豇豆輕斑駁病毒CPMMV感染菜豆對(duì)B型煙粉虱寄主選擇和生物學(xué)特性的影響

楊春曉，YUAN Ling，ZHOU Xu-Guo*，劉 勇

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)/亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510642；2.University of Kentucky,Lexington,KY,USA 40546；3.湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，園藝作物病蟲害綜合治理湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410125))

EffectsofCowpeamildmottlevirusinfectiononhostselectionandbiologicalcharacteristicofBemisiatabaciBbiotype

YANG Chun-Xiao1,YUAN Ling2,ZHOU Xu-Guo2*,LIU Yong3*(1.South China Agricultural University,State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-Bioresources,Guangzhou 510642,China;2.Department of Entomology,University of Kentucky,Lexington,KY,USA 40546;3.Hunan Academy of Agricultural Sciences,Institute of Plant Protection,Changsha 410125,China)

Abstract:The epidemiology ofCowpeamildmottlevirus(CPMMV) is closely associated with its vector whitefly,BemisiatabaciB biotype.However,the effects of CPMMV infection of host plant on host selection and biological characteristic ofB.tabaciB biotype remain unexplored.In this study,we analyzed:1) the effect of CPMMV infection ofPhaseolusvulgarisat different time points on host selection and oviposition preference ofB.tabaciB biotype;2) the effects of CPMMV infection on biological characteristic ofB.tabaciB biotype.Our results showed that:1) compared with healthyP.vulgaris,B.tabaciB biotype preferred to stay and lay eggs on CPMMV-infectedP.vulgaris.However,for the experiment conducted on the four weeks old plants after CPMMV inoculation,B.tabaciB biotype preferred to stay on healthy plants and lay eggs;2)B.tabaciB biotype had no difference in fecundity and survival rates between healthy and CPMMV-infected plants at 1 and 4 weeks after CPMMV inoculation.In conclusion,CPMMV infection ofP.vulgarishad a time effect on the host preference ofB.tabaciB biotype,but CPMMV infection ofP.vulgarishad no significant effect on the biological characteristics ofB.tabaciB biotype.

Keywords:Cowpeamildmottlevirus;B.tabaciB biotype;host selection;biological characteristic

豇豆輕斑駁病毒(Cowpeamildmottlevirus，CPMMV)是正單鏈RNA病毒，病毒粒子為彎曲的絲狀顆粒(約650 nm×15 nm)，與香石竹潛隱病毒屬Carlavirus的其它病毒類似，有一大小為31～33 kDa的外殼蛋白。該屬病毒能使多種作物減產(chǎn)10%～15%，而且還常與其它病毒發(fā)生復(fù)合侵染，使危害加劇(Naiduetal.,1998;Britoetal.,2002;Tavasolietal.,2009)。根據(jù)2011年病毒分類國(guó)際委員會(huì)(The International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)正式出版的病毒分類報(bào)告第九版《Virus Taxonomy:Ninth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses》，CPMMV在分類地位上屬于蕪菁黃花葉病毒目Tymovirales乙型線狀病毒科Betaflexiviridae香石竹潛隱病毒屬Carlavirus(King,2012)。

1973年，Brunt等首次報(bào)道了，在加納CPMMV能在豇豆VignaunguiculataL.上引起系統(tǒng)性斑點(diǎn)、褪綠以及葉片畸形等癥狀(Brunt and Kenten,1973)。隨后，在非洲、亞洲、巴西和阿根廷以及象牙海岸等地的多個(gè)熱帶地區(qū)(Thouveneletal.,1982;Mink and Keswani,1987;Antignus and Cohen,1987;Reddy,1991;Weietal.,2020)都有了該病毒的報(bào)導(dǎo)。CPMMV除侵染豆科外，還可侵染藜科、葫蘆科、莧科和茄科的多種植物。自然條件下感染CPMMV的豇豆，表現(xiàn)出輕微的整株斑駁。若單憑在豇豆植株上表現(xiàn)出癥狀的嚴(yán)重程度，很難準(zhǔn)確評(píng)估該病毒造成經(jīng)濟(jì)損失，但是在亞洲、非洲、美洲的許多熱帶國(guó)家中，豇豆經(jīng)常與其它重要的豆科作物，如花生ArachishypogaeaLinn.、大豆Glycinemax、綠豆Vignaradiata等間作，因此CPMMV仍被視為對(duì)豆科植物的重大威脅(El-Hassanetal.,1997;Salemetal.,2010)。

