富硒辣木籽蛋白降壓肽的酶法制備、硒含量及穩(wěn)定性研究

陳冰冰 楊 奕 李嘉頤 金昶言 程繽霈 鄧泳琪 林碧敏 梁 東 唐德劍 孟 莉 苗建銀

(1. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院廣東省功能食品活性物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510642；2. 省部共建藥用資源化學(xué)與藥物分子工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 桂林 541004；3. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部富硒產(chǎn)品開(kāi)發(fā)與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/富硒食品開(kāi)發(fā)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，陜西 安康 725000；4. 安康市富硒產(chǎn)品研發(fā)中心，陜西 安康 725000)

全球高血壓患者人數(shù)逐年增加，預(yù)計(jì)到2025年，發(fā)病人數(shù)將超過(guò)15億[1-2]。降壓肽又稱(chēng)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制肽，主要通過(guò)降低ACE活性來(lái)降低血壓，而ACE在腎素—血管緊張素系統(tǒng)中起著關(guān)鍵作用[3]。目前，ACE抑制劑是治療高血壓的主要藥物，但臨床上服用合成ACE抑制劑的患者存在不同程度的副作用，如頭痛、疲勞、咳嗽、水腫、皮疹等[4-6]。而從蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物中分離出的ACE抑制肽具有效果溫和、專(zhuān)一、高效和無(wú)副作用等特點(diǎn)，具有良好的開(kāi)發(fā)價(jià)值[7]。植物蛋白制備血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽因其成本低、安全性高、無(wú)毒副作用而成為研究熱點(diǎn)，如從黑豆蛋白[8]、魔芋蛋白[9]、綠茶渣蛋白[2]、玉米蛋白[10]等酶解物中發(fā)現(xiàn)具有ACE抑制活性的多肽，并開(kāi)發(fā)出了多種相關(guān)產(chǎn)品。

硒(Se)是人和動(dòng)物的必需微量元素之一，參與硒酶和硒蛋白的形成，在調(diào)節(jié)氧化還原平衡、物質(zhì)代謝、發(fā)育與生殖及免疫功能方面發(fā)揮重要作用[11]。此外，硒還具有抗氧化[12]、抗炎[13]、抗病毒[14]、提高機(jī)體免疫力[15]、預(yù)防心腦血管疾病[16]等生理功能。與無(wú)機(jī)硒相比，天然有機(jī)硒具有低毒性、生物利用率高和多種生理活性等優(yōu)點(diǎn)，目前已從富硒大豆[17]、富硒大米[18]、富硒茶[19]中分離并鑒定出了含硒肽。

辣木(MoringaoleiferaLam.)是一種生長(zhǎng)在熱帶和亞熱帶的藥食兩用植物[20-21]，其葉被中國(guó)綠色食品發(fā)展中心認(rèn)定為“國(guó)家首推綠色食品”[22]，具有多種生理保健活性。研究發(fā)現(xiàn)，辣木籽是一種具有多種生理活性的天然原料，具有降糖尿病[23]、抗炎和緩解腹痛[24]等功能。研究擬以富硒辣木籽蛋白為原料，優(yōu)化富硒辣木籽蛋白中具有ACE抑制活性肽的酶解制備工藝，并評(píng)價(jià)最優(yōu)條件下降壓肽的穩(wěn)定性及硒含量，旨在為富硒辣木籽蛋白資源的利用和天然富硒降血壓肽的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

富硒辣木籽蛋白粉：北部灣濱海富硒功能農(nóng)業(yè)研究院；

堿性蛋白酶(20萬(wàn)U/g)、胃蛋白酶(300萬(wàn)U/g)、木瓜蛋白酶(20萬(wàn)U/g)、胰蛋白酶(25萬(wàn)U/g)：廣西南寧龐博生物工程有限公司；

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE，來(lái)源于兔肺)、N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸(FAPGG)、羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)：美國(guó)Sigma-Aldrich公司。

