胃靈顆粒中芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量測(cè)定

鞏長芹，李志嬌，趙建英

（臨沂市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 臨沂 276001）

胃靈顆粒收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第六冊(cè)，由炙甘草、炒白芍、海螵蛸、炒白術(shù)、延胡索和黨參組成，具有健胃和中，制酸，止痛之功效；用于胃炎，胃及十二指腸潰瘍等癥[1-2]，為2020年山東省風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)抽檢品種。本品種全國生產(chǎn)企業(yè)共有43家，批準(zhǔn)文號(hào)有43個(gè)。因原標(biāo)準(zhǔn)中僅有性狀和檢查兩項(xiàng)，無含量測(cè)定項(xiàng)，本文在參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-16]的基礎(chǔ)上，結(jié)合條件摸索，建立了芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量測(cè)定方法，以對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，為建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、全面控制胃靈顆粒的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 液相色譜儀（美國安捷倫）、XS205電子分析天平（梅特勒托利多）、超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

芍藥苷對(duì)照品（110736-201943，供含量測(cè)定用，含量以95.1 %計(jì)）、甘草苷對(duì)照品（111610-201908，供含量測(cè)定用，含量以95.0 %計(jì)）、甘草酸銨對(duì)照品（110731-202021，供含量測(cè)定用，含量以96.2 %計(jì)）均來源于中國食品藥品檢定研究院；色譜純甲醇和乙腈（默克公司），水為超純水，其余試劑均為分析純。30批次樣品來自省風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)抽檢樣品，涉及全國8家生產(chǎn)企業(yè)（a～h）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.05 %磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，A 20 %；10～20 min，A 20 %→50 %；20～25 min，A 50 %→65 %；25～42 min，A 65 %；42～47 min，A 20 %）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/ min；檢測(cè)波長：230 nm（0～6.5 min；芍藥苷）、280 nm（6.5～19.0 min；甘草苷）、250 nm（19.0～47.0 min；甘草酸），進(jìn)樣量10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取芍藥苷對(duì)照品、甘草苷對(duì)照品、甘草酸銨對(duì)照品適量，精密稱定，分別置入50 ml量瓶，加70 %乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml含芍藥苷0.3205 mg、含甘草苷0.4267 mg、含甘草酸0.4089 mg的溶液，各作為對(duì)照儲(chǔ)備液。分別精密吸取芍藥苷對(duì)照儲(chǔ)備液、甘草苷對(duì)照儲(chǔ)備液、甘草酸對(duì)照儲(chǔ)備液2.5，2.0，5.0 ml，置入同一25 ml量瓶，加70 %乙醇定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液I。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10袋，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置入50 ml量瓶，加入70 %乙醇適量，超聲處理30 min，放冷，用70 %乙醇定容至刻度，搖勻?yàn)V過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性溶液的制備 按胃靈顆粒處方和制法分別制備缺炒白芍和炙甘草的陰性樣品，按照供試品溶液制備的方法制備成陰性溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性和專屬性考察

精密吸取2.2項(xiàng)制備溶液各10 μl，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果3種有效成分分離度良好，均大于1.5；理論塔板數(shù)以芍藥苷、甘草苷和甘草酸峰計(jì)算均不低于4000。專屬性考察見圖1。

圖1 專屬性考察HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液I 0.1，0.25，0.5，1.0，2.5，4.0 ml置入5 ml量瓶，加70 %乙醇至刻度，搖勻，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，以對(duì)照品進(jìn)樣量（X/μg）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的色譜峰峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性方程及相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明，線性范圍內(nèi)3種有效成分的進(jìn)樣量與各自的峰面積呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性方程及其范圍

2.5 精密度考察

精密吸取對(duì)照品溶液I 2.0 ml置入10 ml量瓶，加70 %乙醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液II，按2.1項(xiàng)色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積。結(jié)果，芍藥苷、甘草苷、甘草酸峰面積RSD分別為1.39 %，1.04 %，1.36 %，表明儀器精密度良好，適用于本試驗(yàn)。

2.6 穩(wěn)定性考察

取同一份樣品（企業(yè)a，批號(hào)：200307），按2.2.2項(xiàng)方法制備后，分別于配制后0，2，4，8，12，18，24 h，按2.1項(xiàng)條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄3種成分的峰面積。結(jié)果，芍藥苷、甘草苷、甘草酸峰面積RSD分別為0.86 %，1.55 %，1.28 %，表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)穩(wěn)定，能滿足測(cè)定需要。

