血清GDNF、IL-2在兒童注意缺陷多動(dòng)障礙中的表達(dá)及臨床意義

黎鵬，王菊紅

1.寶雞市中醫(yī)醫(yī)院兒科，陜西寶雞 721000；

2.寶雞市婦幼保健院兒童免疫內(nèi)分泌科，陜西寶雞 721000

注意缺陷多動(dòng)障礙(attention deficit hyperactivity disorder，ADHD)是一種常見的兒童疾病，影響6%～10%的學(xué)齡兒童，其癥狀主要表現(xiàn)為持續(xù)的注意力不集中，伴或不伴多動(dòng)癥，容易出現(xiàn)沖動(dòng)行為[1-2]。其中多動(dòng)癥是兒科心理學(xué)家和精神科醫(yī)生治療時(shí)最常見的疾病，該病將影響兒童的智力發(fā)育，將會(huì)是造成兒童成長(zhǎng)過(guò)程中學(xué)業(yè)失敗、情緒困難、青春期和成年期同伴關(guān)系不佳的重要風(fēng)險(xiǎn)因素[3-4]，甚至可能對(duì)社會(huì)產(chǎn)生一定程度的危害。因此尋找早期判斷ADHD的生物指標(biāo)，對(duì)兒童的健康成長(zhǎng)具有重要意義。膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族中的一員[5]，與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor，TGF)-β密切相關(guān)。GDNF作為一種多效性因子在腸道神經(jīng)系統(tǒng)的形成、突觸可塑性、神經(jīng)嵴細(xì)胞的遷移、腎臟的形成和胎兒生殖細(xì)胞的維持等多個(gè)發(fā)育過(guò)程中都是必不可少的[6]。白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)是一種炎癥細(xì)胞因子，由抗原激活的T細(xì)胞分泌[7]。IL-2最初被鑒定為是一種T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，現(xiàn)在大量研究結(jié)果證明其具有廣泛的作用，有研究表明IL-2可以通過(guò)多種途徑參與神經(jīng)細(xì)胞功能的調(diào)控，與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[8]。目前有關(guān)GDNF、IL-2在ADHD患兒血清中的表達(dá)及相關(guān)臨床研究較少。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)ADHD患兒血清中GDNF、IL-2表達(dá)變化，分析兩者在ADHD中的作用及關(guān)系，初步探討其可能的潛在價(jià)值和臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年7月至2020年5月在寶雞市中醫(yī)醫(yī)院和寶雞市婦幼保健院就診的85例ADHD兒童納入ADHD組，其中男性51例，女性34例；年齡5～12歲，平均(7.65±0.74)歲。將確診兒童分為注意力缺陷(PIT)為主型組(n=28)、多動(dòng)-沖動(dòng)(HIT)為主型組(n=21)、混合型(CT)組(n=36)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)兒童ADHD診斷標(biāo)準(zhǔn)按照美國(guó)《精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(第5版)》[9]；(2)就診前未使用治療ADHD的藥物；(3)初次確診為ADHD患兒。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有家族遺傳史者；(2)有過(guò)敏性疾病、內(nèi)分泌代謝性等疾病者；(3)有先天性精神障礙、智力障礙者；(4)臨床資料不完整者。選取同期體檢的健康兒童60例為對(duì)照組，其中男性35例，女性25例；年齡5～11歲，平均(7.55±0.81)歲。本研究經(jīng)兩家醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有樣品采集均取得受試者家長(zhǎng)知情同意，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及檢測(cè)ADHD組兒童于入院次日清晨采集空腹靜脈血5 mL，對(duì)照組兒童于體檢當(dāng)日采集空腹靜脈血5 mL，將其放入離心機(jī)，采用3 000 r/min離心處理10 min后取上層血清置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 血清GDNF、IL-2水平檢測(cè)分別使用人GDNF ELISA試劑盒(貨號(hào)：ab100525，Abcam公司)試劑盒、人IL-2 ELISA試劑盒(貨號(hào)：ab281169，Abcam公司)試劑盒，采用ELISA法檢測(cè)各組受檢者血清中GDNF、IL-2表達(dá)水平，具體操作步驟按照ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析；采用Pearson相關(guān)系數(shù)法分析GDNF與IL-2表達(dá)的相關(guān)性；利用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)評(píng)價(jià)血清GDNF、IL-2水平對(duì)ADHD的診斷價(jià)值；通過(guò)Logistic回歸分析法分析ADHD的影響因素。均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者的一般資料比較兩組受檢者的性別、年齡、身高、體質(zhì)量、BMI、分娩方式比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但兩組受檢者在家庭教育方式是否粗暴、是否為單親、兒童是否孤獨(dú)方面比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組受檢者的一般資料比較[例(%)，±s]

表1 兩組受檢者的一般資料比較[例(%)，±s]

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2.2 兩組受檢者的血清GDNF和IL-2水平比較ADHD組兒童血清中GDNF、IL-2表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組受檢者的血清GDNF、IL-2水平比較(±s)

表2 兩組受檢者的血清GDNF、IL-2水平比較(±s)

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2.3 不同ADHD分型患者血清GDNF和IL-2水平比較HIT組患者血清GDNF水平高于CT組，CT組高于PIT組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；CT組IL-2水平高于HIT組，HIT組高于PIT組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同ADHD分型患者血清GDNF和IL-2表達(dá)水平比較(±s)

