不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間果實硬度及細胞壁降解的影響

張 群，舒 楠，寧密密，李紹華

（1.湖南省農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，湖南 長沙 410125；2.湖南大學研究生院隆平分院，湖南 長沙 410125；3.岳陽峰嶺菁華果業(yè)股份有限公司，湖南 岳陽 414000）

獼猴桃是獼猴桃科（Actinidiaceae）獼猴桃屬的多年生藤本落葉植物，原產(chǎn)于我國，富含抗壞血酸（VC）、膳食纖維及多種礦物質(zhì)，具有很高的營養(yǎng)和保健價值，深受消費者的青睞[1-3]。獼猴桃果實屬于呼吸躍變型，采后易軟化腐爛，貯藏性差[4-5]。軟化是獼猴桃果實采后成熟與衰老的典型特征，也是限制果實長期貯藏的關鍵因素[6-8]。在栽培種植過程中可采取系列方法增強耐貯性：別智鑫等[9]采用氮肥+磷肥+農(nóng)家肥相結合的施肥方式可顯著延長“秦美”獼猴桃果實貯藏期；胥偉秋等[10]在種植過程中施用鈣制劑可提高“金實1號”獼猴桃果實的貯藏性；屈魏等[11]研究表明，適度掛樹預貯可提高“徐香”獼猴桃的耐貯性和抗冷害能力；劉煥[12]研究發(fā)現(xiàn)，膨大劑處理對“翠香”獼猴桃貯藏性的影響大于“徐香”和“秦美”；曾祥碧等[13]采用外黃內(nèi)黑和棕黃色套袋可提高“貴長”獼猴桃的品質(zhì)及貯藏性。

近年來，由于農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結構調(diào)整和獼猴桃高產(chǎn)高效的特點，果農(nóng)栽培獼猴桃的積極性逐漸提高，栽培面積逐年增加[1]。從獼猴桃生產(chǎn)范圍來看，各區(qū)域土壤、氣候、農(nóng)戶的施肥種類、施肥量及管理方法等都存在差異，導致獼猴桃貯藏品質(zhì)和食用品質(zhì)也存在很大差異[1]。近年來，水果種植均要求多施用有機肥，減少化學肥料，提升鮮果品質(zhì)。有研究報道，施用不同肥料[9，14]、不同氮肥[15]會影響獼猴桃產(chǎn)量、品質(zhì)及貯藏性，但目前關于不同施肥處理對獼猴桃采后貯藏期間硬度和細胞壁降解的影響鮮有報道。為尋求減施化肥，增施有機肥對獼猴桃貯藏性能的影響，本研究在岳陽“東紅”獼猴桃園中進行不同的施肥處理，以有機肥和生物菌肥代替部分化肥，生理成熟后采摘，進行室溫貯藏，對果實軟化和細胞壁降解進行研究分析，探明不同施肥處理對獼猴桃采后果實軟化、細胞壁降解及相關酶活性的影響程度，以期為實際生產(chǎn)中減施化學肥料，增施有機肥和生物菌肥，提高耐貯性提供技術與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

1.1.1 材料與試劑

試驗于湖南省岳陽臨湘市五里牌鎮(zhèn)千針村土壤肥力中等的5年齡獼猴桃園中進行。供試樹種為“東紅”獼猴桃。

試驗設置5組施肥處理和對照（CK）6個處理，每個處理3次重復，隨機區(qū)組排列，每小區(qū)選連續(xù)10株長勢一致的樹。肥料種類見表1，具體施肥方案見表2。田間管理按常規(guī)方法進行。

表1 肥料信息Table 1 Fertilizer information

表2 獼猴桃不同施肥處理試驗Table 2 Experiment on different fertilizing methods of kiwifruit

多聚半乳糖醛酸、果膠、羧甲基纖維素鈉、P-硝基酚-β-D-吡喃半乳糖苷：純度大于99.0%,Sigma-Aldrich公司；其他化學試劑均為分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司；實驗室用水由Millipore Milli QRG超純水系統(tǒng)制備。

