一株富含多不飽和脂肪酸杜氏藻的鑒定和優(yōu)化培養(yǎng)研究?

陳仁霞，朱葆華，曹子豪，李 赟，靳桂勇，潘克厚,2??

(1.海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國(guó)海洋大學(xué))，山東 青島 266003; 2.青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室 海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266237)

微藻作為水體環(huán)境中的初級(jí)生產(chǎn)者，可高效利用太陽能將CO2和H2O轉(zhuǎn)化為淀粉、油脂和多糖等有機(jī)物，目前已被廣泛開發(fā)應(yīng)用于生物柴油和生物餌料領(lǐng)域[1]。然而，微藻在生產(chǎn)過程中存在生物量低和生產(chǎn)成本高的問題，且在不同環(huán)境條件下微藻的蛋白質(zhì)、類胡蘿卜素和多不飽和脂肪酸等活性物質(zhì)的含量不同，這些問題阻礙了微藻的規(guī)?；a(chǎn)。當(dāng)前，主要的解決途徑是篩選活性物質(zhì)含量高的藻種并通過優(yōu)化其培養(yǎng)條件獲得較大的生物量[2-3]。

多不飽和脂肪酸對(duì)機(jī)體有非常重要的生理調(diào)節(jié)功能[4]。例如二十碳五烯酸(EPA)能降低血液中甘油三酯和膽固醇的含量，從而加快體內(nèi)飽和脂肪酸的代謝速率[5]；二十二碳六烯酸(DHA)是促進(jìn)大腦發(fā)育的重要物質(zhì)，被認(rèn)為具有誘導(dǎo)神經(jīng)再生的功能[6]；EPA與DHA是神經(jīng)細(xì)胞膜的重要組成成分，主要從深海冷水魚魚油中獲取，資源稀缺。有研究表明α-亞麻酸可以在人體內(nèi)通過去飽和酶和延伸酶的催化，轉(zhuǎn)化為EPA和DHA[7]。此外，α-亞麻酸還有增長(zhǎng)智力、保護(hù)視力和延緩衰老等功效，具有重要的藥用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值；多不飽和脂肪酸中的亞油酸有降低血液膽固醇、降血壓和防治動(dòng)脈粥樣硬化等功效，被稱為“血管清道夫”[8]。亞麻酸和亞油酸都是人體必需的脂肪酸，需從外界獲取，因此亟需尋找富含亞麻酸及亞油酸的原料。微藻具有富含多不飽和脂肪酸、生長(zhǎng)快和可直接食用等優(yōu)點(diǎn)，成為生產(chǎn)亞麻酸、亞油酸和EPA等多不飽和脂肪酸的重要原料。

杜氏藻(Dunaliella)屬于綠藻門(Chlorophyta)綠藻綱(Chlorophyceae)團(tuán)藻目(Volvocales)杜氏藻科(Dunaliellaceae)。杜氏藻對(duì)鹽度有廣泛的適應(yīng)性，在鹽度2～350的水域均能存活[9]。另外杜氏藻富含多糖、類胡蘿卜素和多不飽和脂肪酸等活性物質(zhì)，具有無細(xì)胞壁、生長(zhǎng)速度相對(duì)較快和抗逆性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)被廣泛應(yīng)用于規(guī)?；a(chǎn)。因?yàn)槎攀显宓纳锪恳资軠囟取Ⅺ}度和光照等培養(yǎng)條件的影響[10-12]，所以可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件獲得更高的生物量和更豐富的活性物質(zhì)[13]。

本研究對(duì)一株分離自內(nèi)蒙古哈馬太湖的藻株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定該藻株為Dunaliellasp.，將其命名為HK128。并在此基礎(chǔ)上探討不同培養(yǎng)條件對(duì)HK128生長(zhǎng)的影響，初步評(píng)估HK128生產(chǎn)多不飽和脂肪酸的潛力，進(jìn)而為其開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藻種、培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基

