長白豬Plin3、Plin5基因克隆及表達規(guī)律研究

李鑫月 郭振清 張 寒 李紅強,2,*

(1 河北科技師范學(xué)院動物科技學(xué)院，河北 昌黎 066000；2 河北省特色動物種質(zhì)資源挖掘與創(chuàng)新重點實驗室，河北 昌黎 066000)

豬肉是我國居民的主要肉食來源，其產(chǎn)量在肉類總產(chǎn)量中占主導(dǎo)地位，是我國生產(chǎn)和消費最多的肉類品種。脂肪沉積性狀是養(yǎng)豬生產(chǎn)中重要的經(jīng)濟性狀，既與生豬生產(chǎn)效率和繁殖性狀密切相關(guān)，還影響豬肉品質(zhì)和消費者對豬肉的選擇。脂肪沉積是一個動態(tài)平衡過程，包括脂肪合成、脂肪分解和脂肪轉(zhuǎn)運等過程。沉積在肌束間和肌纖維間的脂肪，即肌內(nèi)脂肪，其含量直接影響豬肉的感官品質(zhì)、風(fēng)味、多汁性、嫩度和色澤[1]，因此將肌內(nèi)脂肪含量作為判斷豬肉品質(zhì)的重要指標之一。

脂滴作為肌內(nèi)脂肪細胞存儲脂肪的細胞器，受到研究人員的普遍關(guān)注。不同組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，脂滴形成和發(fā)育受多種脂肪生成相關(guān)基因、轉(zhuǎn)錄因子以及表觀遺傳因子共同調(diào)控。PAT(perilipin-adipophilin-tail interacting protetin of 47 ku)家族蛋白是最早被發(fā)現(xiàn)的脂滴相關(guān)蛋白，在脂滴合成和分解過程中起作用，包括Plin1、Plin2、Plin3、Plin4和Plin5[2]共5個成員。Plin1和Plin4在白色脂肪細胞和棕色脂肪細胞中表達[3-4]；Plin2和Plin3在動物體內(nèi)普遍表達[5]；而Plin5在心臟、肝臟和脂肪等氧化修飾的組織中高度表達[6]。Plin3和Plin4均在脂滴初步合成中發(fā)揮作用[7]。目前已知脂肪組織中Plin4缺失沒有影響脂肪組織的脂代謝功能[8]。Plin3可快速促進新脂滴的合成，在胞質(zhì)和脂滴表面之間具有轉(zhuǎn)運功能，并參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝；使用siRNA敲除Plin3發(fā)現(xiàn)，甘油三酯水平降低，脂滴形成受到抑制[9]；據(jù)報道，Plin3分別參與了肥胖誘導(dǎo)的肝臟和骨骼肌中脂質(zhì)代謝和胰島素敏感性的失調(diào)[10]，如Plin3在肌肉中過表達可增加肌肉細胞中甘油三酯的含量[11]，Plin3缺失可降低肌肉細胞中甘油三酯的含量，并抑制脂滴成熟[12]；以上研究表明Plin3在甘油三酯穩(wěn)定儲存方面發(fā)揮了作用。在心肌細胞中，Plin2和Plin5位于脂滴表面；而在棕色脂肪組織的脂肪細胞中，Plin1和Plin5覆蓋在脂滴表面。盡管在上述脂滴均有Plin蛋白表達，但Plin5在調(diào)節(jié)脂解和脂滴合成中起主導(dǎo)作用。有研究表明，禁食可以誘導(dǎo)Plin5的表達，通過與過氧化物酶體增殖物激活受體α (peroxisome proliferator-activated receptorα，PPARα)相互作用調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝；由Plin5缺陷小鼠模型可知，脂肪合成受到抑制，但加快了脂肪酸代謝和線粒體的增殖[13]。Plin5通過結(jié)合比較基因識別-58(comparative gene identification-58，CGI-58)抑制脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase，ATGL)活性，從而干擾ATGL介導(dǎo)的脂肪分解代謝的過程[14]?？梢?，Plin5在脂肪合成代謝中起到重要作用。另外，Laurens等[15]證明Plin5在脂肪分解過程中，可通過促進脂肪酸氧化來滿足代謝加快的需求。Plin5敲除小鼠經(jīng)高脂飲食后，導(dǎo)致輕微的肝功能受損[16]，可見Plin5是肝臟穩(wěn)態(tài)的多效性調(diào)節(jié)因子[15]。此外，研究顯示Plin5的缺失可干擾線粒體的功能，從而加劇肥胖小鼠心肌的氧化應(yīng)激損傷，最終引起小鼠心臟功能的進一步損害[17]。相反，在小鼠心肌細胞中過表達Plin5會大量增加脂滴中三?；视偷膬Υ鎇18]。也有研究表明，Plin5可能調(diào)節(jié)激素敏感性脂肪酶活性，進而影響肌肉的生長發(fā)育[19]。由上可知，Plin3和Plin5在脂代謝調(diào)節(jié)中發(fā)揮直接作用。