1.1.2 儀器與設備

Avanti J-26XP型高效冷凍離心機，美國貝克曼庫爾特有限公司；UV7100型紫外分光光度計，日本Shimadzu公司；Mettler Toledo AL204型電子天平、Mettler Toledo Delta 320型pH計，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計

各供試植株的果實于2021年8月18日采摘，選擇大小均勻、無明顯病蟲害和機械損傷的果實作為貯藏試驗用果。分別在各試驗區(qū)采摘上層果360個，采后當天運回實驗室。果實攤晾散熱后均分為3份，分別裝入打有透氣孔的塑料袋中，置于（25±1）℃室溫貯藏，定期取樣檢測，并將果實去皮切塊于液氮中速凍，-80℃超低溫冰箱保存用于細胞壁組分（原果膠、可溶性果膠、淀粉、纖維素）含量和細胞壁軟化酶（多聚半乳糖醛酸酶（PG）、果膠甲酯酶（PME）、纖維素酶（Cx）、β-半乳糖苷酶（β-Gal）及淀粉酶）活性測定。每3 d進行相關指標的測定，試驗設3次重復，結果以xˉ±s表示。

1.2.2 測定項目與方法

1.2.2.1 果肉硬度

從各組中隨機取10個果實，取每個果實的赤道線附近兩對稱部位進行測定。

1.2.2.2 軟化率

獼猴桃手感微軟、可食用的計為軟化果，每3 d統(tǒng)計軟化獼猴桃的數(shù)量（重復3次），軟化率以3 d內(nèi)軟化的獼猴桃數(shù)量占貯藏果實的百分比計。

軟化率（%）=軟化果實數(shù)×100/貯藏果實總數(shù)

1.2.2.3 可溶性果膠和原果膠含量

參照曹建康等[16]的方法略加改進，提取可溶性果膠和原果膠后采用咔唑法測定其含量。原果膠含量以質(zhì)量分數(shù)（%）表示，可溶性果膠含量以mg·g-1FW表示。

1.2.2.4 纖維素含量

參照王學奎[17]的方法，用蒽酮法測定纖維素含量。

1.2.2.5 淀粉含量和淀粉酶活性

參照曹建康等[16]的方法測定。淀粉含量以每克獼猴桃果肉中含淀粉毫克數(shù)表示，淀粉酶活性以每小時每克獼猴桃果肉樣品淀粉水解為葡萄糖的質(zhì)量表示，單位：mg/（g·h）。

1.2.2.6 PME活性

參照Ly-Nguyen等[18]的方法，以每分鐘每克鮮質(zhì)量樣品催化果膠釋放羧酸的物質(zhì)的量為一個酶活力單位。酶活性單位為：mmol/（min·g）。

1.2.2.7 PG活性

參照曹建康等[16]的方法測定。以每小時每克獼猴桃果肉樣品（鮮質(zhì)量）在37℃催化多聚半乳糖醛酸水解生成半乳糖醛酸的質(zhì)量表示。酶活性單位為：mg/（h·g）。

1.2.2.8 Cx活性

參照曹建康等[16]的方法測定。以每小時每克獼猴桃果肉樣品（鮮質(zhì)量）在37℃條件下催化羧甲基纖維素水解形成還原糖的質(zhì)量表示。酶活性單位為：mg/（h·g）。

1.2.2.9 β-Gal活性

參照Gwanpua等[19]的方法測定。以每分鐘每克鮮樣水解釋放對硝基苯酚的物質(zhì)的量表示。酶活性單位為：mmol/（min·g）。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

采用Origin 2016軟件進行作圖分析，SPSS 20.0軟件進行差異顯著性檢驗以及數(shù)據(jù)間相關性分析。

2 結果與分析

2.1 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間果實硬度的影響

果肉硬度是評價果實耐貯性最直觀的外在指標之一，硬度的變化是果實內(nèi)在各種生理生化變化的外在體現(xiàn)[4]。果肉硬度常作為果實適時采收和貯藏的重要指標。