HK128是從內(nèi)蒙古哈馬太湖(39°06′N，108°02′E)中分離的一株綠藻。哈馬太湖常年平均水深1.5 m，四季溫度12.5～26.0 ℃，pH在8.5以上?；诠R太湖水域微堿的特點(diǎn)，將分離的HK128接入Zarrouk培養(yǎng)基中進(jìn)行為期7 d的預(yù)培養(yǎng)，而后收獲、轉(zhuǎn)接，進(jìn)入正式培養(yǎng)。預(yù)培養(yǎng)在光暗比12 h∶12 h，溫度25 ℃，光照強(qiáng)度75 μmol/(m2·s)和轉(zhuǎn)速160 r/min的光照震蕩培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

1.2 HK128的鑒定

本實(shí)驗(yàn)在Zeiss imager Z2微分干涉顯微鏡下對(duì)HK128進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀測(cè)，包括藻細(xì)胞形態(tài)和大小。隨后取指數(shù)生長(zhǎng)期的藻液，用HP Plant DNA Kit(50)試劑盒法(OMEGA)提取HK128微藻基因組DNA，并設(shè)計(jì)2對(duì)引物18SF: 5’GCTGAAACTTAAAGGAATTGACGG3’, 18SR: 5’GAGAGCCAAGATATCCGTTGTTG3’；5.8SF: 5’TGCTGAAACTTAAAGGAATTGACG3’，5.8SR: 5’ GAGAGCCAAGATATCCGTTGTTG3’分別擴(kuò)增18S rDNA和5.8S rDNA部分序列[14]。PCR產(chǎn)物送至上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測(cè)序。獲得的擴(kuò)增序列經(jīng)與GenBank中相關(guān)序列信息進(jìn)行BLAST相似性檢索，選取相似性大于97%的序列，以光滑念珠菌(Candidaglabrata)、衣藻(Chlamydomonas)和小球藻(Chlorella)等作外類群，用Mega5.1鄰接法(Neighbor-joining)建立系統(tǒng)進(jìn)化樹，重復(fù)1 000次計(jì)算bootstrap值，用于分離藻株的分子鑒定。

1.3 HK128培養(yǎng)條件優(yōu)化

為優(yōu)化HK128的培養(yǎng)條件，本研究分別比較了在不同的培養(yǎng)基、初始pH和鹽度等條件下(見表1)藻株HK128的生長(zhǎng)情況。實(shí)驗(yàn)流程為:先篩選出適宜HK128生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，然后進(jìn)行溫度、初始pH、鹽度和光強(qiáng)的優(yōu)化。

表1 實(shí)驗(yàn)變量及變化范圍

1.4 分析方法

1.4.1 藻細(xì)胞密度及生物量測(cè)定 利用藻細(xì)胞的光密度(OD)和單位體積藻液中的藻細(xì)胞干質(zhì)量(DCW)表征藻細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。藻細(xì)胞光密度(OD)采用分光光度計(jì)測(cè)定750 nm波長(zhǎng)下的吸光值。用血球計(jì)數(shù)板法統(tǒng)計(jì)細(xì)胞密度，建立細(xì)胞密度與吸光度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線：

Y=1374.5X-159.76,R2=0.99。

藻細(xì)胞光密度OD750與細(xì)胞密度的相關(guān)性系數(shù)為0.99，顯示OD750與細(xì)胞數(shù)之間具有較好的相關(guān)性。

藻細(xì)胞干質(zhì)量的測(cè)定方法如Lamers等[15]所述。將GF/C玻璃纖維素膜(直徑47 mm，孔徑0.45 μm)烘至恒重m0。取5 mL藻液，抽濾藻液至生物膜上，將生物膜放入65 ℃的烘箱，烘干至恒重m1。利用公式：藻細(xì)胞干質(zhì)量(g/L)=(m1-m0)×200得出微藻的生物量。

1.4.2 藻細(xì)胞的葉綠素a、b及總類胡蘿卜素含量的測(cè)定 取第7天指數(shù)生長(zhǎng)期的藻液5 mL測(cè)定葉綠素a、b以及總類胡蘿卜素，測(cè)定方法采用95%乙醇提取法[16]。按以下公式計(jì)算藻細(xì)胞的葉綠素含量：

CChlorophyll a(mg/L)=13.95×OD665-6.88×OD649；

CChlorophyll b(mg/L)=24.96×OD649-7.32×OD665；

2.05×Chlorophylla-114.8×Chlorophyllb)。

式中：C表示葉綠素含量；T表示總類胡蘿卜素含量；OD665、OD649和OD470分別表示藻液在665、649和470 nm下的光密度值。Chlorophylla表示葉綠素a，Chlorophyllb表示葉綠素b, Total carotenoids表示總類胡蘿卜素。