河北科技師范學(xué)院豬種質(zhì)資源挖掘課題組前期對長白豬轉(zhuǎn)錄組測序[20]鑒定出多個與脂質(zhì)代謝相關(guān)的差異表達基因，如Plin3、Plin5、誘導(dǎo)細胞死亡的DFF45樣效應(yīng)因子B基因(cell death-inducing DFF45-like effector B，CIDEB)和誘導(dǎo)細胞凋亡DFF45樣效應(yīng)因子C基因(cell death-inducing DFF45-like effector C，CIDEC)等。進一步將Cidec轉(zhuǎn)染細胞分析脂滴形態(tài)，發(fā)現(xiàn)Plin3和Plin5在此過程中表達量差異明顯。此外，目前對于Plin3和Plin5在調(diào)控長白豬肌肉生長發(fā)育方面鮮有研究[21]。鑒于此，本試驗通過構(gòu)建這2個基因表達載體并研究其在長白豬各個組織中的表達規(guī)律，探究其在調(diào)節(jié)脂肪代謝過程中的潛在作用，旨在為鑒定調(diào)控豬肌內(nèi)脂肪細胞生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗所用樣品來自河北省秦皇島市昌黎縣肉聯(lián)廠，選取營養(yǎng)條件相同體重相似的3頭6月齡雄性長白豬，3頭豬的平均胴體重為79 kg。屠宰采集其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、皮下脂肪、大腸、小腸、背長肌和膀胱11種組織，包裝編號，并迅速置于液氮中。

1.2 主要試劑

TrQuick Reagent、Methylidyne trichloride、異丙醇，河北科技師范學(xué)院動物實驗室；焦碳酸二乙酸、Goldenview，北京拜爾迪生物科技有限公司；2×Es Taq MasterMix，武漢莫納生物科技有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、qPCR SYBR Green Master Mix，上海翊圣生物科技有限公司；DNA凝膠回收試劑盒、DL2000 DNA Ladder，北京索萊寶生物科技有限公司。

1.3 載體和菌株

pcDNA3.1+載體由河北省秦皇島市昌黎縣河北科技師范學(xué)院動物實驗室保存，DH5α菌株購自北京索萊寶生物科技有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 引物設(shè)計與合成 根據(jù)GenBank中收錄的豬的Plin3、Plin5基因序列，使用Primer 5.0軟件設(shè)計引物(表1)，并由北京天一輝遠生物科技有限公司合成。

表1 PCR引物序列信息Table 1 PCR primer sequence information

1.4.2 總RNA提取和cDNA合成 根據(jù)Trizol法[22]提取長白豬11個組織的總RNA，用NanoDrop2000超微量分光光度計(Bio-Rad，美國)檢測其RNA濃度和純度。參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書對11個組織的總RNA進行反轉(zhuǎn)錄。

1.4.3 基因擴增 以1.4.2得到的cDNA為模板進行普通PCR擴增，擴增反應(yīng)體系為10 μL：H2O 3 μL、2×Taq MasterMix 5 μL、100 ng·μL-1cDNA 1 μL、10 μmol·L-1上游引物0.5 μL、10 μmol·L-1下游引物0.5 μL。擴增程序為：95℃預(yù)變性5 min；95℃變性30 s，57℃退火30 s，72℃延伸1 min，35個循環(huán)；72℃再延伸5 min，20℃ 終延伸5 min，4℃條件下保存2 h備用。將產(chǎn)物通過1%瓊脂糖凝膠電泳檢測并用膠回收試劑盒回收PCR片段，隨后與PMD?18-T載體連接后轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細胞，涂布到含Amp+的LB培養(yǎng)基上，并挑取單克隆菌株進行PCR鑒定，送至生工生物工程(上海)股份有限公司測序。