在煙粉虱隱種中，MEAM1(B)和MED(Q)隱種在世界范圍內(nèi)發(fā)生危害最為嚴(yán)重。煙粉虱為害最嚴(yán)重的是因其取食以及傳播眾多的植物病毒，對(duì)農(nóng)作物和觀賞植物造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失(Brown and Czosnek,2002;Panetal.,2012)。煙粉虱傳播的病毒，90%屬于菜豆金黃花葉病毒屬，約288種病毒(Polstonetal.,2014;Gilbertsonetal.,2015)，被認(rèn)為對(duì)農(nóng)作物的生長(zhǎng)和產(chǎn)量最具威脅。研究發(fā)現(xiàn)，香石竹潛隱病毒屬的大多數(shù)病毒主要由蚜蟲傳播，大約有50種(Polstonetal.,2014)，已被證實(shí)的兩種由煙粉虱傳播的該屬病毒為CPMMV和甜瓜泛黃相關(guān)病毒(Melonyellowing-associatedvirus，MYaV)。

針對(duì)煙粉虱傳播的具有持久性傳播方式的番茄黃化曲葉病毒(Tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV)，近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，Q型煙粉虱停留在感染了TYLCV的曼陀羅DaturastramoniumL.植株上的數(shù)量要顯著的高于在健康植株上的停留數(shù)量，Q型煙粉虱在感染了TYLCV病毒的曼陀羅上的產(chǎn)卵量顯著的高于在健康植株上的產(chǎn)卵量(Chenetal.,2013)。另外，通過比較無毒B型煙粉虱、帶毒B型煙粉虱(攜帶TYLCV)、無毒Q型煙粉虱以及帶毒Q型煙粉虱(攜帶TYLCV)對(duì)健康番茄Lycopersiconesculentum以及TYLCV感染的帶毒番茄選擇的喜好，研究發(fā)現(xiàn)無毒的B型煙粉虱喜好健康番茄植株，而無毒的Q型煙粉虱則喜好帶TYLCV的感病植株，然而，當(dāng)B型煙粉虱與Q型煙粉虱攜帶了TYLCV之后，發(fā)現(xiàn)它們對(duì)健康番茄與發(fā)病番茄植株沒有明顯的選擇偏好(Fangetal.,2013)。

病毒感染寄主植物后的不同時(shí)期，寄主植物在顏色、氣味以及營(yíng)養(yǎng)組成等方面都會(huì)不同，進(jìn)而會(huì)對(duì)媒介昆蟲產(chǎn)生不同的影響。本文以煙粉虱及其傳播的半持久性/非持久性病毒，CPMMV為研究對(duì)象，探討CPMMV感染的菜豆在不同時(shí)間點(diǎn)，對(duì)于煙粉虱寄主選擇和生物學(xué)特性的影響。

1 材料與方法

1.1 室內(nèi)煙粉虱種群和寄主植物

2014年，從美國(guó)肯塔基州列克星敦市的棉花Gossypiumspp.、向日葵HelianthusannuusL.和番茄Lycopersiconesculentum上采集了煙粉虱樣本，經(jīng)mtCOI測(cè)序、SCAR引物鑒定后確認(rèn)為B型煙粉虱(Panetal.,2011)，以棉花上采集的B型煙粉虱在菜豆上建立種群，隨后飼養(yǎng)在玻璃溫室中，環(huán)境溫度為26±2℃。本試驗(yàn)所用植物為菜豆Phaseolusvulgaris，栽培品種為‘Topcrop’。菜豆種植在步入式植物生長(zhǎng)箱中，試驗(yàn)在肯塔基州的煙草研究和發(fā)展中心完成(Kentucky Tobacco Research and Development Center)。

