• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    沙棘刺和芽的組織解剖與轉(zhuǎn)錄組分析

    2022-09-01 09:00:30王建武嚴(yán)加坤相微微馮光惠劉翠英尚愛軍
    西北植物學(xué)報 2022年7期
    關(guān)鍵詞:沙棘木質(zhì)素氣孔

    王建武,楊 濤,嚴(yán)加坤,相微微,馮光惠,劉翠英,尚愛軍*

    (1 榆林學(xué)院陜西省陜北礦區(qū)生態(tài)修復(fù)重點實驗室, 陜西榆林 719000;2 陜西省林業(yè)科學(xué)院,西安 710082;3 國家林業(yè)和草原局長柄扁桃工程技術(shù)研究中心,陜西榆林 719000)

    自然界中的許多植物都有刺,但不同植物中刺的發(fā)育機制存在顯著差異。英語詞匯里有專門的單詞來區(qū)分不同的刺,即prickle(由皮層發(fā)育而來)、spine(葉子的尖銳部分)和thorn(尖銳的樹枝)[1],玫瑰刺是植物表皮毛發(fā)育而形成的尖銳突起,通常被誤認(rèn)為是真正的葉刺或枝刺[2]。本研究在討論尖銳的植物器官時統(tǒng)一使用“刺”一詞。刺的明顯功能是防御,刺可以提供機械保護(hù),防止草食動物啃食;刺可以幫助種子和植物擴散;刺可以增加表皮的厚度,從而減少熱量和水分的散失;一些刺可以防止陽光直射,降低光抑制,并可降低低溫產(chǎn)生的損傷[1-2]。

    從生理角度來看,植物刺是有重要功能的器官,刺的發(fā)育和形成除了受自身基因控制外,環(huán)境因素對刺的發(fā)育和形成也有重要影響。動物啃食可以刺激植物產(chǎn)生更多的刺,以防御動物過度啃食[1];土壤濕度降低會使黑枸杞的莖刺變得堅硬[3];遮陰可以使鷹爪化的鉤刺數(shù)量增多,有利于攀緣[4]。因此從遺傳的角度來看,植物刺是一個數(shù)量性狀,而不是一或幾個基因控制的質(zhì)量性狀。刺的發(fā)育和形成由多個基因控制,其分子機理應(yīng)該是一個復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。目前,研究人員把表皮毛作為研究擬南芥和棉花細(xì)胞增殖和生長發(fā)育的模式細(xì)胞,因此,由表皮毛發(fā)育成刺的分子機理相對清晰[2,5-9]。對于葉刺、皮刺、枝刺等多細(xì)胞構(gòu)成的刺,目前已通過遺傳和分子生物學(xué)手段克隆鑒定到一些相關(guān)基因,如玫瑰的RrTT-G1基因[10]、花椒的10個皮刺分化相關(guān)基因[11]、萵苣的LG5467628基因(混池RNA-seq測序后定位到的候選基因)[12]及生菜(做了基因定位分析,尚未具體到基因水平)[13],但尚未建立一個調(diào)控網(wǎng)絡(luò),而且已有的研究相互印證和支持性也不強,也進(jìn)一步說明刺的發(fā)育和形成分子機制比較復(fù)雜。不同植物的刺,甚至同種植物不同部位的刺,其發(fā)育和形成分子機理可能都有其特異性。

    沙棘是多年生灌木,根具有固氮根瘤菌,耐貧瘠和干旱[14],是優(yōu)良的防風(fēng)固沙植物,具有重要的生態(tài)價值。此外,沙棘果實具有很高的營養(yǎng)和藥用價值,可以加工沙棘汁,并從果實中提取藥用成分[15-17]。沙棘枝上有很多刺,沙棘刺含有維管組織,折斷時斷面粗糙,屬于典型的枝刺(thorn)。從外部形態(tài)來看,沙棘刺具有營養(yǎng)葉,發(fā)育早期的刺和枝芽差異很小,只是刺頂端生長點消失,而且刺的著生位置跟枝芽也沒有明顯差異,總體上刺和芽在莖上有規(guī)律地間隔開。這些特征跟黑枸杞和酸棗的枝刺有較大區(qū)別,黑枸杞和酸棗的刺不具有營養(yǎng)葉,而且長在葉腋中,因此,對沙棘刺的研究可以聚焦于比較分析去掉營養(yǎng)葉的刺和芽之間的差異,在取材上能盡量去掉背景噪音,凸顯差異。從采摘的角度來看,人們希望獲得少刺或無刺的沙棘品種,然而要通過遺傳手段調(diào)控刺的發(fā)育,培育少刺或無刺新品種,需要對沙棘刺的發(fā)育和形成分子機理有深入了解。綜上,對沙棘刺的研究既有理論意義,也有應(yīng)用前景。本研究比較了沙棘刺和芽的形態(tài)和組織差異,通過轉(zhuǎn)錄組測序分析比較了沙棘刺和芽基因表達(dá)譜,挖掘到與木質(zhì)素、細(xì)胞壁、表皮和氣孔相關(guān)的差異表達(dá)基因(differentially expressed genes,DEGs),并通過qRT-PCR驗證了關(guān)鍵基因的表達(dá)水平。

