鈣結(jié)合蛋白S100A6、結(jié)締組織生長因子表達(dá)水平與肺腺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性研究

馬曉艷

河南省平頂山市第一人民醫(yī)院 467000

肺癌為常見惡性腫瘤，發(fā)病率、死亡率均位于我國惡性腫瘤首位，近年來仍呈逐年遞增趨勢。肺癌包括小細(xì)胞肺癌、大細(xì)胞癌、鱗癌、腺癌等，其中以肺腺癌最為常見，約占肺癌的40%，由于肺腺癌早期無明顯癥狀，多數(shù)患者確診時病情已經(jīng)惡化[1-2]。當(dāng)前肺腺癌的治療臨床效果一般，這可能是由于癌細(xì)胞中基因數(shù)目表達(dá)較多，因此臨床亟需找尋新型分子作用靶點作為肺癌診斷及治療的依據(jù)。研究指出，不同腫瘤調(diào)控蛋白表達(dá)可影響肺部腺體上皮細(xì)胞增殖、侵襲，參與肺腺癌發(fā)生、發(fā)展[3]。S100A6屬于鈣結(jié)合蛋白家族成員，可結(jié)合鈣離子分解上皮細(xì)胞間質(zhì)，提升癌細(xì)胞擴(kuò)散、變形能力；結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor，CTGF)屬生長因子CCN基因家族成員，其可對腫瘤生長、遷移具有抑制作用[4-5]。本文選取我院98例肺腺癌患者作為觀察對象，旨在探究CTGF、S100A6的表達(dá)與其臨床病理特征關(guān)聯(lián)性。報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過。選取2018年1月—2021年1月我院98例肺腺癌患者作為觀察對象，其中女39例，男59例，年齡42～70歲，平均年齡(54.69±5.76)歲；腫瘤直徑：<2cm 52例、≥2cm 46例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有47例、無51例；臨床分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期30例、Ⅲ期28例、Ⅳ期19例；分化程度：高分化25例、中分化45例、低分化28例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移：有35例、無63例。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)病理組織檢查確診；未實施放化療治療；均簽署知情同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：伴其他惡性腫瘤；合并重要器官功能障礙；精神異常、認(rèn)知功能障礙；免疫系統(tǒng)疾?。荒δ苷系K。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)染色。取病理組織及癌旁邊緣>5cm正常組織；試劑：兔抗人多克隆抗體CTGF(武漢博士德生物技術(shù)有限公司)、兔抗人S100A6多克隆抗體(美國NeoMarkers公司)，SP試劑盒、多聚-L-賴氨酸、PBS粉劑、濃縮型檸檬酸組織抗原修復(fù)液(pH 6.0)、液體DAB酶底物顯色試劑盒，由福州邁新生物科技有限公司提供。采用10%甲醛對采集標(biāo)本實施固定，并石蠟包埋，常規(guī)石蠟切片，采用二甲苯脫蠟，脫水(不同梯度酒精)，脫水后在檸檬酸鹽溶液中靜置20min，采用PBS清洗，加入3% H2O2，并在室溫環(huán)境反應(yīng)10min，采用PBS清洗3次，5min/次，將切片置于EDTA抗原修復(fù)液內(nèi)(pH=9.0)，微波修復(fù)(10min)，室溫冷卻，PBS清洗3次，5min/次，加入CTGF或S100A6多克隆抗體，在溫度為4℃條件下靜置過夜，次日取出后采用PBS清洗3次，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，溫度設(shè)置為37℃，靜置30min；再采用PBS清洗3次后加入二氨基聯(lián)苯氨顯色，清洗(蒸餾水)后，蘇木素復(fù)染，乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片。鏡下攝像、閱片。

1.3.2 陽性結(jié)果判定。高倍鏡(×400)下隨機(jī)選取5個視野，統(tǒng)計陽性染色細(xì)胞數(shù)量，依照染色程度、陽性細(xì)胞百分比計分，其中按染色程度將棕色、黃色、淡黃色、無色分別計3分、2分、1分、0分；將陽性細(xì)胞百分比>75%、51%～75%、10%～50%、<10%分別計4分、3分、2分、1分；將染色程度與陽性細(xì)胞百分比之積評估CTGF、S100A6陽性情況，乘積<3分為陰性，反之為陽性。

