:與對(duì)照組比較,P<0.01;b:與對(duì)照組比較,P<0.05;c:與毛萼乙素組比較,P<0.05;d:與毛萼乙素組比較,P<0.01

    HCT116細(xì)胞447.02±16.84 300.53±10.64a 245.63±9.98a 131.48±8.31d組別對(duì)照組毛萼乙素組XAV939組毛萼乙素+XAV939組β-catenin HT29細(xì)胞103.58±8.26 68.98±3.74a 79.40±2.56a 55.44±2.21c HCT116細(xì)胞175.17±9.81 102.92±9.22a 94.89±7.43a 72.78±6.12d E-cadherin HT29細(xì)胞29.22±2.36 62.32±4.27b 104.48±14.87a 149.43±10.62d HCT116細(xì)胞60.08±2.76 92.08±3.80a 71.80±2.31b 134.52±5.98d N-cadherin HT29細(xì)胞63.97±3.51 42.41±1.13a 36.23±1.60a 21.51±2.95d

    圖5 毛萼乙素聯(lián)合XAV939對(duì)2種結(jié)腸癌細(xì)胞遷移能力及β-catenin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表達(dá)的影響

    4 討論

    腫瘤轉(zhuǎn)移是結(jié)腸癌相關(guān)死亡的主要原因[13―14],轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌預(yù)后較差,傳統(tǒng)的治療方法如手術(shù)切除和化療并不能有效防止腫瘤轉(zhuǎn)移[15]。目前臨床仍缺乏能夠有效抑制結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的方案,因此,開發(fā)抗結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物顯得尤為重要。

    細(xì)胞的侵襲和遷移是結(jié)腸癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要過程[16]。本研究通過劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)毛萼乙素抑制結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲和遷移的能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)毛萼乙素能夠顯著降低結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲率和遷移率,且其遷移能力具有一定濃度和時(shí)間依賴趨勢(shì)。

    EMT是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移最主要的原因[17],故本研究檢測(cè)不同濃度毛萼乙素處理結(jié)腸癌細(xì)胞后EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),毛萼乙素能夠抑制結(jié)腸癌間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin以及與EMT呈正相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達(dá),同時(shí)還能促進(jìn)上皮細(xì)胞表型標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá),這表明毛萼乙素可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT。

    目前研究顯示,Wnt/β-catenin信號(hào)通路是調(diào)節(jié)結(jié)腸癌EMT的關(guān)鍵信號(hào)通路[18],且其在結(jié)腸癌中被高度激活[19―20],因此,抑制該信號(hào)通路活性對(duì)結(jié)腸癌的治療具有重要作用。本研究通過檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白β-catenin及其下游靶蛋白(c-myc、cyclin D1、TCF4)的表達(dá)情況,并通過利用該信號(hào)通路激活劑Licl進(jìn)行功能回復(fù)實(shí)驗(yàn),以探討毛萼乙素抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT是否與抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活有關(guān)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),毛萼乙素可以抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá),且該抑制作用能被該信號(hào)通路激活劑Licl逆轉(zhuǎn),這表明毛萼乙素可通過抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT。

    為進(jìn)一步研究毛萼乙素在今后臨床轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用價(jià)值,本研究檢測(cè)毛萼乙素與Wnt/β-catenin通路抑制劑XAV939的相互作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩者聯(lián)用后,結(jié)腸癌細(xì)胞遷移率及β-catenin、N-cadherin蛋白表達(dá)水平進(jìn)一步降低,這表明毛萼乙素與Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制劑XAV939之間存在協(xié)同作用。