    1 材料和方法

    1.1 植物材料

    從7年生雄性沙棘(HippophaerhamnoidesL.ssp.sinenisRousi)上采集芽和刺,該沙棘品種多刺。種植地點位于陜西省榆林市榆陽區(qū)陜西省防沙研究院苗圃內(nèi)(海拔1 129 m;N38°19′49″,E109°42′42″)。在2021年4月22日,選擇約2 cm長的芽和刺,在開花前采集,除去營養(yǎng)葉,液氮中速凍,干冰運輸?shù)缴虾C兰具M(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。樣品中所有4個生物重復(fù)都來自同一株植株,芽標(biāo)記為bud1、bud2、bud3、bud4,剌標(biāo)記為thorn1、thorn2、thorn3和thorn4。

    1.2 組織切片分析

    樣品在FAA中固定過夜,將固定的材料分割成0.3 cm大小,梯度乙醇脫水,石蠟包埋,Leica RM2135 石蠟切片機切片,切片厚度 8~12 μm,然后二甲苯脫蠟,梯度乙醇復(fù)水,番紅-固綠染色,中性樹膠封片,Leica DMLB顯微鏡觀察并拍照。切片用開放場或在340~380 nm激發(fā)后,用Leica DMLB熒光顯微鏡觀察,并用攝像機(Leica,DC 300F)記錄[18]。

    1.3 RNA-Seq分析

    使用TRIzol試劑(美國Invitrogen)從樣品中提取總RNA,并在Illumina HiSeq平臺上進(jìn)行RNA測序。RNA測序數(shù)據(jù)分析按標(biāo)準(zhǔn)化流程進(jìn)行[19-21]。每個轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)水平被標(biāo)準(zhǔn)化為每百萬個轉(zhuǎn)錄本(transcripts per million,TPM)值[22]。在本研究中,每個轉(zhuǎn)錄本的差異表達(dá)水平以| log2(fold-change)| ≥ 1和P-value ≤ 0.05為標(biāo)準(zhǔn),以確定芽和刺之間的DEGs。使用BLASTx程序,針對NCBI NR(non-redundant protein)、Swiss-Prot、Pfam、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)、KOG(euKaryotic orthologous groups of proteins)和GO(gene ontology)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,對unigenes進(jìn)行注釋[20]?;蚓垲惙治霾捎肕EGA 7.0軟件。

    1.4 qRT-PCR驗證

    所用樣本與轉(zhuǎn)錄組分析相同。qRT-PCR在FTC-3000儀器(加拿大,F(xiàn)unglyn生物技術(shù)公司)上使用TB-Green方法(TB-Green?Fast qPCR Mix,日本Takara)進(jìn)行。用于qRT-PCR的引物為unigene DN7364_c0_g2、DN4324_c0_g3、DN10443_c0_g2、DN8484_c0_g2、DN16315_c0_g1、DN8647_c0_g3、DN424_c0_g1、DN8861_c0_g2、DN14231_c0_g1、DN7861_c0_g1、DN11032_c0_g1、DN13014_c0_g1、DN16737_c0_g1和DN13978_c0_g1(表1)。內(nèi)參基因采用通過轉(zhuǎn)錄組測序得到的沙棘ef1α基因片段(unigene DN5364_c0_g6)(表1)[23]。Unigene DN5364_c0_g6被較好注釋,為延伸因子ef1-α基因,包含466 bp。bud1、bud2、bud3、bud4、thorn1、thorn2、thorn3和thorn4中DN5364_c0_g6的TPM值分別為68.09、81.53、88.84、66.05、89.7、70.73、84.69和79.32,該基因表達(dá)相對穩(wěn)定,適合作為內(nèi)參基因[24]。

    表1 qRT-PCR引物Table 1 Primers for qRT-PCR

    1.5 統(tǒng)計分析

    qRT-PCR試驗采用3個生物學(xué)重復(fù),數(shù)據(jù)均為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差”。統(tǒng)計分析用SPSS 22.0。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 沙棘刺和芽的形態(tài)和組織比較