在不同施肥處理下，獼猴桃果肉硬度在室溫貯藏過程中隨時間變化情況如圖1所示。貯藏初期，生物菌肥+有機肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）的硬度大于純化肥組（GD、PH、GD+PH），對照組（CK）硬度最低。如圖1所示，果實在采后貯藏過程中，硬度均呈下降的趨勢。硬度下降過程可分為兩個明顯的階段，貯藏初期硬度快速下降，后期下降緩慢，與“美味”[20]和“秦美”[21]獼猴桃的后熟結果一致。室溫條件下，貯藏第一階段是從采收至貯藏15 d左右，果肉硬度下降迅速。CK組的硬度從（16.80±1.60）kg/cm2降至（0.50±0.05）kg/cm2，下降幅度達97.02%，平均每天的硬度下降率為6.47%；GD組、PH組、GD+PH組、GD+YJ+SW組和PH+YJ+SW組硬度分別從較高值降至（0.56±0.06）kg/cm2、（0.60±0.04）kg/cm2、（0.60±0.10）kg/cm2、（0.60±0.06）kg/cm2和（0.65±0.05）kg/cm2，這一階段稱之為硬度速降期。第二階段（15～21 d）硬度下降速率相對變緩，硬度基本穩(wěn)定在最低值。GD+YJ+SW組、PH+YJ+SW組的硬度分別由（0.60±0.06）kg/cm2、（0.65±0.05）kg/cm2降至0.40 kg/cm2，此階段稱之為硬度緩降期。果實在前后兩個階段的硬度損失率差異達到極顯著水平（P＜0.01），CK組、純化肥組、有機肥+生物菌肥+化肥組，3組間的硬度變化達到極顯著水平（P＜0.01），且CK組硬度始終較低，純化肥（GD、PH、GD+PH）及化肥+生物肥+有機肥（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）組內(nèi)硬度變化差異均不顯著。

圖1 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間果實硬度的影響Fig.1 Effect on hardness of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

本試驗中果實硬度下降速度依次為PH+YJ+SW組＜GD+YJ+SW組＜PH組＜GD+PH組＜GD組＜CK組，耐貯性依次為PH+YJ+SW組＞GD+YJ+SW組＞PH組＞GD+PH組＞GD組＞CK組，說明施用有機肥+生物菌肥+化肥（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW），其耐貯性優(yōu)于施用純化肥（GD、PH、GD+PH）。PH+YJ+SW組最耐貯藏，耐貯性與初始硬度具有相關性，初始硬度值越高，貯藏中硬度變化相對緩慢，更耐貯藏。

2.2 不同施肥處理對獼猴桃果實貯藏期間軟化率的影響

不同施肥處理組的獼猴桃在后熟過程中軟化開始時間及軟化速率均不同[22]。如圖2所示，CK組獼猴桃在室溫貯藏3 d軟化率為5.17%±0.76%，隨后軟化率快速上升，貯藏12 d時，CK組的軟化率達100%。GD組貯藏3 d時軟化率為5.00%±0.50%，貯藏6 d時軟化率達21.00%±3.61%，12 d時達80.00%±5.00%，第15天時完全軟化。PH組貯藏3 d時軟化率達2.10%±0.36%，貯藏6 d時達11.33%±3.21%，貯藏15 d時達100%。GD+PH組在室溫貯藏3 d時軟化率為0，貯藏6 d時為10.33%±1.53%，貯藏15 d時達80.00%±5.00%，貯藏18 d時達100%。GD+YJ+SW組、PH+YJ+SW組在室溫貯藏3 d時軟化率均為0，貯藏6 d時軟化率分別達9.67%±0.58%、5.17%±0.76%，貯藏18 d時軟化率均達100%。可見CK組最不耐貯藏，最早開始軟化，化肥組（GD、PH、GD+PH）內(nèi)差異不大，有機肥+生物菌肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）內(nèi)差異不大，但組間差異大，軟化時間和軟化完畢時間為CK組最早，其次為化肥組，最后為化肥+有機肥+生物菌肥組。施有機肥+生物菌肥+化肥可推遲軟化時間，較耐貯藏。上述結果表明，施肥處理時合理減施化肥，增加有機肥和生物菌肥，可以提高果實耐貯性，推遲軟化時間和軟化率。