1.4.3 藻粉主要生化成分的測(cè)定 初始接種的OD750為0.2左右，收集第7天的藻液，離心(4 500 r/min，4 ℃，10 min)，蒸餾水洗滌2次，再次離心后倒掉上清，收集藻泥并于真空冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24 h，冷凍干燥的藻粉放置于玻璃干燥皿中避光暫存。

1.4.3.1 可溶性總蛋白含量測(cè)定 采用BCA蛋白測(cè)定試劑盒法測(cè)定可溶性總蛋白[17]。稱取0.03 g冷凍干燥的藻粉，加入3 mL磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，pH=7.4)于10 mL離心管中，冰浴條件下進(jìn)行超聲細(xì)胞破碎。取離心后上清20和200 μL試劑混合(1 mL Cu試劑和50 mL BCA試劑混合)，加入酶標(biāo)板中，放恒溫培養(yǎng)箱于37 ℃孵育25 min。最后，用酶標(biāo)儀562 nm波長(zhǎng)測(cè)吸光值，通過牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=0.847 7X+0.080 9,R2=0.99換算得到藻粉中可溶性蛋白的含量。

1.4.3.2 多糖含量測(cè)定 采用硫酸蒽酮法測(cè)定微藻中多糖含量[18]。稱取0.01 g冷凍干燥后的藻粉，加入6 mL磷酸緩沖溶液于10 mL離心管中，振蕩混勻。超聲破碎20 min，沸水浴30 min。取4 mL溶液，加0.2 mL硫酸鋅，沸水浴5 min；加0.4 mL亞鐵氰化鉀，振蕩混勻后離心。取1 mL上清于玻璃管中，加入硫酸蒽酮溶液4 mL，沸水浴10 min，冷水迅速冷卻至室溫15 min。測(cè)量620 nm處的吸光值，并通過制作的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=0.006 3X+0.030 1,R2=0.99，換算得到藻粉中多糖的含量。

1.4.3.3 總脂含量測(cè)定 采用質(zhì)量量法[19]，稱取0.04 g(m0)冷凍干燥的藻粉，加2 mL氯仿和1 mL甲醇于10 mL離心管中，渦旋振蕩混勻12 h。將離心管放置于有冰水混合物的玻璃燒杯中，超聲破碎20 min。離心(4 500 r/min)10 min，將上清液移至新的離心管中。重復(fù)3次上述過程，該過程合并所有上清至新的離心管中。上清液中加入1.2 mL 0.9%NaCl，渦旋震蕩后，靜置分層。吸取下層液體，轉(zhuǎn)移至恒重的玻璃管中(m1)用水浴將液體完全揮發(fā)，放置于65 ℃烘箱中烘干，冷卻至恒重稱重m2?？傊浚?/p>

TTotallipidcontent=((m2-m1)/m0)×100%。

1.4.3.4 藻粉脂肪酸組成分析 采用Lamers等[15]氣相色譜分析方法，稱取0.01 g藻粉,加入1 mL(2 mol/L)KOH-CH3OH溶液，混勻，將玻璃管放入75 ℃水浴鍋中皂化，甲酯化30 min，冷卻至室溫。加入1.5 mL HCl-CH3OH(3 mol/L)溶液，混勻。75 ℃水浴鍋中酸化30 min，冷卻至室溫。加入2 mL蒸餾水，0.5 mL正己烷，混合均勻。3 500g離心10 min。吸取上層正己烷注入棕色進(jìn)樣瓶中，冷凍避光保存，供色譜分析。將氣相色譜儀的條件設(shè)置如下：進(jìn)樣口溫度250 ℃；內(nèi)部程序升溫至150 ℃維持1 min，再以15 ℃/min升高到250 ℃保留10 min；載氣為N2和H2，流速分別為40和25 mL/min。采用面積歸一法，將樣品所有組分都顯示出峰值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用被測(cè)組分的面積占總面積的百分比表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析

