新生兒體內(nèi)IgG型ABO血型系統(tǒng)抗體效價(jià)評(píng)估新生兒溶血病嚴(yán)重程度的臨床價(jià)值

楊雪，詹江輝，仲華，閆雪云，洪亞

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 輸血科，河南 新鄉(xiāng) 453100；2.新鄉(xiāng)市第二人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 新鄉(xiāng) 453000)

新生兒溶血主要是指由于母、子血型不合導(dǎo)致的同種免疫性溶血，母親血型抗體經(jīng)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)后，導(dǎo)致胎兒及新生兒紅細(xì)胞遭到破壞。在人類(lèi)多種血型系統(tǒng)內(nèi)，ABO 血型不合導(dǎo)致的溶血性疾病較為常見(jiàn)，Rh血型不合引起的較少見(jiàn)。另外，新生兒溶血還可能是由非同種免疫性因素，例如藥物、感染、自身免疫性疾病、血紅蛋白缺陷、紅細(xì)胞先天酶缺陷等因素引起。新生兒溶血病患兒疾病輕重同溶血程度一致，主要表現(xiàn)為網(wǎng)織紅細(xì)胞升高、貧血及黃疸，病情嚴(yán)重者還可發(fā)生胎兒水腫。新生兒溶血病通常出現(xiàn)在既往有新生兒溶血發(fā)病史、流產(chǎn)史、妊娠史的孕產(chǎn)婦。近年來(lái)新生兒溶血病患兒數(shù)量將逐漸升高，而對(duì)該疾病開(kāi)展研究能夠更好地確保疑似新生兒溶血病胎兒娩出后獲得準(zhǔn)確的診斷及治療，降低疾病給新生兒產(chǎn)生的傷害及后遺癥。臨床對(duì)新生兒溶血病的診斷一般采用溶血三項(xiàng)，檢驗(yàn)報(bào)告屬于定性結(jié)果，在新生兒機(jī)體中IgG 型血型抗體水平定量檢測(cè)方面的研究較少，需要以此為切入點(diǎn)開(kāi)展深入分析。故而，本次研究針對(duì)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院收治的215 例新生兒溶血病患兒進(jìn)行IgG 型ABO 血型系統(tǒng)抗體效價(jià)檢測(cè)，現(xiàn)針對(duì)研究相關(guān)情況作出以下介紹。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究群體為本院2019年1月至2021年12月收治的215 例新生兒溶血病患兒。215 例患兒內(nèi)，男114 例，女101 例；年齡1～6 d，平均(3.26±1.01)d；體 重2.4～4.1 kg，平均(3.22±0.21)kg；血型數(shù)目A 型112例，B 型98 例，AB 型5 例。本研究資料在本院倫理專(zhuān)家查看后允許繼續(xù)實(shí)施研究。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1) 患兒在開(kāi)展各種臨床項(xiàng)目檢查后，均被確診為新生兒溶血??；(2) 妊娠周期在37～42周者；(3) 母體病例資料完整，在妊娠過(guò)程中未出現(xiàn)妊娠并發(fā)癥；(4) 臨床病例資料完整者；(5)家長(zhǎng)了解研究?jī)?nèi)容，同意參與試驗(yàn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1) 存在先天性血管、腦、心臟病變情況者；(2) 存在顱內(nèi)出血、感染、窒息及胎兒窘迫等病變情況者；(3) 雙胎及以上者；(4) 巨大兒、早產(chǎn)兒及畸形兒；(5) 母親患有肝臟疾病、甲亢、妊娠期糖尿病及妊娠期高血壓者。

1.2 研究方法

1.2.1 檢測(cè)儀器和試劑

XN-10 血液細(xì)胞分析儀(采購(gòu)自日本希森美康公司)，AU5800 型全自動(dòng)生化分析儀(采購(gòu)自貝克曼庫(kù)爾特有限公司)。離心機(jī)系統(tǒng)、卡式孵育器(采購(gòu)自美國(guó)BIO-RED)、不規(guī)則抗體篩檢細(xì)胞、人ABO 紅細(xì)胞、新生兒溶血病檢測(cè)卡、ABO 及Rh 單克隆抗體血型檢測(cè)卡采購(gòu)自長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2.2 血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查

分別采集新生兒母親及新生兒抗凝靜脈全血，將其放置在1 000 g 離心力的離心機(jī)中進(jìn)行持續(xù)3 min 離心處理，將紅細(xì)胞與血漿分離后待用。依據(jù)微柱凝膠卡檢測(cè)方式對(duì)不規(guī)則抗體、Rh 及ABO 血型進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 溶血三項(xiàng)檢測(cè)