1.4.4 實時熒光定量PCR檢測 根據(jù)SYBR Green熒光染料法[23]進行實時熒光定量PCR，反應(yīng)總體系為20 μL。利用GAPDH為內(nèi)參基因，按照2-△△Ct算法計算Plin3、Plin5基因在各個組織中的相對表達量。每組試驗重復(fù)3次，數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示，并利用Graphpad Prim 8軟件將表達量進行單因素方差分析，不同小寫字母表示存在顯著差異(P<0.05)。

1.4.5 生物信息學(xué)分析 利用表2的生物信息學(xué)分析軟件[22-23]對長白豬的Plin3和Plin5進行分析。Plin3的物種類型分別為人(Homosapiens，登錄號：NP_001157661.1)、豬(Susscrofa，登錄號：NP_001026948.1)、家鼠(Musmusculus，登錄號：NP_080112.1)、斑馬魚(Daniorerio，登錄號：NP_001373243.1)、家犬(Canislupusfamiliaris，登錄號：XP_038284951.1)、家貓(Feliscatus，登錄號：XP_023106648.1)、山羊(Caprahircus，登錄號：NP_001272524.1)、大猩猩(Gorilla，登錄號：XP_018871611.1)、家牛(Bostaurus，登錄號：NP_001070514.1)、家馬(Equuscaballus，登錄號：XP_023500242.1)；Plin5的物種類型有人(Homosapiens，登錄號：NP_001013728.2)、豬(Susscrofa，登錄號：NP_001116607.1)、家鼠(Musmusculus，登錄號：NP_001070816.1)、家犬(Canislupusfamiliaris，登錄號：XP_038284970.1)、家貓(Feliscatus，登錄號：XP_011286089.1)、山羊(Caprahircus，登錄號：XP_017906367.1 )、大猩猩(Gorilla，登錄號：XP_030862323.1)、家牛(Bostaurus，登錄號：NP_001094606.1)、家馬(Equuscaballus，登錄號：XP_023500224.1)、鳉魚(Poeciliareticulata，登錄號：XP_008405304.1)。

表2 生物信息學(xué)軟件Table 2 Bioinformatics software

2 結(jié)果與分析

2.1 長白豬Plin3、Plin5基因克隆

利用表1設(shè)計的特異PCR引物進行PCR克隆，PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后，Plin3基因在約1 400 bp有明亮的擴增條帶，Plin5基因在1 357 bp左右有明亮的擴增條帶。圖1說明PCR擴增產(chǎn)物為單一特異性條帶，片段大小與預(yù)測片段大小幾乎一致，可通過回收DNA片段進行載體轉(zhuǎn)化。

注：P3、P5分別表示Plin3、Plin5的PCR擴增產(chǎn)物；M表示2 000 bp DNA Ladder Marker。Note: P3 and P5 represent the PCR amplification products of Plin3 and Plin5, respectively. M stands for 2 000 bp DNA ladder marker.圖1 PCR擴增凝膠電泳檢測圖Fig.1 Detection of GEL electrophoresis by PCR amplification

2.2 生物信息學(xué)分析

2.2.1 與其他物種系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建 由圖2可知，長白豬Plin3、Plin5氨基酸序列與山羊和家牛的親緣關(guān)系近，Plin3與斑馬魚親緣關(guān)系遠；Plin5氨基酸序列與鳉魚的親緣關(guān)系遠。同時，將長白豬Plin3、Plin5與其他物種序列比對分析其同源性可知，Plin3與山羊的同源性最高(89.98%)，與斑馬魚的同源性最低(39.60%)；Plin5與山羊的同源性也最高(90.17%)，與鳉魚的同源性最低(26.94%)。此結(jié)果與進化樹的結(jié)果一致。

注：A為Plin3系統(tǒng)進化樹圖；B為Plin5系統(tǒng)進化樹圖。Note: A is the phylogenetic tree of Plin3 system. B is the phylogenetic tree of Plin5 system.圖2 豬Plin3、Plin5系統(tǒng)進化樹Fig.2 Phylogenetic tree of pig Plin3 and Plin5