    綜上所述,毛萼乙素可通過抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT。

    猜你喜歡
    乙素遷移率結(jié)腸癌
    燈盞乙素在抑制冠脈搭橋術(shù)后靜脈橋再狹窄中的應(yīng)用
    燈盞乙素對(duì)OX-LDL損傷的RAW264.7細(xì)胞中PKC和TNF-α表達(dá)的影響
    分子印跡復(fù)合膜在拆分延胡索乙素對(duì)映體中的應(yīng)用
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:31
    MicroRNA-381的表達(dá)下降促進(jìn)結(jié)腸癌的增殖與侵襲
    SiC/SiO2界面形貌對(duì)SiC MOS器件溝道遷移率的影響
    結(jié)腸癌切除術(shù)術(shù)后護(hù)理
    濾棒吸阻和濾嘴長度對(duì)卷煙煙氣中6種元素遷移率的影響
    煙草科技(2015年8期)2015-12-20 08:27:17
    高遷移率族蛋白B1對(duì)16HBE細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)和分泌的影響
    基于六普數(shù)據(jù)的年齡—遷移率模型研究
    五味子乙素對(duì)MDR1介導(dǎo)的人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS/ADR所致多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)研究
    亚洲片人在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 99国产精品一区二区蜜桃av| 丰满的人妻完整版| 美女扒开内裤让男人捅视频| www.熟女人妻精品国产| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲avbb在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 麻豆av在线久日| 精品免费久久久久久久清纯| 久久久久久久午夜电影| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 黄频高清免费视频| 亚洲国产看品久久| 老汉色∧v一级毛片| 午夜两性在线视频| 好男人电影高清在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99国产极品粉嫩在线观看| 日本 av在线| 丰满人妻一区二区三区视频av | 无遮挡黄片免费观看| 久久精品影院6| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲在线自拍视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 91麻豆精品激情在线观看国产| 91在线精品国自产拍蜜月 | netflix在线观看网站| 日本黄色视频三级网站网址| 在线免费观看的www视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 特大巨黑吊av在线直播| 手机成人av网站| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲av电影在线进入| 青草久久国产| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 老汉色∧v一级毛片| 99精品欧美一区二区三区四区| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品永久免费网站| 亚洲色图av天堂| 美女午夜性视频免费| 性色av乱码一区二区三区2| xxxwww97欧美| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 成人特级av手机在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 91在线观看av| 美女免费视频网站| 免费大片18禁| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品影院久久| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜激情福利司机影院| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 一个人看的www免费观看视频| 无遮挡黄片免费观看| 欧美日韩乱码在线| 精品久久蜜臀av无| 一级毛片精品| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 色综合站精品国产| 女人被狂操c到高潮| 中文资源天堂在线| 全区人妻精品视频| 久久久久久人人人人人| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 99热这里只有是精品50| 亚洲成av人片在线播放无| 黄色日韩在线| 日本五十路高清| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产高清有码在线观看视频| 国产av一区在线观看免费| 精品福利观看| 岛国视频午夜一区免费看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 真实男女啪啪啪动态图| 午夜视频精品福利| 久久中文字幕一级| 午夜福利成人在线免费观看| 又紧又爽又黄一区二区| 1024香蕉在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 窝窝影院91人妻| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产淫片久久久久久久久 | 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲人成网站高清观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲熟妇熟女久久| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲av片天天在线观看| av国产免费在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 久久国产精品人妻蜜桃| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人亚洲精品av一区二区| 国语自产精品视频在线第100页| 一进一出好大好爽视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产精品久久电影中文字幕| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 禁无遮挡网站| xxx96com| av中文乱码字幕在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 免费在线观看亚洲国产| 成年版毛片免费区| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲人与动物交配视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产成人系列免费观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | h日本视频在线播放| 午夜免费观看网址| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美日韩精品网址| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 欧美在线一区亚洲| 中文字幕久久专区| 日韩欧美精品v在线| 国产成人精品无人区| 午夜成年电影在线免费观看| 一区二区三区高清视频在线| 嫩草影院精品99| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产毛片a区久久久久| 国产高清激情床上av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 午夜精品一区二区三区免费看| 精品电影一区二区在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久久久久久久黄片| 国产视频内射| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 男人舔女人下体高潮全视频| 在线观看日韩欧美| 亚洲av五月六月丁香网| 国产三级黄色录像| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产一区二区三区视频了| 