挑選新生兒紅細(xì)胞壓積，使用生理鹽水進(jìn)行3 次洗滌，使用56℃熱放散試驗(yàn)，并且針對(duì)新生兒血漿實(shí)施游離試驗(yàn)。選用洗滌后紅細(xì)胞開(kāi)展直接抗人球蛋白試驗(yàn)。

1.2.4 測(cè)定新生兒機(jī)體中抗體效價(jià)

針對(duì)游離試驗(yàn)及放散試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性的標(biāo)本，依據(jù)濃度梯度稀釋法對(duì)檢測(cè)液進(jìn)行處理，并將其滴注在凝膠卡里，放置于37℃卡式孵育器中孵育15 min，取出之后進(jìn)行離心(900 r/2 min，1 500 r/3 min)，離心之后取出并記錄效價(jià)結(jié)果。

1.2.5 血細(xì)胞計(jì)數(shù)

采集新生兒靜脈全血，并使用乙二胺四乙酸二鉀進(jìn)行抗凝處理，利用XN-10 血液細(xì)胞分析儀開(kāi)展紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞、血紅蛋白及有核紅細(xì)胞檢測(cè)。

1.2.6 生化檢測(cè)

采集新生兒未抗凝靜脈全血，將其置入37℃溫育箱內(nèi)進(jìn)行持續(xù)30 min 溫育，隨后放置在1 000 g 離心力的離心機(jī)中進(jìn)行持續(xù)5 min 離心處理，選擇AU5800 型全自動(dòng)生化分析儀針對(duì)鉀離子、白蛋白及未結(jié)合膽紅素水平實(shí)施檢測(cè)。

1.3 觀察項(xiàng)目

(1) 分析患兒溶血試驗(yàn)結(jié)果。(2) 分析放散試驗(yàn)和游離抗體試驗(yàn)分布情況。(3) 分析不同放散試驗(yàn)滴度(1∶1～1∶32) 的患兒特點(diǎn)。(4) 分析不同游離抗體試驗(yàn)(1∶1～1∶4) 的患兒特點(diǎn)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1 患兒溶血試驗(yàn)結(jié)果分析

在215 例患兒中，紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率是184 例(85.6%)，游離抗體試驗(yàn)陽(yáng)性率是176 例(81.9%)，直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率是86 例(40.0%)，三種試驗(yàn)方式陽(yáng)性率對(duì)比。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ=129.125，＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 患兒溶血試驗(yàn)結(jié)果分析[n(%)]

2.2 放散試驗(yàn)和游離試驗(yàn)分布情況分析

在患兒中，紅細(xì)胞放散試驗(yàn)抗體效價(jià)最高的是1∶32，6 個(gè)不同放散液效價(jià)組患兒數(shù)量對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ=143.738，＜0.05)。血漿游離抗體試驗(yàn)效價(jià)最高的是1∶4，3 個(gè)不同游離抗體效價(jià)組患兒數(shù)量對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ=434.267，＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 放散試驗(yàn)和游離試驗(yàn)分布情況分析(n)

2.3 不同放散試驗(yàn)滴度(1∶1～1∶32)的患兒特點(diǎn)分析

在放散試驗(yàn)中，患兒機(jī)體內(nèi)抗體效價(jià)越高，病情嚴(yán)重程度越高，治療恢復(fù)時(shí)間越長(zhǎng)，呈現(xiàn)患兒住院時(shí)間隨效價(jià)上升而延長(zhǎng)。見(jiàn)表3。

表3 不同放散試驗(yàn)滴度(1∶1～1∶32)的患兒特點(diǎn)分析

2.4 不同游離抗體試驗(yàn)(1∶1～1∶4)的患兒特點(diǎn)分析

在游離抗體試驗(yàn)中，患兒機(jī)體內(nèi)抗體效價(jià)越高，病情嚴(yán)重程度越高，治療恢復(fù)時(shí)間越長(zhǎng)，呈現(xiàn)患兒住院時(shí)間隨效價(jià)上升而延長(zhǎng)。見(jiàn)表4。

表4 不同游離抗體試驗(yàn)(1∶1～1∶4)的患兒特點(diǎn)分析

3 討 論

當(dāng)前臨床對(duì)新生兒溶血病進(jìn)行預(yù)測(cè)的主要方式是對(duì)夫妻雙方開(kāi)展ABO 血型檢測(cè)，當(dāng)兩者ABO 血型相同時(shí)，則不會(huì)出現(xiàn)ABO 型新生兒溶血?。划?dāng)兩者ABO 血型不相同時(shí)，則有發(fā)生新生兒溶血的可能性。在該種情況下，孕婦需要開(kāi)展IgG 型抗-A、抗-B 效價(jià)測(cè)定，當(dāng)抗體效價(jià)在64 及以上時(shí)存在臨床價(jià)值。在孕婦妊娠期間，IgG 型抗-A、抗-B 效價(jià)出現(xiàn)明顯變化，表明臨床需要針對(duì)孕婦開(kāi)展干預(yù)，進(jìn)而確保胎兒能夠正常生長(zhǎng)發(fā)育。

