貯藏溫度對(duì)納米晶纖維素/殼聚糖涂膜保鮮效果的影響

曹思源，李保祥，何悅，劉敏，吳習(xí)宇,2，任丹,2，徐丹,2*

1(西南大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院，重慶，400700)2(西南大學(xué) 食品貯藏與物流研究中心，重慶，400700)

柑橘是世界上產(chǎn)量最大也是最受消費(fèi)者歡迎的水果之一，味道甜美且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高[1]。但柑橘果實(shí)的成熟期較為集中，在采后貯藏和運(yùn)輸過(guò)程中失水率高且容易腐爛，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失和資源浪費(fèi)[2-3]。據(jù)國(guó)家統(tǒng)計(jì)局調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，2019年我國(guó)的柑橘產(chǎn)量為4 584.54萬(wàn)t。但我國(guó)的柑橘果實(shí)采后貯藏與保鮮技術(shù)與發(fā)達(dá)國(guó)家相比還較為落后，果實(shí)的采后損失率高達(dá)20%～30%[4]。控制采后果實(shí)的貯藏溫度，以降低果實(shí)的采后呼吸和蒸騰速率，可顯著延緩果實(shí)的衰老，是目前果實(shí)采后保鮮最常用的技術(shù)手段。但柑橘果實(shí)在低溫下貯藏容易遭受冷害，且運(yùn)輸和銷(xiāo)售過(guò)程中的環(huán)境溫度波動(dòng)較大，僅依靠環(huán)境溫度的調(diào)節(jié)難以達(dá)到最佳的保鮮效果。

近年來(lái)，可食性涂膜技術(shù)作為一種易于操作、效果顯著且安全無(wú)毒的保鮮方式受到了廣泛關(guān)注。涂覆在果實(shí)表面的半透性可食性薄膜，作為果實(shí)與環(huán)境之間的屏障，具有調(diào)控果實(shí)的呼吸作用、降低水分散失和抵御病菌侵染等作用，進(jìn)而延長(zhǎng)果實(shí)的貨架期[5]。研究表明，涂膜還可維持柑橘果實(shí)細(xì)胞膜氧化酶活性以及細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，從而有效提高果實(shí)對(duì)低溫的耐受性，減少冷害的發(fā)生[6-8]。因此，將涂膜保鮮技術(shù)與溫控技術(shù)聯(lián)用，有望進(jìn)一步減少柑橘果實(shí)在貯運(yùn)過(guò)程中的損失。但果實(shí)的呼吸強(qiáng)度隨貯藏溫度的降低而下降，因此涂膜對(duì)果實(shí)呼吸的調(diào)節(jié)作用也受溫度的影響。同時(shí)，本項(xiàng)目組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，在果實(shí)的呼吸和蒸騰作用下，親水性的殼聚糖(chitosan，CS)涂膜在貯藏期間會(huì)出現(xiàn)微孔，導(dǎo)致涂膜的致密結(jié)構(gòu)被破壞而削弱其對(duì)果實(shí)的屏障作用，降低涂膜保鮮效果。在涂膜中添加納米晶纖維素(nanocrystal cellulose，NCC)可提高涂膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，延緩微孔的出現(xiàn)，進(jìn)而提高其保鮮效果[9]。同時(shí)，果實(shí)的呼吸速率越快，涂膜中的微孔出現(xiàn)得越早。由此可見(jiàn)，貯藏溫度不僅會(huì)影響涂膜對(duì)果實(shí)的呼吸調(diào)控作用，也會(huì)影響涂膜結(jié)構(gòu)的變化，進(jìn)而影響其保鮮效果。但目前鮮有文獻(xiàn)對(duì)不同貯藏溫度下的涂膜保鮮效果進(jìn)行研究。因此，本文在前期的研究基礎(chǔ)上，采用NCC質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的殼聚糖復(fù)合涂膜液對(duì)紅桔果實(shí)進(jìn)行涂膜處理后，將其與未處理的對(duì)照組在不同溫度(4、8、12 ℃)下貯藏，對(duì)果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量、抗氧化酶活性等進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并定期觀察涂膜的表面微觀形貌，以探究溫度對(duì)涂膜保鮮效果的影響及機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料與試劑

