丁香和槐角提取物對三黃雞生長性能、抗氧化性能和脂質(zhì)代謝的影響

柴雪萍，梁光哲，刁藍宇，吳智超，梁明振*

（1.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530004；2.廣西宜坤奇飼料有限公司，廣西南寧 530001）

隨著生活質(zhì)量不斷改善，人們對食品安全的要求越趨嚴(yán)格，尤其對肉、蛋、奶等產(chǎn)品。植物提取物能提高畜禽飼料轉(zhuǎn)化率、改善肉品質(zhì)，對機體的免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等方面有十分重要作用，且植物提取物含多種有效成分，能增強機體的自愈和抗應(yīng)激能力。槐角和丁香是我國傳統(tǒng)中藥材之一，具有一定抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用，同時能增強免疫力、改善認(rèn)知障礙等，臨床上常用于治療腸熱便血、肝熱頭痛等疾病；槐角含有黃酮類（蘆丁、槲皮素）和異黃酮類化合物（染料木素、染料木苷、槐角雙苷），黃酮類化合物具有護肝、抗自由基、抗氧化、抗癌等作用；異黃酮類化合物能改善機體免疫機能，是當(dāng)前國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點。丁香能促進胃液分泌，增強胃腸蠕動，保肝、解毒、抑菌等作用。丁香的化學(xué)成分主要有黃酮類、三萜類、苯丙素類等，黃酮類成分有良好的抗氧劑活性、抗炎、抗癌、抗衰老等作用，在國家公布的藥食兩用原料中名列第一。本文旨在研究不同水平植物提取物對三黃雞抗氧化性能和脂質(zhì)代謝的影響，探討植物提取物在三黃雞上的應(yīng)用效果及地方品種雞生產(chǎn)上應(yīng)用的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 采用單因素完全隨機分組設(shè)計，選取體況一致、體重（0.56±0.01）kg 且發(fā)育良好的45 日齡三黃雞母雞256 羽（廣西玉林市興業(yè)縣和豐禽業(yè)有限公司），隨機分為4 組，每組4 個重復(fù)，每個重復(fù)16 羽，各組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0（對照組）、150、200、300 mg/kg 丁香和槐角提取物，預(yù)試期5 d，正試期為70 d。丁香和槐角提取物由北京康華遠景科技股份有限公司提供，活性成分為糊精（載體）、總黃酮2.0%、總多糖3.5%。基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型，參考三黃雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合生產(chǎn)實踐擬定營養(yǎng)需要，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗期采用籠養(yǎng)方式，每天08:00 和15:00 飼喂，保證充足飲水，飼養(yǎng)管理和免疫程序按三黃雞常規(guī)方法進行，定期消毒，每天觀察雞群健康狀況，并記錄死淘數(shù)。

1.3 樣品采集 試驗期共采樣2 次，于80 日齡為第1 次采樣，測定血清抗氧化指標(biāo)；于120 日齡為第2 次采樣，測定血清抗氧化指標(biāo)和血脂脂質(zhì)代謝指標(biāo)。采集的樣品于室溫下傾斜放置0.5 h，3 000 r/min 離心10 min，制備血清，并將血清轉(zhuǎn)移至2 mL 離心管中，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 檢測指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能 飼養(yǎng)期間以重復(fù)為單位對試驗雞進行空腹稱重（稱重前停飼12 h），并記錄作為試驗初始體重，在試雞120 日齡禁飼12 h 后按重復(fù)稱重，作為試驗?zāi)┢隗w重，試驗期間準(zhǔn)確記錄試雞的喂料量、剩料量和死淘數(shù)，計算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、耗料增重比（F/G），計算公式：

1.4.2 血清抗氧化和血脂代謝指標(biāo) 血清抗氧化指標(biāo)丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）、總抗氧化能力（T-AOC）以及血脂代謝指標(biāo)甘油三酯（TG）、膽固醇（CHO）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）使用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定。

1.4.3 脂質(zhì)代謝基因相對表達量 采用Trizol 法提取胸肌和腿肌組織RNA，參照TIAN ScriptKit 反轉(zhuǎn)錄試劑盒提取cDNA 作為模板，采用實時熒光定量PCR 法測定脂肪酸合成酶（）、乙酰輔酶A 羧化酶（）、過氧化物酶體增殖物激活受體（）、過氧化物酶體增殖物激活受體（）基因的mRNA 相對表達量，采用Primer 6.0 軟件，以-actin 為內(nèi)參，在qTOWER3G 熒光定量PCR 儀上進行qRT-PCR 反應(yīng)，使用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定。