圖2 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間果實軟化率的影響Fig.2 Effect on fruit soft percentage of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

2.3 不同施肥處理對獼猴桃貯藏期間細胞壁組分的影響

2.3.1 不同施肥處理對獼猴桃貯藏期間原果膠和可溶性果膠質(zhì)量分數(shù)的影響

果膠是構成細胞壁的主要成分，果實在后熟過程中原果膠在果膠酶的作用下不斷被水解為可溶性果膠，果實變軟[18-19，22-23]。由圖3A可見，果實在貯藏過程中，原果膠質(zhì)量分數(shù)呈直線下降趨勢，與“秦美”[22]、“紅陽”[23]獼猴桃果膠含量的變化結果一致，使用有機肥+生物菌肥+化肥處理的果實原果膠質(zhì)量分數(shù)高于CK組和化肥組，PH組比GD組的原果膠質(zhì)量分數(shù)高，CK組最低。剛采收時，有機肥+生物菌肥+化肥組的原果膠質(zhì)量分數(shù)高于化肥組。GD+YJ+SW組比GD組高0.07個百分點，比PH組高0.02個百分點，比GD+PH組高0.04個百分點。PH+YJ+SW組比GD組高0.09個百分點，比PH組高0.04個百分點，比GD+PH組高0.06個百分點。有機肥+生物菌肥+化肥組內(nèi)、化肥組內(nèi)原果膠質(zhì)量分數(shù)差異不顯著，但均顯著高于CK組（P＜0.05）。

由圖3B可知，在室溫貯藏前期，可溶性果膠含量呈上升趨勢，后期緩慢下降，與“秦美”[22]、“紅陽”[23]獼猴桃貯藏期可溶性果膠變化一致。在采后貯藏9～15 d，可溶性果膠含量迅速上升。CK組室溫貯藏12 d時，可溶性果膠含量達峰值（2.80±0.28）mg·g-1FW?；式M貯藏在12 d時達峰值，其中GD組、PH組、GD+PH組可溶性果膠含量分別達2.62、2.42、2.52 mg·g-1FW；有機肥+生物菌肥+化肥組在貯藏15 d時達峰值，其中GD+YJ+SW組和PH+YJ+SW組分別達2.60、2.51 mg·g-1FW。不同施肥組的果實在室溫貯藏下，可溶性果膠含量達峰值時間有差異，有機肥+生物菌肥+化肥組的時間晚于CK組和化肥組。不同組間增加幅度差異顯著（P＜0.05），組內(nèi)增加幅度差異不顯著。有機肥+生物菌肥處理延緩了原果膠的降解和可溶性果膠含量的升高，從而延緩了果實細胞骨架物質(zhì)果膠的分解，延緩果實軟化。在種植獼猴桃進行施肥處理時，CK組種植前期不施肥，僅后期施壯果肥，果實不耐貯藏。合理施肥處理，減施化肥，增加有機肥和生物菌肥，可以提高獼猴桃果實的耐貯性。

圖3 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間原果膠(A)和可溶性果膠含量(B)的影響Fig.3 Effect on proto-pectin and soluble pectin contents of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