1.1.2 主要儀器設(shè)備

數(shù)顯恒溫水浴鍋：HH-4型，金壇市華城海龍實(shí)驗(yàn)儀器廠；

冷凍干燥機(jī)：FD-1型，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司；

pH計(jì)：PHS-3CW型，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；

電熱恒溫培養(yǎng)箱：DH5000BII型，天津泰斯特儀器有限公司；

臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)：L530型：湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；

多功能酶標(biāo)儀：2300型，美國(guó)PerkinElmer公司；

原子熒光光度計(jì)：AFS-9530型，北京海光儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 富硒辣木籽蛋白降壓肽制備 稱(chēng)取一定量的富硒辣木籽蛋白粉，加入蒸餾水配制成一定濃度的蛋白質(zhì)溶液，調(diào)節(jié)pH，加入一定量的酶，沸水浴滅酶，4 000 r/min離心20 min，收集上清液，測(cè)定ACE抑制率。

1.2.2 蛋白酶初篩 以富硒辣木籽蛋白為原料，選取4種蛋白酶在其最適條件下酶解，分別為堿性蛋白酶(pH 8.5，55 ℃)、胃蛋白酶(pH 2，37 ℃)、木瓜蛋白酶(pH 6.5，55 ℃)、胰蛋白酶(pH 8，37 ℃)。其余試驗(yàn)條件：底物濃度5%，酶底比0.3%，酶解時(shí)間3 h，滅酶，離心，取酶解液用蒸餾水稀釋10倍，測(cè)定ACE抑制率，選擇制備富硒辣木籽蛋白降壓肽的最佳酶。

(1) 酶解時(shí)間：在最適蛋白酶的基礎(chǔ)上，固定胰蛋白酶酶解溫度37 ℃，pH 8，底物濃度5%，酶底比0.3%，考察酶解時(shí)間(1，2，3，4，5 h)對(duì)富硒辣木籽蛋白酶解物ACE抑制活性的影響。

(2) 酶解溫度：在最適蛋白酶的基礎(chǔ)上，固定胰蛋白酶酶解時(shí)間3 h，pH 8，底物濃度5%，酶底比0.3%，考察酶解溫度(27，32，37，42，47 ℃)對(duì)富硒辣木籽蛋白酶解物ACE抑制活性的影響。

(3) pH：在最適蛋白酶的基礎(chǔ)上，固定胰蛋白酶酶解時(shí)間3 h，酶解溫度37 ℃，底物濃度5%，酶底比0.3%，考察pH(7.0，7.5，8.0，8.5，9.0)對(duì)富硒辣木籽蛋白酶解物ACE抑制活性的影響。

(4) 底物濃度：在最適蛋白酶的基礎(chǔ)上，固定胰蛋白酶酶解時(shí)間3 h，酶解溫度37 ℃，pH 8，酶底比0.3%，考察底物濃度(1%，3%，5%，7%，9%)對(duì)富硒辣木籽蛋白酶解物ACE抑制活性的影響。

(5) 酶底比：在最適蛋白酶的基礎(chǔ)上，固定胰蛋白酶酶解時(shí)間3 h，酶解溫度37 ℃，pH 8，底物濃度5%，考察酶底比(0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%)對(duì)富硒辣木籽蛋白酶解物ACE抑制活性的影響。

1.2.4 響應(yīng)面優(yōu)化 基于單因素試驗(yàn)結(jié)果，以底物濃度、酶解溫度和酶解時(shí)間為自變量，以ACE抑制率為響應(yīng)值，根據(jù)Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原理進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)，優(yōu)化降壓肽的最佳制備工藝。

1.2.5 最優(yōu)酶解液的超濾分離 將最佳條件下獲得的酶解液用10 kDa的超濾膜進(jìn)行超濾，收集<10 kDa和>10 kDa組分冷凍干燥，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.6 ACE抑制率測(cè)定 根據(jù)文獻(xiàn)[25]。

