QuEChERS/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中14 種蛋白同化激素殘留

王 敬，張海超，賈海濤，艾連峰

（石家莊海關(guān)技術(shù)中心，河北石家莊 050051）

蛋白同化激素是一類可以調(diào)節(jié)機(jī)體代謝，促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)分化，進(jìn)而增強(qiáng)食欲、促進(jìn)發(fā)情、提高飼料轉(zhuǎn)化率的甾體激素，在畜牧養(yǎng)殖業(yè)應(yīng)用廣泛。然而，濫用該類抗生素會(huì)造成其在動(dòng)物組織不同程度的殘留，進(jìn)而引起消費(fèi)者內(nèi)分泌紊亂，導(dǎo)致兒童性早熟，甚至增加致癌、致畸等風(fēng)險(xiǎn)。因此世界各國(guó)均規(guī)定了動(dòng)物源性食品中蛋白同化激素的最大殘留限量，歐盟、美國(guó)和日本等國(guó)家或組織就規(guī)定禁止將蛋白同化激素應(yīng)用到食用型動(dòng)物的飼養(yǎng)中。我國(guó)農(nóng)業(yè)部第250 號(hào)公告將群勃龍、甲睪酮、美侖孕酮等同化激素列為禁用獸藥；GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》要求苯丙酸諾龍和丙酸睪酮不得在動(dòng)物性食品中檢出，同時(shí)世界反興奮劑機(jī)構(gòu)發(fā)布的《禁用清單國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)》將蛋白同化劑列為禁止使用的興奮劑類藥物。

激素通過代謝殘留于動(dòng)物體內(nèi)，含量非常低，大部分在μg/kg 水平，目前國(guó)內(nèi)外分析蛋白同化激素殘留的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣質(zhì)聯(lián)用法（GC/MS）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLCMS/MS）和高分辨線性離子阱法等。由于動(dòng)物源性食品基質(zhì)的復(fù)雜性，HPLC 法和GC/MS 法由于干擾嚴(yán)重，檢出限高難以滿足要求；高分辨線性離子阱法由于設(shè)備昂貴，仍然難以大規(guī)模推廣使用；HPLC-MS/MS 法因其靈敏度高，選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)應(yīng)用廣泛；QuEChERS 是一種新的前處理技術(shù)，廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物樣品中的農(nóng)獸藥殘留檢測(cè)，但采用QuEChERS 前處理方法同時(shí)測(cè)定動(dòng)物源食品中蛋白同化激素殘留的研究尚未見報(bào)道。

目前針對(duì)動(dòng)物源性食品中蛋白同化劑的檢測(cè)也有一些相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，但檢測(cè)基質(zhì)僅局限于肌肉、牛奶和飼料等動(dòng)物源性食品，未涉及調(diào)制肉制品。西方食用調(diào)制肉制品的人群較多，該類食物為動(dòng)物源性食品的重要部分，其監(jiān)管絕對(duì)不能出現(xiàn)漏洞。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確的適用于動(dòng)物源性食品中蛋白同化激素的檢測(cè)方法即可滿足當(dāng)前食品安全檢測(cè)的需求，又能避免重大賽事中運(yùn)動(dòng)員因誤服誤用導(dǎo)致興奮劑陽性事件的發(fā)生。本文采用QuEChERS 前處理技術(shù)，通過優(yōu)化樣品前處理及色譜、質(zhì)譜分析條件，建立了同時(shí)測(cè)定肌肉組織（豬肉、牛肉、羊肉）、調(diào)制肉（火腿、牛肉餅、咖喱肉、羊肉串）、肝臟組織（豬肝、豬腎）、牛奶和雞蛋等基質(zhì)動(dòng)物源食品中14 種蛋白同化激素殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。該方法快速準(zhǔn)確、適用基質(zhì)范圍廣，能為打擊在動(dòng)物源性食品中激素類藥物的違法使用提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

