TTF-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床意義

徐春紅，戴保秀，潘 云

（1.大理護(hù)理職業(yè)學(xué)院，云南大理 671006；2.玉溪市人民醫(yī)院，云南玉溪 653100；3.大理大學(xué)第一附屬醫(yī)院，云南大理 671000）

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）為女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)發(fā)病率有逐年上升的趨勢。據(jù)報道在每10 000例國外女性中，約有10～19例子宮內(nèi)膜癌患者〔1〕。研究〔2〕表明我國子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中排列第二，近年來其病死率也呈現(xiàn)上升趨勢。國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期的Ⅰ期及Ⅱ期子宮內(nèi)膜癌患者5年存活率一般在90%以上，Ⅲ期患者5年存活率為57%~66%，而Ⅳ期患者5年存活率僅為20%~26%〔3〕，目前子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后并不理想。因此，闡明子宮內(nèi)膜癌的病因、發(fā)病機(jī)制，對改善子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后尤為關(guān)鍵。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）是肺癌、甲狀腺癌病理診斷中常用的免疫組化指標(biāo)。TTF-1的基因定位于人類染色體14q13，具有器官特異性〔4〕。在相關(guān)器官組織的形態(tài)發(fā)生發(fā)育、分化過程中，TTF-1都扮演著關(guān)鍵的角色。此外，部分基因的表達(dá)調(diào)節(jié)與TTF-1有關(guān)，保持維護(hù)器官組織的功能也與TTF-1有關(guān)。研究報道在泌尿系統(tǒng)部分小細(xì)胞癌、乳腺癌等病變中，均出現(xiàn)不同程度的TTF-1表達(dá)〔5〕，說明TTF-1的表達(dá)譜比較寬泛。因此，臨床工作中，有必要重新認(rèn)識TTF-1在子宮內(nèi)膜癌中的診斷意義。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本 標(biāo)本采集自2010年1月至2015年6月在大理大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的患者，其中，子宮內(nèi)膜正常者11例（以下稱“正常組”）、子宮內(nèi)膜增生者17例（以下稱“增生組”）、子宮內(nèi)膜癌者45例（以下稱“內(nèi)膜癌組”），共計73例。依據(jù)世界衛(wèi)生組織的分級標(biāo)準(zhǔn)，將內(nèi)膜癌組又分為：高分化組（25例）和中、低分化組（20例）。臨床中一般將子宮內(nèi)膜癌分為Ⅰ型子宮內(nèi)膜樣腺癌和Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌。按此標(biāo)準(zhǔn)對研究標(biāo)本進(jìn)行分期，Ⅰ型33例，Ⅱ型12例。納入實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本，手術(shù)前沒有實(shí)施相關(guān)的診療方案，如放療、診斷性手術(shù)等。

1.1.2 主要試劑TTF-1一抗，即用型鼠抗人TTF-1單克隆抗體（Dako公司，型號：8G7G3/1）；TTF-1二抗（羊抗，Dako公司）；DAB顯色劑（Dako公司），按說明書以DAB原液與DAB稀釋液1∶50的比例混合，避光保存；磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）；檸檬酸鹽緩沖液（0.01 mol/L，pH 6.0）。

1.2方法

1.2.1 免疫組化SP法檢測TTF-1表達(dá) 選取蠟塊切片，厚度4 μm。切片脫蠟及水化，0.5% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，檸檬酸鹽緩沖液高溫修復(fù)組織抗原（220 s），冷卻后用PBS沖洗。5%羊血清室溫孵育30 min；加入TTF-1一抗，4℃冰箱過夜。第2天取出復(fù)溫1 h，PBS沖洗，加入TTF-1二抗，室溫孵育60 min。DAB試劑顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核、脫水、透明，中性樹膠封片。PBS代替一抗，作陰性對照；已知TTF-1陽性的肺腺癌，作陽性對照。

1.2.2 判斷標(biāo)準(zhǔn)TTF-1陽性結(jié)果定位在目標(biāo)細(xì)胞核。表現(xiàn)為相應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞核中有棕黃色顆粒呈現(xiàn)，陽性率＞5%判斷為陽性。