1.2 CPMMV的人工接種及鑒定

本試驗(yàn)所用植物為菜豆，栽培品種為‘Topcrop’。CPMMV感染的菜豆葉片由美國(guó)佛羅里達(dá)大學(xué)植物病理系的Jane E.Polston教授提供。通過低溫郵寄，而后存放于-20℃冰箱。

1.2.1人工摩擦接種CPMMV

先準(zhǔn)備好研缽與研棒、紗布、洗瓶、金剛砂、0.1 mol/L pH 7.2的磷酸緩沖液、標(biāo)簽、記號(hào)筆等。當(dāng)菜豆長(zhǎng)到兩個(gè)真葉期，用于接種試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過程：(1)剪取小塊含病毒或健康的葉片(1 g)，分別放在1個(gè)研缽中并加入適量磷酸緩沖液(10 mL)和少許金剛砂，研磨成糊狀。(2)用手指蘸取少量病樣或健康汁液在葉面上輕抹2～3次，之后用洗瓶?jī)?nèi)的水清洗葉面。另外在營(yíng)養(yǎng)缽中插入標(biāo)簽，注明接種日期和接種人，每3天觀察一次發(fā)病情況，注意接種CPMMV的葉片和對(duì)照植物葉上的癥狀是否一致。

1.2.2CPMMV的RT-PCR鑒定

RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄：應(yīng)用TRIzol的方法提取菜豆植物葉片的RNA，然后取1 μg總RNA應(yīng)用M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒和引物oligo (dT)21進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA用于下游的PCR，反應(yīng)前存放于-20℃保存。應(yīng)用鑒定香石竹潛隱病毒屬的引物5′-GGBYTNGGBGTNCCNCANGA-3′和oligo (dT)21進(jìn)行CPMMV的PCR鑒定(Gasparetal.,2008)。PCR反應(yīng)體系20 μL，包括ddH2O 7.0 μL，PCR Mix 10.0 μL，上下游引物各1.0 μL，模板1 μL。PCR程序設(shè)置：94℃預(yù)變性5 min，35個(gè)循環(huán)；94℃變性1 min，50℃退火1 min，72℃延伸2 min。循環(huán)結(jié)束后72℃延伸5 min，8℃保存。

1.3 帶毒菜豆植株的獲取

應(yīng)用上述的CPMMV的人工接種方法，摩擦接種2片真葉期的菜豆植株。植物置于溫度為26±2℃，16 L ∶8 D，相對(duì)濕度為70%的步入式植物生長(zhǎng)箱中生長(zhǎng)，取摩擦接種后第1周和第4周的植株，經(jīng)RT-PCR檢測(cè)證實(shí)感染病毒的植株用于試驗(yàn)。

1.4 B型煙粉虱對(duì)健康和CPMMV感染的菜豆寄主選擇性測(cè)定

B型煙粉虱對(duì)寄主植物選擇行為的設(shè)計(jì)按照Omondietal.(2005)的方法開展。將大小一致，接種后第1周或第4周健康和感染CPMMV的菜豆植株分別放置在一個(gè)紗網(wǎng)籠(60 cm×60 cm×60 cm)的相對(duì)角落。分別在每個(gè)籠子的中心底部釋放大約50頭煙粉虱成蟲。并在釋放煙粉虱1、3、6、24、48、72和96 h，分別統(tǒng)計(jì)在每株植株上的蟲數(shù)。96 h后，在體式顯微鏡(Olympus SZ61)下對(duì)每株菜豆所有葉片上的卵進(jìn)行計(jì)數(shù)。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，共6個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)籠。這些籠子放置于自然光照和自然環(huán)境溫度(26±2℃)的溫室中。