肌肉組織（豬肉、牛肉、羊肉）、調(diào)制肉（火腿、牛肉餅、咖喱肉、羊肉串）、肝臟組織（豬肝、豬腎）、牛奶和雞蛋等樣品 均購(gòu)自當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)；群勃龍（Trenbolone，CAS：1061-33-8）、勃地龍（Boldenone，CAS：846-48-0）、諾龍（Nandrolone，CAS：433-22-0）、睪酮（Testosterone，CAS：58-22-0）、美雄酮（Methandienone，CAS：72-63-9）、甲睪酮（17-methyltesterone，CAS：58-18-4）、脫氫表雄酮（Dehydroepiandrosterone，CAS：53-43-0）、丙酸諾龍（Nandrolone 17-propionate，CAS：7207-92-3）、丙酸睪酮（Testosterone propionate，CAS：57-85-2）、黃體酮（Progesterone，CAS：57-83-0）、雄諾龍（Stanolone，CAS：521-18-6）、司坦唑醇（Stanozolol，CAS：10418-03-8）、美替諾龍（Methenolone，CAS：153-00-4）、苯丙酸諾龍（Nandrolone phenylpropionate，CAS：62-90-8）等14 種蛋白同化激素 純度≥95%，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer 公司；乙腈（色譜純）、甲酸（色譜純）、甲醇（色譜純）、正己烷（色譜純）、-葡萄糖醛酸酶及芳香基硫酸酯酶（-葡萄糖醛酸酶＞100000 Units/mL，芳香基硫酸酯酶＜20000 Units/mL）、QuEChERS 凈化管（300 mg 無水硫酸鎂、50 mg PSA、50 mg C、300 mg 中性氧化鋁）上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；乙酸、乙酸銨、氯化鈉 分析純，廣州化學(xué)試劑廠；實(shí)驗(yàn)用水Milli-Q 超純水 美國(guó)Millipore 公司。

Waters Acquity UPLC/XEVOTQ-S 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀（配電噴霧離子源） 美國(guó)Waters 公司；VORTEX 2 渦旋振蕩器 德國(guó)Heidolph 公司；KQ-200 TDB 超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；ML 204/02 分析天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；CR22GIII 型高速冷凍離心機(jī) 日本HITACHI 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 mg/mL）配制：分別稱取14 種蛋白同化激素標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.1 mg）于10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，4 ℃避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1 μg/mL）配制：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各0.10 mL，置于100 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成1 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，4 ℃冷藏保存。

基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制：準(zhǔn)確量取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，用50%乙腈溶液稀釋空白樣品基質(zhì)提取液，配制成濃度為0.1、0.2、0.5、1、5、10 ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2 樣品前處理 稱取5.0 g 樣品（精確至0.01 g）于50 mL 具塞塑料離心管中，加入10 mL 乙酸銨緩沖溶液（pH5.2），渦旋混勻，再加入-葡萄糖醛酸酶及芳香基硫酸酯酶溶液100 μL，于（37±1）℃振蕩酶解12 h，取出冷卻至室溫，加入20 mL 乙腈、5 g 氯化鈉，渦旋振蕩2 min，4000 r/min 離心5 min。移取10 mL 乙腈層至另一離心管中，加入10 mL 乙腈飽和正己烷，渦旋振蕩1 min 后棄去正己烷層，再加入10 mL 乙腈飽和正己烷重復(fù)操作一次。取上清液約5 mL 置于裝有300 mg 無水硫酸鎂、50 mg PSA、50 mg C和300 mg 中性氧化鋁的另一10 mL 離心管中，渦旋振蕩2 min，10000 r/min 高速離心5 min。準(zhǔn)確移取4 mL 上清液于10 mL 離心管中，40 ℃氮吹至近干，用1 mL 50%乙腈溶液溶解殘?jiān)?。?jīng)0.22 μm 濾膜過濾，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.2.3 儀器條件 色譜柱：Waters Acquity BEH C（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：40 ℃；流動(dòng)相：A 相為0.1%甲酸水溶液，B 相為乙腈；流速：350 μL/min；梯度洗脫程序如下：0～1.0 min，20%B；1.0～5.0 min，20%B～90%B；5.0～6.0 min，90%B～100%B；6.0～6.5 min，100%B～20%B；6.5～8.0 min，20%B。

電離方式：電噴霧正離子源（ESI）；檢測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；離子源溫度：150 ℃；去溶劑溫度：450 ℃；脫溶劑氣流量：1000 L/h；碰撞氣流量：0.17 mL/min。待測(cè)物的母離子、子離子、保留時(shí)間及碰撞能等參數(shù)見表1。

表1 14 種待測(cè)物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Multi-reaction monitoring mass spectrometry parameters of the target compounds

1.3 數(shù)據(jù)處理

在沃特世超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀上通過MassLynx 軟件獲取和分析數(shù)據(jù)，所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的優(yōu)化