計(jì)算3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差(n=3)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用SPSS分析軟件進(jìn)行單因素方差分析，p<0.01表示差異極顯著，p<0.05表示差異顯著，用Origin Pro 9.1進(jìn)行作圖分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 HK128的形態(tài)學(xué)觀察及分子生物學(xué)鑒定

用玻璃微吸管法將分離的藻株在Zarrouk培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)7 d后鏡檢。在48孔板中將目標(biāo)藻株進(jìn)行多次稀釋，并在固體Zarrouk培養(yǎng)基中涂布獲得單藻落。挑取單藻落轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基，在光暗比12 h∶12 h、溫度25 ℃、光照強(qiáng)度75 μmol/(m2·s)條件下培養(yǎng)。在液體培養(yǎng)基中HK128藻細(xì)胞呈綠色的紡錘形(見圖1)，長(zhǎng)8～10 μm。有2條等長(zhǎng)的頂生鞭毛，游動(dòng)迅速。細(xì)胞側(cè)緣有一個(gè)紅色的眼點(diǎn)，中部有一個(gè)杯狀色素體。藻細(xì)胞沒有堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，周邊只有一層薄薄的生物膜包裹。根據(jù)藻細(xì)胞形態(tài)初步確定HK128為一株杜氏藻。

圖1 HK128藻細(xì)胞形態(tài)

本研究擴(kuò)增得到的HK128 18S rDNA和5.8S rDNA序列長(zhǎng)度分別為865和915 bp。結(jié)果顯示，獲得的與HK128序列相似性大于97%的序列共12條，均為杜氏藻屬的微藻。使用Mega5.1的鄰接法(Neighbor-joining)，利用擴(kuò)增序列及相似性較高的序列構(gòu)建18S rDNA和5.8S rDNA序列系統(tǒng)進(jìn)化樹(見圖2)。結(jié)果顯示，HK128的18S rDNA與杜氏藻屬中Dunaliellasalinastrain(KMMCC1064)在NJ樹上聚為一支，相似距離為95%。HK128的5.8S rDNA與杜氏藻屬中特氏杜氏藻Dunaliellatertiolectastrain(CCAP19/23)在NJ樹上聚為一支，相似距離達(dá)100%。核糖體5.8S rDNA具有很低的遺傳保守性，是進(jìn)行生物種內(nèi)及種間的理想分子標(biāo)記[20]。但由于杜氏藻屬微藻在分類鑒定中仍存在著許多爭(zhēng)議，且分類體系尚未完全確立，所以本研究結(jié)果只能表明HK128藻株是Dunaliellasp.。

圖2 基于18S rDNA和5.8S rDNA序列信息構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(Neighbor-joining法)

2.2 HK128的適宜培養(yǎng)基

HK128在3種培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 d，結(jié)果顯示(見圖3)，HK128在Zarrouk培養(yǎng)基(鹽度20，pH 9.5)中生長(zhǎng)最優(yōu)。在0～7 d保持持續(xù)增長(zhǎng)的趨勢(shì)，培養(yǎng)基顏色逐漸加深至墨綠色。培養(yǎng)至第7天，HK128在Zarrouk培養(yǎng)基中的OD750是在f/2培養(yǎng)基(鹽度30，pH 8.11)中OD750的2.02倍，是在BG11培養(yǎng)基(鹽度5，pH 7.23)中OD750的5.43倍。說明HK128藻株更適合在Zarrouk培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

((a)HK128在三種培養(yǎng)基中OD750的變化;(b)第7天HK128藻液顏色。(a)Changes of OD750 of HK128 in three media;(b)Day 7 HK128 algal liquid color.)

2.3 HK128培養(yǎng)條件優(yōu)化

Santhanam等[21]和Dinesh Kumar等[22]的研究結(jié)果表明溫度、鹽度和光強(qiáng)等培養(yǎng)條件對(duì)微藻細(xì)胞的生長(zhǎng)有顯著影響。有報(bào)道表明D.salina在30 ℃、D.viridis在37 ℃、D.tertiolecta在26 ℃生長(zhǎng)最佳[23]。本研究中，HK128在20、25和30 ℃具有相同的生長(zhǎng)趨勢(shì)(見圖4(a))，在第7天25 ℃時(shí)HK128藻細(xì)胞的OD750(1.5)顯著高于20 ℃(1.4)和30 ℃(1.1)時(shí)的OD750(p<0.01)，說明HK128合適的培養(yǎng)溫度為25 ℃，與已報(bào)道的研究結(jié)果基本一致[22]。在戶外實(shí)際生產(chǎn)過程中，溫度波動(dòng)大，HK128藻株有較寬的溫度適應(yīng)范圍，這對(duì)于實(shí)際生產(chǎn)有重要意義。