1.5 B型煙粉虱在健康和CPMMV感染植株上生物學(xué)特性的比較

本試驗(yàn)對(duì)B型煙粉虱在健康和感染CPMMV的菜豆上的存活率和產(chǎn)卵量進(jìn)行了的比較，設(shè)置4個(gè)處理，B型煙粉虱+摩擦接種無毒葉片第1周的健康菜豆、B型煙粉虱+摩擦接種無毒葉片第4周的健康菜豆、B型煙粉虱+摩擦接種CPMMV第1周的感病菜豆、B型煙粉虱+摩擦接種CPMMV第4周的感病菜豆，每處理初始設(shè)置20個(gè)重復(fù)。取羽化3 h內(nèi)的B型煙粉虱，在解剖鏡下鑒別雌雄后，取雌蟲分別轉(zhuǎn)接到夾在摩擦接種后第1周和第4周的健康和發(fā)病菜豆中部葉片上的微蟲籠中，每籠1頭雌蟲。每株菜豆夾2個(gè)微蟲籠。每天觀察煙粉虱的存活，連續(xù)觀察7 d。7 d后在解剖鏡下觀察記錄葉片上的卵數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用重復(fù)測(cè)量方差分析比較B型煙粉虱在不同時(shí)間點(diǎn)停留在健康和感染CPMMV的菜豆上的差異。應(yīng)用單因素方差分析比較B型煙粉虱在健康和感染CPMMV菜豆上的產(chǎn)卵量。當(dāng)方差顯著時(shí)，再用LSD法對(duì)平均值進(jìn)行多重比較。百分比數(shù)據(jù)在比較前先進(jìn)行反正弦平方根轉(zhuǎn)換。存活率的比較應(yīng)用卡方檢驗(yàn)，產(chǎn)卵量的比較應(yīng)用單因素方差分析。用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，取0.05顯著性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 MtCOI測(cè)序、SCAR方法鑒定煙粉虱隱種結(jié)果

應(yīng)用mtCOI SCAR引物對(duì)采集自棉花、向日葵和番茄上的煙粉虱鑒定后發(fā)現(xiàn)，全部為B型煙粉虱。B型煙粉虱引物能穩(wěn)定擴(kuò)增出478 bp的條帶；而Q型煙粉虱引物則沒有擴(kuò)增出條帶(圖1)。

圖1 應(yīng)用煙粉虱mtCOI特異性引物鑒定煙粉虱隱種Fig.1 Applying of mtCOI species-specific primers to distinguish the Bemisia tabaci species注：M，標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量；PCR反應(yīng)的模板為：3頭從棉花上采集的煙粉虱；3頭從向日葵上采集的煙粉虱；3頭從番茄上采集的煙粉虱。Note:M,Marker;Templates in the PCR reactions were as follows:Three B. tabaci individuals from cotton;Three B. tabaci individuals from sunflower;Three B. tabaci individuals from tomato.

對(duì)上述應(yīng)用mtCO1 SCAR引物擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物經(jīng)PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化后，送公司進(jìn)行雙向測(cè)序。將測(cè)序得到的序列進(jìn)行拼接、NCBI比對(duì)后，進(jìn)一步驗(yàn)證了所采集到的煙粉虱為B型煙粉虱。隨后，建立了從棉花上采集到的B型煙粉虱菜豆種群。

2.2 感染CPMMV菜豆的發(fā)病癥狀

CPMMV侵染菜豆后，葉片表現(xiàn)系統(tǒng)性的斑駁，尤其是感病時(shí)間較長(zhǎng)的植株上部葉片出現(xiàn)黃化癥狀(圖2)。

圖2 CPMMV感染菜豆植株后的典型癥狀Fig.2 Typical sysptom of Phaseolus vulgaris infected by CPMMV

2.3 CPMMV的PCR鑒定

應(yīng)用香石竹潛隱病毒屬的引物進(jìn)行PCR診斷，可以準(zhǔn)確的判斷菜豆植株的CPMMV的感染(圖3)。1、2、3、5為接種CPMMV感染葉片的植株；4、6、7、8為接種健康葉片的植株；9、10為Jane E.Polston教授提供的CPMMV感染的菜豆葉片；11、12、13為健康植株(圖3)。