2.3.2 不同施肥處理對獼猴桃貯藏期間纖維素含量的影響

纖維素是構成細胞壁的一個主要成分，是維持果實硬度的主要物質(zhì)，也是評價果實耐貯性的重要指標[22]。纖維素在果實后熟階段逐漸被水解，果實硬度下降。由圖4可知，隨著貯藏時間的延長，獼猴桃果實纖維素含量逐漸降低。在整個貯藏期間，CK組果實的纖維素含量均低于其他組，化肥組果實的纖維素含量低于化肥+有機肥+生物菌肥組。室溫貯藏至21 d時，CK組與初始相比降低了83.75%，化肥組（GD、PH、GD+PH）較剛采收時分別降低了67.91%、63.34%、61.43%，化肥+有機肥+生物菌肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）較剛采收時分別降低了51.80%、45.53%。CK組降幅最大，化肥組次之，有機肥+生物菌肥+化肥組最小?？梢?，合理施肥可延緩果實纖維素的降解，有機肥+生物菌肥+化肥比純化肥處理能更好地抑制纖維素的降解，延緩細胞結構的破壞及果實硬度降低，從而延緩果實軟化進程。

圖4 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間纖維素含量的影響Fig.4 Effect on cellulose content of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

2.3.3 不同施肥處理對獼猴桃貯藏期間淀粉含量的影響

獼猴桃為淀粉積累型果實，其果實含糖量（甜度）、風味等關鍵品質(zhì)主要取決于采前淀粉含量的高低[24-25]。獼猴桃果實中淀粉代謝是一個由積累到降解的動態(tài)變化過程。淀粉作為內(nèi)容物對植物細胞起支撐作用，并能維持細胞的膨脹力，淀粉可被水解轉(zhuǎn)化為可溶性糖，進入呼吸代謝，引起細胞張力下降，導致果實軟化[24-25]。

由圖5可見，不同施肥組獼猴桃果實的淀粉含量在室溫貯藏期間持續(xù)下降。在整個貯藏期間，CK組果實的淀粉含量均低于不同施肥處理組，化肥組果實的淀粉含量低于有機肥+生物菌肥+化肥組。室溫貯至21 d時，CK組與初值相比降低了97.00%，化肥組（GD、PH、GD+PH）較初值分別降低了95.51%、93.94%、94.78%，有機肥+生物菌肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）較初值分別降低了95.33%、95.20%?？梢姡侠硎┓士裳泳徆麑嵵械矸鄣慕到?，有機肥+生物菌肥+化肥比純化肥組能更好地延緩淀粉的降解，抑制果實軟化，提高耐貯性。

圖5 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間淀粉含量的影響Fig.5 Effect on starch content of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

2.4 不同施肥處理對獼猴桃果實貯藏期間細胞壁降解酶活力的影響

2.4.1 不同施肥處理對獼猴桃果實貯藏期間PME和PG活性的影響

PME主要使果膠去甲酯化，催化果膠酯酸轉(zhuǎn)化為果膠酸，破壞多聚糖醛酸鏈間鈣的橫向聯(lián)接而導致細胞分離，同時生成適合于PG作用的底物，進而使PG沿多聚半乳糖醛酸主鏈水解果膠酸，使果膠降解，導致細胞壁解體而使果實軟化[22-23]。由圖6A可知，PME活性隨貯藏時間的延長呈先上升后下降的變化趨勢，與“秦美”[22]、“紅陽”[23]獼猴桃貯藏期PME變化一致。CK組在室溫貯藏6 d時PME活性達到峰值（0.32±0.01）mmol/（min·g），之后呈下降趨勢。化肥組（GD、PH、GD+PH）室溫貯藏到12 d時PME活性達到峰值，分別為（0.32±0.003）、（0.30±0.001）、（0.30±0.005）mmol/（min·g），化肥組間差異不顯著。有機肥+生物菌肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）室溫貯藏到15 d時PME活性達到峰值，分別為（0.31±0.008）、（0.29±0.004）mmol/（min·g），組內(nèi)差異不顯著。有機肥+生物菌肥+化肥組的PME活性峰值低于CK組和化肥組，化肥組的PME活性峰值低于CK組。說明合理施肥可延緩PME活性峰值的出現(xiàn)時間，并降低峰值，延緩果膠的降解及果實軟化，延長貯藏期。

圖6 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間PME（A）和PG（B）活性的影響Fig.6 Effect on PME(A)and PG(B)enzyme activities of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