    成熟的沙棘刺長約3 cm,具有營養(yǎng)葉;同一年生長的刺會在秋天時從刺尖開始枯萎(圖1,A)??偟膩碚f,沙棘芽橫切面的組織邊界明顯且層次分明;而沙棘刺橫切面的組織邊界模糊,染色區(qū)域類型單調(diào),且刺尖中心的紅色區(qū)域較大(圖1,C~F)。這可能是因為刺尖細(xì)胞開始變得像導(dǎo)管一樣,原生質(zhì)體逐漸解體并死亡,只留下細(xì)胞壁。木質(zhì)素的自發(fā)藍(lán)色熒光顯示刺中的木質(zhì)化程度顯著高于芽,木質(zhì)化程度的增加可增加刺的硬度(圖1,G~J)。

    2.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)整體分析

    轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)優(yōu)化組裝結(jié)果(表2)顯示,經(jīng)數(shù)據(jù)組裝共獲得81 560個unigenes(單基因),其中60.22%的unigenes被定位,unigenes和transcript(轉(zhuǎn)錄本)的TransRate得分分別為0.303 14和0.418 81。統(tǒng)計表明,一個從頭組裝的得分為0.22(優(yōu)化得分為0.35)的TransRate分析結(jié)果將優(yōu)于50%的已發(fā)布在NCBI TSA數(shù)據(jù)庫中的分析結(jié)果[25],故本研究的轉(zhuǎn)錄組組裝質(zhì)量相對較好。BUSCO得分C:75.0%(S:70.3%;D:4.7%),也相對較好(表2)[26]。

    表2 沙棘轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)優(yōu)化組裝結(jié)果評估表Table 2 Results of optimized assembly for sea buckthorn transcriptome

    組裝完成后,通過BLAST在6個公共數(shù)據(jù)庫(NR、Swissprot、KEGG、COG、Pfam和GO)中對組裝的unigenes進(jìn)行注釋,其中分別有38 210、31 176、18 728、34 175、30 298和32 173個unigenes在上述數(shù)據(jù)中得到比對注釋。至少在一個數(shù)據(jù)庫得到注釋的unigenes數(shù)目為42 193(占所有unigenes的52%)。GO和KEGG注釋基因在所有單基因中的比例分別為39%和23%。共獲得9 385個DEGs(上調(diào)6 428個、下調(diào)2 957個)。DEGs聚類分析表明,本研究的4個生物學(xué)重復(fù)具有良好的一致性(圖2)。

    為了進(jìn)一步了解DEGs的功能,將所有DEGs映射到GO數(shù)據(jù)庫,并進(jìn)行富集分析。GO分析表明DEGs被分為三大功能類別47個項目,其中BP類別、CC類別和MF類別中的項目數(shù)量分別為20、12和15。圖3顯示了前20個GO富集程度最高的項目及其DEGs數(shù)目。排名前三的GO富集項目分別是植物表皮發(fā)育(plant epidermis development)、氣孔復(fù)合體發(fā)育(complex stomatal development)和木質(zhì)素分解代謝(lignin catabolic process)過程。KEGG富集分析得到DEGs參與的138個代謝途徑,圖4顯示了前20個KEGG富集程度最高的項目及其DEGs數(shù)目,其中角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟質(zhì)生物合成途徑(cutin, suberine and wax biosynthesis)是排名第一的途徑。

    2.3 木質(zhì)素分解代謝過程相關(guān)的DEGs

    木質(zhì)素的生物合成和代謝途徑主要分為莽草酸途徑(shikimic acid pathway)、苯丙烷途徑(phenylpropanoid pathway)和木質(zhì)素特異性合成途徑(lignin-specific synthesis pathway)三個階段。迄今為止,莽草酸途徑中參與木質(zhì)素生物合成的調(diào)控機制尚未被確定。然而,在苯丙烷途徑和木質(zhì)素合成特異途徑中發(fā)現(xiàn)了能夠特異性調(diào)節(jié)木質(zhì)素合成的關(guān)鍵酶和相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子[27-29]。本研究通過GO富集分析發(fā)現(xiàn)了20個與木質(zhì)素合成有關(guān)的DEGs,其中只有2個屬于苯丙烷途徑,即DN2241_c0_g1(肉桂醇脫氫酶1,Cinnamyl alcohol dehydrogenase 1)和DN8647_c0_g3(咖啡酸3-O-甲基轉(zhuǎn)移酶,Caffeic acid 3-O-methyltransferase);兩種推定的蛋白(DN7364_c0_g1和DN4324_c1_g1)的具體功能尚不清楚;其他16個DEGs具有漆酶(laccase)活性,這些DEGs屬于木質(zhì)素合成特異途徑(表3)。有些漆酶能降解木質(zhì)素,有些漆酶能合成木質(zhì)素,這與漆酶的來源和合成周期有關(guān)。與芽相比,刺中只有5個具有漆酶活性的DEGs表達(dá)下調(diào),另外11個具有漆酶活性的DEGs表達(dá)上調(diào)(表3)。其中,DN8484_c0_g2、DN8484_c0_g3、DN8484_c0_g1、DN27398_c0_g1和DN16315_c0_g1在芽中的表達(dá)非常低,幾乎在刺中特異表達(dá)(表3)。接下來,選擇6個基因,通過qRT-PCR驗證其表達(dá)水平。這些基因的相對表達(dá)水平與TPM值一致,與芽相比,DN4324_c0_g3、DN8484_c0_g2和DN16315_c0_g1在刺中的表達(dá)分別上調(diào)了9.5倍、41.1倍和13.7倍; DN7364_c0_g2、DN10443_c0_g2和DN8647_c0_g3的下調(diào)顯著,分別只有芽中表達(dá)量的5%、14%和24%(圖5,A)。