紅桔(CitrustangerineHort.ex Tanaka)，采于重慶市北碚區(qū)果園。殼聚糖，脫乙酰度為90%，分子質(zhì)量為180 kDa，濰坊海之源生物制品有限公司；NCC 分散液，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.15%，天津市木精靈生物科技有限公司，采用2，2，6，6-四甲基哌啶氧化物(2,2,6,6-tetramethylpiperidine oxide，TEMPO)氧化法制備；其余試劑均為分析純。

1.1.2 儀器與設(shè)備

L530R型臺(tái)式低速冷凍離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；Epoch2型酶標(biāo)儀光度計(jì)，BioTek Instruments, Inc；ProX型臺(tái)式掃描電鏡能譜一體機(jī)，PhenomWorld, Inc。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)樣品處理

將一定量的NCC懸浮液(NCC干重為殼聚糖干重的6%)添加至1%(體積分?jǐn)?shù))的乙酸水溶液中，磁力攪拌30 min。在均勻混合的NCC溶液中加入一定量殼聚糖，使殼聚糖質(zhì)量濃度達(dá)到15 g/L，并持續(xù)攪拌24 h得到均勻NCC/CS復(fù)合膜液備用。

在當(dāng)天采摘的紅桔中選取成熟度、質(zhì)量和大小一致的果實(shí)。清水洗凈后，在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的NaClO溶液中浸泡2 min消毒。常溫晾干水分后將其隨機(jī)分為6組，每組約80個(gè)果實(shí)。對(duì)照組不再進(jìn)行任何處理，共3組，分別置于溫度為(4±1)、(8±1)和(12±1)℃，濕度為(60±10)%的環(huán)境中貯藏，分別記為4 ℃對(duì)照、8 ℃對(duì)照和12 ℃對(duì)照。涂膜組用NCC質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的NCC/CS 復(fù)合膜液通過(guò)刷子均勻涂覆桔皮，自然風(fēng)干，分別置于溫度為(4±1)、(8±1)、(12±1)℃，濕度為(60±10)%的環(huán)境中貯藏，分別記為4 ℃涂膜、8 ℃涂膜和12 ℃涂膜。每組中隨機(jī)選取30個(gè)果實(shí)用于失重率和腐爛率的檢測(cè)，從1～30進(jìn)行標(biāo)號(hào)并記錄其初始質(zhì)量m0。每2 d從各組其余果實(shí)中隨機(jī)取出5個(gè)無(wú)損鮮果，將鮮果果肉榨汁，并用4層紗布過(guò)濾，采用過(guò)濾后的果汁測(cè)定其品質(zhì)指標(biāo)。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.2.1 腐爛率

每2 d觀察果實(shí)表面是否有病斑、腐爛、軟化等現(xiàn)象，如有則記為爛果，記錄從第0天至測(cè)量當(dāng)天每組的累計(jì)爛果數(shù)，腐爛率計(jì)算如公式(1)所示：

(1)

1.2.2.2 失重率

初始果實(shí)質(zhì)量為m0,每2 d對(duì)1～30號(hào)果實(shí)進(jìn)行單果稱(chēng)重，記當(dāng)天質(zhì)量為mt，失重率按公式(2)計(jì)算：

(2)

1.2.2.3 可滴定酸含量

參考文獻(xiàn)[10]的方法測(cè)定，結(jié)果用%表示。

1.2.2.4 可溶性固形物含量

采用阿貝折射儀測(cè)定，用%表示。

1.2.2.5 可溶性蛋白質(zhì)含量

參考文獻(xiàn)[10]的方法測(cè)定，結(jié)果用μg/g表示。

1.2.2.6 丙二醛含量

參考文獻(xiàn)[10]的方法測(cè)定，結(jié)果用μmol/kg表示。

1.2.2.7 抗壞血酸含量

參考GB 5009.86—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中抗壞血酸的測(cè)定》，采用2，6—二氯丁酚滴定法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果用mg/100 g表示。

