西葫蘆CCD基因家族鑒定及其在果實(shí)發(fā)育中的表達(dá)

陳敏氡，王 彬，李永平，劉建汀，裘波音，朱海生

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 作物研究所，福建省蔬菜遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福州 350013)

類胡蘿卜素是一類廣泛存在于生物界中的重要色素總稱。在高等植物中，類胡蘿卜素通過類胡蘿卜素裂解雙加氧酶(carotenoid cleavage dioxygenase, CCD)裂解生成的脫輔基類胡蘿卜素及其衍生物，在影響農(nóng)作物香氣，調(diào)控植株生長發(fā)育，參與植物激素ABA形成等方面具有重要調(diào)控作用[1]。CCD是一類非血紅素鐵酶，含有保守結(jié)構(gòu)域RPE65(視網(wǎng)膜色素上皮特異性蛋白65，retinal pigment epithelial membrane protein)[2]。依據(jù)底物是否含有環(huán)氧結(jié)構(gòu)，可將其分為類胡蘿卜素裂解雙加氧酶(CCDs)和9-順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶(NCEDs)[3-4]。

目前，在植物中發(fā)現(xiàn)的CCD家族成員共有12個(gè)，包括5個(gè)CCD亞家族(CCD1、CCD2、CCD4、CCD7和CCD8)和7個(gè)NCED亞家族(NCED1、NCED2、NCED3、NCED4、NCED5、NCED6和NCED9)。不同CCD家族成員在植物中發(fā)揮的作用各不相同[5]。CCD1基因能夠裂解β-隱黃質(zhì)、玉米黃質(zhì)、紫黃質(zhì)等類胡蘿卜素9′-10′位置的雙鍵，形成紫羅蘭酮、香葉基丙酮和假紫羅蘭酮等芳香類物質(zhì)，對植物香氣的形成具有重要調(diào)控作用[6]。研究發(fā)現(xiàn)，CCD1是控制杏[7]、煙草[8]等香氣物質(zhì)形成的關(guān)鍵基因。CCD2是在藏紅花屬(CrocMs)植物中新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)CCD家族基因，主要參與花香和花色物質(zhì)(如藏花酸)的形成[9]。研究顯示，藏紅花CCD2基因的過表達(dá)會使其花被片、柱頭呈現(xiàn)黃色、橙色以及紅色[10]。近年來有研究顯示，在梔子的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中并未發(fā)現(xiàn)CCD2基因，推測梔子中參與藏花素合成的CCD基因可能不是CCD2基因，而是CCD4基因[11]。CCD4也在植物著色以及香氣物質(zhì)的合成過程中發(fā)揮重要作用[12]。在金銀花[13]、百合[14]等植物中，CCD4是控制花器官呈現(xiàn)黃色或白色的關(guān)鍵基因。在西葫蘆中CCD4被發(fā)現(xiàn)參與果實(shí)著色調(diào)控[15]。CCD7 和CCD8 主要參與植物激素獨(dú)角金內(nèi)酯的調(diào)控[16-17]。研究發(fā)現(xiàn)，CCD7和CCD8的表達(dá)差異會影響?yīng)毮_金內(nèi)酯的合成，進(jìn)而影響植物的發(fā)育。在土豆[18]、番茄[19]和水稻[20]等多種植物中，CCD7或CCD8被證實(shí)參與調(diào)控植物衰老、根的生長、分蘗以及花器官的發(fā)育等多種生命過程。NCED是植物脫落酸(abscisic acid, ABA)合成的限速酶，對植物抗逆性具有重要作用[21]。過量表達(dá)NCED基因不僅可以增加內(nèi)源ABA的積累，還可以提高植株的干旱忍耐力[22]，此外，NCED還對植株的形態(tài)特征和光合作用產(chǎn)生影響[23]。

