高效液相色譜法測(cè)定水果罐頭中的7種合成著色劑

崔 潔

（山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心（山西省標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量技術(shù)研究院)，山西太原 030012）

隨著食品工業(yè)的發(fā)展，部分食品廠家與商販常常在食品生產(chǎn)、加工過程中加入食用色素來改善食品的感官性狀，吸引消費(fèi)者購(gòu)買食用[1]。食用色素包括天然著色劑與人工合成著色劑，前者綠色安全，但成本較高；后者著色效果好、性質(zhì)穩(wěn)定、成本較低，成為許多食品生產(chǎn)企業(yè)與商販的首選[2]。然而，人工合成著色劑多由苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品經(jīng)化學(xué)合成而來，不僅毫無營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，長(zhǎng)期食用或過量攝入還會(huì)威脅人體健康[3]。目前，市場(chǎng)上琳瑯滿目的水果罐頭很受消費(fèi)者歡迎，然而由于行業(yè)門檻較低，罐頭質(zhì)量參差不齊，濫用人工合成著色劑的情況也頗為嚴(yán)重，因此加強(qiáng)水果罐頭中合成著色劑的監(jiān)管檢測(cè)非常必要。本研究結(jié)合實(shí)驗(yàn)室設(shè)備條件，參照《水果罐頭中合成著色劑的測(cè)定 高效液相色譜法》（GB/T 21916—2008）[4]建立了高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定水果罐頭中檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅和亮藍(lán)共7種常用合成著色劑的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

某品牌梨罐頭購(gòu)自美特好超市；檸檬黃（批號(hào)1902）、莧菜紅（批號(hào)L3Q1）、靛藍(lán)（批號(hào)S3F3）、胭脂紅（批號(hào)N381）、日落黃（批號(hào)81120）、誘惑紅（批號(hào)J4N1）和亮藍(lán)（批號(hào)L3R3）標(biāo)準(zhǔn)品（濃度均為1.00 mg·mL-1，北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限公司）；甲醇（色譜純，迪馬科技公司）；乙酸銨（色譜純，深圳市美爾達(dá)科技有限公司）；無水乙醇（分析純，天津市申泰化學(xué)試劑有限公司）；氨水（分析純，西隴化工股份有限公司）；鹽酸（分析純，北京化工廠）。

1.2 儀器與設(shè)備

U3000 高效液相色譜儀（配PAD 檢測(cè)器，美國(guó)賽默飛公司）；XS204 電子天平（精度0.1 mg，瑞士梅特勒托利多公司）；VORTEX MS3 旋渦混合儀（德國(guó)艾卡）；TDL-5-A 低速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；DZKW-4 電熱恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)世紀(jì)儀器有限公司）；0.45 μm 微孔水相濾膜（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；W-SPE12 固相萃取裝置（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）；Synergy 超純水機(jī)（德國(guó)密理博公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制。分別吸取濃度均為1.0 mg·mL-1的檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅和亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品各1.0 mL 于10 mL 容量瓶中，用純水稀釋、定容至刻度，配制成7種合成著色劑濃度均為100 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)中間液配制。吸取1.0 mL 7種合成著色劑濃度均為100 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用純水配制成10 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。

（3）標(biāo)準(zhǔn)使用液配制。分別吸取0.08 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL 和0.50 mL 的 混 合 標(biāo)準(zhǔn)中間液，0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于8個(gè)10 mL 容量瓶中，用純水稀釋、定容至刻度，配制成7種合成著色劑濃度均為0.08 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.40 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1、1.00 μg·mL-1、2.00 μg·mL-1和4.00 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3.2 試樣制備過程

準(zhǔn)確稱取2.00 g 經(jīng)粉碎混勻后的試樣于50 mL離心管中，加入10 mL 無水乙醇-氨水溶液，用旋渦混合儀渦旋0.5 min，再于3 000 r·min-1的離心機(jī)中離心10 min，上清液用塞有脫脂棉的玻璃漏斗過濾，將殘?jiān)貜?fù)提取過濾3 次，收集所有濾液置于80 ℃的恒溫水浴鍋中濃縮至2 mL。