1.5 統(tǒng)計分析 采用Excel 2010 對數(shù)據(jù)進行初步處理，用2法[ΔCt=Ct（目的基因-Ct（內(nèi)參基因）] 測定基因表達量，計算基因的相對表達量，用SPSS 20.0 分析單因素方差程序進行差異顯著性檢驗，用Duncan's 法進行多重比較，結(jié)果以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，＜0.05 表示差異顯著，用Graphwad Prism 5 軟件制作基因的相對表達量的柱形圖，用Pearson 檢驗相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 丁香和槐角提取物對三黃雞生長性能的影響 由表2 可知，日糧中添加丁香和槐角提取物增加三黃雞的末重、ADFI、ADG，降低F/G；與對照組相比，150、200、300 mg/kg 提取物組分別增加5.81%、10.32%、4.52%（＜0.05），ADG 分別增加9.60%、16.29%、7.11%（＜0.05），F(xiàn)/G 分別降低6.78%、11.40%、5.29%（＜0.05）；150、200 mg/kg 提取物組ADFI 較對照組分別增加2.15%、3.06%（＜0.05）。

表2 丁香和槐角提取物對三黃雞生長性能的影響

2.2 丁香和槐角提取物對三黃雞血清抗氧化指標(biāo)的影響由表3 可知，200 mg/kg 提取物組血清SOD、GSHPx、CAT 活性較對照組分別增加23.21%、48.31%、82.98%（＜0.05）；各組間T-AOC 活性、MDA 含量均無顯著影響。

表3 丁香和槐角提取物對三黃雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 丁香和槐角提取物對三黃雞血清血脂代謝指標(biāo)的影響 由表4 可知，80 日齡，飼糧添加丁香和槐角提取物可增加三黃雞血清HDL 含量，200 mg/kg 提取物組中血清HDL 含量較對照組增加66.15%（＜0.05），各組血清TG、GHO、LDL 含量均無顯著影響；120 日齡，200 mg/kg 提取物組血清GHO 含量較對照組降低27.49%（＜0.05），HDL 含量較對照組和300 mg/kg提取物組分別增高60%、36.05%（＜0.05）。

表4 丁香和槐角提取物對三黃雞血清血脂代謝指標(biāo)的影響 mmol/L

2.4 丁香和槐角提取物對三黃雞肌肉組織脂質(zhì)代謝基因相對表達量的影響 由圖1 可知，200 mg/kg 提取物組腿肌中ACC、基因的mRNA 表達水平高于對照組（＜0.05）；200 mg/kg 提取物組腿肌中基因的mRNA 表達水平高于對照組和300 mg/kg 提取物組（＜0.05）；150 mg/kg 提取物組腿肌中基因的mRNA 表達水平顯著高于對照組和300 mg/kg 提取物組（＜0.05）；但各組間基因mRNA 的表達水平無顯著影響。

圖1 丁香和槐角提取物對三黃雞腿肌脂質(zhì)代謝基因相對表達量的影響

由圖2 可知，200 mg/kg 提取物組胸肌組織中、基因的mRNA 表達水平高于對照組（＜0.05）；150、200 mg/kg 提取物組胸肌組織中基因的mRNA 表達水平高于對照組（＜0.05）；但各組基因mRNA 的表達水平無顯著影響。

圖2 丁香和槐角提取物對三黃雞胸肌脂質(zhì)代謝基因相對表達量的影響

3 討 論

3.1 丁香和槐角提取物對三黃雞生長性能的影響 生長性能作為評定養(yǎng)殖收益的標(biāo)準(zhǔn)之一。趙艷飛研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加0.01%、0.02%、0.04% 復(fù)合植物提取物（黃酮2.31%，總皂苷1.42%）均能顯著增加三黃雞的ADG，并降低其F/G。肖傳明等研究發(fā)現(xiàn)，在白羽肉雞日糧中添加200 g/t 富含黃酮、生物堿等有效成分的中草藥提取物飼料添加劑可增加白羽肉雞的ADG 及降低其F/G。本試驗結(jié)果也表明，日糧中添加200 mg/kg能顯著增加三黃雞的ADFI 及ADG，并能顯著降低F/G，可能是所用丁香和槐角提取物所含的有效成分具有殺菌抑菌作用，其能改善三黃雞腸道健康狀況，提高試雞對疾病的抵抗能力，從而提高了生產(chǎn)性能。