1.2.2.8 總酚含量

參考文獻(xiàn)[10]的方法測(cè)定，結(jié)果以每克樣品含有微克沒(méi)食子酸表示，μg/g。

1.2.2.9 過(guò)氧化物酶(peroxidase, POD)活性

用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定，具體步驟參考文獻(xiàn)[10]的方法進(jìn)行，以每克紅桔汁樣品每分鐘吸光度變化值增加1作為1個(gè)POD活性單位，用U/g表示。

1.2.2.10 過(guò)氧化氫酶(catalase, CAT)活性

采用Solarbio過(guò)氧化氫酶活性檢測(cè)試劑盒測(cè)定，測(cè)試過(guò)程參照試劑盒說(shuō)明書(shū)，結(jié)果用U/g表示。

1.2.2.11 DPPH自由基清除率

用無(wú)水乙醇配制1 mmoL/L DPPH溶液。用5 mL無(wú)水乙醇提取0.5 g紅桔樣品，在4 ℃下以4 500 r/min離心30 min，吸取2 mL上清液加入2 mL 1 mmol/L的DPPH溶液在室溫下反應(yīng)1 h，以無(wú)水乙醇做參比液在518 nm處測(cè)量樣品液吸光度值，DPPH自由基清除率計(jì)算如公式(3)所示：

(3)

式中：A0，無(wú)水乙醇在518 nm處的吸光度值；A1，樣品液在518 nm處的吸光度值。

1.2.2.12 掃描電子顯微鏡分析

首先將桔皮樣品在液氮中脆斷，然后將干燥的膜樣品切成方形小塊(10 mm×10 mm)，用導(dǎo)電膠將其固定在樣品臺(tái)上進(jìn)行噴金處理，最后用掃描電鏡觀察桔皮表面結(jié)構(gòu)與形貌，加速電壓設(shè)置為10 kV。

1.3 數(shù)據(jù)處理

每個(gè)樣品進(jìn)行3次重復(fù)，結(jié)果以“均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差”表示，進(jìn)行單因素方差分析，若數(shù)據(jù)有顯著性差異，再進(jìn)行Duncan法多重比較，顯著性水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 腐爛率

各組紅桔果實(shí)在貯藏期間的腐爛情況如圖1所示。對(duì)照組中，貯藏于4、12 ℃果實(shí)的腐爛率上升較快，尤其是12 ℃對(duì)照組，至第12天時(shí)其腐爛率高達(dá)53.3%；而8 ℃對(duì)照組的腐爛率則顯著低于以上2組。涂膜組中，12 ℃貯藏的果實(shí)同樣具有較高的腐爛率，而4、8 ℃貯藏的涂膜組則在貯藏第6天才出現(xiàn)腐爛，并在整個(gè)貯藏期間均維持了較低的腐爛率，尤其是8 ℃涂膜組，至第12天時(shí)其腐爛率僅為12 ℃對(duì)照組的50%。紅桔的最適貯藏溫度一般為8～10 ℃，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明8 ℃貯藏的對(duì)照組和涂膜組均具有較低的腐爛率。貯藏溫度過(guò)低(4 ℃)，果實(shí)容易發(fā)生冷害，腐爛程度加重[11]；貯藏溫度過(guò)高(12 ℃)，則果實(shí)的呼吸速率高，且病原菌繁殖速度快，其衰老和腐爛速率加快。同時(shí)，與相同貯藏溫度的對(duì)照組相比，涂膜組的腐爛速率均明顯降低。貯藏12 d時(shí)，12、8和4 ℃涂膜組的腐爛率相較于相同溫度下的對(duì)照組分別降低了37.5%、12.5%和27.3%。由此可看出，12 ℃時(shí)，涂膜處理對(duì)紅桔腐爛的抑制效果最好，其次為4 ℃，而8 ℃時(shí)，涂膜抑制果實(shí)腐爛的效果不顯著。

