湘西杜仲葉中六六六、滴滴涕的檢測(cè)

饒青青，歐陽(yáng)位麒，王 然，張 慧，章發(fā)盛

（湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，湖南吉首 416000）

杜仲葉來(lái)源于杜仲科植物杜仲的葉片，有調(diào)血壓、降血糖、調(diào)血脂等功效，在湖南和河南等地區(qū)有作為食品原料使用的歷史。杜仲是我國(guó)特色植物資源，在我國(guó)分布廣泛，但資源利用率較低[1-3]。將杜仲葉與湘西黃金茶鮮葉混合加工，制成黃金杜仲茶，是湘西地區(qū)具有代表性的杜仲初加工產(chǎn)品，其成品既結(jié)合湘西黃金茶“高氨基酸、高茶多酚、高水浸出物”的品質(zhì)特點(diǎn)，又能發(fā)揮杜仲產(chǎn)品的保健 作用[4]。

茶葉中的農(nóng)藥殘留一直以來(lái)都受到國(guó)家的重視，從1982年農(nóng)業(yè)部“農(nóng)藥安全使用規(guī)定”至今陸續(xù)推出一系列針對(duì)茶葉農(nóng)藥殘留的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，然而這些標(biāo)準(zhǔn)及其限量指標(biāo)與國(guó)際茶葉進(jìn)口國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)之間還存在著一定的差距，需對(duì)我國(guó)茶葉農(nóng)藥殘留的檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)的更新制定進(jìn)行進(jìn)一步的研究與探索[5]。六氟環(huán)己烷（Hexachlorocyclohexane，HCH）俗稱(chēng)“六六六”，是一種廣譜殺蟲(chóng)劑，被用于果蔬、農(nóng)作物的病蟲(chóng)害控制，由于在全球范圍內(nèi)被大規(guī)模使用，在環(huán)境介質(zhì)中大量殘留[6]。雙對(duì)氯苯基三氯乙烷（Dichlorodiphenyltrichloroethane，DDT）俗稱(chēng)“滴滴涕”，是1874年最早被合成的有機(jī)氯農(nóng)藥，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的使用歷程和六六六相似。六六六、滴滴涕具有親脂性、疏水性的特點(diǎn)，是一種難以被生物降解的持久性有機(jī)污染物[7]。此外，其還能沿食物鏈的蓄積從環(huán)境介質(zhì)如水、土壤等中富集到高營(yíng)養(yǎng)級(jí)的生物體中，從而危害其健康。有研究發(fā)現(xiàn)滴滴涕對(duì)鳴禽的腦部區(qū)域中含類(lèi)固醇激素受體的發(fā)音系統(tǒng)等有影響[8]。除此之外，滴滴涕在影響人體生育、造成神經(jīng)毒害等方面也有較多的研究[9]。因此，對(duì)湘西杜仲葉中六六六、滴滴涕的檢測(cè)有利于湘西杜仲黃金茶的生產(chǎn)以及湘西杜仲葉的開(kāi)發(fā)利用。

1 材料與方法

1.1 樣品與試劑

樣品為湘西不同地區(qū)采摘的9批杜仲葉樣品。

乙腈、正己烷為色譜純；甲苯為優(yōu)級(jí)純；固相萃取柱：Tea clean-up Column，1 g，6 mL；對(duì)照品：六六六、滴滴涕混合溶液，濃度均為50 μg·mL-1，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所。

1.2 儀器與設(shè)備

7890B型氣相色譜儀（檢測(cè)器：μECD），安捷倫；色譜柱：DB-17（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；AB135-S型電子天平，梅特勒-托利多；AH-30全自動(dòng)均質(zhì)器，銳科；5810R型離心機(jī)，艾本德。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 儀器條件