PG是以PME作用的產(chǎn)物多聚半乳糖醛酸為反應底物的酶。果實貯藏期間，PG的水解作用使果膠降解，細胞壁解體，最終導致果實軟化[22-23]。由圖6B可知，隨著室溫貯藏時間的延長，果實PG活性呈先升后降的趨勢，貯藏前期，CK組果實的PG活性始終高于其他組，化肥組（GD、PH、GD+PH）果實的PG活性高于生物菌肥+有機肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW），且組間差異顯著，但組內(nèi)差異不顯著。不同處理組PG活性出現(xiàn)峰值的時間不同，CK組貯藏12 d時出現(xiàn)峰值（6.19±0.61）mg/（h·g）；化肥組貯藏15 d時出現(xiàn)峰值，依次為GD組（6.01±0.60）mg/（h·g），PH組（5.96±0.58）mg/（h·g），GD+PH組（5.92±0.58）mg/（h·g）；化肥+有機肥+生物菌肥組的果實貯藏15 d時出現(xiàn)峰值，依次為GD+YJ+SW組（5.85±0.57）mg/（h·g），PH+YJ+SW組（5.80±0.56）mg/（h·g）。化肥組（GD、PH、GD+PH）的果實PG活性峰值分別比對照組低2.91%、3.72%、4.36%，化肥+有機肥+生物菌肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）果實的PG活性峰值分別比對照組低5.49%、6.30%?？梢?，合理的施肥處理可降低果實PME和PG活性，從而延緩原果膠的降解，進而延緩果實硬度下降和軟化。施肥處理中采用化肥結合生物菌肥和有機肥優(yōu)于單純施用化肥。減施化肥，提高有機肥和生物菌肥可降低PME和PG活性且延緩峰值出現(xiàn)時間，提高果實的耐貯藏特性。

2.4.2 不同施肥處理對獼猴桃果實貯藏期間CX和β-Gal活性的影響

Cx能降解構成細胞壁的纖維素，從而破壞細胞結構，導致果實軟化[22-23]。由圖7A可知，隨著室溫貯藏時間的延長，果實Cx活性呈先升后降的趨勢。在整個室溫貯藏期間，對照組的Cx活性比其他組高?；式M（GD、PH、GD+PH）果實的Cx活性高于生物菌肥+有機肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）。在貯藏0～18 d Cx活性呈上升趨勢，貯藏到18 d時，Cx活性達峰值。不同施肥處理的獼猴桃果實在貯藏中Cx活性峰值不同，CK組最高，達（6.79±0.64）mg/（h·g），化肥組（GD、PH、GD+PH）的果實Cx活性峰值依次為（6.70±0.66）mg/（h·g）、（6.63±0.65）mg/（h·g）、（6.58±0.64）mg/（h·g），分別比CK組低1.33%、2.36%、3.09%；化肥+有機肥+生物菌肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）的果實Cx活性峰值依次為（6.23±0.61）mg/（h·g）、（5.52±0.57）mg/（h·g），分別比CK組低8.25%、18.70%?？梢姡侠淼氖┓侍幚砜山档凸麑岰x活性，從而延緩纖維素的分解，進而延緩果實硬度下降和軟化。施肥處理以減施化肥，增施有機肥和生物菌肥為宜，即化肥結合生物菌肥和有機肥優(yōu)于單純的施用化肥。

β-Gal主要是切斷細胞壁物質(zhì)的半乳糖苷鍵，可清除半乳糖殘基，對水解果膠和半纖維素均有作用[22，26]。由圖7B可知，β-Gal活性在貯藏期間呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，且處理組始終低于CK組。CK組β-Gal活性在第12天時達到峰值，處理組β-Gal活性在第15～18天時達到峰值，比CK組要晚3～6 d。說明合理的施肥處理延緩了β-Gal活性高峰出現(xiàn)的時間；CK組β-Gal活性高峰值為（0.48±0.04）mmol/（min·g），化肥組（GD、PH、GD+PH）β-Gal活性高峰值分別為（0.46±0.04）、（0.44±0.04）、（0.42±0.04）mmol/（min·g）,依次比CK組低4.17%，8.33%、12.5%；生物菌肥+有機肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）活性高峰值分別為（0.40±0.04）、（0.38±0.04）mmol/（min·g），依次比對照組低16.67%、20.83%。