直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)、游離抗體試驗(yàn)及放散試驗(yàn)是臨床診斷新生兒出生后溶血的主要方式，在敏感度方面，放散試驗(yàn)效果較好。通過(guò)開(kāi)展本次研究后發(fā)現(xiàn)，在215例患兒中，紅細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率為85.6%，游離抗體試驗(yàn)陽(yáng)性率為81.9%，直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性率為40.0%，三種試驗(yàn)方式陽(yáng)性率對(duì)比，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。本次研究通過(guò)對(duì)新生兒溶血患兒機(jī)體中IgG 型抗-A 及抗-B 紅細(xì)胞抗體效價(jià)的差異和臨床效應(yīng)進(jìn)行對(duì)比分析，結(jié)果表明新生兒機(jī)體中放散抗體效價(jià)區(qū)間是1∶1～1∶32，游離抗體區(qū)間是1∶1～1∶4。分析結(jié)果，由于患兒機(jī)體中抗體通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入血液循環(huán)后，同紅細(xì)胞結(jié)合，大部分抗體會(huì)以結(jié)合形式存在。并且本次研究放散實(shí)驗(yàn)選擇的樣本是濃縮紅細(xì)胞，能夠?qū)贵w實(shí)施富集，其也是放散實(shí)驗(yàn)抗體效價(jià)相較于游離實(shí)驗(yàn)較高的主要因素。

本次研究發(fā)現(xiàn)，新生兒溶血病患兒ABO 血型分布無(wú)明顯差異，這提示不同血型導(dǎo)致的新生兒溶血能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)前臨床對(duì)新生兒溶血患兒疾病嚴(yán)重程度的判斷主要是利用血紅蛋白、紅細(xì)胞及膽紅素，當(dāng)IgG 型抗體結(jié)合紅細(xì)胞后，會(huì)引起紅細(xì)胞免疫性溶血，使得血液內(nèi)膽紅素水平逐漸升高。當(dāng)膽紅素在機(jī)體中的聚集遠(yuǎn)高于肝臟代償功能時(shí)，可出現(xiàn)黃疸癥狀。紅細(xì)胞出現(xiàn)免疫性溶血后，會(huì)發(fā)生血紅蛋白水平降低及紅細(xì)胞計(jì)數(shù)下降的情況，而在臨床表現(xiàn)方面，則有缺氧及貧血癥狀。上述實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)改變及臨床表現(xiàn)均是IgG 型抗體同紅細(xì)胞結(jié)合達(dá)到一定程度后才會(huì)出現(xiàn)的，故而通過(guò)觀察上述指標(biāo)會(huì)對(duì)疾病及時(shí)診斷發(fā)生不利影響。

本次研究發(fā)現(xiàn)，患兒機(jī)體內(nèi)抗體效價(jià)越高，病情嚴(yán)重程度越高，治療恢復(fù)時(shí)間越長(zhǎng)，呈現(xiàn)患兒住院時(shí)間隨效價(jià)上升而延長(zhǎng)。針對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行分析，患兒機(jī)體中IgG 型抗-A 及抗-B 紅細(xì)胞抗體效價(jià)越高，抗體水平越多，對(duì)紅細(xì)胞的破壞則越強(qiáng)，這使得紅細(xì)胞發(fā)生溶血，機(jī)體循環(huán)血液內(nèi)膽紅素水平升高。膽紅素在肝血竇面實(shí)施跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)，需要同白蛋白結(jié)合，因此在診斷新生兒溶血時(shí)，血紅蛋白水平下降可發(fā)揮輔助作用。在新生兒溶血治療期間，醫(yī)護(hù)人員需要對(duì)血紅蛋白水平進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)測(cè)，當(dāng)發(fā)生血紅蛋白水平降低時(shí)，需要合理補(bǔ)充，確保機(jī)體內(nèi)膽紅素能夠獲得正常代謝。

綜上所述，新生兒機(jī)體中IgG 型ABO 血型系統(tǒng)抗體效價(jià)能夠?qū)π律鷥喝苎』純簷C(jī)體中抗A/B 抗體水平進(jìn)行判斷，進(jìn)而預(yù)測(cè)患兒機(jī)體中抗體誘發(fā)紅細(xì)胞溶血水平，有利于臨床評(píng)估新生兒溶血病的嚴(yán)重程度和疾病預(yù)后。