3.2 丁香和槐角提取物對三黃雞血清抗氧化指標(biāo)的影響Wang 等研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖植物提取物可顯著增加海蘭褐蛋雞血清GSH-Px 活性，降低血清MDA 含量。杜天璽研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加紅車軸草提取物可有效抑制由于免疫應(yīng)激所致的SOD、GSHPx 活性降低。王志祥等研究表明，日糧中添加黃芪提取物能顯著增加肉雞血清SOD、GSH-Px 活性。本試驗結(jié)果也表明，日糧中添加200 mg/kg 丁香和槐角提取物能增加血清SOD、GSH-Px 及CAT 活性，且能夠改善機體抗氧化性能，原因可能是丁香和槐角提取物含有黃酮類（具有抗菌、抗病毒、抗過敏作用）、多酚類（具有清除自由基、調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化酶活性作用）、皂苷類、維生素類等抗氧化活性物質(zhì)，這些物質(zhì)抑制自由基產(chǎn)生，進而提高機體抗氧化力。

3.3 丁香和槐角提取物對三黃雞血清血脂代謝指標(biāo)的影響 葛洪偉等研究發(fā)現(xiàn)，仙人掌提取物能顯著降低廣西麻雞血清膽固醇含量。段凱文等研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加200 mg/kg 百里香酚和八角茴香植物提取物可顯著降低感染產(chǎn)氣莢膜梭菌雛雞血清CHO 含量，顯著增加HDL 含量。本試驗結(jié)果也表明，日糧中添加200 mg/kg 丁香和槐角提取物可顯著增加80 日齡肉雞血清HDL 含量，顯著降低120 日齡肉 雞血清CHO 含量。原因可能是丁香和槐角提取物含有黃酮類、多酚類、皂苷類、維生素類等抗氧化活性物質(zhì)，其中黃酮類是許多植物的主要抗氧化成分，其具有抗菌、抗病毒、抗過敏等生理活性或藥力作用，多酚類物質(zhì)可以直接清除自由基、調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化酶活性，能誘導(dǎo)機體抗氧化酶表達，從而抑制過多自由基產(chǎn)生，進而提高機體抗氧化力。

3.4 丁香和槐角提取物對三黃雞肌肉組織脂質(zhì)代謝基因相對表達量的影響 Cui 等研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AS 與北京油雞肝臟脂肪含量高度相關(guān)，在胸肌和腿肌組織中的表達水平則相對較低。而本試驗結(jié)果表明，F(xiàn)AS 與體脂含量呈正相關(guān)，胸肌和腿肌組織中FAS 含量隨添加量增加而增加，原因可能與家禽品種差異有關(guān)，也可能受添加劑量的影響。關(guān)于丁香和槐角提取物對機體基因表達影響的報道較少，不足以表明丁香和槐角提取物對機體基因有調(diào)控作用。武俊紫等研究發(fā)現(xiàn)，富硒靈芝能夠抑制非酒精性脂肪（NAFLD）大鼠肝臟中基因的mRNA 表達水平。消痰化瘀類植物提取物通過下調(diào)基因mRNA 表達水平，從而減少大鼠的肝臟脂質(zhì)沉積。張向杰等研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼糧中單獨或配合使用山楂葉總黃酮和何首烏二苯乙烯苷均能降低肉雞肝臟組織中基因mRNA 表達水平，從而改善肉雞血清脂質(zhì)代謝。主要在脂肪細胞中高度表達，是脂肪生成的主要調(diào)節(jié)因子，其表達水平對機體內(nèi)脂質(zhì)代謝和脂肪細胞分化有重大影響。研究表明，人參三七川穹提取物能顯著上調(diào)的表達。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加200 mg/kg 丁香和槐角提取物對胸肌和腿肌組織中基因的mRNA 表達水平有顯著作用，而基因mRNA 表達水平隨添加量增加而增加。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加丁香和槐角提取物能夠促進三黃雞生長發(fā)育，有效降低腹脂率，增強抗氧化性能，能顯著上調(diào)三黃雞腿肌組織中基因的mRNA 表達水平和胸肌組織中基因的mRNA 表達水平，但腿肌組織中和胸肌組織中基因的mRNA 表達水平無顯著影響，因此丁香和槐角提取物對三黃雞胸肌和腿肌組織中和基因的mRNA表達水平均有一定調(diào)控作用。在本試驗條件下，以飼糧中添加200 mg/kg 丁香和槐角提取物效果較佳。