8味中藥對(duì)腹瀉仔豬大腸桿菌抑制試驗(yàn)研究

林松泉

（廈門惠盈動(dòng)物科技有限公司，福建 廈門 361023）

從腹瀉仔豬體內(nèi)分離出1株大腸桿菌[1]，通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該病菌致病性較強(qiáng)，且對(duì)大多數(shù)的抗生素具有耐藥性。隨著國(guó)家替抗、減抗政策的實(shí)施，尋求抗生素替代品具有重要意義。

中草藥以天然植物為主，其具有對(duì)環(huán)境無污染、對(duì)機(jī)體不產(chǎn)生耐藥性及毒副作用低等優(yōu)點(diǎn)，因而逐漸引起人們的關(guān)注[2]。本試驗(yàn)選取市場(chǎng)上較為常見、常用的8味中藥，先進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，測(cè)試其抑菌活性，再通過小鼠體內(nèi)試驗(yàn)，驗(yàn)證其抑菌活性。同時(shí)選取市場(chǎng)上銷售的5種復(fù)合中藥產(chǎn)品進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，通過對(duì)比試驗(yàn)，分析這8味中藥的抑菌效果，并為中藥方劑的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)指示菌。大腸桿菌[1]（Escherichia coli）分離自腹瀉仔豬。

1.1.2 試驗(yàn)用中藥及市場(chǎng)上的中藥產(chǎn)品。純中藥魚腥草、蒲公英、金銀花、姜黃、板藍(lán)根、白頭翁、黃柏和黃連皆由藥店采購(gòu)。

產(chǎn)品A：黃芪、姜黃、甘草；產(chǎn)品B：黃柏、黃芪、黃連、板藍(lán)根；產(chǎn)品C：杜仲、蒲公英、金銀花；產(chǎn)品D：黃芩、黃柏、大青葉；產(chǎn)品E：白頭翁、黃連、黃柏。該5種中藥產(chǎn)品皆從市場(chǎng)上采購(gòu)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 中藥前處理。將8味純中藥分別稱取100 g，加入500 mL自來水于高壓蒸汽滅菌鍋中110℃滅菌2 h。過濾，收集濾液后再次進(jìn)行煮沸濃縮，最終定容至100 mL（此時(shí)1 mL中藥液相當(dāng)于1 g原中藥），4℃保存?zhèn)溆肹3-4]。

將8味純中藥及5種中藥產(chǎn)品分別稱取100 g，加入500 mL自來水于37℃恒溫?fù)u床內(nèi)180 r/min振蕩 2 h。過濾，收集濾液后再次進(jìn)行煮沸濃縮，最終定容至100 mL（此時(shí)1 mL中藥液相當(dāng)于1 g原中藥），4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 中藥體外抑菌試驗(yàn)。挑取活化后的大腸桿菌菌泥，稀釋至活菌數(shù)約108CFU/mL，吸取2 mL菌懸液加入50℃保溫的200 mL營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中搖勻，傾倒平板，冷卻凝固后將滅菌后的牛津杯置于平板上。向牛津杯中各自加入中藥濃縮液0.1 mL，于37℃環(huán)境中培養(yǎng)24 h。觀察有無抑菌圈產(chǎn)生，并用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑大小。

1.2.3 小鼠致病性及治療試驗(yàn)。選取100只健康小鼠隨機(jī)分成10組，每組10只，采用選取的8味中藥進(jìn)行小鼠體內(nèi)抑菌試驗(yàn)。給病菌感染組及8味中藥試驗(yàn)組的小鼠腹腔注射菌濃約為106CFU/mL的病菌懸液0.5 mL/只，對(duì)照組注射0.5 mL/只的0.85%無菌生理鹽水。將8組中藥試驗(yàn)組各自按10 mL/kg用藥量加入蒸煮炮制的中藥濃縮液至日糧及飲水中，10組日常喂食管理一致，飲水自由。連續(xù)觀察7 d，計(jì)算小鼠死亡只數(shù)，并剖檢死亡小鼠，取臟器進(jìn)行病菌分離。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥體外抑菌試驗(yàn)

將8味中藥經(jīng)過2種不同處理后獲得的濃縮液，對(duì)大腸桿菌進(jìn)行抑制試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，進(jìn)行簡(jiǎn)單溶水、浸泡的中藥中，魚腥草、蒲公英、金銀花、板藍(lán)根及白頭翁對(duì)大腸桿菌無抑制效果；姜黃、黃柏和黃連抑制效果較差，表現(xiàn)為低敏感。對(duì)中藥進(jìn)行蒸煮處理后，蒲公英、金銀花、姜黃、白頭翁、黃柏和黃連對(duì)大腸桿菌的抑制效果明顯提升，多數(shù)表現(xiàn)為中敏感；魚腥草、板藍(lán)根則對(duì)該大腸桿菌無抑制效果；而市場(chǎng)上的5種復(fù)合中藥產(chǎn)品經(jīng)過浸泡處理，對(duì)該大腸桿菌的抑制效果較差或無效果。具體試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 中藥體外抑菌效果