涂膜主要通過(guò)其半透性來(lái)減少果實(shí)內(nèi)部與外界的氣體交換，降低果實(shí)的呼吸強(qiáng)度。因此，在較高溫度下(12 ℃)，果實(shí)具有較高呼吸強(qiáng)度時(shí)，涂膜可更好地發(fā)揮其抑制果實(shí)呼吸的作用，延緩其衰老；在較低溫度下(4 ℃)，涂膜可提高果實(shí)的低溫耐受能力，降低其腐爛率。而8 ℃時(shí)，果實(shí)的呼吸作用已減緩，各項(xiàng)生理活動(dòng)也隨之減弱，因此涂膜對(duì)果實(shí)呼吸的調(diào)控作用較為有限。

2.2 失重率

紅桔果實(shí)在貯藏期間的失重情況如圖2所示，可以看出貯藏溫度對(duì)果實(shí)的失重率具有顯著影響(P<0.05)。各組果實(shí)在4 ℃下的失重率最低，并隨貯藏溫度的升高而逐漸增加。同時(shí)，相同溫度下對(duì)照組和涂膜組果實(shí)失重率之間的差異也隨溫度上升而增加。貯藏在4、8 ℃下的對(duì)照組和涂膜組果實(shí)的失重率在貯藏期間均無(wú)顯著差異(P>0.05)，而12 ℃涂膜組的失重率在貯藏第8天后顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。果實(shí)在貯藏期間的質(zhì)量下降主要源于蒸騰作用導(dǎo)致果實(shí)內(nèi)部水分散失[12]，而失水不僅影響果實(shí)的口感，且可造成細(xì)胞膨壓降低，引起組織萎蔫，果品光澤消失。低溫下，果實(shí)的蒸騰速率降低，且果皮蠟質(zhì)層較為穩(wěn)定[13]，可較好地保持其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，防止果實(shí)失水[14]。因此，果實(shí)的失重率隨溫度降低明顯下降。但涂膜僅在果實(shí)失重率較高時(shí)起到抑制果實(shí)失重的作用，這可能是由于殼聚糖/納米纖維素復(fù)合涂膜的阻濕性較差，主要通過(guò)其對(duì)果實(shí)呼吸作用和生理活動(dòng)的抑制來(lái)起到降低果實(shí)失重的作用。

2.3 果肉中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量變化

由圖3-a可知，各組果實(shí)中抗壞血酸含量在貯藏期間均呈波動(dòng)變化狀態(tài)?？箟难崾枪咧蟹敲割?lèi)抗氧化劑，貯藏過(guò)程中在抗壞血酸氧化酶的作用下被氧化，其脫下的氫離子與活性氧結(jié)合，減少自由基的累積。抗壞血酸在抗氧化過(guò)程中被消耗造成含量降低[15]；而果實(shí)在貯藏過(guò)程中發(fā)生的采后成熟、生物合成、氧化和再循環(huán)等過(guò)程則會(huì)造成抗壞血酸含量的上升[16]。以上2種作用造成了果實(shí)中抗壞血酸含量的波動(dòng)。12 ℃對(duì)照組果實(shí)中的抗壞血酸含量在貯藏前6 d波動(dòng)幅度較大，可能是由于貯藏溫度較高，果實(shí)的生理活動(dòng)較強(qiáng)導(dǎo)致，但12 ℃涂膜組的抗壞血酸含量與4、8 ℃貯藏果實(shí)較為接近，說(shuō)明涂膜抑制了果實(shí)的生理活動(dòng)，有利于穩(wěn)定果實(shí)中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量。