综合色av麻豆| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 全区人妻精品视频| 日本a在线网址| 天堂影院成人在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 国产黄色小视频在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产单亲对白刺激| 久久伊人香网站| 黄色 视频免费看| 露出奶头的视频| 中出人妻视频一区二区| 久久香蕉精品热| 亚洲国产看品久久| 在线免费观看的www视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久久久人人人人人| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 91av网站免费观看| 亚洲成人久久爱视频| 两个人看的免费小视频| h日本视频在线播放| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 精品无人区乱码1区二区| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲熟女毛片儿| 久久99热这里只有精品18| 午夜福利在线观看吧| 国产成人啪精品午夜网站| netflix在线观看网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 午夜免费激情av| 最新美女视频免费是黄的| 午夜福利在线在线| 亚洲成av人片免费观看| 国产毛片a区久久久久| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲国产中文字幕在线视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲欧美日韩东京热| 午夜免费观看网址| 色综合欧美亚洲国产小说| 在线观看66精品国产| 宅男免费午夜| 美女扒开内裤让男人捅视频| 在线观看66精品国产| 黄色女人牲交| 女人被狂操c到高潮| 亚洲电影在线观看av| 露出奶头的视频| 高清在线国产一区| 美女免费视频网站| 很黄的视频免费| 婷婷精品国产亚洲av| 国产成人福利小说| 国产人伦9x9x在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 一个人看视频在线观看www免费 | 天堂√8在线中文| 欧美成人免费av一区二区三区| 免费在线观看影片大全网站| 日韩高清综合在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日韩欧美三级三区| 精品久久久久久成人av| 悠悠久久av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 又黄又粗又硬又大视频| 午夜a级毛片| 午夜福利在线观看吧| 国产单亲对白刺激| 欧美一级毛片孕妇| 特级一级黄色大片| 欧美日韩黄片免| 日韩欧美三级三区| 禁无遮挡网站| 老司机福利观看| 国产爱豆传媒在线观看| 午夜免费激情av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲18禁久久av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 中国美女看黄片| netflix在线观看网站| 亚洲av美国av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 男人舔奶头视频| 岛国在线免费视频观看| 日本三级黄在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 变态另类丝袜制服| 精品一区二区三区四区五区乱码| 欧美乱色亚洲激情| 精品久久久久久,| 国产高清有码在线观看视频| 99热这里只有精品一区 | 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 91av网站免费观看| 制服人妻中文乱码| 久久久国产欧美日韩av| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美日韩黄片免| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产乱人伦免费视频| or卡值多少钱| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产主播在线观看一区二区| aaaaa片日本免费| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 又爽又黄无遮挡网站| 99国产精品一区二区三区| 国产精品乱码一区二三区的特点| av欧美777| av视频在线观看入口| 校园春色视频在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 狠狠狠狠99中文字幕| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 老汉色∧v一级毛片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 变态另类丝袜制服| 麻豆国产av国片精品| 国产精品永久免费网站| 久久伊人香网站| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久亚洲精品不卡| 久久性视频一级片| 成人一区二区视频在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 成人一区二区视频在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 美女cb高潮喷水在线观看 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 91在线精品国自产拍蜜月 | 国产精品久久电影中文字幕| 午夜两性在线视频| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国语自产精品视频在线第100页| 国产高清视频在线观看网站| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| av天堂中文字幕网| 国产av不卡久久| 婷婷丁香在线五月| 久久精品国产清高在天天线| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美黄色淫秽网站| 精品福利观看| 日韩三级视频一区二区三区| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 国产欧美日韩精品亚洲av| www国产在线视频色| 小说图片视频综合网站| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 99久国产av精品| 不卡一级毛片| 我要搜黄色片| 亚洲在线自拍视频| 男女午夜视频在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 在线播放国产精品三级| 日韩欧美 国产精品| 久久中文字幕一级| 国产亚洲欧美98| 中文资源天堂在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产精品久久久av美女十八| 91在线精品国自产拍蜜月 | 国产成+人综合+亚洲专区| 成人国产综合亚洲| 亚洲激情在线av| 香蕉国产在线看| 国产在线精品亚洲第一网站| 操出白浆在线播放| 亚洲午夜理论影院| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 中文字幕最新亚洲高清| 精品人妻1区二区| 丝袜人妻中文字幕| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 1024香蕉在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久香蕉国产精品| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 我要搜黄色片| 淫妇啪啪啪对白视频| 搡老岳熟女国产| 亚洲国产色片| 欧美一级毛片孕妇| 白带黄色成豆腐渣| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品久久久久久久电影 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品电影一区二区在线| x7x7x7水蜜桃| 最好的美女福利视频网| 99久国产av精品| 欧美在线黄色| www.