pH從改變環(huán)境酸堿度和碳酸鹽平衡系統(tǒng)(CO2+H2OH2CO3H++HCO3-2H++CO32-)兩方面對(duì)微藻的生長(zhǎng)產(chǎn)生影響[24-25]。本實(shí)驗(yàn)利用NaHCO3和Na2CO3不同的添加比例來調(diào)節(jié)Zarrouk培養(yǎng)基的初始pH(9.3～11.5)。如圖4(b)所示，隨著培養(yǎng)液初始pH增大，藻細(xì)胞生長(zhǎng)速度逐漸降低。在第7天,高pH組(pH=11.0和pH=11.5)的細(xì)胞密度顯著低于低pH組(pH=9.3和pH=9.5)的細(xì)胞密度(p<0.05)，這表明HK128藻株適宜初始pH為9.3～9.5。Mclachlan等[26]發(fā)現(xiàn)杜氏藻能在pH為6.0～10.5的環(huán)境中正常生長(zhǎng)，最適值為8.0～9.0，這與本研究的結(jié)果基本一致，說明HK128藻株對(duì)堿性環(huán)境具有較強(qiáng)的耐受性。

在溫度25 ℃、光暗比12 h∶12 h、初始pH=9.3，光強(qiáng)75 μmol/(m2·s)培養(yǎng)條件下，通過向Zarrouk培養(yǎng)基添加0～1.0 mol/L NaCl將培養(yǎng)液鹽度調(diào)至20～55，比較HK128的生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示(見圖4(c))，HK128藻株在鹽度20～41的培養(yǎng)基中1～7 d持續(xù)增長(zhǎng)，較低鹽度組(20和27)的細(xì)胞密度顯著高于較高鹽度組的細(xì)胞密度(34和41)，而在高鹽度組(48和55)HK128藻細(xì)胞不能正常生長(zhǎng)，可見HK128是一株適宜低鹽度培養(yǎng)的杜氏藻，與Cifuentes等[27]發(fā)現(xiàn)D.tertiolecta適宜在低鹽度生長(zhǎng)的結(jié)果一致。HK128藻株適應(yīng)低鹽度的原因可能是長(zhǎng)期培養(yǎng)于低鹽度的培養(yǎng)基中。

光強(qiáng)對(duì)HK128生長(zhǎng)的影響如圖4(d)所示，在光強(qiáng)為75～200 μmol/(m2·s)范圍內(nèi)，HK128藻株的OD750隨著光照強(qiáng)度的增加相應(yīng)提高，但當(dāng)光強(qiáng)超過200 μmol/(m2·s)，再提高光強(qiáng)并未明顯促進(jìn)藻細(xì)胞的生長(zhǎng)，但也未出現(xiàn)明顯的光抑制現(xiàn)象，說明HK128對(duì)高光強(qiáng)具有很強(qiáng)的適應(yīng)性。

圖4 HK128的OD750在不同溫度(a)、初始pH(b)、鹽度(c)和光強(qiáng)(d)下的變化

在上述獲得的優(yōu)化條件下，即溫度25 ℃，初始pH=9.3，鹽度20，光強(qiáng)200 μmol/(m2·s)，在第7天HK128的生物量可達(dá)3.6 g/L，是Morowvat等[28]優(yōu)化的D.salina生物量(1.015 g/L)的3.54倍。此外，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，培養(yǎng)基的pH從初始的9.3增至第7天的10.23(見圖5)，說明HK128具有較強(qiáng)的pH耐受特性。