圖3 應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)菜豆感染CPMMV的狀態(tài)Fig.3 Using the method of RT-PCR to detect the CPMMV infection status of Phaseolus vulgaris注：M，標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量；PCR反應(yīng)的模板為：1，2，3，5為接種CPMMV感染葉片的植株；4，6，7，8為接種健康葉片的植株；9，10為Jane E.Polston提供的CPMMV感染的植株葉片；11，12，13為健康植株葉片。Note:M,Marker;Templates in the PCR reactions were as follows:1,2,3,5 were the plants inoculated by CPMMV-infected leaves;4,6,7,8 were the plants inoculated by healthy leaves;9,10 were the CPMMV-infected leaves that provided by Jane E.Polston;and 11,12,13 were the healthy leaves.

2.4 B型煙粉虱對(duì)健康和CPMMV感染的菜豆寄主選擇性

在摩擦接種CPMMV后第1周的植株上，在任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，CPMMV感染菜豆上的B型煙粉虱成蟲的數(shù)量都顯著的高于在健康植株上(F1,4=23.473,P=0.008)(圖4)。96 h后，在感染了CPMMV的菜豆植株上，B型煙粉虱的總產(chǎn)卵量要高于在健康植株上的總產(chǎn)卵量(F1,4=3.611,P=0.130)(圖5)。

圖4 B型煙粉虱對(duì)健康菜豆和接種CPMMV病毒1周后感病菜豆植株的選擇Fig.4 Host selection of Bemisia tabaci B biotype on healthy and CPMMV-infected one week old Phaseolus vulgaris注：圖中數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。下圖同。Note:Values were means±SE.Same below.

圖5 B型煙粉虱在健康菜豆和接種CPMMV病毒1周后的感病菜豆植株上產(chǎn)卵量Fig.5 Number of eggs (mean±SE) laid by Bemisia tabaci B biotype on healthy and CPMMV-infected one week old Phaseolus vulgaris in a choice test

然而，在摩擦接種CPMMV后4周的植株上，寄主選擇與產(chǎn)卵的結(jié)果與接種第1周后植株上的試驗(yàn)結(jié)果完全相反。結(jié)果顯示，在任意一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，B型煙粉虱停留在健康菜豆植株上的數(shù)量要顯著高于在CPMMV感染的植株上的數(shù)量(F1,4=206.170,P<0.0001)(圖6)。96 h后，在健康植株上B型煙粉虱的總產(chǎn)卵量顯著高于在感染了CPMMV病毒的植株上的總產(chǎn)卵量(F1,4=32.905,P=0.005)(圖7)。

圖6 B型煙粉虱對(duì)健康菜豆和接種CPMMV病毒4周后的感病菜豆植株選擇Fig.6 Host selection of Bemisia tabaci B biotype on healthy and CPMMV-infected four weeks old Phaseolus vulgaris

圖7 B型煙粉虱在健康菜豆和接種CPMMV病毒4周后的感病菜豆植株上的產(chǎn)卵量Fig.7 Number of eggs (mean±SE) laid by Bemisia tabaci B biotype on healthy and CPMMV-infected four weeks old Phaseolus vulgaris in a choice test

2.5 B型煙粉虱在健康和CPMMV感染植株上生物學(xué)特性的比較

摩擦接種CPMMV后1周，B型煙粉虱的產(chǎn)卵量在健康和感染CPMMV的植株上差異不顯著(F1,36=1.162,P=0.288)(圖8-A)。另外，B型煙粉虱在健康和感染CPMMV的植株上的存活率也無顯著差異(χ2=1.579,P=0.209)(圖8-B)。

圖8 B型煙粉虱雌蟲在接種后第1周的健康和感染CPMMV的菜豆上的產(chǎn)卵量(A)和存活率(B)Fig.8 Fecundity (A) and survival rate (B) of Bemisia tabaci B biotype females on one week old healthy vs.CPMMV-infected Phaseolus vulgaris after inoculation