外源性同化激素在動(dòng)物體內(nèi)的代謝情況比較復(fù)雜，目前沒有文獻(xiàn)明確指出14 種蛋白同化激素在動(dòng)物體內(nèi)的代謝過程和代謝途徑。黃冬梅等報(bào)道蛋白同化激素多以葡萄糖醛酸結(jié)合形態(tài)存在，酶解可促進(jìn)蛋白同化激素水解成游離態(tài)，從而提高樣品中激素的提取效率。14 種蛋白同化激素屬于脂溶性化合物，極性較弱，難溶于水，易溶于極性有機(jī)溶劑。蛋白同化激素常用的提取溶劑有叔丁基甲醚、乙酸乙酯、乙腈、甲醇等。通過待測(cè)物加標(biāo)回收率，試驗(yàn)考察了豬肉中甲醇、乙腈、乙酸乙酯和叔丁基甲醚四種溶劑的提取效果。由圖1 可知，同甲醇（回收率范圍：63%～94%）、乙酸乙酯（回收率范圍：52%～91%）、叔丁基甲醚（回收率范圍：45%～88%）相比，乙腈（回收率范圍：85%～108%）是最合適的提取溶劑。甲醇對(duì)勃地龍、諾龍、脫氫表雄酮、雄諾龍和丙酸諾龍的提取效果不理想，且甲醇提取樣品雜質(zhì)較多，基質(zhì)干擾嚴(yán)重；乙酸乙酯和叔丁基甲醚的乳化現(xiàn)象嚴(yán)重，常需要進(jìn)行破乳。甲醇極性較強(qiáng)但樣品中的色素和脂肪等基質(zhì)干擾物較多，增加了后續(xù)凈化的難度；乙腈穿透力強(qiáng)具有較強(qiáng)的沉淀蛋白作用，提取效率高；考慮到動(dòng)物源性食品中含有大量的蛋白質(zhì)，采用乙腈提取，既可以鹽析，又可以沉淀蛋白質(zhì)，一定程度上能夠減少基質(zhì)效應(yīng)，有利于后續(xù)的凈化。

圖1 提取溶劑的種類對(duì)蛋白同化激素回收率的影響Fig.1 Different extraction solvents on the extraction rate for anabolic androgenic steroids

對(duì)比了10、20 和50 mL 目標(biāo)物濃度為50 ng/mL的提取溶劑對(duì)回收率的影響，結(jié)果如圖2 顯示，當(dāng)提取溶劑體積為10 mL 時(shí)，除諾龍、甲睪酮、丙酸睪酮和丙酸諾龍外，其他10 種蛋白同化激素的提取率在45%～70%之間；當(dāng)提取溶劑體積為20 mL 時(shí)，回收率均能達(dá)到80%以上，最終用20 mL 乙腈提取。動(dòng)物源性食品中含有大量的脂肪和蛋白質(zhì)，脂肪易被有機(jī)溶劑萃取，對(duì)分析造成嚴(yán)重的基質(zhì)干擾，試驗(yàn)采用乙腈飽和的正己烷萃取可有效去除脂肪。

圖2 提取體積對(duì)蛋白同化激素回收率的影響Fig.2 Different extraction volume on the extraction rate for anabolic androgenic steroids

