毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定八寶五膽藥墨中冰片的含量

許紅葉，萬(wàn) 慶，孫 松

(1 銅陵市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 銅陵 244000；2 合肥遠(yuǎn)志醫(yī)藥科技開(kāi)發(fā)有限公司，安徽 合肥 230088)

八寶五膽藥墨是由人工麝香、冰片、熊膽、人工牛黃等多味藥材制成，具有消炎解毒、活血止痛、涼血止血、消腫軟堅(jiān)、防腐收斂等功效。用于吐血、咳血、鼻衄、便血、赤白痢下、癰疽瘡瘍、無(wú)名腫毒、頑癬、皮炎、濕疹等。該品種現(xiàn)收載于國(guó)家衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊(cè)中，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控方法僅有鑒別，未對(duì)處方中冰片的含量進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見(jiàn)對(duì)八寶五膽藥墨的冰片的測(cè)定方法，為了更有效地控制本品質(zhì)量保證藥品療效，本文在參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-8]與實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上建立了毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定八寶五膽藥墨中冰片主要成分龍腦的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀 器

GC-2014C氣相色譜儀，日本島津儀器公司；HGH-300E氫氣發(fā)生器、HGA-2L空氣發(fā)生器，北京匯龍公司；SK1200H超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；KQ-100E超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；AB135-S電子天平(d=0.01 mg)，梅特勒-托利多公司；BT25-S電子天平(d=0.01 mg)，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。

1.2 試 劑

對(duì)照品為龍腦(批號(hào)為110881-201709)，中國(guó)食品藥品檢定研究院；八寶五膽藥墨由某廠家提供，批號(hào)為A201101、A201102、A201103；水楊酸甲酯、無(wú)水乙醇為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

以50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的毛細(xì)管柱(DM-17毛細(xì)管柱，柱長(zhǎng)為30 m，柱內(nèi)徑為0.32 mm，膜厚度為0.25 μm)；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器，氣化室溫度：210 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；柱溫：初溫 100 ℃(保持3 min)，以5 ℃/min升溫至130 ℃(保持2 min)，再以50 ℃/min升溫至220 ℃(保持21 min)；載氣：氮?dú)?，流速? mL/min，進(jìn)樣量：1 μL；分流比5:1。理論板數(shù)按水楊酸甲酯峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000；龍腦與水楊酸甲酯峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 校正因子測(cè)定

取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇制成每1 mL含67.83 μg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取龍腦對(duì)照品適量，精密稱定，加入內(nèi)標(biāo)溶液制成每1 mL含43.03 μg的溶液，搖勻，吸取1 μL注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。

2.2.2 供試品溶液的制備

取八寶五膽藥墨10錠，研細(xì)，稱取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液40 mL，混勻，精密稱定重量，超聲處理10 min，放冷，再稱定重量，用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，吸取續(xù)濾液1 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備

按照處方組成，取除冰片外的其余藥材，按制備工藝要求，制備缺冰片的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備缺冰片的陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取上述龍腦對(duì)照品溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、供試品溶液和龍腦陰性對(duì)照溶液各1 μL，按上述“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，注入氣相色譜分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，龍腦和水楊酸甲酯峰的理論塔板數(shù)為53288和78309，分離度13.5，分離度均大于2。缺冰片的陰性樣品溶液色譜圖中，在與龍腦色譜峰相應(yīng)位置上無(wú)干擾，見(jiàn)圖1所示。

圖1 專屬性試驗(yàn)(A-D)

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密吸取龍腦對(duì)照品溶液1 μL注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，其校正因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.47%(應(yīng)≤2.0%)，符合藥典規(guī)定。結(jié)果見(jiàn)表1所示。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