用2%的氨水將濃縮后的試液調(diào)節(jié)pH 值為8，轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中，依次用3 mL pH 值為8 的水和pH 值為8 的50%甲醇溶液淋洗，棄去流出液。用10 mL 鹽酸-乙醇（1+9）溶液洗脫，收集洗脫液，用氨水中和，于80 ℃的恒溫水浴鍋中濃縮至近干，冷卻后用50%甲醇溶液定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾，上機(jī)待測(cè)。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：Thermo C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：10 μL；流速：1.0 mL·min-1；流動(dòng)相：A 相為0.02 mol·L-1乙酸銨溶液，B 相為甲醇；洗脫方式：梯度洗脫；洗脫時(shí)間程序：0 ～10.00 min，95%A ～5%B；10.00 ～18.00 min，8 0%A ～ 2 0%B；1 8.0 0 ～ 2 5.0 1 m i n，40%A ～60%B；25.01 ～40 min，95%A ～5%B；PAD 檢測(cè)器波長(zhǎng)為檸檬黃428 nm、莧菜紅521 nm、靛藍(lán)608 nm、胭脂紅509 nm、日落黃483 nm、誘惑紅507 nm 和亮藍(lán)625 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性方程及檢出限

將配制的7種合成著色劑混合系列標(biāo)準(zhǔn)使用液在1.4 色譜條件下測(cè)定，以混合系列標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度點(diǎn)為橫坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)測(cè)得的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算線性回歸方程。由表1 可知，7種合成著色劑組分在0.08 ～4.00 μg·mL-1與其色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。

準(zhǔn)確稱取2.00 g 樣品，加入0.1 mL 濃度為1.0 μg·mL-1的7種合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照供試品溶液處理上機(jī)測(cè)試，7種合成著色劑組分色譜峰高度均大于其3 倍噪音，計(jì)算得出水果罐頭中7種合成著色劑的檢出限；根據(jù)加標(biāo)回收試驗(yàn)中低濃度水平回收率測(cè)試結(jié)果可得出該方法中7種合成著色劑的定量限，結(jié)果見表1。

表1 7種合成著色劑的曲線方程和線性系數(shù)

2.2 加標(biāo)回收率與重復(fù)性

在陰性梨罐頭試樣中，結(jié)合方法線性范圍與GB 2760—2014[5]中規(guī)定的水果罐頭中7種合成著色劑的最大使用量，添加低（0.1 mg·kg-1）、中（0.2 mg·kg-1）、高（1.0 mg·kg-1）3個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用1.3.2 試樣制備過程處理，按照1.4色譜條件測(cè)定，每個(gè)濃度水平進(jìn)行6 次平行測(cè)試，考察7種合成著色劑的加標(biāo)回收情況與重復(fù)性（以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 表示）。由表2 可知，梨罐頭中7種合成著色劑在0.1 ～1.0 mg·kg-1添加水平下，平均回收率在82.77%～101.67%，重復(fù)性RSD 在0.21%～3.58%，表明該方法加標(biāo)回收情況與重復(fù)性良好，滿足《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[6]中的規(guī)定。

表2 7種合成著色劑組分的加標(biāo)回收率與重復(fù)性

2.3 實(shí)際樣品的測(cè)定

隨機(jī)在市場(chǎng)上采集蘋果、櫻桃、橘子、草莓和黃桃等30 批次的水果罐頭，采用本研究方法進(jìn)行7種合成著色劑的檢測(cè)，某品牌糖水草莓罐頭中莧菜紅檢測(cè)結(jié)果為0.001 01 g·kg-1，不符合食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，其他批次樣品中7種合成著色劑都符合《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）中的規(guī)定。

3 結(jié)論

本研究參照《水果罐頭中合成著色劑的測(cè)定 高效液相色譜法》（GB/T 21916—2008），建立了高效液相色譜法測(cè)定水果罐頭中7種常用合成著色劑的方法，經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，該方法的線性關(guān)系良好，加標(biāo)回收率在82.77%～101.67%，重復(fù)性RSD 在0.21%～3.58%，檢出限及定量限均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，能夠滿足食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)水果罐頭中7種常用合成著色劑快速、準(zhǔn)確、高效的檢測(cè)需求，可為綜合性食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)及第三方實(shí)驗(yàn)室開展水果罐頭中合成著色劑參數(shù)的檢測(cè)提供參考。