2.2 凈化劑的選擇與優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)選取了C、HLB、通過式PRiME HLB 固相萃取柱和QuEChERS 四種凈化方式進(jìn)行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，C柱凈化效果較差，基質(zhì)效應(yīng)明顯；HLB 和通過式PRiME HLB 固相萃取柱對(duì)目標(biāo)物的保留性強(qiáng)，需要后續(xù)的乙腈進(jìn)行洗脫，增加了基質(zhì)效應(yīng)的影響，二者雖然結(jié)果重現(xiàn)性好，但存在操作繁瑣、處理時(shí)間長(zhǎng)、成本高等問題。QuEChERS 方法常用的凈化劑有N-丙基乙二胺（PSA）、十八烷基硅烷（C）、石墨化炭黑（GCB）、中性氧化鋁等。PSA 可以去除乙腈提取液中的脂肪酸、糖類、酚類以及極性色素等成分；C能吸附基質(zhì)中部分非極性脂肪和脂溶性雜質(zhì)；中性氧化鋁具有良好的除脂能力；GCB 能夠去除色素和固醇類雜質(zhì)，但對(duì)苯環(huán)類平面結(jié)構(gòu)的藥物有一定的吸附，實(shí)驗(yàn)最終選定PSA、C和中性氧化鋁作為樣品吸附劑。考察了不同配比的PSA、C和中性氧化鋁的凈化效果，結(jié)果如表2 所示。取5 mL 提取液，加入20 mg PSA 和100 mg 中性氧化鋁，分別比較C添加量為10、30、50、70 mg 時(shí)，14 種蛋白同化激素的回收率，發(fā)現(xiàn)C添加量為50 mg 時(shí)14 種蛋白同化激素的回收率最高；加入50 mg C和100 mg 中性氧化鋁，分別比較PSA 添加量為10、30、50、70 mg 時(shí)，14 種蛋白同化激素的回收率，發(fā)現(xiàn)PSA 添加量為50 mg時(shí)，14 種蛋白同化激素的回收率最高；中性氧化鋁對(duì)大部分目標(biāo)物的吸附較少，加入50 mg C和50 mg PSA，分別比較中性氧化鋁添加量為100、200、300、400 mg 時(shí)，14 種蛋白同化激素的回收率，發(fā)現(xiàn)中性氧化鋁在加入300 mg 時(shí)凈化后的溶液較之前清澈透亮，基線較平整，當(dāng)增加到400 mg 時(shí)，回收率會(huì)下降。因此，實(shí)驗(yàn)最終選擇5 mL 提取液加入300 mg無水MgSO、50 mg C、50 mg PSA 和300 mg 中性氧化鋁作為凈化劑組合時(shí)，樣品可以獲得良好的凈化效果，基質(zhì)干擾小，且不會(huì)對(duì)目標(biāo)物產(chǎn)生明顯吸附。

表2 不同條件凈化劑組合蛋白同化激素回收率Table 2 Recovery of anabolic hormones by combination of purifiers under different conditions

2.3 色譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)選擇了Agilent Eclipse Plus C（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）、Waters Acquity BEH C（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）和Agilent Zobrax SB-C（100 mm×3.0 mm，1.8 μm）三種色譜柱進(jìn)行分離。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，由于蛋白同化激素屬于弱極性和中等極性化合物，普通的C柱均能保留目標(biāo)物，但14 種物質(zhì)在Waters Acquity BEH C（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）柱上均能得到優(yōu)異的色譜峰形，重現(xiàn)性好，對(duì)不同極性的化合物均有合適的保留且質(zhì)譜檢測(cè)本底低。因此，試驗(yàn)選擇Waters Acquity BEH C（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）柱。

2.4 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

蛋白同化激素屬于脂溶性化合物，弱極性或中等極性，以乙腈-水為基準(zhǔn)流動(dòng)相，采用“T”三通方式，對(duì)14 種目標(biāo)物的質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化。在正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描，以選擇適當(dāng)?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明，在離子源ESI電離方式下，可以獲得較高豐度的[M+H]母離子。在確定目標(biāo)物的母離子后，采用子離子掃描方式對(duì)子離子進(jìn)行了選擇，通過優(yōu)化毛細(xì)管電壓、一級(jí)錐孔電壓、二級(jí)錐孔電壓、射頻透鏡電壓、碰撞能量以及質(zhì)譜分辨率等參數(shù)，使每種激素的分子離子與特征碎片離子產(chǎn)生的離子強(qiáng)度達(dá)到最大。將液相色譜與三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)機(jī)，對(duì)離子源溫度、去溶劑氣溫度及流量、錐孔氣流量進(jìn)行優(yōu)化，使每種目標(biāo)物的離子化效率達(dá)到最佳，14 種蛋白同化激素的質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。圖3 為蛋白同化激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM 色譜圖。

圖3 蛋白同化激素標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖（0.5 ng/mL）Fig.3 MRM chromatograms of anabolic androgenic steroids (0.5 ng/mL)

