高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多巴酚丁胺注射液中鹽酸多巴酚丁胺的不確定度評(píng)定

許倩，汪海宣，劉靜，陳扣寶，汪夢(mèng)美

(合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心，合肥 230001)

缺血性心肌病是發(fā)生率高的一種心臟病，病情發(fā)展速度快，死亡率高[1]。有資料顯示[2]，患者容易轉(zhuǎn)變?yōu)殡y治性心力衰竭，死亡率達(dá)5%。鹽酸多巴酚丁胺注射液是一種擬交感神經(jīng)藥物，激動(dòng)心臟β受體[3-4]，提高血管活性[5-6]，它的主要作用就是治療各種原因?qū)е碌男牧λソ?。小劑量鹽酸多巴酚丁胺注射液在治療嬰幼兒重癥肺炎臨床效果明顯[7]，能夠直接刺激心臟，增強(qiáng)心肌的收縮力，可以使心排血量增加，還可以降低外周血管的阻力，使心肌耗氧量降低，從而使心臟負(fù)擔(dān)減輕，形成良好的循環(huán)。

在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)含量的過(guò)程中，多種因素會(huì)對(duì)測(cè)量結(jié)果造成一定的影響[8-9]，測(cè)量不確定度評(píng)定已成為實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的一項(xiàng)重要參數(shù)，普遍用于各類分析中[10-11]。關(guān)于高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多巴酚丁胺注射液中鹽酸多巴酚丁胺含量的不確定度尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者依據(jù)GB/T 27418—2017 《測(cè)量不確定度評(píng)定和表示》[12]，結(jié)合基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和條件，分析了鹽酸多巴酚丁胺含量不確定度的主要原因，對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行不確定評(píng)定[13-15]，降低檢驗(yàn)中可能引入的誤差，以此獲得更真實(shí)準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

電子天平：XP205 型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒-托特利多有限公司。

高效液相色譜儀：U3000 型，配有DAD 檢測(cè)器，美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司。

移液管：5 mL，A 級(jí)，美國(guó)默克公司。

容量瓶：20、100 mL，A 級(jí)，美國(guó)默克公司。

鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品：含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為99.8%，批號(hào)為101185-201202，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

甲醇、乙腈：色譜純，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

鹽酸多巴酚丁胺注射液樣品：2 mL/支，山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司。

辛烷磺酸鈉：含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為99.0%，天津益仁達(dá)試劑廠。實(shí)驗(yàn)所用其它試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

環(huán)境溫度：22.3 ℃；相對(duì)濕度：55%。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent zorbax C18柱(250 mm×5 mm，美國(guó)安捷倫科技有限公司)；流動(dòng)相：A 相為辛烷磺酸鈉（稱取辛烷磺酸鈉2.6 g，加入1 000 mL 水溶解，再加入3 mL 三乙胺，搖勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至2.5）；B 相為乙腈-甲醇(體積比為18∶82)，A 相與B 相體積比為55∶45，流量為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣體積：20 μL[16]。

1.4 溶液制備

鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品溶液：分別精密稱取鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品0.010 10、0.010 74 g，再分別置于兩只20 mL 溶量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至標(biāo)線，搖勻，濾過(guò)，分別作為對(duì)照品溶液1 (0.505 mg/mL)和對(duì)照品溶液2 (0.537 mg/mL)。

鹽酸多巴酚丁胺注射液樣品溶液：取鹽酸多巴酚丁胺注射液樣品40 支，混合，用5 mL A 級(jí)移液管精密量取溶液5 mL，置于100 mL 容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至標(biāo)線，搖勻，濾過(guò)，平行制備10 份。

2 數(shù)學(xué)模型

鹽酸多巴酚丁胺注射液樣品中鹽酸多巴酚丁胺的質(zhì)量m由式(1)計(jì)算：

3 不確定度來(lái)源

根據(jù)數(shù)學(xué)模型，影響高效液相色譜法測(cè)定鹽酸多巴酚丁胺含量不確定度的因素，主要來(lái)源于兩個(gè)方面。

(1) A 類不確定度。鹽酸多巴酚丁胺重復(fù)性測(cè)量引入的不確定度；

(2) B 類不確定度。鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品稱量、純度引入的不確定度，鹽酸多巴酚丁胺注射液樣品、鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品溶液制備、稀釋及定容引入的不確定度。

4 不確定度評(píng)定

4.1 鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品質(zhì)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量urel(ms)

為使重復(fù)性測(cè)定引入的不確定度可信，平行稱取對(duì)照品兩份，稱量結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 平行2 份對(duì)照品稱量數(shù)據(jù) mg

4.1.1 鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品純度引入的不確定度u1(ms)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)，實(shí)驗(yàn)所用的鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品純度為99.8%，其相對(duì)擴(kuò)展不確定度為2%，k=2，則鹽酸多巴酚丁胺對(duì)照品純度[17]引入的不確定度：

4.1.2 天平稱量的準(zhǔn)確性引入的不確定度u2(ms)

由儀器校準(zhǔn)證書(shū)提供，天平稱量允許的最大誤差為0.02 mg，利用差減法稱量2 次，根據(jù)JJF 1059.1—2012 《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》，采用B類評(píng)定，按照均勻分布考慮，k= 3，故天平稱量的準(zhǔn)確性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

4.2 溶液定容及移液引入的不確定度u(V )

4.2.1 溶液定容

上述各不確定度分量互不相關(guān)，溶液定容所引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

4.2.2 移液

4.3 重復(fù)性測(cè)量引入的不確定度

平行取樣10 份，進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，鹽酸多巴酚丁胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 重復(fù)性測(cè)量鹽酸多巴酚丁胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果

重復(fù)性測(cè)量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

5 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

將各不確定分量匯總于表3。

表3 不確定度匯總表

上述各不確定度分量的來(lái)源彼此獨(dú)立且不相關(guān)，采用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成，合成得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

6 擴(kuò)展不確定度

在95%的置信概率情況下，取包含因子k=2，則擴(kuò)展不確定度：

7 測(cè)量結(jié)果不確定度的報(bào)告與表示

在95%的置信概率情況下，包含因子k=2，測(cè)量結(jié)果：

8 結(jié)語(yǔ)

依據(jù)藥典標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定鹽酸多巴酚丁胺注射液的含量，經(jīng)過(guò)分析計(jì)算和對(duì)照各因素引入的不確定度大小進(jìn)行綜合考量。結(jié)果得出，不確定度主要來(lái)源于人員因素，包括天平稱量和定容體積，其它因素引入的不確定度相對(duì)較小。因此在測(cè)定過(guò)程中，樣品制備過(guò)程中應(yīng)選擇校準(zhǔn)過(guò)的儀器和容量瓶，定期維護(hù)，使其保持良好的工作狀態(tài)；提高人員操作技能，定期對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行實(shí)操培訓(xùn)和加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部人員比對(duì)試驗(yàn)，減少人為誤差，提高實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。