    表3 沙棘芽和刺中木質(zhì)素分解代謝相關(guān)DEGsTable 3 DEGs linked with lignin catabolic process of sea buckthorn bud and thorn

    2.4 細(xì)胞壁、表皮和氣孔相關(guān)的DEGs

    通過KEGG途徑富集分析,角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟質(zhì)生物合成是最富集的途徑。因此,我們分析了屬于該途徑的DEGs。共有29個DEGs與角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟質(zhì)生物合成有關(guān);這些DEGs可分為乙醇合成相關(guān)的脂肪酰輔酶A還原酶(Alcohol-forming fatty acyl-CoA reductase)、ω-羥基棕櫚酸酯O-阿魏酰轉(zhuǎn)移酶(Omega-hydroxypalmitate O-feruloyl transferase)、細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450)、熱頭蛋白(HOTHEAD protein)和其他類別(表4)。許多基因在芽和刺中的表達(dá)水平具有相反的趨勢,要么在刺中表達(dá),而在芽中表達(dá)非常低,要么在芽中表達(dá),而在刺中表達(dá)非常低(表4)。例如,DN53228_c0_g1、DN15725_c0_g4、DN41003_c0_g1、DN14231_c0_g1和DN16701_c0_g1在芽中的表達(dá)水平很低,但在刺中高表達(dá),而DN424_c0_g1、DN48710_c0_g1和DN27861_c0_g1在刺中的表達(dá)水平很低,但在芽中高表達(dá);特別是,刺中DN27861_c0_g1的TPM值為0(表4)。接下來,從上述基因中選擇4個基因,通過qRT-PCR驗證其表達(dá)。這些基因的相對表達(dá)水平與TPM值一致,與芽相比,刺中的DN8861_c0_g2和DN14231_c0_g1分別上調(diào)3.6倍和22.1倍;DN424_C0_g1和DN27861_C0_g1的下調(diào)顯著,分別只有芽中表達(dá)量的3%倍和6%倍(圖5,B)。

    表4 沙棘芽和刺中角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟質(zhì)合成相關(guān)DEGsTable 4 DEGs linked with cutin, suberine and wax biosynthesis of sea buckthorn bud and thorn

    植物表皮發(fā)育和氣孔復(fù)合體發(fā)育是GO富集分析結(jié)果中的前2個項目,因此,本研究進(jìn)一步分析了相關(guān)DEGs。植物表皮發(fā)育與氣孔復(fù)合體發(fā)育密切相關(guān)。本研究鑒定的參與植物表皮發(fā)育和氣孔復(fù)合體發(fā)育的DEGs是相同的;這些DEGs可分為表皮形成因子(Epidermal patterning factor,EPF)、轉(zhuǎn)錄因子(Transcription factor)、多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)和其他類別(表5)。與芽相比,所有DEGs在刺中均下調(diào)表達(dá),DN55365_c0_g1、DN11032_c0_g1、DN13014_c0_g1、DN29670_c0_g1、DN46942_c0_g1、DN16737_c0_g1、DN13978_c0_g1和DN16781_c0_g1在刺中的表達(dá)水平非常低,但在芽中高表達(dá);特別是,刺中DN29670_c0_g1的TPM值為0(表5)。接下來,從上述基因中選擇4個基因,并通過qRT-PCR驗證其表達(dá)。這些基因的相對表達(dá)水平與TPM值一致,與芽相比,刺中的DN11032_c0_g1、DN13014_c0_g1、DN16737_c0_g1和DN13978_c0_g1顯著下調(diào),分別只有芽中表達(dá)量的6%、13%、3%和4%(圖5,C)。

    表5 沙棘芽和刺中表皮/氣孔發(fā)育相關(guān)DEGsTable 5 DEGs linked with epidermis/stomatal development of sea buckthorn bud and thorn

    3 討 論

    前人研究認(rèn)為,無論側(cè)芽最終是發(fā)育成刺還是枝,都是在芽個體發(fā)育的早期階段決定的,刺芽通常比枝芽產(chǎn)生更小、更少的三角形葉原基[30]。刺發(fā)育過程中的顯著變化是頂端分生組織縮小,最終變硬,同時伴隨分生組織活動和葉片起始發(fā)育的停止[30]。