西葫蘆為葫蘆科(Cucurbitaceae)南瓜屬一年蔓生草本植物，是中國冬春季節(jié)設(shè)施栽培重要的瓜類蔬菜之一。迄今，西葫蘆中已克隆到了2個(gè)CCD基因，均為NCED亞家族基因。研究發(fā)現(xiàn)，這2個(gè)基因分別參與西葫蘆的果實(shí)發(fā)育過程，且受干旱誘導(dǎo)后顯著高表達(dá)，表明CCD基因在西葫蘆的生長發(fā)育及應(yīng)對逆境脅迫過程起著調(diào)節(jié)作用。目前對西葫蘆CCD基因家族未見系統(tǒng)的報(bào)道，尤其是CCD亞家族基因。本研究基于已公布的西葫蘆全基因組數(shù)據(jù)，對西葫蘆CCD基因家族成員進(jìn)行鑒定，并對該家族成員的理化性質(zhì)、染色體定位、基因結(jié)構(gòu)、保守基序、系統(tǒng)進(jìn)化、順式元件以及共線性等進(jìn)行分析，繼而研究CCD基因在西葫蘆不同組織及果實(shí)發(fā)育過程中的表達(dá)模式，為后續(xù)解析CCD基因家族在西葫蘆中的功能提供參考。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)以西葫蘆品種‘401’為材料，于2021年6月在福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所東張基地，分別采集子房授粉后3、5、7和20 d的西葫蘆果實(shí)，選擇無病蟲害、無機(jī)械損傷、大小一致、果形均勻的果實(shí)，每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù)。采后將所有樣品液氮速凍，置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 西葫蘆CCD基因家族的鑒定

參照已報(bào)道的9個(gè)擬南芥CCD蛋白序列，對西葫蘆的蛋白序列進(jìn)行本地Blast，得到候選的西葫蘆CCD蛋白序列，接著提交到在線軟件SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)和在線工具CDD(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd)進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測，刪除不包含RPE65結(jié)構(gòu)域的序列，最終得到西葫蘆CCD家族基因。依據(jù)擬南芥中同源基因進(jìn)行命名，將沒有同源基因的命名為CpCCD-like，同一個(gè)亞家族內(nèi)的基因根據(jù)染色體上的位置按照小寫字母依次排序。西葫蘆全基因組數(shù)據(jù)、蛋白序列和注釋文件從CuGenDB數(shù)據(jù)庫(http://cucurbitgenomics.org/)中下載, 擬南芥CCD基因序列和蛋白序列從NCBI中下載。

1.3 西葫蘆CCD基因家族的生物信息學(xué)分析

利用ExPASy(https://www.expasy.org/)和在線工具SMS (http://www.bio-soft.net/sms/index.html)分析西葫蘆CCD蛋白的理化性質(zhì)。利用在線工具CDD分析CCD基因中RPE65結(jié)構(gòu)域的位置。利用WoLF PSORT (http://wolfpsort.org)預(yù)測亞細(xì)胞定位情況。利用TBtools軟件工具制作西葫蘆CCD基因家族的染色體定位圖。利用在線軟件MEME(http://meme-suite.org/)分析CCD蛋白序列的保守基序(Motif)。利用在線軟件GSDS(http://gsds. cbi.pku.edu.cn/)制作基因結(jié)構(gòu)圖。利用MEGA 7.0軟件構(gòu)建西葫蘆、擬南芥和番茄CCD蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹，并使用在線工具Evolview(https://www.evolgenius.info/evolview/)對進(jìn)化樹進(jìn)行美化和可視化。利用Plant CARE 數(shù)據(jù)庫(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/)分析順式作用元件的種類、數(shù)目及功能。利用MCScanX軟件檢測西葫蘆基因復(fù)制事件，并使用TBtools軟件進(jìn)行西葫蘆CCD家族成員的共線性分析。

1.4 CCD基因家族的表達(dá)分析

1.4.1CCD基因在西葫蘆不同組織的表達(dá)分析利用實(shí)驗(yàn)室前期已有的西葫蘆不同組織(根、莖、葉、花和果實(shí))高通量轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，收集所有CCD家族基因在不同組織中的FPKM值，對轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，并利用TBtools軟件繪制CCD基因家族成員在西葫蘆不同組織中的表達(dá)熱圖。