由圖3-b可知，各組果實(shí)的總酚含量隨貯藏時(shí)間均呈先下降后上升的趨勢(shì)，與冉皓杰等[17]研究結(jié)果一致。酚類(lèi)化合物是果實(shí)的次生代謝產(chǎn)物，具有防御功能，其含量變化反應(yīng)了果實(shí)成熟度及對(duì)環(huán)境脅迫產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)[18]。貯藏前期，果實(shí)生理活動(dòng)劇烈，酚類(lèi)物質(zhì)被氧化、消耗，導(dǎo)致其含量降低。此時(shí)各溫度下涂膜組果實(shí)總酚含量降低速率低于其相同溫度下的對(duì)照組。貯藏后期，細(xì)胞氧化受損，果實(shí)合成總酚作為防御物質(zhì)，因此總酚含量也反映了細(xì)胞的受損情況[19]。各組果實(shí)中，其中12 ℃對(duì)照組果實(shí)總酚含量上升最為明顯，其余組的總酚含量較為接近，說(shuō)明貯藏溫度越高，果實(shí)細(xì)胞受損衰老越嚴(yán)重，但涂膜可緩解這一現(xiàn)象。

由圖3-c可知，各組果實(shí)可溶性固形物含量總體先下降后上升。糖分是可溶性固形物的主要組成成分，在貯藏初期被消耗轉(zhuǎn)化為CO2和O2，含量下降。而隨著果實(shí)的失水和衰老，細(xì)胞壁水解產(chǎn)生的多糖和部分淀粉的相繼水解又會(huì)造成可溶性固形物含量的逐漸上升至相對(duì)穩(wěn)定[20]。相同溫度下對(duì)照組與涂膜組變化趨勢(shì)較為一致。貯藏中期(第6～8天)，貯藏于4、8 ℃下的對(duì)照組果實(shí)中的可溶性固形物含量高于相同溫度下的涂膜組，但貯藏后期差異減小，說(shuō)明在這2個(gè)溫度下涂膜可減少果實(shí)中糖分的消耗。

可溶性蛋白是構(gòu)成果蔬中酶的重要組成部分，參與了多種生理生化反應(yīng)的調(diào)控，同時(shí)也是重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)[21]。由圖3-d可知，在貯藏初期，呼吸作用較強(qiáng)，可溶性蛋白快速水解，導(dǎo)致各組果實(shí)內(nèi)其含量銳減。但在貯藏2 d后，可溶性蛋白的含量較為穩(wěn)定，且各組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)，說(shuō)明涂膜和貯藏溫度對(duì)貯藏后期果實(shí)的可溶性蛋白含量無(wú)顯著影響。

a-抗壞血酸；b-總酚；c-可溶性固形物；d-可溶性蛋白質(zhì)圖3 紅桔果實(shí)在不同貯藏溫度下的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量變化Fig.3 Changes of nutrient contents of red tangerines fruits under different storage temperatures

2.4 丙二醛含量變化

如圖4所示，貯藏期間所有實(shí)驗(yàn)組果實(shí)的丙二醛含量均隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)而上升。丙二醛作為脂質(zhì)過(guò)氧化作用的次要終產(chǎn)物，常被用作膜完整性喪失的代謝指標(biāo)[22]，反映膜受損的情況。從圖4可看出，4、8 ℃貯藏的果實(shí)中丙二醛含量增速相對(duì)緩慢，且各組的含量在貯藏期間除第10天外均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。12 ℃貯藏果實(shí)的丙二醛含量則隨貯藏期的延長(zhǎng)而迅速增加，尤其是12 ℃對(duì)照組。由此進(jìn)一步說(shuō)明，貯藏在較高溫度(12 ℃)下的果實(shí)細(xì)胞膜脂氧化較快，衰老加快，與陳小紅[23]的研究結(jié)果一致。但NCC/CS涂膜可抑制果實(shí)呼吸，從而降低果實(shí)的過(guò)氧化程度，延緩果實(shí)衰老。

圖4 紅桔果實(shí)在不同貯藏溫度下的丙二醛含量變化Fig.4 Changes of MDA content in red tangerines fruits under different storage temperatures