要進(jìn)一步推進(jìn)大學(xué)生的社會(huì)實(shí)踐,建立完善的社會(huì)實(shí)踐評(píng)價(jià)機(jī)制勢(shì)在必行。在評(píng)價(jià)考核的時(shí)候,學(xué)校應(yīng)該更加重視學(xué)生的實(shí)踐成果，做好實(shí)踐活動(dòng)的評(píng)價(jià)反饋，使學(xué)生能明確自己的不足之處，并在之后的學(xué)習(xí)中不斷完善自己。學(xué)校應(yīng)加強(qiáng)與社會(huì)實(shí)踐單位的溝通，與所在單位負(fù)責(zé)人進(jìn)行時(shí)時(shí)聯(lián)系,加強(qiáng)對(duì)學(xué)生社會(huì)實(shí)踐的過(guò)程管理，以便切實(shí)了解學(xué)生的社會(huì)實(shí)踐狀況，從而進(jìn)一步完善學(xué)校、學(xué)生和實(shí)踐單位三者間的互動(dòng)和溝通。

1.2.7 硒含量測(cè)定 按GB 5009.93—2017執(zhí)行。

1.2.8 富硒辣木籽蛋白降壓肽的穩(wěn)定性分析 根據(jù)最優(yōu)條件制備ACE抑制酶解液，凍干即得富硒辣木籽降壓肽粗肽粉，配制質(zhì)量濃度為5 mg/mL的多肽溶液，以ACE抑制率為指標(biāo)，分別考察溫度、pH及體外模擬胃腸道酶系對(duì)富硒辣木籽降壓肽穩(wěn)定性的影響。

(1) 溫度：根據(jù)文獻(xiàn)[26]。

(2) pH：根據(jù)文獻(xiàn)[26]。

(3) 模擬胃腸道消化：根據(jù)文獻(xiàn)[26-27]并修改。將富硒辣木籽蛋白降壓肽用0.1 mol/L的HCl調(diào)節(jié)pH為2，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的胃蛋白酶，37 ℃水浴3 h，滅酶10 min，冷卻，用1 mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH為7，4 000 r/min 離心10 min，測(cè)定上清液的ACE抑制率。取離心前pH為7的溶液，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的胰蛋白酶，37 ℃水浴3 h，滅酶10 min，4 000 r/min離心10 min，測(cè)定上清液的ACE抑制率。

1.2.9 數(shù)據(jù)處理 使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，字母不同表示在P<0.05范圍內(nèi)存在顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋白酶初篩

由圖1可知，4種蛋白酶的酶解效果分別為胰蛋白酶>堿性蛋白酶>木瓜蛋白酶>胃蛋白酶，且差異顯著(P<0.05)。胰蛋白酶水解富硒辣木籽蛋白產(chǎn)物具有最高的ACE抑制率(68.86%)，其酶切位點(diǎn)優(yōu)先在精氨酸和賴(lài)氨酸處裂解，C末端Arg或Lys的存在能增強(qiáng)ACE抑制活性[28-30]。因此，選擇最佳酶為胰蛋白酶。

圖1 蛋白酶種類(lèi)對(duì)酶解物ACE抑制率的影響Figure 1 Effects of protease species on ACE inhibition rate of enzymatic hydrolysates

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 酶解時(shí)間對(duì)酶解效果的影響 由圖2可知，當(dāng)酶解時(shí)間<3 h時(shí)，ACE抑制率隨酶解時(shí)間的增加而顯著升高(P<0.05)；當(dāng)酶解時(shí)間>3 h時(shí)，ACE抑制率有輕微下降，可能是由于酶解反應(yīng)在3 h內(nèi)持續(xù)進(jìn)行，富硒辣木籽蛋白被不斷水解，使得具有抑制ACE活性的肽不斷積累，ACE抑制率則不斷增強(qiáng)；進(jìn)一步延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(>3 h)，富硒辣木籽的蛋白質(zhì)底物被完全分解，而胰蛋白酶仍具有活性，會(huì)分解新生成的肽產(chǎn)物，導(dǎo)致活性肽含量降低，抑制活性降低。實(shí)際生產(chǎn)中，在不降低目標(biāo)產(chǎn)物ACE抑制活性前提下，可以縮短酶解時(shí)間使生產(chǎn)效率最大化，故確定最佳酶解時(shí)間為3 h。