    頂端分生組織的分子調(diào)控機制非常復(fù)雜,僅基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)很難進(jìn)行深入、明確的分析。最近,人們發(fā)現(xiàn)水稻中也存在與擬南芥HTH基因高度同源的HOTHEAD(HTH)基因[31-32]。ONI3在水稻莖尖細(xì)胞中特異表達(dá),ONI3突變體在莖尖細(xì)胞中表現(xiàn)出發(fā)育缺陷,導(dǎo)致莖尖發(fā)育異常[33]。類似地,Mini1在水稻幼嫩莖尖表達(dá),但在根中不表達(dá),Mini1突變體芽的發(fā)育提前終止[34]。因此,推測水稻HTH基因和擬南芥HTH基因具有不同的功能;水稻HTH基因在維持莖尖分生組織(SAM)活性和促進(jìn)水稻莖尖發(fā)育方面起著重要作用[33-34]。在本研究中,挖掘得到5個HTH基因,其中unigene DN27861_c0_g1在刺中不表達(dá),DN48710_c0_g1在刺中的表達(dá)也非常低,DN34353_c0_g1在刺中表達(dá)增加,而其他2個基因在刺中表達(dá)降低。推測其中一些基因可能參與角質(zhì)合成,類似于擬南芥HTH基因的功能,一些可能參與分生組織活動。

    細(xì)胞壁木質(zhì)化可顯著增加刺的硬度。因此,沙棘刺的木質(zhì)化程度顯著高于芽,這與沙棘刺的硬化一致。木質(zhì)素分解代謝過程是GO富集分析結(jié)果中的第3項,表明刺和芽中的木質(zhì)素代謝存在顯著差異。大多數(shù)與木質(zhì)素分解代謝過程有關(guān)的DEGs屬于漆酶;漆酶負(fù)責(zé)將氨酚醇聚合成木質(zhì)素聚合物[35-36]。單一木質(zhì)素的組成在植物種類、組織和細(xì)胞類型之間變化很大,甚至在單個細(xì)胞內(nèi)的獨立細(xì)胞壁層之間差異也很大,該組成主要影響最終木質(zhì)素聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和物理化學(xué)性質(zhì)[35]。漆酶的組織定位以及它們的生化特性決定了木質(zhì)素聚合的組織模式[35]。沙棘漆酶生化特性的深入研究,可將其作為經(jīng)基因工程手段調(diào)控沙棘刺硬度的候選基因。

    在刺的發(fā)育過程中,細(xì)胞的功能類型逐漸趨于單一化,也就是說,它們變硬并起到機械支撐的作用。因此,與芽相比,刺細(xì)胞的細(xì)胞壁成分發(fā)生了顯著變化。本研究結(jié)果支持這一觀點。首先,組織切片分析表明,刺細(xì)胞的染色結(jié)果相對單一,層次性不如芽切片明顯,這表明刺細(xì)胞的功能在形態(tài)學(xué)上得到了簡化。其次,KEGG富集分析表明,角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟質(zhì)生物合成是富集程度最高的途徑,乙醇形成相關(guān)的脂肪酰輔酶A還原酶、ω-羥基棕櫚酸酯O-阿魏酰轉(zhuǎn)移酶、細(xì)胞色素P450、HOTHEAD蛋白家族在角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟質(zhì)生物合成途徑中有多種異構(gòu)體,這些蛋白質(zhì)異構(gòu)體屬于進(jìn)化中的旁系同源物,應(yīng)具有明顯的功能分化。因此,進(jìn)一步研究這些同源蛋白的生物化學(xué)功能,分析它們參與的代謝途徑,對闡明沙棘刺和芽之間角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟質(zhì)生物合成的差異具有重要意義。第三,沙棘刺中表皮和氣孔的發(fā)育可能逐漸停止,本研究發(fā)現(xiàn)參與表皮和氣孔發(fā)育的所有DEGs在刺中均下調(diào)表達(dá)。bHLH轉(zhuǎn)錄因子SPEECHLESS(SPCH)在氣孔發(fā)育中扮演關(guān)鍵角色[37-39],SPCH整合了內(nèi)源信號,并作為激素和環(huán)境信號的受體,在發(fā)育過程中調(diào)節(jié)氣孔密度和發(fā)育模式[37-39]。SPCH的表達(dá)水平受分泌型的表皮形成因子(EPF)調(diào)節(jié),SPCH與EPF在功能上是相關(guān)的[40-47],SPCH和EPF在沙棘中的表達(dá)譜相似,這與它們的功能相關(guān)性一致。

    綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)沙棘刺和芽具有明顯的形態(tài)和組織差異,二者中的差異表達(dá)基因(DEGs)主要與木質(zhì)素合成以及細(xì)胞壁、表皮和氣孔發(fā)育有關(guān),參與沙棘刺頂端分生組織活動消失和刺硬化過程相關(guān)的關(guān)鍵基因得到初步明確。本研究結(jié)果為進(jìn)一步探討沙棘刺發(fā)育的分子機制奠定了基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    沙棘木質(zhì)素氣孔
    沙棘種植讓日子甜滋滋
    沙棘頌
    玉米葉氣孔特征對氮素和水分的響應(yīng)及其與葉氣體交換的關(guān)系
    某灰鑄鐵汽油機缸體電機面氣孔的解決探討
    木質(zhì)素增強生物塑料的研究進(jìn)展
    上海包裝(2019年8期)2019-11-11 12:16:14
    沙棘在西藏的發(fā)展前景探討
    KD490:一種軟包鋰離子電池及其制作工藝
    沙棘產(chǎn)業(yè)的直銷之路
    一種改性木質(zhì)素基分散劑及其制備工藝
    天津造紙(2016年1期)2017-01-15 14:03:29
    一種新型酚化木質(zhì)素胺乳化劑的合成及其性能
    亚洲av熟女| 免费av观看视频| 国产精品国产高清国产av| 久久久午夜欧美精品| 99热只有精品国产| 国模一区二区三区四区视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产 一区精品| 国产精品国产高清国产av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 男女啪啪激烈高潮av片| 日韩欧美 国产精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产 一区 欧美 日韩| 看十八女毛片水多多多| 久久精品国产自在天天线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美xxxx性猛交bbbb| 青春草视频在线免费观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 日本一本二区三区精品| 小说图片视频综合网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 我要看日韩黄色一级片| 99热全是精品| 又爽又黄a免费视频| 天天躁日日操中文字幕| 小说图片视频综合网站| 国产成人freesex在线 | 精品熟女少妇av免费看| 伦理电影大哥的女人| 搞女人的毛片| 成人美女网站在线观看视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 51国产日韩欧美| 中国美女看黄片| 欧美色视频一区免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲美女搞黄在线观看 | 在线a可以看的网站| 在线观看av片永久免费下载| 欧美bdsm另类| 亚洲熟妇熟女久久| 有码 亚洲区| 九九热线精品视视频播放| 午夜福利18| 1000部很黄的大片| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 免费黄网站久久成人精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 男女那种视频在线观看| 亚洲在线自拍视频| 免费人成在线观看视频色| 啦啦啦韩国在线观看视频| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 伦理电影大哥的女人| 黄片wwwwww| 午夜亚洲福利在线播放| 如何舔出高潮| 国产伦精品一区二区三区四那| 99久久成人亚洲精品观看| 日本五十路高清| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲成人久久性| h日本视频在线播放| .国产精品久久| 日本黄大片高清| 神马国产精品三级电影在线观看| 成人国产麻豆网| 久久韩国三级中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 色综合亚洲欧美另类图片| 97热精品久久久久久| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国国产精品蜜臀av免费| 成年免费大片在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品人妻视频免费看| 乱人视频在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲无线观看免费| 亚洲在线自拍视频| 久久久成人免费电影| av在线观看视频网站免费| 国产av在哪里看| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 免费看a级黄色片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 午夜福利在线在线| 国产av在哪里看| 国产 一区精品| 婷婷精品国产亚洲av在线| 又粗又爽又猛毛片免费看| 在线观看一区二区三区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 精品久久久久久久末码| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 99热6这里只有精品| 成年免费大片在线观看| 在线国产一区二区在线| 三级国产精品欧美在线观看| 精品福利观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 97超碰精品成人国产| 国产精品亚洲美女久久久| 国产精品亚洲美女久久久| 午夜福利高清视频| 久久久久久国产a免费观看| 午夜爱爱视频在线播放| 日韩一区二区视频免费看| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 午夜爱爱视频在线播放| 久久久欧美国产精品| 此物有八面人人有两片| 亚洲最大成人av| 久久人人爽人人片av| 看黄色毛片网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 听说在线观看完整版免费高清| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 精品人妻视频免费看| 日本a在线网址| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 成年免费大片在线观看| 日韩国内少妇激情av| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产精品久久久久久久电影| АⅤ资源中文在线天堂| 国产美女午夜福利| 亚洲成av人片在线播放无| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产在视频线在精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 丰满的人妻完整版| 在现免费观看毛片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 少妇丰满av| 全区人妻精品视频| 国产精品人妻久久久影院| 最近在线观看免费完整版| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美激情国产日韩精品一区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 欧美高清成人免费视频www| 免费人成在线观看视频色| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产91av在线免费观看| 久久99热6这里只有精品| 欧美极品一区二区三区四区| av在线老鸭窝| 日韩成人伦理影院| 欧美区成人在线视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精品成人久久久久久| 日韩三级伦理在线观看| 舔av片在线| 午夜老司机福利剧场| 国产日本99.