1.4.2CCD基因在西葫蘆不同果實(shí)發(fā)育時(shí)期的qRT-PCR分析采用通用植物總RNA提取試劑盒(北京百泰克生物技術(shù)有限公司)提取西葫蘆不同發(fā)育時(shí)期(子房、授粉后3、5、7和20 d)果實(shí)總RNA, 將其作為模板，利用HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)反轉(zhuǎn)錄試劑盒(南京諾唯贊生物科技股份有限公司)合成cDNA。利用Primer Premier 5軟件設(shè)計(jì)定量引物，具體引物序列見表1，其中西葫蘆EF-1a為內(nèi)參基因。利用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ熒光定量試劑盒(寶生物工程(大連)有限公司)進(jìn)行qRT-PCR分析，PCR反應(yīng)體系為 cDNA 2 μL，2×SYBR Premix Ex TaqTMⅡ10 μL，50×ROX Reference Dye 0.4 μL，正、反向引物各0.8 μL和ddH2O 6 μL。擴(kuò)增程序?yàn)?5 ℃預(yù)變性30 s; 95 ℃變性5 s, 60 ℃退火34 s, 40個(gè)循環(huán)。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù), 并使用2-ΔΔCT方法計(jì)算基因的相對表達(dá)量，用Excel軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行作圖。

表1 本研究所用實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物Table 1 qRT-PCR primers used in this study

2 結(jié)果與分析

2.1 西葫蘆CCD基因家族的鑒定與序列分析

從西葫蘆基因組中共鑒定出13個(gè)CCD基因并進(jìn)行命名，13個(gè)西葫蘆CCD基因分布在9條染色體上，且分布不均勻，其中1號、12號、14 號染色體上分布較多(圖1)。序列分析表明，13個(gè)西葫蘆CCD基因編碼的氨基酸數(shù)目介于420～590，分子量介于47.29～65.89 kDa，等電點(diǎn)介于5.67～8.44。13個(gè)CCD基因的RPE65結(jié)構(gòu)域位置各不相同(表2)。亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示，西葫蘆CCD基因家族成員均定位于葉綠體或細(xì)胞質(zhì)(表2)。

表2 西葫蘆基因組中鑒定到的CCD基因Table 2 The CCD genes identified in zucchini genome

2.2 西葫蘆CCD基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化分析

選取9個(gè)擬南芥(Arabidopsisthaliana) CCD蛋白，10個(gè)番茄(Solanumlycopersicum)CCD蛋白和13個(gè)西葫蘆CCD蛋白構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖2)，發(fā)現(xiàn)32個(gè)CCD 蛋白可分為 6個(gè)亞家族，分別為CCD1、CCD4、CCD7、CCD8、NCED、CCD1-like。CCD1、CCD4、CCD1_like和NCED亞家族之間具有更近的遺傳距離，而與CCD8和CCD7亞家族的遺傳距離較遠(yuǎn)。CCD家族蛋白具有較高的保守性，推測它們可能具有相似或相同的基因功能。

2.3 西葫蘆CCD基因家族的保守基序(Motif)和基因結(jié)構(gòu)分析

使用MEME工具在西葫蘆CCD家族蛋白中找到了10個(gè)Motif(圖3)。NCED亞組含有的Motif數(shù)量最多，為9～10個(gè)且種類基本相同；CCD各亞組間和組內(nèi)所含Motif的種類與數(shù)量差異較大，其中CCD1和CCD4亞組含有的Motif數(shù)量最多，為7～9個(gè)，而CCD1-like和CCD7含有Motif數(shù)量最少，為3～4個(gè)。進(jìn)一步分析西葫蘆CCD家族各成員的基因結(jié)構(gòu)(圖4)發(fā)現(xiàn)，西葫蘆CCD基因家族外顯子數(shù)目為1～13個(gè)，內(nèi)含子數(shù)目為0～12個(gè)；成員間結(jié)構(gòu)存在較大的差異，其中CCD4和NCED亞家族基因結(jié)構(gòu)較簡單，而CCD1和CCD1-like亞家族基因的結(jié)構(gòu)復(fù)雜。

