江西部分省級醫(yī)院食源性疾病沙門菌監(jiān)測與分子分型研究

李 梅，顏興偉，彭思露，吳竹君，鄔 艷

(1.南昌市東湖區(qū)疾病預(yù)防控制中心，南昌 330008； 2.江西省疾病預(yù)防控制中心，南昌 330029)

食源性疾病是因進食了被病原微生物或毒素污染的食物而引起的具有感染或中毒性質(zhì)的疾病[1]。感染性腹瀉是一類常見的食源性疾病，其致病微生物以沙門菌為主。沙門菌經(jīng)口傳播，患者常因食用受污染的禽肉、蛋、奶等食品而受到感染[2]。準確的沙門菌血清型分型對確定感染源及控制疾病傳播具有重要意義，而同一血清型的不同菌株間的同源性鑒定則需借助分子生物學(xué)手段，目前常用的方法為脈沖場凝膠電泳(PFGE)。本研究通過對江西省2家省級醫(yī)院感染性腹瀉病例進行沙門菌檢測與分子分型分析，以期為沙門菌相關(guān)的食源性疾病防控提供經(jīng)驗與參考。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

選擇南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院和江西省兒童醫(yī)院作為食源性疾病主動監(jiān)測哨點醫(yī)院。哨點醫(yī)院負責病例信息的記錄及感染性腹瀉病例糞便標本的采集工作，2020年南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院送檢130份標本，江西省兒童醫(yī)院送檢139份標本。

病例選擇標準：1)由食品或懷疑由食品引起；2)以腹瀉癥狀為主訴(每日排便3次或3次以上，且糞便性狀異常，如稀便、水樣便、黏液便或膿血便等)；3)2020年份病例樣本。

1.2 檢測方法

采集的感染性腹瀉病例糞便置于Cary-Bair運送培養(yǎng)基中，運送至南昌市東湖區(qū)疾病預(yù)防控制中心進行檢測。沙門菌檢測按照《2020年國家食源性疾病監(jiān)測工作手冊》[3]中規(guī)定的沙門菌檢測程序進行：用無菌棉簽取少量樣品插入SBG增菌液，置恒溫培養(yǎng)箱36 ℃培養(yǎng)24 h，用接種環(huán)從增菌液中挑取一環(huán)接種于沙門氏菌顯色平板，置36 ℃培養(yǎng)24 h，從沙門氏菌顯色平板上挑取紫色菌落進行生化鑒定。對檢出的沙門菌進行血清學(xué)及分子生物學(xué)分型，血清學(xué)分型鑒定以White-Kauffmann-Le Minor抗原表[4]為準，分子生物學(xué)分型鑒定采用PFGE法。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以百分率表示，比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 沙門菌感染樣本的人群分布

2哨點醫(yī)院共送檢269份符合食源性疾病主動監(jiān)測標準的感染性腹瀉病例樣本，共檢出沙門菌43株，檢出率為15.99%(43/269)。男性沙門菌檢出率為14.39%(20/139)，女性沙門菌檢出率為17.7%(23/130)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.546,P=0.460)。0～6歲患者占病例總數(shù)的的52.42%，沙門菌檢出率為23.40%(33/141)；>6歲患者占47.58%，沙門菌檢出率為7.81%(10/128)，不同年齡組間沙門菌檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.035,P=0.010)。見表1。

表1 沙門菌感染樣本的人群分布n=269

2.2 檢出沙門菌血清學(xué)分型

檢出的43株沙門菌共分屬12種血清型，見表2—3。0～6歲患者檢出沙門菌33株，其中鼠傷寒沙門菌20株(60.61%)，其他血清型沙門菌13株(39.39%)；>6歲患者檢出沙門菌10株，其中鼠傷寒沙門菌3株(30.00%)，其他血清型沙門菌7株(70.00%)。

表2 檢出沙門菌血清學(xué)分型 n=43

2.3 檢出沙門菌分子生物學(xué)分型

檢出的43株沙門菌中部分條帶發(fā)生降解，分型成功的34株P(guān)FGE指紋圖譜帶型相似度為47%～100%且大部分同一血清型的沙門菌PFGE圖譜可聚集成簇。20株鼠傷寒沙門菌聚集成為2簇，其中SM-DHQ-2020-124株與SM-DHQ-2020-126株、SM-DHQ-2020-215株與SM-DHQ-2020-138株帶型相似度接近100%。4株布利丹沙門菌中3株高度同源，帶型相似度接近100%。見圖1。

圖1 檢出沙門菌分子生物學(xué)分型

表3 34株沙門菌血清型及來源情況

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，世界各國的細菌性食物中毒病例中沙門菌引起的食源性感染常位于榜首，中國大陸地區(qū)食源性疾病中40%～60%是由沙門菌引起[5]。

本研究結(jié)果顯示，2020年江西省2家省級哨點醫(yī)院食源性疾病樣本中沙門菌檢出率為15.99%，明顯高于2018-2019年江西省感染性腹瀉患者病原微生物監(jiān)測中的沙門菌檢出率(3.11%)[6]，與鼓樓區(qū)食源性疾病監(jiān)測結(jié)果相似(15.15%)[7]。本研究發(fā)現(xiàn)0～6歲患者感染性腹瀉沙門菌檢出率明顯高于>6歲患者，尤其是6個月～1歲的幼兒沙門菌感染率高達24.55%。其原因可能在于該時期幼兒食物以乳與乳制品為主，初步學(xué)會爬行，且處于口腔敏感期，經(jīng)常吮吸、舔舐手指和玩具等物件，容易接觸病原菌，再加之嬰幼兒胃腸功能和免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，抵抗力弱，故容易發(fā)病[8]。

本研究檢出的43株沙門菌共分屬于12種血清型，且以鼠傷寒沙門菌為主，占總株數(shù)的53.49%，與福建省食源性沙門菌監(jiān)測中鼠傷寒沙門菌占比57.85%的結(jié)果[2]基本一致。分型結(jié)果說明江西省沙門菌型別呈現(xiàn)多態(tài)性，且以鼠傷寒沙門菌為優(yōu)勢菌，與世界衛(wèi)生組織全球沙門菌血清型監(jiān)測結(jié)果一致[9]。本研究數(shù)據(jù)顯示兒童患者感染的沙門菌以鼠傷寒沙門菌為主，與胡海贇等[10]的結(jié)果一致。分子生物學(xué)分型結(jié)果顯示，同一血清型沙門菌的PFGE圖譜大部分能聚集成1簇，這與于烽等[11]對新疆43株沙門菌的PFGE分型結(jié)果基本一致。20株鼠傷寒沙門菌聚集成2簇，可能存在鼠傷寒變種沙門菌。鼠傷寒沙門菌中SM-DHQ-2020-124株與SM-DHQ-2020-126株、SM-DHQ-2020-215株與SM-DHQ-2020-138株帶型相似度接近100%，4株布利丹沙門菌中有3株帶型相似度接近100%，這些菌株高度同源，提示病例存在流行病學(xué)關(guān)聯(lián)，為流行病溯源提供了依據(jù)。