1.4 觀察指標(biāo) (1)比較癌組織、癌旁正常組織CTGF、S100A6陽性表達(dá)率。(2)比較不同臨床病理特征患者CTGF、S100A6陽性表達(dá)率。(3)分析CTGF、S100A6與臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用[n(%)]表示,行χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織、癌旁正常組織CTGF、S100A6陽性表達(dá)率 肺腺癌組織中S100A6陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，CTGF陽性表達(dá)率低于癌旁正常組織(P<0.05)，見表1。

表1 癌組織、癌旁正常組織CTGF、S100A6陽性表達(dá)率比較[n(%)，n=98]

2.2 不同臨床病理特征患者CTGF、S100A6陽性表達(dá)率 分期為Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤分化程度為高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者CTGF陽性率較高，分期為Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤分化程度為低分化、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處有轉(zhuǎn)移患者S100A6陽性率較高(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床病理特征患者CTGF、S100A6陽性表達(dá)率[n(%)]

2.3 CTGF、S100A6與臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性 經(jīng)Spearman相關(guān)分析，S100A6與分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(r=0.635、0.621、0.648，P均<0.05)，與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.632，P<0.05)；CTGF與分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)(r=-0.651、-0.632、-0.627，P均<0.05)，與腫瘤分化程度呈正相關(guān)(r=0.659，P<0.05)。

3 討論

數(shù)據(jù)調(diào)查指出，肺腺癌惡性程度較高，治療難度大，手術(shù)及綜合治療后5年內(nèi)死亡率仍然較高，有研究指出，免疫靶向治療對于輔助肺腺癌治療具有一定幫助[6]。因此，對癌組織中腫瘤相關(guān)蛋白進(jìn)行分析，可為肺腺癌免疫靶向治療提供依據(jù)，并為臨床病情評估提供一定幫助。

S100A6屬鈣結(jié)合蛋白家族成員，可結(jié)合鈣離子，促使膠原蛋白酶激活，進(jìn)而加快細(xì)胞間質(zhì)分解，S100A6水平過多可使癌細(xì)胞突破基底膜能力提升，增加癌細(xì)胞對血管內(nèi)皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞黏附能力，有助于癌細(xì)胞的增殖、分化[7]。既往研究指出，S100A6水平提升可顯著促使肺癌發(fā)展，降低肺癌患者對化療的敏感性[8]。本文中通過分析肺腺癌患者S100A6表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，肺腺癌組織中S100A6陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，由此表明S100A6高表達(dá)可能參與肺腺癌的病情進(jìn)展。分析原因在于S100A6可通過促使上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，提升肺泡上皮細(xì)胞浸潤能力，為腫瘤細(xì)胞生長提供有利環(huán)境，促使腫瘤發(fā)展[9]。同時，本文分析不同病理特征患者S100A6表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，分期為Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤分化程度為低分化、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處有轉(zhuǎn)移患者S100A6陽性率較高；經(jīng)Spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，S100A6與分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，可見S100A6不僅參與肺腺癌的發(fā)生，還參與肺腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)過程，因此通過監(jiān)測S100A6表達(dá)有助于了解肺腺癌患者生物學(xué)特征。

CTGF屬于CCN家族成員，為分泌性糖蛋白的一種，可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞游走、增殖、黏附、有絲分裂等，同時還可影響新生血管形成、腫瘤、纖維化等作用[10]。相關(guān)研究指出，CTGF在不同類型腫瘤中表達(dá)并不一致，其中CTGF在急性淋巴細(xì)胞性白血病中呈高表達(dá)狀態(tài)，而在肝癌患者中呈低表達(dá)狀態(tài)[11]。本文通過分析肺腺癌患者CTGF表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，肺腺癌組織中CTGF陽性表達(dá)率低于癌旁正常組織，分期為Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤分化程度為高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者CTGF陽性率較高，與分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤分化程度呈正相關(guān)(P<0.05)。既往有研究指出，CTGF可通過依賴CRMP-1蛋白對肺腺癌轉(zhuǎn)移、遷移發(fā)揮抑制作用，另有研究指出，CTGF高表達(dá)可阻斷ERK信號通路進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞生長[12]。結(jié)合既往研究及本文結(jié)果推測CTGF可作為腫瘤抑制因子抑制肺腺癌的發(fā)生發(fā)展，但具體相關(guān)機(jī)制尚未明確，可做后續(xù)研究重點。

綜上所述，S100A6、CTGF在肺腺癌患者癌組織中存在異常表達(dá)，且與臨床病理特征具有一定關(guān)系，通過檢測其水平可對肺腺癌情況進(jìn)行評估，有助于指導(dǎo)臨床治療。