2.2.2 長白豬Plin3、Plin5蛋白質(zhì)理化性質(zhì)預(yù)測 經(jīng)克隆得到的Plin3蛋白質(zhì)分子式是C2067H3354N596O675S17，其分子量為47 899.98 Da，理論等電點為5.60，編碼439個氨基酸，編碼的氨基酸數(shù)量見表3，纈氨酸(V)個數(shù)為49，比例最高，為11.2%，不含吡咯賴氨酸和硒半胱氨酸，消光系數(shù)是29 575，推測半衰期為30 h，不穩(wěn)定指數(shù)46.22，為不穩(wěn)定蛋白，脂肪系數(shù)為81.91，總平均親水性為-0.245。Plin5的蛋白質(zhì)分子式為C2205H3532N654O670S19，其分子量為50 533.42 Da，理論等電點為5.50，編碼458個氨基酸，編碼氨基酸數(shù)量見表4，亮氨酸(L)個數(shù)為59，比例最高，為12.9%，不含吡咯賴氨酸和硒半胱氨酸，消光系數(shù)是48 970，推測半衰期為30 h，不穩(wěn)定指數(shù)57.69，為不穩(wěn)定蛋白，脂肪系數(shù)為87.77，總平均親水性為-0.382。

表3 Plin3編碼的蛋白質(zhì)氨基酸組成Table 3 Amino acid composition of proteins encoded by Plin3

2.2.3 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu) 經(jīng)預(yù)測長白豬Plin3二級結(jié)構(gòu)見圖3-A，其中無規(guī)則卷曲占21.13%、延伸鏈占3.19%、α-螺旋占74.03%、β-轉(zhuǎn)角占1.59%；Plin5二級結(jié)構(gòu)見圖3-B，其中無規(guī)卷曲占26.64%、延伸鏈占2.84%、α-螺旋占68.12%、β-轉(zhuǎn)角占2.40%。Plin3蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)建模預(yù)測如圖3-C所示，全面模型評估值是0.41，序列相似性為0.52，模型構(gòu)建符合要求，該三級結(jié)構(gòu)顯示其存在多個α-螺旋結(jié)構(gòu)；Plin5蛋白三級結(jié)構(gòu)建模預(yù)測如圖3-D所示，全面模型評估值是0.38，序列相似性為0.40，模型構(gòu)建符合要求，該三級結(jié)構(gòu)顯示其存在多個α-螺旋結(jié)構(gòu)。用STRING數(shù)據(jù)庫預(yù)測與Plin3相互作用的蛋白(圖3-E)，結(jié)果顯示，Plin3可能與M6PR、PNPLA2和ABHD5等蛋白存在相互作用。用STRING數(shù)據(jù)庫搜索與Plin5蛋白可能相互作用的蛋白(圖3-F)，結(jié)果顯示Plin5可能與ABHD5、PNPLA2和PNPLA3等蛋白存在相互作用。

表4 Plin5編碼的蛋白質(zhì)氨基酸組成Table 4 Amino acid composition of protein encoded by Plin5

注：A：Plin3蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)，h為α-螺旋，e為延伸鏈，t為β-轉(zhuǎn)角，c為無規(guī)則卷曲；B：Plin5蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)；C：Plin3蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)；D：Plin5蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)；E：Plin3相互作用蛋白預(yù)測；F：Plin5相互作用蛋白預(yù)測。Note: A: The secondary structure of Plin3 protein. h is α -helix. e is extended chain. t is β-turn angle. c is random crimp. B: The secondary structure of Plin5 protein. C: The tertiary structure of Plin3 protein. D: The tertiary structure of Plin5 protein. E: The prediction of Plin3 interacting protein. F:The predicted of Plin5 interacting protein. 圖3 長白豬Plin3、Plin5蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.3 Protein structure prediction of Plin3 and Plin5 in landraces

