牛病毒性腹瀉的診斷及防控

郭曉萍，楊小虎

（巴彥淖爾市臨河區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000）

牛病毒性腹瀉(Bovine viral diarrhea，BVD)是感染牛病毒性腹瀉病毒 (Bovine viral diarthea virus，BVDV)所導(dǎo)致的一種接觸性傳染病[1-2]。該病的主要臨床特征為發(fā)熱、黏膜糜爛、白細(xì)胞數(shù)量減少及腹瀉等[3]。懷孕母牛感染后常出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或畸形胎。該病致病機制復(fù)雜、傳染性強且傳播速度快，同時缺乏有效的治療手段，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。

1 病原學(xué)

BVDV屬于黃病毒科瘟病毒屬成員。成熟的病毒粒子在電鏡下呈直徑為40～60 nm的球形或圓形，內(nèi)含直徑為25～30 nm的核衣殼蛋白，外有囊膜包裹。BVDV病毒粒子耐堿不耐酸，pH值為3.0即可使其失活，但是當(dāng)pH值為5.7～9.3時，其性狀保持穩(wěn)定。此外，對有機溶劑乙醚、氯仿及蛋白酶也較為敏感。BVDV不耐高溫，56℃條件下1 h以上便可使其滅活。但對低溫有較強的耐受力，－70℃條件下能夠保存多年。根據(jù)基因的抗原性差異，通常將BVDV分為瘟病毒 A（BVDV-1）、瘟病毒 B（BVDV-2）和最新發(fā)現(xiàn)的Hobi樣瘟病毒（BVDV-3）3種類型。根據(jù)病毒感染細(xì)胞后是否產(chǎn)生細(xì)胞病變（CPE），將BVDV分為致細(xì)胞病變型（CP）和非致細(xì)胞病變型（NCP）兩種不同的生物型。兩種生物型引起的癥狀不同，CP型可引起細(xì)胞凋亡，對機體損傷嚴(yán)重，而NCP型在胎兒發(fā)育早期感染BVDV后形成持續(xù)性感染(persistent infection,PI)動物，是牛病毒性腹瀉的主要傳染源。

2 流行病學(xué)

在我國牛病毒性腹瀉在冬春季發(fā)病率較高，且多呈地方性流行。各品種和年齡段的牛對BVDV都易感，6～18月齡的犢牛最容易感染發(fā)病，其中肉牛比奶牛的發(fā)病率高。牛是BVDV的自然宿主，越來越多的研究表明，豬、綿羊、山羊、鹿、駱駝及其他野生動物也是BVDV的易感宿主[4]。

該病的傳播方式較多，包括接觸傳播、胎盤垂直傳播、種公牛精液帶毒后交配傳播、呼吸道和消化道傳播等，而野外反芻動物感染的重要途徑則是吸血蟲媒介傳播。PI牛是該病的主要傳染源，PI牛終生帶毒，持續(xù)大量脫落的BVDV存在于全身分泌物中，包括鼻涕、唾液、精液及糞便等。BVDV的水平傳播途徑主要是直接或者間接地攝入或接觸被病毒污染的物質(zhì)，主要包括受污染的飼料、水、機械設(shè)備及人員(包括獸醫(yī))等。有限的證據(jù)表明，蒼蠅和其他擅長叮咬的昆蟲在BVDV的被動傳播中也發(fā)揮著重要作用。

3 臨床癥狀

3.1 持續(xù)性感染型

持續(xù)感染是母牛在懷孕早期感染NCP型BVDV，胎牛的未成熟免疫系統(tǒng)尚未形成足夠的免疫應(yīng)答，在出生后就會攜帶BVDV。NCP型BVDV產(chǎn)生的非溶質(zhì)感染和逃避宿主免疫應(yīng)答的能力是持續(xù)性感染存在的主要機制[5]。部分感染牛不出現(xiàn)臨床癥狀，外觀呈健康狀態(tài)，但機體呈持續(xù)感染狀態(tài)，會感染許多正常牛只，嚴(yán)重影響牛的生產(chǎn)性能。PI牛終身帶毒且不斷向外界排毒，是BVD重要的傳染源，普通的診斷很難將其篩查出來。因此，很多國家把清除PI牛作為BVD凈化與防控的重點。

3.2 急性型

牛病毒性腹瀉急性型，又被稱為一過性感染（TI），犢牛和青年牛易感。牛病毒性腹瀉急性型發(fā)病率高，臨床表現(xiàn)較溫和，死亡率低。牛群感染發(fā)病后體溫呈雙相熱，伴有呼吸道與消化道感染及繁殖障礙。BVDV可感染胃腸道肌肉層和黏膜下層的神經(jīng)結(jié)，導(dǎo)致正常神經(jīng)功能被破壞，造成感染牛常出現(xiàn)腹痛且伴有不同程度的腹瀉，精神沉郁、生產(chǎn)性能降低，病情嚴(yán)重時可見血便，最后因急性脫水死亡。犢牛感染后死亡率增加，懷孕母牛感染后會發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎或PI牛。