1.2.3 統(tǒng)計分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，運(yùn)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行計數(shù)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種不同內(nèi)膜組織標(biāo)本中TTF-1的表達(dá) 免疫組化染色結(jié)果顯示，TTF-1表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺體腺上皮細(xì)胞核，細(xì)胞核中出現(xiàn)棕褐色的顆粒。在正常增生期，可見部分增生子宮內(nèi)膜腺體腺上皮細(xì)胞核TTF-1陽性表達(dá)；在正常分泌期，可見較多分泌期子宮內(nèi)膜腺體腺上皮細(xì)胞核TTF-1陽性表達(dá)；在復(fù)雜性增生子宮內(nèi)膜中，可見部分子宮內(nèi)膜腺體腺上皮細(xì)胞核TTF-1陽性表達(dá)。中、高分化子宮內(nèi)膜癌中，可見部分癌細(xì)胞核TTF-1陽性表達(dá)；低分化子宮內(nèi)膜癌中，可見大部分癌細(xì)胞核TTF-1陽性表達(dá)。見圖1~2。

圖1 TTF-1在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜增生組織中的表達(dá)（20×）

圖2 TTF-1在不同分化程度子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)（40×）

2.2 TTF-1在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況TTF-1在正常組、增生組、內(nèi)膜癌組中的陽性率分別為45%、35%、16%。與正常組比較，內(nèi)膜癌組中TTF-1陽性率較低（P=0.030），表明僅部分內(nèi)膜癌表達(dá)TTF-1。見表1。33例Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌及12例Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中，TTF-1的陽性率分別為18%、8%，兩種類型子宮內(nèi)膜癌中TTF-1的陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

表1 不同子宮內(nèi)膜組織中TTF-1的表達(dá)

表2 子宮內(nèi)膜癌Ⅰ型及Ⅱ型中TTF-1的表達(dá)

2.3 TTF-1表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 在內(nèi)膜癌組中，與高分化子宮內(nèi)膜癌比較，TTF-1在中、低分化子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)明顯上調(diào)（P=0.017），提示TTF-1在不同分化程度的子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)有差異，且隨腫瘤的分化程度降低而逐漸升高。TTF-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，與患者年齡（P=0.465）、民族（P=0.826）、手術(shù)病理分期（P=0.180）、腫瘤浸潤肌層深度（P=0.660）、有無轉(zhuǎn)移（P=0.290）均無相關(guān)性。見表3。

3 討論

Niu等〔6〕研究表明，TTF-1在28例正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性率為54%。Sullivan等〔7〕報道TTF-1在216例正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性率為55%，45例單一增生內(nèi)膜組織中TTF-1的陽性率為53%，25例異型增生內(nèi)膜標(biāo)本中TTF-1的陽性率為52%。何惠嫦等〔8〕報道了23例子宮內(nèi)膜增生未惡變組中TTF-1的陽性率為60.8%，比內(nèi)膜增生發(fā)生惡變組中TTF-1的陽性率高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。陳蘇瓊等〔9〕研究表明在32例正常子宮內(nèi)膜組織中，TTF-1的陽性率為68.75%。張越等〔10〕研究也表明，30例正常子宮內(nèi)膜組織中TTF-1的陽性率為70.00%，30例非典型增生子宮內(nèi)膜組織中TTF-1的陽性率為53.33%，其結(jié)果提示正常子宮內(nèi)膜組織中TTF-1顯著表達(dá)，而增生內(nèi)膜中TTF-1的表達(dá)呈下降趨勢。本研究中正常組11例，增生組17例，其TTF-1的陽性率分別為45%、35%，正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜增生病變中TTF-1的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本研究及上述研究均提示正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜增生癥中，均出現(xiàn)不同程度的TTF-1表達(dá)。TTF-1可能參與了正常子宮內(nèi)膜或子宮內(nèi)膜增生癥發(fā)生惡變的過程，但其機(jī)制不清。與上述研究相比，本研究正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜增生中TTF-1的陽性率偏低，可能與研究病例少、不同研究者采用的TTF-1陽性標(biāo)準(zhǔn)不同等因素有關(guān)。