2.5 DPPH自由基清除率與抗氧化酶活性變化

由表1可知，隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，紅桔果實(shí)的DPPH自由基清除率總體呈下降趨勢(shì)，即其抗氧化能力下降。果實(shí)貯藏第12天時(shí)，各組果實(shí)中DPPH自由基清除率最低的為8 ℃對(duì)照組，最高的為12 ℃涂膜組。果實(shí)的DPPH自由基清除率取決于其抗氧化物質(zhì)的含量，從2.3節(jié)可看出，果實(shí)中的抗壞血酸和總酚等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量均呈先下降后上升的趨勢(shì)，與表中各組果實(shí)的DPPH自由基清除率變化趨勢(shì)較為一致。同時(shí)，除4 ℃貯藏的果實(shí)外，其余貯藏溫度下的涂膜組果實(shí)的DPPH自由基清除率在貯藏后期均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明NCC/CS涂膜可有效延緩果實(shí)抗氧化能力的降低，有助于增強(qiáng)其防御能力。

表1 貯藏溫度和NCC/CS涂膜對(duì)紅桔貯藏期DPPH自由基清除率的影響Table 1 Effect of storage temperature and NCC/CS coating on DPPH free radical scavenging rate of tangerine during storage

POD作為果蔬內(nèi)重要的氧化還原酶之一，在降低活性氧積累、延緩膜脂過(guò)氧化進(jìn)程以及維持細(xì)胞膜完整性中都承擔(dān)著重要作用。它能夠清除植物組織中的活性氧自由基，保護(hù)細(xì)胞膜脂，但是它也可以產(chǎn)生酚自由基，促進(jìn)果蔬采后衰老[24-25]。由圖5-a可知，貯藏前2 d果實(shí)POD活性有所上升，可能是果實(shí)的環(huán)境應(yīng)激反應(yīng)。此后，12 ℃對(duì)照組果實(shí)的POD活性持續(xù)下降，說(shuō)明果實(shí)的衰老較快，與陳超等[26]的研究結(jié)果一致，而4 ℃對(duì)照組則保持穩(wěn)定的活性直至第12天時(shí)迅速下降，可能是由于果實(shí)遭受冷害導(dǎo)致細(xì)胞損傷。但12和4 ℃貯藏的涂膜組果實(shí)的POD活性變化趨勢(shì)則與8 ℃貯藏的對(duì)照組和涂膜組一致，均在第8天達(dá)到峰值而后下降。由此說(shuō)明，涂膜可在貯藏溫度較高時(shí)維持抗氧化酶活性，延緩果實(shí)的衰老，且在溫度較低時(shí)保護(hù)果實(shí)細(xì)胞免受損傷。

a-POD活性;b-CAT活性圖5 紅桔果實(shí)在不同貯藏溫度下的抗氧化酶活性變化Fig.5 Changes of antioxidant enzyme activity in red tangerines fruits under different storage temperatures

CAT是植物生長(zhǎng)系統(tǒng)防御的關(guān)鍵酶之一，它在氧化應(yīng)激條件下對(duì)清除活性氧起著必不可少的作用[27]。圖5-b所示，8和12 ℃貯藏的對(duì)照組果實(shí)的CAT活性在第4天達(dá)到峰值，而貯藏在相同溫度下的涂膜組果實(shí)CAT活性則在貯藏第8天才開(kāi)始顯著上升(P<0.05)，說(shuō)明涂膜減少了自由基的積累，推遲了CAT啟動(dòng)防御的時(shí)間。果實(shí)如出現(xiàn)冷害，會(huì)造成細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，例如質(zhì)體降解和過(guò)氧化物酶體的消失等[28-30]，使得抗氧化酶活力下降[27]。圖5-b中可看出4 ℃對(duì)照組果實(shí)的CAT在整個(gè)貯藏期間均維持較低的活性，但涂膜組果實(shí)的CAT活性從第8天開(kāi)始上升且在第10天達(dá)峰值，與POD活性變化較為一致。由此說(shuō)明，4 ℃貯藏的對(duì)照組果實(shí)出現(xiàn)了冷害，而涂膜處理能有效提高CAT參與活性氧代謝程度，減輕冷害癥狀。