摩擦接種CPMMV后4周，B型煙粉虱的產(chǎn)卵量在健康和感染CPMMV的植株上無顯著差異(F1,31=0.003,P=0.958)(圖9-A)。另外，B型煙粉虱在健康和感染CPMMV的植株上的存活率也差異不顯著(χ2=0.105,P=0.746)(圖9-B)。

圖9 B型煙粉虱雌蟲在接種后第4周的健康和感染CPMMV的菜豆上的產(chǎn)卵量(A)和存活率(B)Fig.9 Fecundity (A) and survival rate (B) of Bemisia tabaci B biotype females on four weeks old healthy vs.CPMMV-infected Phaseolus vulgaris after inoculation

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)通過mtCOI測(cè)序和SCAR方法明確了從棉花、向日葵及番茄上采集到的煙粉虱為B型煙粉虱，建立了從棉花上采集的，進(jìn)而飼養(yǎng)在菜豆上的B型煙粉虱種群。McKenzie等(2012)對(duì)2005年1月-2011年12月從美國(guó)、百慕大群島、加拿大和墨西哥多種植物上采集到的208組樣本進(jìn)行了煙粉虱隱種鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，71%的樣本至少有1頭 B型煙粉虱，53%的樣本僅含有B型煙粉虱。Q型煙粉虱從美國(guó)23州采集的樣本中均有發(fā)現(xiàn)，且僅在保護(hù)地中的植物上發(fā)現(xiàn)，在大田植物上沒有檢測(cè)到Q型煙粉虱。本試驗(yàn)采集的3個(gè)B型煙粉虱種群都是從田間采集的，所以，也驗(yàn)證了在美國(guó)田間植物上發(fā)生的煙粉虱為B型，至今還沒有Q型煙粉虱在美國(guó)大田發(fā)生為害的報(bào)道(McKenzieetal.,2012)。

本研究表明，在摩擦接種后第1周和第4周健康和發(fā)病的菜豆植株上，B型煙粉虱的寄主選擇和產(chǎn)卵偏好性有顯著的差別。摩擦接種后第1周時(shí)，B型煙粉虱喜好在CPMMV感染的植株上停留和產(chǎn)卵；然而，摩擦接種后第4周時(shí)，B型煙粉虱偏好在健康的植株上停留和產(chǎn)卵。這些數(shù)據(jù)表明，CPMMV侵染菜豆對(duì)于傳播媒介B型煙粉虱選擇寄主植物的偏好性影響具有時(shí)間效應(yīng)。本試驗(yàn)的目的是探究半持久性/非持久性傳播的病毒CPMMV侵染寄主菜豆后的不同時(shí)間對(duì)于媒介昆蟲B型煙粉虱寄主選擇行為和產(chǎn)卵行為的影響。當(dāng)前，僅Legarrea等(2015)的研究發(fā)現(xiàn)，TYLCV侵染番茄植株對(duì)于B型煙粉虱的寄主選擇行為和適合度的影響具有時(shí)間效應(yīng)。然而，到目前為止，還沒有關(guān)于半持久性/非持久性傳播的病毒侵染寄主植物的不同時(shí)期對(duì)于傳毒昆蟲是否具有時(shí)間效應(yīng)的報(bào)道。本研究表明，在摩擦接種后第1周和第4周的健康和感染CPMMV的植株上，B型煙粉虱的寄主選擇行為和產(chǎn)卵偏好性有顯著的差別。已有的研究表明，嗅覺線索在昆蟲對(duì)寄主植物的選擇過程中發(fā)揮著重要作用，而這與植物的次生代謝產(chǎn)物密切相關(guān)(Kessleretal.,2001;Chenetal.,2007;Suetal.,2018)。次生代謝產(chǎn)物包括萜烯類化合物、黃酮類化合物、苯丙素類、酚類物質(zhì)、蠟質(zhì)、其它硫化物/含氮化合物等(Karbanetal.,1999;Yangetal.,2020)。在植物的抗病反應(yīng)中，次生代謝產(chǎn)物不僅可以作為生化壁壘抵抗病原物的侵染，還能作為信號(hào)物質(zhì)參與植物的抗病反應(yīng)。次生代謝產(chǎn)物通常還決定著植物的顏色、氣味和味道，從而使植物對(duì)昆蟲具有趨避或吸引作用(Karbanetal.,2014;Suetal.,2018)。另外，CPMMV侵染菜豆后可能會(huì)影響其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如游離氨基酸、碳水化合物、氮磷鉀等發(fā)生變化(Jiaoetal.,2012;2018;Guoetal.,2019)，進(jìn)而影響B(tài)型煙粉虱的寄主選擇和生物學(xué)特性。因此推測(cè)，在病毒侵染寄主的不同時(shí)間點(diǎn)，煙粉虱對(duì)于寄主的選擇偏好性差異可能與寄主次生代謝產(chǎn)物和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)種類與含量變化有關(guān)。這些推測(cè)需要進(jìn)一步的揮發(fā)物檢測(cè)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量變化試驗(yàn)以及轉(zhuǎn)錄組信息來加以驗(yàn)證。另外，這些結(jié)果還表明，單憑在一個(gè)時(shí)間點(diǎn)獲得的病原物與宿主昆蟲互作的結(jié)論是有局限性的。今后，在研究不同組合的寄主植物、植物病毒及傳毒昆蟲的互作時(shí)，時(shí)間因子必須要考慮進(jìn)去，這樣得到的結(jié)論才更為可信。此外，本試驗(yàn)的結(jié)果有助于更好的理解相關(guān)因子(如感染病毒后的不同時(shí)間)如何驅(qū)動(dòng)煙粉虱傳播的CPMMV的暴發(fā)流行。

