過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑治療豬急性回腸炎效果研究

張 黎談小龍王 辰 譚 凡 鄭龍龍*

（1山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山西太谷 030801；2安徽省六安市畜牧發(fā)展中心，安徽六安 237000）

胞內(nèi)勞森氏菌(lawsonia intracelularis,Law-bacteria)可引起的豬回腸、盲腸、結(jié)腸黏膜等部位呈以腺瘤樣增生為主要特征的腸道傳染病，常造成13～16周齡(3～4月齡)育肥期和成年豬群出現(xiàn)急性猝死和血痢的臨床癥狀[1,2]。我國養(yǎng)豬業(yè)在飼料“禁抗”壓力下，豬增生性腸炎(pig proliferative enteritis,PPE)對豬場造成的損失更為顯著，同時與非洲豬瘟的血便有相似之處，為降低該病造成臨床更大的損失，豬場管理者主要通過添加治療性藥物和口服疫苗的方式綜合防控[3,4]。

考慮到要謹(jǐn)慎使用抗生素和逐漸出現(xiàn)耐藥菌株的威脅，藥物防控效果越來越差，同時工作量大，操作復(fù)雜，嚴(yán)重制約了該病的有效防控。控制和預(yù)防豬回腸炎的長期策略應(yīng)基于豬場特有的免疫接種計劃、生物安全和降低風(fēng)險因素等綜合措施。過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑具有高效、穩(wěn)定、低毒、刺激性小、易操作、水質(zhì)要求低等優(yōu)勢[5,6]，通過飲水消毒的方式相比投藥和疫苗免疫防控豬回腸炎是更優(yōu)的選擇。

本文通過PCR檢測糞便攜帶細(xì)菌情況[7]，對比抗生素(泰妙菌素)和飲用水最常用消毒劑(漂白粉)對回腸炎的防控效果，探討過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑治療豬急性回腸炎的效果，為該病的控制提供新思路。

1 材料與方法

1.1 豬群情況

選取5個相同豬苗提供場(各500頭)的3月齡育肥豬，且有豬乃急性死亡，病豬臨床表現(xiàn)為排煤焦油樣黑色稀薄糞便。試驗前對豬乃糞便進(jìn)行多重PCR鑒定，未檢測到豬沙門氏菌和螺旋體核酸，而胞內(nèi)勞森菌核酸檢測為陽性。無菌棉簽每天各取糞便10份，連續(xù)采樣7天，總計350份，置于1.5 mL含生理鹽水的EP管中，-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗材料

過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑由山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院動物病理學(xué)實驗室提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 治療方式

歐美國家常以泰妙菌素(100%)60 g/T作為治療豬回腸炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”[8]，我國常以80%含量的泰妙菌素110～200 g/T拌料用于治療急性出血性回腸炎[9]，均取得較好的臨床效果。本文以100 g/T 80%含量的泰妙菌素(A組)、10 g/T漂白粉(B組)作為對照組，不同稀釋比例的過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑治療組(C組、D組、E組)作為試驗組，通過早晚各1次飲水，連續(xù)用藥7 d的方式，治療豬急性出血性腸炎，詳見表1。

表1 豬急性出血性回腸炎治療方法

1.3.2 多重PCR鑒定

無菌棉簽蘸取100 mg發(fā)病豬糞便加入1 mL無菌生理鹽水混勻，浸泡10 min后以2 000 r/min離心5 min，取上清液提取DNA，進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)勞森菌等多重PCR檢測[10]。引用Elder已建立的特異性檢測方法，對糞便樣本進(jìn)行胞內(nèi)勞森菌(Law-bacteria)、豬沙門氏菌(porcine salmonellosis,PS)和豬蛇形螺旋體(serpulina hyodysenteriae,SD)的檢測[11]，其中，設(shè)計胞內(nèi)勞森氏菌的引物為 Law-F：5’CACTCCG-3’，Law-R：5’-TGAAGGTATTGGTATTCTCC-3’，產(chǎn)物長度319 bp[12]；豬沙門氏菌的引物為PS-F：5’-TGC CTACAAGCATGAAATGG-3’，PS-R：5’-AAACTGG ACCACGGTGACAA-3’，產(chǎn)物長度為457 bp[13]；螺旋體引物為SD-F：5’-GGTACAGGCGGAAACACGAC-3’，SD-R：5’-TCCTATTCTCTGACCTACTG-3’，產(chǎn)物長度為1 550 bp[14]。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。反應(yīng)條件為：94℃5 min，94℃30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共34個循環(huán)，72℃ 5 min，反應(yīng)結(jié)束后的產(chǎn)物12℃保存。

1.3.3 糞便評分

腹瀉指數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn)參照Kelly等提供的方法[15]，見表2。

表2 糞便評分標(biāo)準(zhǔn)

2 試驗結(jié)果

2.1 治療期間各治療組糞便評分

泰妙菌素(A組)和過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(C組、D組，1∶1 000×20～1)治療期間均能在第3 d顯著治療豬急性回腸炎，減少臨床死亡；漂白粉(B組)和過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(E組，1∶4 000)稀釋時效果相當(dāng)，第5 d才能對豬急性回腸炎有治療效果。過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(C組，1∶1 000)治療第6 d和過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(D組，1∶2 000)、泰妙菌素(A組)治療第7 d能完全控住腹瀉。詳見表3。

表3 治療期間各治療組糞便評分結(jié)果

2.2 PCR鑒定

泰妙菌素(A組)和過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(C組，1∶1 000)治療組第3 d的豬糞便中胞內(nèi)勞森菌的核酸檢測呈陰性；過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(D組，1∶2 000)治療組第5 d的豬糞便中胞內(nèi)勞森菌的核酸檢測呈陰性；漂白粉(B組)和過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(E組，1∶4 000)治療組第6 d的豬糞便中胞內(nèi)勞森菌的核酸檢測呈陰性。詳見表4。

表4 治療期間糞便中的胞內(nèi)勞森菌核酸檢測結(jié)果

3 討論

胞內(nèi)勞森菌主要通過糞便排菌，豬發(fā)生急性出血性腸炎時糞便中的帶菌量很大，能夠污染圈舍內(nèi)的用具和環(huán)境。胞內(nèi)勞森菌常見的間接傳播媒介有：膠鞋、鐵鍬、老鼠等。接觸到病豬糞便的工具、人員和其他動物均可使病原菌進(jìn)行長距離傳播。胞內(nèi)勞森菌引起的豬急性出血性回腸炎的凈化工作比較困難，疫苗不能清除病原體攜帶者，需要采取綜合措施對其進(jìn)行防控。病原菌嚴(yán)格胞內(nèi)寄生，環(huán)境消毒僅能減少排泄物中的病原載量；藥物防控成本高，乃能暫時控制疾病造成的損傷，無法修復(fù)已經(jīng)破損的腸絨毛，且容易形成耐藥性和造成藥物殘留。

日常飲水消毒具有操作簡便、成本低廉、安全高效，不易產(chǎn)生耐藥性，并可降低排泄物中病原載量。畜禽日常飲用稀釋過的過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑后，可有效降低畜禽排泄物中的病菌含量，且對豬急性回腸炎具有治療作用。超低劑量稀釋的過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑治療豬急性回腸炎，在使用后第6 d，豬糞便中胞內(nèi)勞森菌核酸呈陰性。

4 結(jié)論

綜上所述，過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑對治療豬急性回腸炎效果明顯，在生豬養(yǎng)殖過程中有潛在的飲水消毒應(yīng)用前景。