2.4 西葫蘆CCD基因家族的共線性分析

為進(jìn)一步探索西葫蘆CCD家族基因的進(jìn)化過程，本研究分析了CCD家族不同基因間的共線性關(guān)系，共發(fā)現(xiàn)5對CCD基因存在共線性關(guān)系(圖5)，分別為CpCCD4b和CpCCD4a、CpCCD8a和CpCCD8b、CpNCED3a和CpNCED3b、CpNCED5a和CpNCED5b、CpNCED5a和CpNCED9。這5對共線性的基因?qū)χ邪?對同源基因，每對同源基因?qū)Ψ植荚诓煌娜旧w上，說明該家族在進(jìn)化過程中發(fā)生了染色體片段復(fù)制事件。

2.5 西葫蘆CCD基因家族啟動子順式作用元件分析

進(jìn)一步分析了西葫蘆CCD基因家族的啟動子區(qū)域(圖6)。結(jié)果表明，CCD基因家族的每個(gè)成員都含有大量的光信號響應(yīng)元件，如G-box、GT1-Motif、TCT-Motif等，表明西葫蘆CCD家族基因具有光誘導(dǎo)的特性。大多數(shù)CCD家族成員含有激素以及環(huán)境脅迫響應(yīng)元件，如生長素響應(yīng)元件(TGA、TGA-box)、脫落酸響應(yīng)元件(ABRE)、赤霉素響應(yīng)元件(GARE-Motif、P-box、TATC-box)、茉莉酸甲酯響應(yīng)元件(CGTCA-Motif、TGACG-Motif)、水楊酸響應(yīng)元件(TCA)、干旱響應(yīng)元件(MBS)、低溫響應(yīng)元件(LTR)、防御脅迫響應(yīng)元件(TC-rich repeats)和抗氧化響應(yīng)元件(ARE)，推測西葫蘆CCD家族基因可能參與響應(yīng)激素調(diào)控及抵御干旱、低溫等脅迫過程。除此之外，還發(fā)現(xiàn)少部分CCD基因含有響應(yīng)生長發(fā)育相關(guān)元件，如調(diào)控晝夜節(jié)律響應(yīng)元件(Circadian)、調(diào)控胚乳響應(yīng)元件(GCN4-Motif)以及調(diào)控種子萌發(fā)響應(yīng)元件(RY)，暗示CCD基因也參與植物的生長發(fā)育過程。

2.6 西葫蘆CCD基因家族的組織表達(dá)特性分析

根據(jù)前期獲得的西葫蘆不同組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，CCD家族成員在西葫蘆根、莖、葉、花和果實(shí)等5個(gè)組織中的表達(dá)見圖7。以FPKM值>1作為基因表達(dá)的篩選標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)其中3個(gè)基因(CpCCD8b、CpNCED5a和CpNCED6)在所有組織中的FPKM數(shù)值均小于1，可以認(rèn)為它們在組織中不表達(dá)。余下的10個(gè)基因中，CpCCD1、CpCCD4a、CpCCD4b和CpCCD8a4個(gè)基因在所有組織中均有表達(dá)且表達(dá)量高，其中CpCCD1基因在葉和果實(shí)中顯著高表達(dá)(FPKM值>100)，提示該基因可能參與調(diào)控葉和果實(shí)的發(fā)育調(diào)控；其他6個(gè)基因表達(dá)量低，且部分基因在一些組織中不表達(dá)，其中CpCCD7和CpNCED9分別只在根和花中特異表達(dá)。

2.7 西葫蘆CCD家族基因在不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)中的qRT-PCR分析