2.2.4 蛋白質(zhì)疏水性、信號肽及跨膜區(qū)分析 由圖4-A可知，Plin3整條氨基酸鏈在第423位氨基酸處有最大疏水值1.756，第268位氨基酸處有最小疏水值 -2.789， 總平均疏水性為-0.339，可以看出Plin3靠近N端前端表現(xiàn)出較強的親水區(qū)域(score>1)，中端靠近C端位置表現(xiàn)出較強的疏水性。由圖4-B可知，Plin5整條氨基酸鏈在383位點有最大疏水值1.967，在193位點有最小疏水值-3.133，總平均疏水性為-0.380，Plin5靠近N端位置表現(xiàn)出較強的疏水性，靠近C端位置存在較強的親水性。同時對Plin3、Plin5蛋白的信號肽及跨膜區(qū)域結(jié)構(gòu)進行預(yù)測分析可知，兩個蛋白均無信號肽、無跨膜區(qū)域結(jié)構(gòu)。

注：A：Plin3蛋白疏水性分析；B：Plin5蛋白疏水性分析。Note: A: The hydrophobicity analysis of Plin3 protein. B: The hydrophobicity analysis of Plin5 protein.圖4 長白豬Plin3、Plin5蛋白疏水性Fig.4 Hydrophobicity of Plin3 and Plin5 proteins in landraces

注：不同小寫字母表示不同組織之間差異顯著(P<0.05)。Note:Different lowercase letters indicate significant differences between tissues at 0.05 level.圖5 長白豬Plin3、Plin5基因在不同組織中的表達量Fig.5 Expression of Plin3 and Plin5 genes in different tissues of landraces

2.2.5 蛋白質(zhì)磷酸化位點預(yù)測 預(yù)測結(jié)果顯示長白豬Plin3共有53個磷酸化位點，其中絲氨酸上有30個磷酸化位點，蘇氨酸上有21個磷酸化位點，酪氨酸上有2個磷酸化位點；Plin5共有25個磷酸化位點，絲氨酸上有18個磷酸化位點，蘇氨酸上有6個磷酸化位點，酪氨酸上有1個磷酸化位點。之后，對Plin3、Plin5進行糖基化位點預(yù)測，兩個蛋白均無N端糖基化位點；Plin3含有23個O端糖基化位點，Plin5含有10個O端糖基化位點。

2.3 長白豬Plin3、Plin5基因的組織表達譜

由圖5-A可知，Plin3在長白豬的各個組織中均有表達，在脾中的相對表達量顯著高于在其他10種組織中，其次是肝、膀胱、腎、小腸、肺、脂肪，在背長肌中的相對表達量最低。由圖5-B可知，Plin5在脂肪組織中的相對表達量顯著高于在其他組織，其次是腎、肝、背長肌、心、肺、脾、膀胱、胃，在大腸和小腸中幾乎不表達，且在腎臟中的相對表達量除了與肝中的相對表達量差異不顯著以外，與其他組織中的相對表達量均有顯著差異。

3 討論

本研究成功克隆了Plin3、Plin5基因全長序列，其中Plin3序列全長1 403 bp，編碼439個氨基酸，Plin5序列全長1 397 bp, 編碼458個氨基酸，與Genbank數(shù)據(jù)庫中豬的Plin3、Plin5序列一致。2個基因在多個物種中均有表達，其中在小鼠和山羊中Plin3均編碼437個氨基酸[24-25]；Plin5在人和鼠物種上編碼463個氨基酸[26]，在不同物種中2個基因編碼的氨基酸數(shù)量差異不大，證明2個基因的遺傳距離較近。對兩者氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，Plin3和Plin5氨基酸序列與山羊和家牛的氨基酸序列同源性較高，進化樹分析顯示與山羊和家牛的親緣關(guān)系也較近，推測2個蛋白質(zhì)的保守性較強，此結(jié)果與郝娟等[25]在西農(nóng)薩能羊和焦迪等[26]在陸川豬中的研究結(jié)果一致。