錢萍等〔11〕檢測了TTF-1在35例子宮內(nèi)膜樣癌、11例子宮內(nèi)膜透明細(xì)胞癌中的表達(dá)，陽性率分別為5.7%、9.1%。Fujiwara等〔12〕研究了55例子宮內(nèi)膜樣腺癌，其TTF-1的陽性率為10%。Sullivan、何惠嫦、陳蘇瓊及張越等〔7-10〕分別研究了106、28、30、80例子宮內(nèi)膜癌，TTF-1的陽性率分別為64%、44.4%、36.67%、33.75%。本研究TTF-1在45例子宮內(nèi)膜癌中的陽性率為16%，其中I型子宮內(nèi)膜癌TTF-1陽性率18%、Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌TTF-1陽性率8%，研究結(jié)果比錢萍等〔11〕、Fujiwara等〔12〕報道的陽性率稍高；比Sullivan、何惠嫦、陳蘇瓊及張越等〔7-10〕報道的陽性率偏低。但本研究中TTF-1在子宮內(nèi)膜癌組中的陽性率明顯低于正常子宮內(nèi)膜組（P=0.030）。相關(guān)研究顯示TTF-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，不同試驗(yàn)的結(jié)果有差異；此結(jié)論與檢測過程中采用的TTF-1抗體及實(shí)驗(yàn)標(biāo)本不同、TTF-1反應(yīng)體系不同等因素有關(guān)。

本研究中TTF-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與患者民族、年齡、手術(shù)病理分期、腫瘤浸潤肌層深度及有無轉(zhuǎn)移等均無相關(guān)性。子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)TTF-1，不影響患者的手術(shù)分期，結(jié)果與Sullivan等〔7〕的報道相近。本研究中子宮內(nèi)膜癌的分期、腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移，與其是否表達(dá)TTF-1均無相關(guān)性，該結(jié)論與何惠嫦等〔8〕的研究結(jié)果有差異。原因可能是：病例在3組不同內(nèi)膜組織標(biāo)本中分布不均勻；不同研究過程運(yùn)用的TTF-1抗體克隆號不一致；其他一些生物學(xué)因素的影響。Sullivan等〔7〕初次報道子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本中出現(xiàn)TTF-1陽性，提示TTF-1發(fā)揮腫瘤抑制因子的功能，但機(jī)制不清。有研究〔13〕也顯示TTF-1在鼠肺腺癌模型中的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移；同時TTF-1表達(dá)下調(diào)，影響腫瘤的去分化及轉(zhuǎn)移潛能的增加。研究〔10〕發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌惡性變過程中，TTF-1也發(fā)揮了腫瘤抑制因子的功能，此外，在腫瘤進(jìn)展過程中，TTF-1的作用喪失及表達(dá)減少，可能影響腫瘤細(xì)胞的增殖。魯曉東等〔14〕研究提示TTF-1及PTEN基因表達(dá)降低，會影響腫瘤的肌層浸潤、FIGO分期及盆腔淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。低級別子宮內(nèi)膜癌中TTF-1的表達(dá)較少，患者的預(yù)后不好〔15〕。本研究的子宮內(nèi)膜癌組中，與高分化子宮內(nèi)膜癌比較，TTF-1在中、低分化子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)明顯上調(diào)（P=0.017），提示TTF-1在不同分化程度的子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)有差異，且隨腫瘤的分化程度降低而逐漸升高，與Ervine等〔15〕的研究結(jié)果相近。但本研究未進(jìn)行患者的隨訪，無生存曲線分析結(jié)果，未能闡明不同分化程度的子宮內(nèi)膜癌中TTF-1的表達(dá)是否會影響患者預(yù)后。

綜上所述，在子宮內(nèi)膜癌發(fā)展過程中，TTF-1可能參與了腫瘤的進(jìn)展。鑒于部分子宮內(nèi)膜癌表達(dá)TTF-1，當(dāng)女性患者其他臟器或組織出現(xiàn)來源部位不明轉(zhuǎn)移瘤且TTF-1陽性時，要考慮有子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的可能。病理工作中需要進(jìn)一步分析，不同類型的子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本表達(dá)TTF-1的特點(diǎn)，并揭示其生物學(xué)機(jī)制，為子宮內(nèi)膜癌治療提供病因?qū)W的依據(jù)。