免费观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 99热精品在线国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 丰满乱子伦码专区| 国产91av在线免费观看| 国产视频一区二区在线看| 天堂动漫精品| 最近的中文字幕免费完整| 国产精品不卡视频一区二区| 最好的美女福利视频网| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品熟女少妇av免费看| 丰满乱子伦码专区| 中出人妻视频一区二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 日本成人三级电影网站| 长腿黑丝高跟| 久久99热6这里只有精品| 大香蕉久久网| 久久精品国产清高在天天线| 三级毛片av免费| 不卡视频在线观看欧美| 色综合亚洲欧美另类图片| 99在线视频只有这里精品首页| 国产av麻豆久久久久久久| 成人三级黄色视频| 最近在线观看免费完整版| 亚洲最大成人中文| 亚洲内射少妇av| 特大巨黑吊av在线直播| 又粗又爽又猛毛片免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲性久久影院| 美女黄网站色视频| 99热全是精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美精品国产亚洲| 日本免费a在线| 在现免费观看毛片| 九九爱精品视频在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩欧美精品v在线| 长腿黑丝高跟| 校园人妻丝袜中文字幕| 男人的好看免费观看在线视频| 韩国av在线不卡| 淫妇啪啪啪对白视频| 国内精品一区二区在线观看| 不卡一级毛片| 亚洲av.av天堂| 日韩精品中文字幕看吧| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲最大成人av| 一区二区三区免费毛片| 乱系列少妇在线播放| 亚洲图色成人| 一个人看视频在线观看www免费| 日产精品乱码卡一卡2卡三| АⅤ资源中文在线天堂| av女优亚洲男人天堂| 久久久a久久爽久久v久久| 少妇高潮的动态图| 午夜影院日韩av| 我要看日韩黄色一级片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 特级一级黄色大片| av在线观看视频网站免费| 有码 亚洲区| 能在线免费观看的黄片| 国产精品1区2区在线观看.| a级毛片a级免费在线| 99久久成人亚洲精品观看| 久久人人精品亚洲av| 精品一区二区三区视频在线| 成年女人看的毛片在线观看| 午夜老司机福利剧场| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 中国国产av一级| 国产精品一区二区免费欧美| 一进一出好大好爽视频| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 中国美女看黄片| 搞女人的毛片| 欧美一区二区亚洲| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久这里只有精品中国| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久午夜福利片| 人人妻人人看人人澡| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲精品456在线播放app| 久久精品人妻少妇| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日本a在线网址| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产一区二区在线av高清观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 真实男女啪啪啪动态图| 91av网一区二区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲高清免费不卡视频| 国产探花极品一区二区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成年女人毛片免费观看观看9| 日韩av不卡免费在线播放| 免费观看的影片在线观看| 网址你懂的国产日韩在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜视频国产福利| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 插阴视频在线观看视频| av福利片在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲电影在线观看av| 久久人人爽人人爽人人片va| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产午夜精品论理片| 最新中文字幕久久久久| 69人妻影院| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久久久国产网址| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲精品国产av成人精品 | av免费在线看不卡| 亚洲成人久久爱视频| 日本熟妇午夜| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲成人久久爱视频| 一个人看视频在线观看www免费| 色吧在线观看| 久久人人爽人人片av| 成年版毛片免费区| 天堂√8在线中文| 免费看av在线观看网站| 亚洲专区国产一区二区| 少妇的逼好多水| 精品日产1卡2卡| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 黄色一级大片看看| 嫩草影院新地址| 欧美日本视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 97超碰精品成人国产| 成人特级av手机在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产高清三级在线| 黑人高潮一二区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 婷婷色综合大香蕉| 99久国产av精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 秋霞在线观看毛片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 美女 人体艺术 gogo| 大型黄色视频在线免费观看| 秋霞在线观看毛片| av中文乱码字幕在线| 亚洲人与动物交配视频| 国产乱人视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 波多野结衣高清无吗| 51国产日韩欧美| 久久精品人妻少妇| 久久人人爽人人片av| 97碰自拍视频| 国产视频内射| 久久国产乱子免费精品| 如何舔出高潮| 午夜a级毛片| 免费黄网站久久成人精品| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲人成网站在线播| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| av免费在线看不卡| 亚洲在线自拍视频| 床上黄色一级片| 日韩一区二区视频免费看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 日韩一区二区视频免费看| 国产成人福利小说| 中文字幕av在线有码专区| a级毛片a级免费在线| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 秋霞在线观看毛片| 久久人人精品亚洲av| 一级av片app| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 99久久精品一区二区三区| 久久中文看片网| 国产亚洲欧美98| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 精品欧美国产一区二区三| 欧美最黄视频在线播放免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久综合国产亚洲精品| 直男gayav资源| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 国产探花在线观看一区二区| 91久久精品电影网| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品久久久久久久久免| 色综合色国产| 成年女人永久免费观看视频| 午夜激情欧美在线| 伊人久久精品亚洲午夜| 