3.3 黏膜型

黏膜型的特點是死亡率高，患病牛通常在出現(xiàn)臨床癥狀后1～2周內(nèi)死亡，尸檢顯示胃腸道不同部位的黏膜出現(xiàn)糜爛和潰瘍。黏膜型多發(fā)生于PI牛再次感染了CP型毒株之后，對病牛進行病理剖檢可見明顯的黏膜潰爛[6]。通常分為急性黏膜型與慢性黏膜型。慢性黏膜型發(fā)病率低、死亡率高，且牛群中犢牛感染后死亡率較其他牛高。黏膜型BVDV病程較長，感染牛食欲不振、精神沉郁、白細(xì)胞減少、消瘦、生產(chǎn)性能顯著下降，呈持續(xù)或間歇性腹瀉，糞便帶血，腸道黏膜受損嚴(yán)重。

4 診斷技術(shù)

4.1 免疫瓊脂擴散試驗

免疫瓊脂擴散法是我國基層獸醫(yī)部門采用的一種普查手段，具有耗時少、可操作性強、節(jié)省資源等優(yōu)點。可選擇潰瘍或炎性組織的黏膜直接與陽性血清進行抗原檢測，也可以取代被檢血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原進行抗體的檢測。陳茂盛等[7]通過試驗發(fā)現(xiàn)，采用瓊擴散試驗檢驗BVDV的抗體，其結(jié)果與微量中和試驗差異顯著。

4.2 病毒中和試驗

病毒中和試驗是流行病學(xué)調(diào)查十分有效的方法，廣泛應(yīng)用于BVDV的病原學(xué)檢測和血清學(xué)檢測。孟慶森[8]等為了解BVDV在國內(nèi)的流行情況，在全國共采集了451份犢牛血清樣品，用病毒中和試驗檢測樣品中BVDV的抗體情況。結(jié)果顯示，從我國不同地區(qū)采集的血清樣品，BVDV陽性率參差不齊，最低為25.6%，最高可達91.9%，表明BVDV在我國流行較為嚴(yán)重。

4.3 免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)應(yīng)用范圍較廣，可以特異性檢測BVDV抗原、抗體。該技術(shù)包括直接免疫熒光技術(shù)和間接免疫熒光技術(shù)兩種。直接免疫熒光技術(shù)主要用熒光素耦聯(lián)抗BVDV的抗體對新鮮組織的冰凍切片或細(xì)胞進行染色檢測；間接免疫熒光主要是把熒光素耦聯(lián)到二抗上，利用二抗種屬特異性進行染色檢測，然后在熒光顯微鏡下觀察包漿中是否有熒光粒子出現(xiàn)，出現(xiàn)熒光粒子表明檢測樣品為陽性。該檢測技術(shù)結(jié)果可靠且特異性強，不足之處是價格較為昂貴，所需檢測抗原需要制備相應(yīng)的熒光標(biāo)記的抗體，這就要求配備熒光顯微鏡和觀察及記錄試驗結(jié)果的相機[9]。

5 防控措施

5.1 提高日常飼養(yǎng)管理水平

定期對飼養(yǎng)環(huán)境進行清理消毒，保持圈舍的干燥、清潔及通風(fēng)良好，冬春季采取防寒保暖措施，為牛提供一個舒適的生產(chǎn)環(huán)境，增強抵抗力，減少BVD的發(fā)生。此外，日常飼養(yǎng)過程中飼料配比要合理，以滿足牛的生長發(fā)育需求，增強體質(zhì)，預(yù)防疾病的發(fā)生。

5.2 積極做好免疫接種工作

疫苗免疫成本低、有效性高，是預(yù)防動物疫病的有效措施。BVD疫苗主要是通過刺激機體的B細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生獲得性免疫來降低BVD的發(fā)病率。目前，國內(nèi)已經(jīng)研發(fā)了多種疫苗，如牛黏膜病弱毒疫苗、滅活疫苗，這對控制與消滅BVD起到了積極作用。

5.3 嚴(yán)格做好檢疫工作

定期對牛群進行檢查，發(fā)現(xiàn)患病或者可疑牛只，及時進行隔離，做到“早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早淘汰”。對飼養(yǎng)環(huán)境進行全面消毒，對健康牛群進行緊急免疫，控制傳染源。對出現(xiàn)臨床癥狀的牛只盡快淘汰。堅持自繁自養(yǎng)，確需引種時要進行嚴(yán)格檢疫，確保完全健康方可進行混養(yǎng)。

5.4 加強對PI牛的檢測

目前，全球多個國家采用的防控方案是檢出PI牛后，消滅或阻止它們返回牛群。在疫病早期階段，特別是犢牛出生后不久，檢測PI牛是較為高效的方式之一。