熟女人妻精品国产| 亚洲av免费在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| www.999成人在线观看| 久久人妻av系列| 国产精品,欧美在线| 中文字幕最新亚洲高清| 一二三四社区在线视频社区8| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| www.999成人在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产伦精品一区二区三区四那| 99久久精品热视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 五月伊人婷婷丁香| 一本久久中文字幕| 欧美激情久久久久久爽电影| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产成人欧美在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 一级毛片精品| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久香蕉精品热| 男女视频在线观看网站免费| 99久久99久久久精品蜜桃| АⅤ资源中文在线天堂| 丁香六月欧美| 免费看美女性在线毛片视频| 国内精品一区二区在线观看| 久久久久国内视频| 12—13女人毛片做爰片一| 一级作爱视频免费观看| 男人舔奶头视频| 国产69精品久久久久777片 | 国产精品一区二区免费欧美| 国产真人三级小视频在线观看| bbb黄色大片| 国产精品久久视频播放| 日本一本二区三区精品| 欧美在线黄色| 久久这里只有精品19| 在线观看免费视频日本深夜| 制服丝袜大香蕉在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 草草在线视频免费看| 中文字幕最新亚洲高清| 国产黄a三级三级三级人| 日韩欧美在线乱码| av视频在线观看入口| 一级黄色大片毛片| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 午夜精品久久久久久毛片777| 午夜视频精品福利| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜福利欧美成人| 日韩欧美国产在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久精品国产综合久久久| 91在线精品国自产拍蜜月 | 色噜噜av男人的天堂激情| 伦理电影免费视频| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲国产欧美网| or卡值多少钱| 曰老女人黄片| tocl精华| 日韩精品青青久久久久久| 美女高潮的动态| 久久亚洲精品不卡| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 精品无人区乱码1区二区| 久久人人精品亚洲av| 99久国产av精品| 国产欧美日韩一区二区三| а√天堂www在线а√下载| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国模一区二区三区四区视频 | 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久亚洲精品不卡| 国内精品久久久久精免费| 久久久精品欧美日韩精品| 岛国在线观看网站| 禁无遮挡网站| 精品人妻1区二区| 欧美成人免费av一区二区三区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 热99re8久久精品国产| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美黄色片欧美黄色片| 成人18禁在线播放| 一a级毛片在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲国产色片| 一区二区三区高清视频在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 精品国产美女av久久久久小说| 国产久久久一区二区三区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美3d第一页| 91麻豆精品激情在线观看国产| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 18禁美女被吸乳视频| 日本成人三级电影网站| 在线观看免费午夜福利视频| www日本黄色视频网| 男女那种视频在线观看| 久久精品综合一区二区三区| www日本在线高清视频| 国模一区二区三区四区视频 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产真实乱freesex| 亚洲国产精品999在线| 制服人妻中文乱码| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 成人国产综合亚洲| av女优亚洲男人天堂 | 亚洲第一电影网av| 成年女人永久免费观看视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 两性夫妻黄色片| 久久精品人妻少妇| 国产成人啪精品午夜网站| 床上黄色一级片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产亚洲精品久久久com| 日韩欧美国产一区二区入口| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲中文av在线| 曰老女人黄片| 熟女人妻精品中文字幕| 精品国产三级普通话版| 可以在线观看毛片的网站| 岛国在线免费视频观看| 日韩欧美 国产精品| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 天天一区二区日本电影三级| 久久久色成人| 99re在线观看精品视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久久久久久精品吃奶| 999久久久国产精品视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲中文av在线| 欧美日韩精品网址| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产激情欧美一区二区| 韩国av一区二区三区四区| 国产精品久久视频播放| av天堂在线播放| 中文字幕最新亚洲高清| 偷拍熟女少妇极品色| 日韩中文字幕欧美一区二区| 女人被狂操c到高潮| 欧美黑人欧美精品刺激| 天天一区二区日本电影三级| 国产淫片久久久久久久久 | 99国产精品一区二区三区| 午夜福利视频1000在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 男女那种视频在线观看| 日本a在线网址| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲av电影不卡..在线观看| 变态另类丝袜制服| 精品福利观看| 99热6这里只有精品| avwww免费| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产成人精品无人区| 国产爱豆传媒在线观看| svipshipincom国产片| 久久久久久大精品| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | www.www免费av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲在线自拍视频| 亚洲av熟女| 91字幕亚洲| 欧美成人免费av一区二区三区| 麻豆国产97在线/欧美| 黄色日韩在线| aaaaa片日本免费| 97超视频在线观看视频| 99国产精品一区二区三区| 99精品久久久久人妻精品| 国产高清激情床上av| netflix在线观看网站| 毛片女人毛片| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久久久久中文| 亚洲五月婷婷丁香| 美女午夜性视频免费| 国产1区2区3区精品| 又大又爽又粗| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 日韩av在线大香蕉| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | АⅤ资源中文在线天堂| 国产精品1区2区在线观看.| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲av成人av| 午夜日韩欧美国产| 久久久久国内视频| 搡老岳熟女国产| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 男人的好看免费观看在线视频| 国产真人三级小视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产精品女同一区二区软件 | 免费在线观看成人毛片| 美女黄网站色视频| 日韩精品中文字幕看吧| 免费在线观看成人毛片| 波多野结衣高清作品| 成年版毛片免费区| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品粉嫩美女一区|