圖7 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間Cx（A）和β-Gal（B）活性的影響Fig.7 Effect on Cx(A)andβ-Gal(B)enzyme activities of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

可見，合理施肥處理可降低Cx和β-Gal的活性，并延緩Cx和β-Gal活性高峰出現(xiàn)的時間，使細胞壁中纖維素和果膠的分解降速，從而延緩果實的后熟軟化，使果實耐貯性增強，其中，化肥+生物菌肥+有機肥的效果優(yōu)于單純的化學肥料。

2.4.3 不同施肥處理對獼猴桃果實貯藏期間淀粉酶活性的影響

獼猴桃果實采前以貯存淀粉的形式積累碳水化合物，隨著果實后熟進程，淀粉酶水解淀粉形成可溶性糖，使其可溶性固形物含量升高，食用品質(zhì)得以改善[24-25]。

淀粉酶活性提高能促進果實中淀粉的降解，在果實軟化過程中具有重要作用[24-25]。由圖8可以看出，采后獼猴桃果實中淀粉酶活性變化趨勢為先上升后下降。CK組室溫貯藏至9 d時達峰值，淀粉酶活性為（0.74±0.04）mg/（g·h）?；式M（GD、PH、GD+PH）室溫貯至12 d達峰值，淀粉酶活性分別為（0.68±0.02）、（0.66±0.006）、（0.68±0.01）mg/（g·h），分別比CK組低8.10%、10.81%、8.10%。生物菌+有機肥+化肥組（GD+YJ+SW、PH+YJ+SW）室溫貯至15 d達峰值，淀粉酶活性分別為（0.66±0.01）、（0.64±0.02）mg/（g·h），分別比對照組低10.81%、13.51%。淀粉酶活性峰值大小依次為CK組＞化肥組＞生物菌肥+有機肥+化肥組。貯藏中淀粉酶活性峰值出現(xiàn)時間最早為CK組，其次為化肥組，生物菌肥+有機肥+化肥組最晚。可見，種植過程中合理施肥可延緩淀粉酶活性的增加，并降低淀粉酶活性峰值，延緩峰值的出現(xiàn)時間，從而延緩果實淀粉降解和果實軟化。

圖8 不同施肥處理對“東紅”獼猴桃貯藏期間淀粉酶活性的影響Fig.8 Effect on starch enzyme activities of‘Donghong’kiwifruit during storage with different fertilizing methods

2.5 不同施肥處理的“東紅”獼猴桃果實硬度、細胞壁組分及其降解酶活性之間的相關性

獼猴桃果實采后軟化過程常伴隨多糖類物質(zhì)（如淀粉、果膠和纖維素）的降解[22-23]。由表3可見，獼猴桃果實軟化率與原果膠、淀粉、纖維素含量呈極顯著負相關（P＜0.01），相關系數(shù)分別為-0.924、-0.948、-0.910，與可溶性果膠呈極顯著正相關（P＜0.01）。原果膠、淀粉和纖維素為果實細胞壁的組成部分，可支撐細胞的張力，維持果實的硬度。但后熟過程中，細胞壁降解，細胞間的支撐力減弱，果實軟化。果實的原果膠降解為可溶性果膠，淀粉、纖維素降解為可溶性糖類，增加果實的口感。果實細胞壁物質(zhì)降解需要酶的作用，果實軟化率與PG、Cx、β-Gal和淀粉酶活性呈極顯著正相關（P＜0.01），與PME呈顯著負相關（P＜0.05）。Cx、PG、β-Gal和淀粉酶活性對獼猴桃軟化率的貢獻大于PME，Cx、PG、β-Gal和淀粉酶協(xié)同作用于細胞壁，降解原果膠、纖維素和淀粉，使細胞間的支持作用變?nèi)酰瑢е鹿麑嵱捕认陆怠?/p>