進(jìn)一步分析了10個(gè)CCD基因 (CpCCD1、CpCCD4a、CpCCD4b、CpCCD8a、CpCCD1-like、CpNCED3b、CpNCED3a、CpNCED5a、CpNCED9和CpCCD7)在西葫蘆果實(shí)不同發(fā)育時(shí)期(子房以及授粉后3、5、7和20 d)的表達(dá)規(guī)律(圖8)。結(jié)果顯示，8個(gè)CCD基因(CpCCD1、CpCCD4a、CpCCD4b、CpCCD8a、CpNCED3b、CpNCED3a、CpNCED5a和CpCCD7)在果實(shí)發(fā)育過程中呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)，2個(gè)CCD基因(CpCCD1-like和CpNCED9)在果實(shí)發(fā)育過程中呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，其中CpCCD1、CpCCD4a、CpCCD4b、CpCCD8a這4個(gè)CCD基因在果實(shí)膨大生長期或成熟期出現(xiàn)顯著高表達(dá)。CpCCD8a基因在授粉后3 d表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，之后一直維持高表達(dá)，到授粉20 d果實(shí)中的表達(dá)量再次顯著升高(P<0.05)；CpCCD4a在授粉后5 和7 d表達(dá)量出現(xiàn)顯著升高(P<0.05)，之后在20 d再次顯著升高至最大值；CpCCD4b和CpCCD1在授粉后前5 d表達(dá)量較低，到授粉后7 和20 d表達(dá)量分別出現(xiàn)兩次顯著升高(P<0.05)，推測它們可能在西葫蘆果實(shí)生長發(fā)育過程中具有重要的調(diào)控作用。

3 討 論

CCD基因在高等植物中數(shù)量不一。擬南芥基因組中有9個(gè)CCD基因[3]，金銀花中有7個(gè)CCD基因[13]，煙草中有19個(gè)CCD基因[24]。本研究從西葫蘆基因組中獲得了13個(gè)CCD基因。研究發(fā)現(xiàn)不同物種間CCD成員數(shù)量差異主要表現(xiàn)在CCD4亞家族上，張亞飛等[25]認(rèn)為這是該基因在進(jìn)化過程中發(fā)生了基因擴(kuò)增事件。除此之外，由于CCD4與植物果肉、花器官的著色密切相關(guān)，因此，顏色豐富的作物通常含有的CCD4成員也多。西葫蘆種質(zhì)顏色多樣，有黃色、綠色和白色等。本研究在西葫蘆果實(shí)中鑒定到了2個(gè)CCD4基因，也印證了這個(gè)現(xiàn)象。在13個(gè)西葫蘆CCD基因中共發(fā)現(xiàn)4個(gè)基因?qū)?，占家族成員總數(shù)的60%以上，與張亞飛[25]、徐胤[26]等在柑橘、毛竹中的研究結(jié)果類似，提示CCD基因家族在進(jìn)化過程中可能發(fā)生大量的復(fù)制現(xiàn)象，導(dǎo)致基因數(shù)量的擴(kuò)增。共線性結(jié)果顯示這4個(gè)基因?qū)嬖谥簿€性關(guān)系，而且單個(gè)基因還對應(yīng)多個(gè)基因，推測它們可能具有相似或相同的基因功能。本研究對擬南芥、番茄和西葫蘆共 32個(gè)CCD蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，CCD家族蛋白可分為CCD1、CCD4、CCD7、CCD8、NCED、CCD1-like 6個(gè)亞組，其中CCD1、CCD4、CCD1-like 和NCED亞家族之間的遺傳距離更近，表明它們彼此間的親緣關(guān)系更近。一般而言，同一基因家族親緣關(guān)系較近的基因，它們的基因結(jié)構(gòu)也相似[27-28]。本研究中，西葫蘆CCD4和NCED亞家族內(nèi)的基因結(jié)構(gòu)相近且較簡單，除CpNCED9和CpCCD4a含1個(gè)內(nèi)含子外，其他成員均不含內(nèi)含子，這與柑橘CCD4和NCED亞家族基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)一致[25]。