2.6 紅桔果皮形貌變化

圖6所示為各組紅桔表皮的微觀形貌隨貯藏時(shí)間的變化。對(duì)照組果皮上的蠟質(zhì)層結(jié)構(gòu)隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸被破壞，尤其是貯藏于12 ℃的果實(shí)，在第12天時(shí)蠟質(zhì)層出現(xiàn)了明顯的破裂和剝離。經(jīng)涂膜處理后，果實(shí)表面被致密的NCC/CS涂膜所覆蓋，氣孔消失。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，在果實(shí)氣孔處的呼吸和蒸騰作用下，親水性的NCC/CS涂膜的結(jié)構(gòu)被破壞，果實(shí)氣孔位置處出現(xiàn)微孔，與前期研究結(jié)果一致[9]。且該微孔的出現(xiàn)時(shí)間隨著貯藏溫度的升高而提早，貯藏第6天時(shí)，4 ℃貯藏果實(shí)表面的涂膜未觀察到微孔，8 ℃貯藏果實(shí)的涂膜開(kāi)始形成微孔；而12 ℃貯藏果實(shí)的涂膜則早在第2天便觀察到了微孔，且在第6天時(shí)涂膜出現(xiàn)了局部脫落的現(xiàn)象。由此說(shuō)明，NCC/CS涂膜的穩(wěn)定性確實(shí)與貯藏溫度有關(guān)，貯藏溫度越低，果實(shí)的呼吸與蒸騰作用速率降低，涂膜出現(xiàn)微孔的時(shí)間也越晚。貯藏于12 ℃的果實(shí)雖然在后期涂膜結(jié)構(gòu)被破壞，但由于涂膜前期的保護(hù)作用，例如顯著降低果實(shí)的過(guò)氧化程度，因此涂膜組果實(shí)的腐爛率在貯藏后期仍然顯著低于對(duì)照組。

圖6 各組紅桔果實(shí)在不同貯藏溫度下的果皮形貌變化Fig.6 Changes of peel morphology of red tangerines fruits in each group under different temperatures

3 結(jié)論

本研究考察了NCC/CS涂膜組與對(duì)照組紅桔果實(shí)在4、8、12 ℃下貯藏時(shí)的品質(zhì)與酶活性變化。結(jié)果表明，在最佳貯藏溫度8 ℃下，紅桔果實(shí)能維持較低的呼吸強(qiáng)度且不會(huì)出現(xiàn)冷害，此時(shí)NCC/CS涂膜對(duì)果實(shí)的貯藏品質(zhì)無(wú)顯著提高。貯藏于12 ℃的紅桔果實(shí)，呼吸作用較強(qiáng)，衰老加快導(dǎo)致其在貯藏后期迅速腐爛，但涂膜組果實(shí)具有顯著降低的腐爛率、失重率和丙二醛含量，且保持了較為穩(wěn)定的可溶性固形物、可溶性蛋白質(zhì)含量以及POD和CAT的活性。同時(shí)，貯藏在4 ℃的紅桔果實(shí)易發(fā)生冷害而腐爛，但涂膜處理可顯著(P<0.05)降低其腐爛率和丙二醛含量，并推遲POD和CAT活性高峰，增強(qiáng)了果實(shí)的耐冷害能力。果實(shí)表面的涂膜隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而出現(xiàn)微孔，但其穩(wěn)定性隨貯藏溫度降低而提高。因此，NCC/CS涂膜在貯藏溫度較高時(shí)可適當(dāng)抑制果實(shí)呼吸，在貯藏溫度較低時(shí)可減少冷害的發(fā)生，有助于提高果實(shí)在貯運(yùn)過(guò)程中對(duì)溫度波動(dòng)的耐受度，起到減損保鮮的效果。