圖2 時(shí)間對(duì)ACE抑制率的影響Figure 2 Effect of time on ACE inhibition rate

2.2.2 酶解溫度對(duì)酶解效果的影響 由圖3可知，隨著催化酶解反應(yīng)溫度的不斷升高，水解產(chǎn)物對(duì)ACE的抑制作用明顯增加(P<0.05)，當(dāng)反應(yīng)溫度為37 ℃時(shí)，ACE抑制率最大為66.88%。隨著酶解溫度的升高，胰蛋白酶的活性逐漸增大，與底物的接觸幾率增大，水解效率增加，ACE抑制活性也隨之增加。但當(dāng)酶解溫度超過(guò)最適溫度(37 ℃)后繼續(xù)增高，過(guò)高的酶解溫度可能導(dǎo)致胰蛋白酶變性失活，底物不能被有效地水解，降低了對(duì)底物水解后產(chǎn)物ACE的抑制效果[31-32]。故選擇最佳酶解溫度為37 ℃。

圖3 酶解溫度對(duì)ACE抑制率的影響Figure 3 Effect of hydrolysis temperature on ACE inhibition rate

2.2.3 pH對(duì)酶解效果的影響 由圖4可知，ACE抑制率隨酶解pH的增大先上升后下降，當(dāng)pH為8時(shí)達(dá)最大值66.67%。pH值是影響酶解效果的重要因素，其影響體現(xiàn)在蛋白酶構(gòu)象、酶與蛋白質(zhì)的結(jié)合狀態(tài)等方面，過(guò)高或過(guò)低的pH都不利于酶解[33-34]。pH 8是胰蛋白酶的最適pH值，此時(shí)酶活性最強(qiáng)，水解效率也最高，水解后的產(chǎn)物中含有更多的活性短肽，ACE抑制率高，但當(dāng)pH低于或高于8時(shí)，胰蛋白酶活性下降，富硒辣木籽蛋白被胰蛋白酶催化水解效率下降，具有ACE抑制活性的短肽數(shù)目減少，ACE抑制率降低。故選擇最佳pH為8。

圖4 pH對(duì)ACE抑制率的影響Figure 4 Effect of pH on ACE inhibition rate

2.2.4 底物濃度對(duì)酶解效果的影響 由圖5可知，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?%～5%時(shí)，ACE抑制率隨底物濃度的增加而顯著增加(P<0.05)，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?%時(shí)，ACE抑制率達(dá)最高值68.78%，可能是由于通過(guò)增加底物濃度來(lái)增加反應(yīng)體系中底物與酶分子的碰撞機(jī)會(huì)，從而提高了酶解反應(yīng)速度[35]。當(dāng)?shù)孜餄舛炔粩嘣黾?，抑制劑的效果反而降低，一方面可能是因?yàn)闆](méi)有足夠的酶催化底物反應(yīng)，另一方面由于酶解液過(guò)于黏稠，影響蛋白質(zhì)的自由擴(kuò)散，影響酶解效率，從而影響抑制率[36]。故選取最佳底物濃度為7%。

圖5 底物濃度對(duì)ACE抑制率的影響Figure 5 Effect of substrate concentration on ACE inhibition rate

2.2.5 酶底比對(duì)酶解效果的影響 由圖6可知，ACE抑制率隨酶底比的增加呈先增大后緩慢降低的趨勢(shì)，當(dāng)酶底比為0.1%～0.3%時(shí)，ACE抑制率顯著增加(P<0.05)，且在0.3%達(dá)最大值68.85%。而后繼續(xù)增大酶底比，ACE抑制率緩慢降低(P>0.05)，主要是因?yàn)槊傅妆容^低時(shí)，與蛋白底物結(jié)合未完全達(dá)到一定的飽和，隨著酶底比的增加，酶與底物結(jié)合越來(lái)越接近飽和，由于底物蛋白有限，過(guò)多的蛋白酶無(wú)法作用蛋白進(jìn)行水解，因此，抑制率變化緩慢。此外，酶解物被水解后含有更多不具有ACE抑制活性的小肽片段，導(dǎo)致活性降低[37-38]。故選取最佳酶底比為0.3%。