氣相條件。氣相色譜設(shè)置：初始溫度150 ℃， 保 持2 min，以5 ℃·min-1升 溫 至280 ℃，保 持 4 min，再以120 ℃·min-1升溫至300 ℃，保持2 min； 進(jìn)樣口溫度：280 ℃；檢測(cè)器溫度：300 ℃；載氣：高純氦氣；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：1.0 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

對(duì)照品溶液制備。取六六六、滴滴涕混標(biāo)制成含量為40 μg·mL-1的使用液（注：含量計(jì)算以各同分異構(gòu)體含量之和為其含量，即六六六含量為α-六六六、β-六六六、γ-六六六和δ-六六六之和，下文同）。準(zhǔn)確量取使用液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、5.0 mL和10.0 mL于100 mL容量瓶中，用正己烷定容并搖勻，制成含量為0.04 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1、2.00 μg·mL-1以及4.00 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品2 g于50 mL離心管中，加入20 mL 乙 腈，15 000 r·min-1均 質(zhì) 提 取1 min，5 000 r·min-1離心5 min，待凈化。準(zhǔn)確取10 mL提取液于用 10 mL乙腈-甲苯（3∶1）預(yù)洗過(guò)的固相萃取柱，下接雞心瓶，再用25 mL乙腈-甲苯洗滌小柱，40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5 mL。加入5 mL正己烷進(jìn)行溶劑交換，重復(fù)兩次，最后使樣液體積約為1 mL，待測(cè)。

圖1 六六六、滴滴涕對(duì)照色譜圖

表1 六六六、滴滴涕線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系

將配制好的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液按1.3.1方法測(cè)定，得到的對(duì)照溶液圖譜如圖1所示，六六六和滴滴涕的各同分異構(gòu)體的線性關(guān)系如表1所示。結(jié)果表明，本方法對(duì)六六六和滴滴涕的同分異構(gòu)體有較好的分離效果，其線性關(guān)系也達(dá)到GB/T 27404—2008要求。經(jīng)計(jì)算六六六檢出限為0.032 1 mg·kg-1，滴滴涕檢出限為0.072 5 mg·kg-1。

2.2 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

按GB/T 27404—2008中檢驗(yàn)方法確認(rèn)技術(shù)要求，進(jìn)行2倍檢出限、5倍檢出限和10倍檢出限 的3水 平 加 標(biāo) 回 收 實(shí) 驗(yàn)，即 按 照0.16 μg·g-1、 0.33 μg·g-1、0.80 μg·g-1的濃度加入對(duì)照溶液，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，六六六、滴滴涕加標(biāo)回收率均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求（60%～120%），RSD也滿足標(biāo)準(zhǔn)要 求（＜30%）。

表2 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 樣品檢測(cè)

按1.3.3處理9批次的樣品并上機(jī)檢測(cè)。結(jié)果表明，9批次樣品均未檢出六六六、滴滴涕，即六六六＜0.032 1 mg·kg-1，滴滴涕＜0.072 5 mg·kg-1。

3 結(jié)論與討論

現(xiàn)階段有關(guān)茶葉中六六六和滴滴涕的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法等[10]。本文選用的氣相色譜法是農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的常用方法，而電子俘獲檢測(cè)器對(duì)六六六、滴滴涕具有較高的靈敏度。

近年來(lái)，世界各國(guó)對(duì)茶葉農(nóng)藥殘留的檢測(cè)項(xiàng)目和限量值要求日趨嚴(yán)格，如日本的肯定列表Positive List System、歐盟標(biāo)準(zhǔn)EC 149/2008中對(duì)六六六、滴滴涕限量值均為≤0.2 mg·kg-1，我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 288—2018中滴滴涕限量值要求為≤0.05 mg·kg-1，日益嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)也使茶葉的生產(chǎn)及檢驗(yàn)都將面對(duì)更大的挑戰(zhàn)。通過(guò)檢測(cè)，湘西地區(qū)的杜仲葉中均未檢出六六六和滴滴涕，這對(duì)湘西杜仲黃金茶的生產(chǎn)具有參考價(jià)值。