圖5 在優(yōu)化條件下HK128生物量(a)及pH(b)的變化

收集培養(yǎng)至第7天的藻粉，分析HK128的主要生化成分，結(jié)果如表2所示。其總脂含量為細(xì)胞干質(zhì)量的24.83%、可溶性蛋白為細(xì)胞干質(zhì)量的17.70%、多糖為細(xì)胞干質(zhì)量的11.99%、葉綠素含量為26.00 mg/L、類胡蘿卜素含量為5.74 mg/L。Fazeli等[29]研究結(jié)果表明，D.tertiolectaDCCBC26在含有0.3 mol/L NaCl的培養(yǎng)基中葉綠素a含量為9.84 mg/L、類胡蘿卜素含量為3.75 mg/L。姜建國(guó)等[30]分析了5種杜氏藻的生化組成發(fā)現(xiàn)Dunaliellabardawil847、Dunaliellabioculata199、Dunaliellaprimolecta818、Dunaliellasalina435和Dunaliella558的總脂含量在11.7%～20.8%，相比上述已報(bào)道的杜氏藻藻株，本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的HK128的總脂含量(24.83%)具有顯著優(yōu)勢(shì)。

表2 在優(yōu)化條件下第7天HK128的主要生化成分含量

進(jìn)一步分析HK128的脂肪酸組成(見表3)，發(fā)現(xiàn)該藻株脂肪酸碳鏈長(zhǎng)度主要集中在C4～C24之間。HK128的脂肪酸圖譜基本與Chen等[31]研究的結(jié)果一致。其中棕櫚酸(C16∶0)和α-亞麻酸(C18∶3n-3)是HK128的主要脂肪酸，相對(duì)含量分別為33.84%和32.48%，其次是相對(duì)含量為10.40%的順-11-二十碳烯酸(C20∶n-9)和相對(duì)含量為8.05%的亞油酸(C18∶2)。一般來說，棕櫚酸是最豐富的脂肪酸，在所有的微藻群中普遍存在。有研究表明，Dunaliellaprimolecta[32]和Phaeodactylumtricornutum[1]中棕櫚酸含量分別為21.8%和21.63%。

表3 在優(yōu)化條件下第7天HK128的脂肪酸組成(占總脂肪酸的百分含量)

杜氏藻中富含亞麻酸和亞油酸，Xie等[33]在150 μmol/(m2·s)光強(qiáng)下培養(yǎng)的Rhodomonassalina含有12.90%的α-亞麻酸和16.47%的亞油酸。Evans等[34]發(fā)現(xiàn)在10 d的連續(xù)光照條件下，D.tertiolecta中α-亞麻酸占總脂肪酸含量的34.7%。本研究中，HK128中α-亞麻酸占總脂肪酸含量的32.48%，但其生物量(3.6 g/L)顯著高于已報(bào)道的Dunaliellatertio-lecta(0.46 g/L)和Dunaliellasp.(0.78 g/L)的生物量[35-36]。說明該藻株具有用于生產(chǎn)亞麻酸的優(yōu)勢(shì)。α-亞麻酸是維系人腦進(jìn)化的核心物質(zhì)，是保持人體健康的必需脂肪酸，具有增長(zhǎng)智力、保護(hù)視力和抑制癌癥轉(zhuǎn)移等功效[7]。目前亞麻酸主要存在于深海魚油和亞麻籽中，但是由于漁業(yè)資源日漸枯竭，亞麻籽生長(zhǎng)環(huán)境苛刻、產(chǎn)量低，導(dǎo)致亞麻酸資源缺乏，亟需尋找新的亞麻酸生產(chǎn)原料。

3 結(jié)語

本研究分離的藻株HK128是一株喜低鹽度和高光強(qiáng)、耐高溫及高pH的Dunaliellasp.。在溫度為25 ℃，光暗周期為12 h∶12 h，初始pH=9.3，光強(qiáng)為200 μmol/(m2·s)條件下，在鹽度20的Zarrouk培養(yǎng)基上進(jìn)行優(yōu)化培養(yǎng)，在培養(yǎng)的第7天HK128的生物量為3.6 g/L，總脂含量可為細(xì)胞干質(zhì)量的24.83%，其中多不飽和脂肪酸α-亞麻酸占總脂肪酸含量的32.48%。由以上結(jié)果可以看出，HK128富含α-亞麻酸、生長(zhǎng)速度快、生物量高，可作為生產(chǎn)α-亞麻酸的理想候選藻株,具有很大的開發(fā)潛力。