結(jié)果表明：本法測(cè)定冰片含量方法系統(tǒng)適用性良好。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取龍腦對(duì)照品8.91 mg，置10 mL量瓶中，用內(nèi)標(biāo)液溶解并稀釋置刻度，搖勻，精密移取上述溶液5 mL，置50 mL量瓶中，用內(nèi)標(biāo)液溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為母液。精密移取母液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL分別置7個(gè)10 mL容量瓶中，用內(nèi)標(biāo)液稀釋至刻度，搖勻。分別取1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，由龍腦峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值(A)對(duì)溶液濃度(C)作線性回歸，得回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表2所示。

表2 線性考察

結(jié)果表明：在17.250～68.999 μg/mL濃度間，本法的線性良好，回歸方程為y=0.0222x+0.0098(R=1.0，n=7)。

2.6 精密度試驗(yàn)

取批號(hào)為A201101樣品6份，照“3.1”項(xiàng)方法測(cè)定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果見(jiàn)表3所示。

表3 中間精密度考察結(jié)果

結(jié)果表明：RSD%=0.98(n=6)小于2，表明本法中間精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為A201101樣品6份，照“3.1”項(xiàng)方法測(cè)定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見(jiàn)表4所示。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)

結(jié)果表明：RSD%=0.70(n=6)小于2，表明本法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品和批號(hào)A201101樣品適量，照“3.1”項(xiàng)下方法處理，按氣相色譜法(中國(guó)藥典2020年版通則0521)用火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)，于配制后立即注入氣相色譜儀，并分別于0、2、4、8、12、24 h注樣分析，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見(jiàn)表5所示。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明：校正因子RSD%=0.73(n=6)小于2，樣品含量RSD%=1.00(n=6)小于2，在24 h以對(duì)照品溶液和內(nèi)被測(cè)樣品溶液基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密移取龍腦對(duì)照品適量，加入到已知含量(9.26 mg/g)(批號(hào)：A201101)的6份樣品中，按“3.1”項(xiàng)下的方法測(cè)定，計(jì)算回收率[回收率=(測(cè)得量-樣品含量)/加入對(duì)照品量×100%]，數(shù)據(jù)見(jiàn)表6所示。

表6 加樣回收率試驗(yàn)

結(jié)果表明：本法測(cè)定冰片的平均回收率在95%～102%之間，且RSD小于2.0，加樣回收率良好。

2.10 樣品含量測(cè)定

取A201101、A201102、A201103三批樣品，照“3.1”項(xiàng)冰片含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表7所示。

表7 含量測(cè)定

3 結(jié) 論

冰片為八寶五膽藥墨中主要藥味之一，具有開(kāi)竅醒神，清熱止痛的作用。龍腦作為冰片中的主要有效成分選擇測(cè)定龍腦的含量可更好地控制八寶五膽藥墨的藥品質(zhì)量，保證藥品的質(zhì)量及有效性。

鑒于毛細(xì)管柱比填充柱具有更高的柱效和色譜分辨率，以及龍腦分子結(jié)構(gòu)中含有一定的極性基團(tuán)，在參考有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，我們選用了以50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的毛細(xì)管柱作為實(shí)驗(yàn)用色譜柱，通過(guò)實(shí)驗(yàn)考察發(fā)現(xiàn)樣品中龍腦成分在50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的毛細(xì)管柱色譜柱條件擁有良好的分離效果，最終決定選用以50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的DM-17毛細(xì)管柱作為實(shí)驗(yàn)用色譜柱。

通過(guò)比較不同的提取溶劑(無(wú)水乙醇、乙醚、乙酸乙酯)發(fā)現(xiàn)無(wú)水乙醇溶劑提取的結(jié)果較其他溶劑充分，從溶劑的提取效率和環(huán)境安全考慮，選擇無(wú)水乙醇作為提取溶劑?？疾觳煌奶崛r(shí)間(5 min、10 min、20 min)和不同的提取方式(超聲、浸漬)，結(jié)果表明超聲較浸漬提取充分，提取10 min已提取充分，故最終選擇為用無(wú)水乙醇超聲10 min作為樣品的提取方式。