最好的美女福利视频网| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲色图av天堂| 欧美一区二区亚洲| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 午夜福利成人在线免费观看| 插逼视频在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久精品国产亚洲av天美| 久久久久久九九精品二区国产| 18禁在线播放成人免费| 看黄色毛片网站| 亚洲内射少妇av| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 久久久久久久久久黄片| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久热精品热| 日本一二三区视频观看| 伦理电影大哥的女人| 成人漫画全彩无遮挡| 美女被艹到高潮喷水动态| 99久久中文字幕三级久久日本| 老司机午夜福利在线观看视频| 日韩av不卡免费在线播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 麻豆国产av国片精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 97热精品久久久久久| 国产精品不卡视频一区二区| 日本免费a在线| 看十八女毛片水多多多| 男人和女人高潮做爰伦理| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久久成人免费电影| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久精品综合一区二区三区| 美女免费视频网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品人妻久久久影院| 久久人妻av系列| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产成人一区二区在线| 一区二区三区免费毛片| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久99热6这里只有精品| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久精品大字幕| 色哟哟·www| 特级一级黄色大片| 日韩高清综合在线| 嫩草影视91久久| 亚洲精品456在线播放app| 精品一区二区免费观看| 免费人成在线观看视频色| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 黄色配什么色好看| 毛片女人毛片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 校园春色视频在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 国产成年人精品一区二区| 最近在线观看免费完整版| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产伦精品一区二区三区视频9| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲精品一区av在线观看| 三级毛片av免费| 久久热精品热| 能在线免费观看的黄片| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲av免费高清在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 午夜老司机福利剧场| 小说图片视频综合网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| .国产精品久久| 亚洲五月天丁香| 网址你懂的国产日韩在线| 夜夜爽天天搞| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 一个人观看的视频www高清免费观看| 日本熟妇午夜| 一区二区三区四区激情视频 | 国产亚洲精品久久久久久毛片| 一本久久中文字幕| 国产av在哪里看| 亚洲国产精品国产精品| 久久久久久大精品| h日本视频在线播放| 国产人妻一区二区三区在| 搡老岳熟女国产| 精品一区二区三区av网在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 热99re8久久精品国产| 男女下面进入的视频免费午夜| 午夜精品一区二区三区免费看| 我要搜黄色片| 免费观看在线日韩| 美女高潮的动态| 99久久中文字幕三级久久日本| 午夜日韩欧美国产| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩精品青青久久久久久| 高清毛片免费看| 国产黄a三级三级三级人| 日本熟妇午夜| 在线免费十八禁| 日韩中字成人| 联通29元200g的流量卡| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 日本黄大片高清| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚州av有码| 国产午夜精品论理片| 亚洲精品国产av成人精品 | 天堂影院成人在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久久久性生活片| 国产私拍福利视频在线观看| 国产午夜精品论理片| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲在线观看片| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲成人久久性| 国产91av在线免费观看| 久久久精品94久久精品| 国产老妇女一区| 国产精品一二三区在线看| 日韩欧美三级三区| 一个人看视频在线观看www免费| 日韩亚洲欧美综合| 国产不卡一卡二| 99精品在免费线老司机午夜| 免费人成视频x8x8入口观看| 97碰自拍视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲av一区综合| 精品一区二区三区人妻视频| 中文字幕免费在线视频6| 色综合站精品国产| 国产视频一区二区在线看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 精品午夜福利在线看| 亚洲国产精品合色在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 丰满的人妻完整版| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲最大成人手机在线| 国产不卡一卡二| 人人妻人人看人人澡| 午夜老司机福利剧场| 国产一区二区三区av在线 | 嫩草影视91久久| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲av一区综合| 亚洲成人久久性| 欧美国产日韩亚洲一区| 成人漫画全彩无遮挡| 不卡一级毛片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 舔av片在线| 永久网站在线| 内地一区二区视频在线| 黄色视频,在线免费观看| 不卡一级毛片| 亚洲国产精品久久男人天堂| 成人漫画全彩无遮挡| av在线蜜桃| 国产精品久久电影中文字幕| 久久久精品欧美日韩精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲第一电影网av| 乱人视频在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 99热这里只有精品一区| 国产高清不卡午夜福利| 午夜福利视频1000在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 国产人妻一区二区三区在| 日韩精品青青久久久久久| 日本黄色片子视频| 日本 av在线| 国产精品永久免费网站| 色吧在线观看| av专区在线播放| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日韩欧美在线乱码| 亚洲最大成人av| 91在线观看av| 岛国在线免费视频观看| 国产熟女欧美一区二区| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人鲁丝片一二三区免费| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产av一区在线观看免费| 国产成人91sexporn|