本研究表明，在摩擦接種CPMMV后1周和4周的植株上，B型煙粉虱在健康和感染CPMMV的植株上的產(chǎn)卵量和存活率均無差別。但有趣的是，摩擦接種后1周，較健康植株，B型煙粉虱在CPMMV感染的植株上的產(chǎn)卵量和存活率相對(duì)高些；而摩擦接種后4周，B型煙粉虱在健康和CPMMV感染的植株上的產(chǎn)卵量和存活率相對(duì)持平。這些數(shù)據(jù)表明，CPMMV侵染菜豆植株對(duì)傳播媒介昆蟲B型煙粉虱的生物學(xué)特性影響具有較弱的時(shí)間效應(yīng)。感染病毒的植物可以影響傳毒昆蟲的生物學(xué)，很多研究表明傳毒昆蟲在健康和感病植株上的生物學(xué)特性有差異。目前，病毒感染寄主植物對(duì)于媒介昆蟲的適合度研究是在很多昆蟲、病毒及寄主植物的不同組合下開展的(Stoutetal.,2006;Weietal.,2019;Lietal.,2019;Wanetal.,2020)，但遺憾的是，在幾乎所有的三者互作試驗(yàn)中，僅選用了病毒侵染寄主植物后的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)去研究。然而，因病毒侵染寄主植物后的不同時(shí)期，寄主植物在表型、氣味、營(yíng)養(yǎng)以及防御機(jī)制等方面都會(huì)不同，那么，早期的研究就不能全面并系統(tǒng)的弄清楚病毒侵染寄主植物后到底是對(duì)媒介昆蟲有利、中性或有害。如TYLCV侵染番茄植株對(duì)于B型煙粉虱的選擇和發(fā)育的影響具有時(shí)間效應(yīng)。較健康植株，B型煙粉虱喜好在TYLCV侵染6周的番茄上停留和產(chǎn)卵，而對(duì)于TYLCV侵染3周和12周的植株，B型煙粉虱的停留和產(chǎn)卵均無偏好性(Legarreaetal.,2015)。

CPMMV的寄主植物范圍廣泛，今后開展更多的關(guān)于CPMMV、B型煙粉虱以及不同寄主植物的互作研究，比較不同組合條件下互作關(guān)系的異同，可為CPMMV的暴發(fā)流行提供更多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。