動物體內(nèi)脂肪沉積的形成主要受脂質(zhì)代謝平衡的影響，脂滴在脂代謝平衡中起重要作用。PAT蛋白是覆蓋在脂滴表面的結(jié)構(gòu)蛋白，包含兩親性螺旋結(jié)構(gòu)[27]，這些結(jié)構(gòu)特征使其與其他蛋白質(zhì)能夠緊密結(jié)合。本研究預(yù)測Plin3、Plin5蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，這兩種蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋組成，與其三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果一致。進一步預(yù)測發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白質(zhì)含有大量的疏水性殘基，可緊密結(jié)合在脂滴表面。本研究還發(fā)現(xiàn)兩種蛋白無信號肽、無跨膜結(jié)構(gòu)和N端糖基化位點，但經(jīng)預(yù)測其有多個磷酸化位點和O端糖基化位點。研究表明，腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)可誘導(dǎo)Plin3的S31和T216位點磷酸化，促進脂滴分解[28]；兒茶酚胺可使Plin5的S140和S155位點磷酸化，增強脂肪分解[29]。同時，本研究預(yù)測Plin3和Plin5均與甘油三脂水解酶(patatin like phospholipase domain containing 2，PNPLA2)和含自水解酶域蛋白5(α/β-hydrolase domain containing 5，ABHD5)相互作用，Karczewska等[30]已證實PAT家族蛋白確與PNPLA2和 ABHD5相互作用。因此推測，Plin3和Plin5蛋白可通過蛋白互作形式調(diào)控脂質(zhì)代謝，但在長白豬中如何發(fā)揮作用仍不清楚，因此本研究進一步分別探究了Plin3和Plin5基因在長白豬體內(nèi)的表達情況。

本研究采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測Plin3和Plin5在長白豬11個組織中的表達情況，其中Plin3在肝臟和脾臟中的相對表達量較高，而郝娟等[25]發(fā)現(xiàn)西農(nóng)薩能羊Plin3在乳腺中的表達量最高，但該基因在這2個物種肌肉組織中的表達量均較低，表明Plin3的表達具有物種特異性。Plin5在長白豬的脂肪組織中表達量最高，其次是腎臟、肝臟，而焦迪[31]研究發(fā)現(xiàn)Plin5在陸川豬和杜洛克豬的肝臟中表達量最高，表明Plin5在相同物種不同豬品種之間的表達有一定差異，且以上組織的耗氧量均較高，由此推測Plin5與能量代謝相關(guān)。在Plin5的功能研究中，王天宇[32]研究發(fā)現(xiàn)在小鼠體內(nèi)過表達Plin5時，解偶聯(lián)蛋白1(uncoupling protein1，UCP1)含量增高，促進了白色脂肪棕色化，這表明Plin5參與調(diào)節(jié)脂肪組織的脂質(zhì)代謝；在高脂飲食的小鼠模型中，Ma等[33]發(fā)現(xiàn)鈣調(diào)素(calmodulin，CaM)缺失抑制Plin5蛋白分解，從而阻礙了肝細胞脂肪分解，導(dǎo)致非酒精性脂肪肝形成；Anastasia等[34]發(fā)現(xiàn)在高脂飲食下，Plin5缺失的小鼠，抑制NLR家族含嘧啶結(jié)構(gòu)域3(NOD-like receptor protein 3，NLRP3)的激活，導(dǎo)致輕微的肝臟損傷；Kuramoto等[35]研究發(fā)現(xiàn)Plin5在心臟中也有重要功能，通過保護脂滴減少線粒體中脂肪酸的氧化來抑制過量的活性氧產(chǎn)生。綜上，Plin3在大多數(shù)的組織中廣泛表達，在調(diào)控脂肪分解代謝和肝臟脂肪變性的過程中起到重要作用；Plin5主要在氧化組織中表達，在脂質(zhì)的儲存方面起重要作用。綜合以上結(jié)果可知，這兩個蛋白質(zhì)在脂代謝過程中發(fā)揮的特定作用取決于其所在的位置。但目前鮮見這兩種基因在長白豬生長發(fā)育中分子機制的相關(guān)報道。因此，本研究可為兩種基因在長白豬脂質(zhì)代謝機制研究中提供一定的理論依據(jù)。

4 結(jié)論

本研究首次克隆了長白豬Plin3、Plin5基因的全長序列，其序列長度分別為1 403、1 397 bp。兩個蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)均以α-螺旋為主，且蛋白保守性強。Plin3在長白豬的脾臟和肝臟中相對表達量顯著高于其他組織中的相對表達量，肌肉中相對表達量最低；Plin5在長白豬脂肪組織中的相對表達量最高，在大腸和小腸內(nèi)不表達，肝臟組織和脂肪組織是對能量代謝活躍的器官。因此推測，Plin3、Plin5基因在脂質(zhì)能量代謝方面發(fā)揮作用。