通過浸泡、蒸煮2種方式炮制中藥，在大腸桿菌的抑制試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過蒸煮處理的中藥，其抑制大腸桿菌的效果優(yōu)于浸泡處理方式。說明蒸煮炮制中藥能將中藥材的有效成分提取出來，使其發(fā)揮藥性。

2.2 小鼠致病性及治療試驗(yàn)

采用本試驗(yàn)所選取的8味中藥進(jìn)行小鼠體內(nèi)抑制大腸桿菌試驗(yàn)，結(jié)果見表2。在小鼠體內(nèi)注射大腸桿菌后的1周，病菌感染組小鼠全部死亡，死亡率達(dá)100%。說明該大腸桿菌具有較強(qiáng)的致病性及致死率。采用中藥進(jìn)行治療的8組中，魚腥草、板藍(lán)根組小鼠死亡率達(dá)100%，其他6組中藥組小鼠死亡率為50%～80%。與病菌感染組小鼠死亡率100%相比，對(duì)該大腸桿菌具有一定抑制效果的中藥為蒲公英、金銀花、白頭翁和黃柏。

表2 小鼠致病性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

將8味中藥經(jīng)過簡(jiǎn)單浸泡與高溫蒸煮2種不同方式處理后獲得的濃縮液，對(duì)大腸桿菌進(jìn)行抑制試驗(yàn)的結(jié)果表明，同種中藥經(jīng)過蒸煮處理，其抑制大腸桿菌效果優(yōu)于浸泡處理方式。說明蒸煮炮制中藥能將中藥材的有效成分提取出來，使其更好地發(fā)揮藥性。有研究表明[6]，中藥炮制的方法及工藝不同，直接影響臨床治療效果。本研究采用2種不同方式處理中藥，其表現(xiàn)出的結(jié)果也不同。關(guān)于魚腥草[7]、板藍(lán)根[8]的抑菌活性研究報(bào)道結(jié)果不一，本研究發(fā)現(xiàn)，這2味中藥無抑菌效果。另外，本研究中其他中藥抑菌活性與別的學(xué)者[9-11]的研究結(jié)果也不盡相同。綜合分析，原因可能為不同來源的大腸桿菌對(duì)中藥的敏感性不一樣[12]，且中藥炮制溫度及時(shí)間不同對(duì)藥效也有影響[13]。

在小鼠致病性及治療試驗(yàn)中，魚腥草、板藍(lán)根組的致死率與病菌感染組一致，達(dá)100%，說明魚腥草、板藍(lán)根無法治療因大腸桿菌所引起的疾病，該結(jié)果與魚腥草、板藍(lán)根對(duì)大腸桿菌無抑制效果的結(jié)論相一致。而小鼠死亡率較低的蒲公英、金銀花、白頭翁和黃柏中藥組，其在體外試驗(yàn)中對(duì)大腸桿菌抑制效果較好，與該結(jié)果也一致。但是黃連在體外試驗(yàn)中對(duì)大腸桿菌的抑制效果優(yōu)于蒲公英、金銀花、黃柏，而在小鼠的治療試驗(yàn)中反而死亡率比蒲公英、金銀花和黃柏組高，針對(duì)該現(xiàn)象，后續(xù)需進(jìn)一步研究探討。

通過上述試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，選取的8味中藥對(duì)治療小鼠大腸桿菌的效果較差，效果最優(yōu)組死亡率僅降低至50%，總體來說治療效果較差。而于市場(chǎng)上購(gòu)買的中藥產(chǎn)品在抑菌殺菌功效上也相對(duì)較低。通常市場(chǎng)上流通的復(fù)合中藥產(chǎn)品，主要是將常規(guī)的中藥材進(jìn)行粉碎后復(fù)配而形成，故其藥材的有效成分難以溶解出來，加之使用者多直接拌料使用，未做進(jìn)一步處理，故抑菌殺菌效果較差，甚至無效果。

4 結(jié)論

通過對(duì)所選取的8味中藥進(jìn)行體外抑制大腸桿菌及體內(nèi)治療小鼠試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蒲公英、金銀花、白頭翁和黃柏能降低小鼠約50%的死亡率，通過高溫蒸煮方式處理的中藥能有效提高其抑菌活性。在對(duì)市場(chǎng)上5種復(fù)合中藥的體外抑菌試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，它們抑菌效果較差或無效果。綜上分析，經(jīng)過簡(jiǎn)單處理的中藥制劑，其抑制該大腸桿菌的效果較差。后續(xù)將繼續(xù)深入研究，優(yōu)化中藥炮制方式，提高抑菌活性。