表3 獼猴桃果實硬度、細胞壁組分及降解酶活性間的相關性Table 3 Correlation between hardness,cell wall composition and enzyme activity of kiwifruit

綜上所述，通過合理施肥可延緩Cx、PG和β-Gal等細胞壁降解酶的活性，減緩原果膠向水溶性果膠的轉(zhuǎn)換，抑制果膠的水解速度，較好地保持細胞壁的完整性，從而延緩果實軟化。減施化肥，增施有機肥和生物菌肥可更好地延緩果實軟化，增加耐貯性。

3 討論

果實的硬度由細胞壁的完整性決定，細胞壁降解酶活性變化影響果實硬度的變化[5-6，22-25]。獼猴桃果實中原果膠、淀粉和纖維素是構成細胞壁的重要物質(zhì)，果實在后熟期間，原果膠、淀粉和纖維素降解，細胞壁的支撐作用減弱時，細胞間變松散，導致果實逐漸變軟，硬度下降[22-25]。在本試驗中，不同施肥處理的獼猴桃果實剛采收時硬度高，硬度值在16.8～18.5 kg/cm2之間，原果膠含量為1.57%～1.68%，淀粉含量為134.0～138.0 mg/g，隨貯藏時間延長，果實后熟軟化，原果膠下降，可溶性果膠逐漸升高，淀粉含量逐漸下降，同時纖維素質(zhì)量分數(shù)也逐漸下降。果實軟化速率依次為對照組＞化肥組＞化肥+有機肥+生物菌肥組，使用化肥+有機肥+生物菌肥種植的獼猴桃果實中的原果膠、淀粉、纖維素下降最緩慢。相關性分析表明，不同施肥組果實細胞壁物質(zhì)中的原果膠、纖維素和淀粉質(zhì)量分數(shù)與硬度均呈極顯著相關（P＜0.01）。

獼猴桃果實質(zhì)地軟化是由于細胞壁降解酶水解細胞壁多糖，細胞間連接減少，導致細胞間結合力減少，細胞離散，細胞支撐少[22-25]。本試驗結果發(fā)現(xiàn)，不同施肥組獼猴桃果實中，原果膠、可溶性果膠及纖維素含量與PME活性無顯著相關性，但原果膠、可溶性果膠、淀粉和纖維素含量均與PG、Cx、β-Gal和淀粉酶活性呈極顯著相關（P＜0.01），可說明細胞壁降解酶通過降解細胞壁物質(zhì)，增加可溶性果膠的含量，促進果實軟化。

PG水解果膠酸，降解果膠，Cx活性的上升引起纖維素的解聚，導致細胞壁解體。本研究中發(fā)現(xiàn)，不同施肥處理的獼猴桃果實采后果肉組織的PG、Cx、β-Gal、淀粉酶活性均隨貯藏時間的延長呈先上升后下降的變化趨勢。CK組果實中PG、Cx、β-Gal、淀粉酶活性均快速上升，且活性高峰值高于其他施肥組，施用有機肥+生物菌肥+化肥可延緩PG、Cx、β-Gal、淀粉酶活性的上升，進而延緩果實軟化。由此推測，獼猴桃種植中，不同施肥處理對其軟化速率有重要的影響，其中施有機肥+生物菌肥+化肥的果實貯藏性能更強，軟化緩慢。

獼猴桃種植過程中不同施肥處理的果實細胞壁物質(zhì)和細胞壁降解酶活性均有較大的差異。對照組和化肥組的果實在貯藏期間果實細胞壁中原果膠、纖維素、淀粉等物質(zhì)的分解速率高于有機肥+生物菌肥+化肥組，導致果實軟化速率高，降低果實的耐貯性。為延長獼猴桃果實的貯藏時間，防止在貯藏和銷售過程中果實硬度下降速度過快，生產(chǎn)種植中宜減施化學肥料，增施有機肥和生物菌肥。