圖6 酶底比對(duì)ACE抑制率的影響Figure 6 Effect of enzyme/substrate on ACE inhibition rate

2.3 響應(yīng)面優(yōu)化

在單因素基礎(chǔ)上，選取底物濃度、酶解溫度和酶解時(shí)間3個(gè)因素為優(yōu)化因素。響應(yīng)面因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels table of response surface experiment

各因素經(jīng)二次多項(xiàng)回歸擬合后，得回歸方程為：

Y=71.34+0.11A-2.45B-0.78C+0.89AB-1.56AC-1.34BC-2.52A2-2.30B2-3.86C2。

(1)

由表3可知，模型顯著(P=0.012 4<0.05)，失擬項(xiàng)不顯著，說(shuō)明回歸模型理想，可以用來(lái)擬合底物濃度、酶解溫度和酶解時(shí)間3個(gè)因素對(duì)水解產(chǎn)物ACE抑制率的影響。一次項(xiàng)B和二次項(xiàng)C2對(duì)ACE抑制率影響極顯著(P<0.01)，二次項(xiàng)A2和B2對(duì)ACE抑制率影響顯著(P<0.05)。

表3 響應(yīng)面二次模型方差分析?Table 3 Analysis of variance for response surface quadratic model

由圖7可知，各因素對(duì)酶解液ACE抑制率的影響為酶解溫度>酶解時(shí)間>底物濃度。根據(jù)回歸模型，得到最佳酶解工藝為底物濃度6.84%，酶解時(shí)間3.01 h，酶解溫度34.25 ℃。考慮實(shí)際生產(chǎn)情況，將工藝調(diào)整為底物濃度7%，酶解時(shí)間3 h，酶解溫度34 ℃，此條件下，酶解液ACE抑制率預(yù)測(cè)值為72.01%，實(shí)測(cè)值為71.34%，與理論值誤差<1%，說(shuō)明該模型獲得的最佳酶解工藝是可靠的。

圖7 各因素相互作用對(duì)ACE抑制率影響的響應(yīng)面圖Figure 7 Response surface diagram of the influence of each factor interaction on ACE inhibition rate

2.4 最優(yōu)酶解物及超濾組分對(duì)ACE抑制活性的影響

由圖8可知，在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，ACE抑制率隨質(zhì)量濃度的增加顯著上升(P<0.05)，當(dāng)質(zhì)量濃度為4 mg/mL時(shí)，ACE抑制率由高到低為分子量小于10 kDa組分(78.88%)>最優(yōu)酶解物(67.00%)>分子量大于10 kDa組分(62.71%)，相應(yīng)的IC50值分別為1.859，1.956，3.426 mg/mL，表明分子量小于10 kDa組分的ACE抑制率最高，顯著高于最優(yōu)酶解物和分子量大于10 kDa組分(P<0.05)。ACE抑制率隨富硒辣木籽多肽分子量的降低而升高，與陳龍等[39-40]的結(jié)論一致。

圖8 富硒辣木籽蛋白酶解物及超濾組分對(duì) ACE的抑制率Figure 8 ACE inhibition rate of Se-enriched Moringa oleifera seed protein hydrolysates and ultrafiltration components

2.5 硒含量

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，富硒辣木籽蛋白原料和富硒辣木籽降壓肽中硒含量分別為1.269，1.394 mg/kg，表明富硒辣木籽蛋白經(jīng)酶解篩選后硒被富集。劉戀等[41]測(cè)得恩施富硒大豆蛋白粉中硒含量為1.068 8 mg/kg，劉波等[42]測(cè)得富硒大米中硒含量為0.167 5 mg/kg。此外，富硒螺旋藻蛋白獲得的硒肽具有較高的ACE抑制率[43-44]，且富硒大豆低聚肽的降血壓作用主要是硒與肽的協(xié)同作用[17]。綜上，富硒辣木籽蛋白是一種硒含量較高的植物蛋白資源，是富硒辣木籽蛋白肽的制備及分離純化的優(yōu)良天然富硒原料。