2.5 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)（Matrix effects，ME）是指色譜分離時(shí)共洗脫的物質(zhì)改變了待測(cè)成分的離子化效應(yīng)，所引起的信號(hào)的抑制或提高，是目標(biāo)物和基質(zhì)成分相互競(jìng)爭(zhēng)導(dǎo)致的結(jié)果。消除和補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)主要包括優(yōu)化色譜質(zhì)譜條件，優(yōu)化色譜分離條件，多步驟凈化措施，使用內(nèi)標(biāo)物定量，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量等?；|(zhì)效應(yīng)（matrix effect,%）ME=（基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率/純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線的斜率-1）×100?；|(zhì)效應(yīng)為負(fù)值表示存在基質(zhì)抑制效應(yīng)，為正值表示基質(zhì)增強(qiáng)；基質(zhì)效應(yīng)在-15%～15%之間認(rèn)為基質(zhì)效應(yīng)不明顯；絕對(duì)值越大表示基質(zhì)效應(yīng)越強(qiáng)。試驗(yàn)比較了豬肉、豬肝、火腿、牛奶和雞蛋的基質(zhì)效應(yīng)，圖4 發(fā)現(xiàn)不同的樣品基質(zhì)存在不同程度的影響，為消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)待測(cè)物的定量準(zhǔn)確度和精密度的影響，試驗(yàn)采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量法基本減小或消除了基質(zhì)干擾對(duì)結(jié)果的影響。

圖4 14 種蛋白同化激素的空白樣品基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果Fig.4 Matrix effect of 14 anabolic androgenic steroids in different sample matrices

2.6 線性關(guān)系、檢出限和定量限

配制濃度為0.1、0.2、0.5、1、5 和10 ng/mL 的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定，以定量離子的響應(yīng)峰面積（Y 軸）對(duì)相應(yīng)的質(zhì)量濃度（X 軸，ng/mL）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程，線性關(guān)系良好，其結(jié)果見表3。實(shí)驗(yàn)以空白添加法，并根據(jù)前處理過程提取凈化過程以及進(jìn)行測(cè)定時(shí)所受的干擾情況，確定14種蛋白同化激素的檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg。該方法檢出限和定量限低，能夠滿足動(dòng)物源性食品中蛋白同化激素殘留檢測(cè)的要求。

表3 14 種蛋白同化激素的線性關(guān)系及相關(guān)系數(shù)Table 3 Linear relationship and correlation coefficient of 14 anabolic androgenic steroids

試驗(yàn)考察了肌肉組織（豬肉、牛肉、羊肉）、調(diào)制肉（火腿、牛肉餅、咖喱肉、羊肉串）、肝臟組織（豬肝、豬腎）、牛奶和雞蛋等動(dòng)物源性食品，涉及的基質(zhì)數(shù)目多數(shù)據(jù)量大，本文列舉了復(fù)雜且具有代表性的豬肉、豬肝和火腿的加標(biāo)回收率范圍和精密度數(shù)據(jù)。試驗(yàn)分別選取不含14 種蛋白同化激素的豬肉、豬肝和火腿3 種不同類型樣品為空白基質(zhì)，在1.0、2.0和10 μg/kg 添加水平進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)做六次，測(cè)得方法的平均回收率為75.7%～104.1%，精密度范圍為3.60%～12.1%，符合規(guī)定的要求，其檢測(cè)結(jié)果見表4。

表4 蛋白同化激素的回收率范圍及精密度（n=6）Table 4 Average recovery ranges and RSDs (n=6) of anabolic androgenic steroids

2.7 實(shí)際樣品的測(cè)定

分別對(duì)市售的16 批豬肉、10 批火腿、4 批牛肉餅、8 批羊肉串、7 批牛肉、5 批牛肝和24 批牛奶樣品進(jìn)行了14 種蛋白同化激素的檢測(cè)，結(jié)果顯示，74 批動(dòng)物源性食品中除了黃體酮外均未檢出其他13 種蛋白同化激素。牛奶中黃體酮的檢出含量為1.1～3.6 μg/kg，檢出率為10.2%。黃體酮是卵巢黃體分泌的一種天然內(nèi)源性孕激素，在體內(nèi)對(duì)雌激素激發(fā)過的子宮內(nèi)膜有顯著形態(tài)學(xué)影響，為維持妊娠所必須，因此在動(dòng)物源性的食品中具有一定比例的檢出率。在世界反興奮劑機(jī)構(gòu)《2021 年禁用清單國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)》中未涉及黃體酮，因此目前國(guó)內(nèi)外尚未有明確的限量規(guī)定。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了分散固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中14 種蛋白同化激素殘留量。酶解后的樣品經(jīng)乙腈提取，乙腈飽和正己烷脫脂后，采用分散固相萃取凈化結(jié)合基質(zhì)外標(biāo)法校正。結(jié)果表明，該方法前處理提取率高，條件易于控制，方法靈敏度高，重復(fù)性好，可為動(dòng)物源性食品中該類物質(zhì)的快速檢測(cè)提供一定的技術(shù)支持。