2.7 重復(fù)性考察

精密稱取同一批號(hào)的樣品（企業(yè)a，批號(hào)：200307）6份，各0.5 g，按2.2.2項(xiàng)方法制備后，按2.1項(xiàng)條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量。結(jié)果，芍藥苷、甘草苷、甘草酸平均含量分別為31.1，7.6，28.6 mg/袋，RSD分別為1.11 %，1.06 %，1.59 %，表明方法重復(fù)性良好，能滿足測(cè)定需要。

2.8 加樣回收率考察

取已知含量的樣品（芍藥苷31.1 mg/袋、甘草苷7.6 mg/袋、甘草酸28.6 mg/袋，企業(yè)a，批號(hào)：200307）約0.25 g，精密稱取，置50 ml量瓶中，稱取6份，分別精密加入芍藥苷、甘草苷、甘草酸對(duì)照品儲(chǔ)備液5，1，4 ml，按2.2.2項(xiàng)方法制備加樣回收率樣品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，分別計(jì)算芍藥苷、甘草苷和甘草酸的加樣回收率及其RSD值，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，芍藥苷、甘草苷和甘草酸的加樣回收率良好，本方法適合本品測(cè)定。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表（n=6）

2.9 樣品含量測(cè)定

取本次抽檢的30批次樣品，按2.2.2項(xiàng)方法制備后，按2.1項(xiàng)條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品中芍藥苷、甘草苷和甘草酸的含量，結(jié)果見表3和圖2。

表3 各生產(chǎn)企業(yè)樣品測(cè)定結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

圖2 樣品含量測(cè)定結(jié)果圖

由結(jié)果可見，生產(chǎn)企業(yè)b生產(chǎn)的胃靈顆粒中3種有效成分的平均含量較高，且均一性較好，表明該企業(yè)的原料質(zhì)量較好，生產(chǎn)工藝比較穩(wěn)定；生產(chǎn)企業(yè)a的樣品個(gè)別成分平均含量較高，但含量結(jié)果的離散性較大，表明該企業(yè)的生產(chǎn)原料或生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性較差；生產(chǎn)企業(yè)c、d、e、f的樣本量較少，致數(shù)據(jù)量較少，趨勢(shì)并不明顯；生產(chǎn)企業(yè)f僅抽到1批樣品，但是在30批次樣品中其3種成分的含量均最低。

3 討論

3.1 提取方法的選擇

本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-7]，考察甲醇、50 %甲醇、70 %甲醇、乙醇、50 %乙醇、70 %乙醇作為提取溶劑發(fā)現(xiàn)，取樣0.5 g，用70 %乙醇50 ml可較完全提取3種有效成分；考察提取方法選擇超聲、熱回流及不同的提取時(shí)間發(fā)現(xiàn)，超聲30 min能較完全提取有效成分。綜上，最終確定樣品稱取0.5 g，加70 %乙醇50 ml，超聲處理30 min，作為本試驗(yàn)的提取方法。

3.2 色譜條件的選擇

在參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-7]的基礎(chǔ)上，通過摸索條件，考察選擇乙腈-水、乙腈-0.1 %磷酸溶液、乙腈-0.4 %磷酸溶液、乙腈-0.05 %磷酸溶液及不同比例發(fā)現(xiàn)，乙腈-0.05 %磷酸溶液梯度洗脫可將3種成分較好分離；在試驗(yàn)中，用DAD在190～400 nm進(jìn)行波長掃描，發(fā)現(xiàn)芍藥苷、甘草苷、甘草酸分別于230，280，250 nm處有較大吸收，可作為檢測(cè)波長。綜上，色譜條件最終確定流動(dòng)相為乙腈-0.05 %磷酸溶液，梯度洗脫，流速為1 ml/min，柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長為230 nm（芍藥苷）、280 nm（甘草苷）、250 nm（甘草酸）。

3.3 建議

由本文結(jié)果可見，目前本省內(nèi)生產(chǎn)環(huán)節(jié)和市場(chǎng)流通領(lǐng)域的胃靈顆?？傮w質(zhì)量較好，但是存在不同生產(chǎn)企業(yè)之間質(zhì)量差異較大和同一生產(chǎn)企業(yè)不同批次間質(zhì)量離散性較大等問題。針對(duì)所發(fā)現(xiàn)的問題提出以下建議：一是加強(qiáng)生產(chǎn)環(huán)節(jié)的監(jiān)督控制，嚴(yán)格把控原藥材質(zhì)量，生產(chǎn)企業(yè)要進(jìn)一步優(yōu)化生產(chǎn)工藝，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行更深入研究；二是鑒于法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)過于簡單，建議對(duì)本制劑進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高，完善其檢驗(yàn)項(xiàng)目，以加強(qiáng)該制劑整體質(zhì)量的監(jiān)督控制，從而確保藥品安全有效。