注：與CT組比較，aP＜0.05；與PIT組比較，bP＜0.05。

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2.4 ADHD兒童血清中GDNF和IL-2表達(dá) 的相關(guān)性Pearson相關(guān)系數(shù)法分析結(jié)果顯示，ADHD兒童血清中GDNF、IL-2表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.363，P＜0.05)，見圖1。

2.5 血清中GDNF、IL-2水平對(duì)ADHD的診斷價(jià)值血清GDNF、IL-2水平預(yù)測(cè)ADHD的曲線下面積(area under the ROC curve，AUC)分別為0.639(95%CI：0.555～0.717)、0.922(95%CI：0.865～0.960)，對(duì)應(yīng)的敏感性分別為54.12%、80.00%，特異性分別為66.70%、98.33%，血清GDNF、IL-2水平聯(lián)合預(yù)測(cè)ADHD的AUC為0.927(95%CI：0.872～0.964)，敏感性為84.71%，特異性為95.00%，見圖2。

2.6 影響ADHD發(fā)生的因素以是否發(fā)生ADHD為因變量，以血清GDNF、IL-2水平、年齡、身高、體質(zhì)量、BMI、分娩方式、家庭教育方式粗暴、父母關(guān)系、兒童孤單為自變量，經(jīng)Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清GDNF、IL-2水平、家庭教育方式粗暴、父母關(guān)系、兒童孤單均是發(fā)生ADHD的危險(xiǎn)因素(P＜0.05)，見表4。

表4 影響ADHD發(fā)生的多因素Logistic回歸分析

3 討論

ADHD是一種非常普遍的神經(jīng)發(fā)育障礙，其特征是注意力不集中、多動(dòng)和沖動(dòng)?；加卸鄤?dòng)癥的兒童經(jīng)常表現(xiàn)出認(rèn)知、情感和運(yùn)動(dòng)控制方面的困難[10]。ADHD的病因復(fù)雜，研究表明遺傳以及外界環(huán)境等均是影響疾病的因素[11-12]。ADHD最常用的治療方法是采用精神藥物和進(jìn)行行為管理。雖然二者都可以非常有效地減少ADHD的癥狀，但它們也有一定的局限性，例如對(duì)治療無(wú)反應(yīng)和負(fù)面副作用等[13]。因此尋找早期判斷ADHD兒童的指標(biāo)，對(duì)兒童的生命健康具有重要意義。

GDNF是一種糖基化二硫鍵連接的同源二聚體蛋白，是TGF-β的成員[14]。各種研究已經(jīng)闡明GDNF的異常表達(dá)與多種人類疾病有關(guān)。GDNF配體家族及其不同的受體系統(tǒng)目前被認(rèn)為是神經(jīng)系統(tǒng)中主要的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)網(wǎng)絡(luò)之一，對(duì)各種神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育、維持和功能具有重要作用[15]。本研究中ADHD兒童血清中GDNF表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組，且HIT組患者血清GDNF水平高于CT組，CT組高于PIT組，提示GDNF可能在ADHD的發(fā)展過(guò)程中起重要作用，對(duì)ADHD的臨床分型有重要價(jià)值；ROC結(jié)果顯示，血清GDNF水平預(yù)測(cè)ADHD的曲線下面積為0.639(95%CI：0.555～0.717)，對(duì)應(yīng)的敏感度為54.12%，特異度為66.70%，表明GDNF可在一定程度上對(duì)ADHD進(jìn)行診斷。

IL-2是一種多效性炎癥細(xì)胞因子，由位于人4號(hào)染色體4q27位點(diǎn)的基因編碼，分子量約為45.5 kDa[16]，在免疫炎癥反應(yīng)過(guò)程中有重要調(diào)節(jié)作用，有研究發(fā)現(xiàn)IL-2可以調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺代謝[17-18]。本研究中，ADHD兒童血清IL-2水平顯著高于對(duì)照組，且CT組IL-2水平高于HIT組，HIT組高于PIT組，表明IL-2可能參與ADHD的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，且對(duì)判定ADHD臨床分型有重要臨床意義；研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，血清中GDNF與IL-2表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)，提示GDNF與IL-2相互影響，進(jìn)而協(xié)同影響ADHD發(fā)病進(jìn)程，但其具體影響機(jī)制有待進(jìn)一步研究。ROC結(jié)果顯示，IL-2水平預(yù)測(cè)ADHD的曲線下面積為0.922(95%CI：0.865～0.960)，對(duì)應(yīng)的敏感度為80.00%，特異度為98.33%，與GDNF二者聯(lián)合預(yù)測(cè)ADHD兒童的AUC為0.927(95%CI：0.872～0.964)，敏感度為84.71%，特異度為95.00%，特異度為89.25%，提示二者聯(lián)合診斷高于單獨(dú)診斷，可以更好地篩查ADHD兒童。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清GDNF、IL-2水平、家庭教育方式粗暴、父母關(guān)系、兒童孤單均是發(fā)生ADHD的危險(xiǎn)因素，提示GDNF、IL-2共同參與ADHD的發(fā)生發(fā)展，且二者水平升高會(huì)增加ADHD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)GDNF、IL-2水平進(jìn)行早期監(jiān)控可能有助于診治ADHD。

綜上所述，GDNF和IL-2在ADHD兒童血清中均呈現(xiàn)高表達(dá)，二者呈顯著正相關(guān)，提示二者可能參與ADHD的發(fā)生、發(fā)展，可作為ADHD的早期診斷及病情評(píng)估的生物學(xué)指標(biāo)，具有重要的臨床意義。