本研究根據(jù)西葫蘆不同組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，分析了CCD家族成員的組織表達(dá)模式，結(jié)果顯示CCD家族成員具有組織表達(dá)特異性，這與束紅梅等[29]在西紅花上研究結(jié)果一致。其中CpCCD1基因在葉和果實(shí)中顯著高表達(dá)(FPKM值>100)，提示該基因可能參與調(diào)控葉和果實(shí)的發(fā)育調(diào)控。進(jìn)一步分析了10個(gè)CCD基因在西葫蘆果實(shí)不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)規(guī)律，結(jié)果顯示，在果實(shí)發(fā)育過程中，8個(gè)CCD基因呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)，2個(gè)CCD基因呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)，其中CpCCD1、CpCCD4a、CpCCD4b、CpCCD8a這4個(gè)CCD基因在果實(shí)膨大生長期或成熟期出現(xiàn)顯著高表達(dá)，由此推測這4個(gè)CCD基因可能在西葫蘆果實(shí)發(fā)育過程中發(fā)揮調(diào)控作用。目前，已有文獻(xiàn)證實(shí)CCD4基因參與了西葫蘆果實(shí)發(fā)育過程中類胡蘿卜素的調(diào)控。Gonzalez-verdejo等[30]發(fā)現(xiàn)CpCCD4基因成員是調(diào)節(jié)西葫蘆果實(shí)中類胡蘿卜素含量的最重要基因，它們在果實(shí)類胡蘿卜素含量的降解過程中起重要作用。CCD1基因也在多種作物中被發(fā)現(xiàn)與果實(shí)發(fā)育密切相關(guān)。張印等[31]發(fā)現(xiàn)CCD1基因抑制表達(dá)后，柑橘果實(shí)中紫黃質(zhì)、9-順式-紫黃質(zhì)的含量顯著增加。劉盛雨等[7]研究顯示PaCCD1是控制杏果實(shí)脫輔基類胡蘿卜素類香氣物質(zhì)形成的關(guān)鍵基因。梁乘榜等[8]發(fā)現(xiàn)CCD1基因參與了枇杷果實(shí)著色的調(diào)節(jié)。CCD8在植物果實(shí)發(fā)育方面的研究相對較少，它的主要功能是參與獨(dú)角金內(nèi)酯的合成。獨(dú)腳金內(nèi)酯是一種新型的植物激素，在調(diào)節(jié)植物分枝生長、根系發(fā)育及根瘤菌形成中發(fā)揮重要作用。由于獨(dú)腳金內(nèi)酯可以誘導(dǎo)危害較大的列當(dāng)屬種子萌發(fā)，因此，在番茄[32]、馬鈴薯[18]中會利用沉默CCD8基因表達(dá)，阻止獨(dú)腳金內(nèi)酯的合成，從而降低列當(dāng)種子的萌發(fā)率。本研究中，CpCCD8a在授粉后3 d一直處于高表達(dá)，說明它們在西葫蘆果實(shí)發(fā)育的中后期產(chǎn)生作用，而具體的作用機(jī)制仍需探究。最近，遼寧石油化工大學(xué)有項(xiàng)研究顯示，在手捻葫蘆雌花形成后定期噴施1.8 ～5.5 μmol/L的獨(dú)腳金內(nèi)酯于雌花基部以及完成授粉后的果實(shí)部位，可以調(diào)節(jié)果實(shí)木質(zhì)化進(jìn)程，使手捻葫蘆上下部木質(zhì)化時(shí)間分離，從而有利于優(yōu)化果實(shí)形狀提高品質(zhì)。因此，在今后研究中可以探索西葫蘆中是否含有獨(dú)腳金內(nèi)酯，且CpCCD8a是否參與獨(dú)腳金內(nèi)酯的合成，以及它與果實(shí)木質(zhì)化的關(guān)系。

綜上，本研究提供了西葫蘆CCD基因家族的完整信息，并明確了CCD家族基因在西葫蘆不同組織及果實(shí)發(fā)育過程中的表達(dá)模式，為后續(xù)解析CCD基因家族在西葫蘆中的功能奠定了基礎(chǔ)。