2.6 富硒辣木籽蛋白降壓肽的穩(wěn)定性

2.6.1 溫度對(duì)辣木籽降壓肽穩(wěn)定性的影響 由圖9可知，當(dāng)溫度為20～100 ℃時(shí)，降壓肽的ACE抑制率為79.17%～84.85%，說(shuō)明ACE抑制率在溫度20～80 ℃時(shí)變化不顯著(P>0.05)；當(dāng)溫度為100 ℃時(shí)，ACE抑制率為79.17%，相對(duì)于其他溫度處理下顯著降低(P<0.05)，但比例變化與其他溫度處理下相比不超過(guò)6%?？傮w看來(lái)，ACE抑制活性受溫度的影響較小，在一定范圍內(nèi)降壓肽表現(xiàn)出良好的溫度穩(wěn)定性，與Hwang等[45]和王珊珊[46]的試驗(yàn)結(jié)果一致。

圖9 富硒辣木籽ACE抑制肽的溫度穩(wěn)定性Figure 9 Temperature stability of ACE inhibitory peptides from Se-enriched Moringa oleifera seed

2.6.2 pH對(duì)辣木籽降壓肽穩(wěn)定性的影響 由圖10可知，當(dāng)pH為10時(shí)，ACE抑制率為83.91%，相對(duì)于pH 2～8時(shí)顯著降低(P<0.05)，可能是因?yàn)榻祲弘脑谝欢▔A性環(huán)境下出現(xiàn)了快速消旋，改變了肽鏈結(jié)構(gòu)，降低了多肽活性[47]，但與最高值相差≤6%。因此，pH對(duì)富硒辣木籽降壓肽的ACE抑制活性存在一定影響，但幅度不大，降壓肽在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下繼續(xù)維持較完整的酶體結(jié)構(gòu)及活性。這與Li等[8]和周劍敏等[26]的試驗(yàn)結(jié)果一致。

圖10 富硒辣木籽ACE抑制肽的酸堿穩(wěn)定性Figure 10 pH stability of ACE inhibitory peptides from Se-enriched Moringa oleifera seed

2.6.3 模擬胃腸道消化對(duì)辣木籽降壓肽穩(wěn)定性的影響

由圖11可知，與未消化的降壓肽相比，胃蛋白酶水解的降壓肽和胃蛋白酶與胰蛋白酶共同作用的降壓肽的抑制率未明顯降低(P>0.05)，說(shuō)明富硒辣木籽降壓肽活性不受胃腸蛋白酶的影響，具有良好的體外消化穩(wěn)定性，與Antonio等[48]和羅鵬等[49]的研究結(jié)論一致。

圖11 富硒辣木籽ACE抑制肽的體外消化穩(wěn)定性Figure 11 In vitro digestion stability of ACE inhibitory peptides from Se-enriched Moringa oleifera seed

3 結(jié)論

以富硒辣木籽蛋白粉為原料，以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制率為指標(biāo)，優(yōu)化了富硒辣木籽蛋白降壓肽的酶解工藝，并分析了酶解物的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制活性、硒含量和穩(wěn)定性。結(jié)果表明，富硒辣木籽蛋白降壓肽的最佳酶解工藝為酶解時(shí)間3 h，酶解溫度34 ℃，pH 8，底物濃度7%，酶底比0.3%。該條件下制備的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的硒含量是辣木籽蛋白原料的1.1倍。此外，該降壓肽還具有良好的溫度、酸堿和體外胃腸道消化穩(wěn)定性。后續(xù)將對(duì)富硒辣木籽肽進(jìn)行純化鑒定、體內(nèi)外活性評(píng)價(jià)、構(gòu)效關(guān)系研究等，以明確其降血壓作用機(jī)制。