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    榆干離褶傘溶栓酶對動脈血栓大鼠血管內(nèi)膜的保護(hù)作用

    2022-09-01 02:32:52崔日花陳佳芮沈明花
    食品科學(xué) 2022年15期
    關(guān)鍵詞:懸液膠原內(nèi)皮細(xì)胞

    崔日花,李 鈺,蘇 新,衛(wèi) 瑩,陳佳芮,沈明花,*

    (1.延邊大學(xué)附屬醫(yī)院,吉林 延吉 133000;2.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院,吉林 延吉 133002)

    血栓形成過程中伴有血管的炎癥性損傷,內(nèi)皮細(xì)胞、血小板以及白細(xì)胞之間的相互作用是血管壁發(fā)生炎癥性損傷的病理基礎(chǔ)。血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及功能障礙、血小板的過度活化是血栓形成的重要因素。當(dāng)血管內(nèi)皮的完整性遭到破壞時內(nèi)皮下膠原被暴露,激活血小板,從而啟動血栓的形成。血小板的異?;罨蓪?dǎo)致病理性血栓的形成?;罨难“宀粌H參與血栓的形成,還通過脫顆粒或釋放5-羥色胺、細(xì)胞因子、組織胺等活性物質(zhì)參與并促進(jìn)炎癥反應(yīng)。血小板通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞以及白細(xì)胞之間的相互作用,促進(jìn)血小板和白細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、滾動,從而加重炎癥反應(yīng)。因此,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞和抑制血小板的過度活化對血栓性疾病的治療及預(yù)后具有重要意義。

    榆干離褶傘()屬擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、口蘑科、離褶傘屬,分布于我國河北、吉林等地。作為食藥用菌,榆干離褶傘具有抗氧化、保肝、抗栓等功效。榆干離褶傘溶栓酶(fibrinolytic enzyme,LUFE)是榆干離褶傘菌絲體中分離純化的一種溶栓酶,具有抗栓、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用。研究表明LUFE抑制血栓形成過程中血小板的過度活化。諸多研究結(jié)果表明,血栓形成過程中并存炎癥反應(yīng),而且這種炎癥反應(yīng)和血栓的形成相互聯(lián)系、相互促進(jìn)。血小板作為炎癥細(xì)胞,在這種血栓-炎癥過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過大鼠動脈血栓模型研究LUFE在血栓形成過程中對血管內(nèi)膜炎性損傷的保護(hù)作用;同時在體外觀察膠原誘導(dǎo)的血小板活化過程中LUFE對血小板黏附功能的影響及其對相關(guān)信號通路的調(diào)控作用,進(jìn)一步明確其抗栓及抗炎機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 動物、材料與試劑

    50 只SD大鼠(SCXK(吉)2017-0003,SYXK(吉)2020-0010),雌雄各半,體質(zhì)量180~200 g,延邊大學(xué)實(shí)驗動物中心提供。

    LUFE從榆干離褶傘菌絲體中分離提取,由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室提供。

    C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion moleculer-1,PECAM-1)試劑盒上海嚴(yán)謹(jǐn)生物科技有限公司;四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(tetramethylrhodamine isothiocyanate Phalloidin,TRITC Phalloidin)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA) 北京索萊寶科技有限公司;鈣離子熒光探針Fluo-4 AM 美國BD公司;膠原 美國Chrono-log公司;T細(xì)胞跨膜連接蛋白(linker for activation of T cells,LAT)抗體、磷酸化LAT(phospho-LAT,p-LAT)抗體、磷脂酶Cγ(phospholipase Cγ,PLCγ)抗體、磷酸化PLCγ(phospho-PLCγ,p-PLCγ)抗體 英國Abcam公司;-actin抗體 美國Sigma公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    RT-2100型酶標(biāo)儀 深圳雷杜公司;流式細(xì)胞儀美國Beckman公司;凝膠成像儀 美國Bio-Rad公司;BX53F光學(xué)顯微鏡 日本Olympus株式會社。

    1.3 方法

    1.3.1 動物分組及模型的建立

    將50 只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、阿司匹林組、LUFE低劑量組和LUFE高劑量組,每組10 只。阿司匹林組(10 mg/kg阿司匹林)和LUFE低(100 mg/kgLUFE)、高(400 mg/kgLUFE)劑量組分別按相應(yīng)劑量灌胃阿司匹林或LUFE(用水溶解后進(jìn)行灌胃,灌胃體積為2 mL),連續(xù)灌胃7 d,假手術(shù)組和模型組灌胃等體積生理鹽水。次日,腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠后以建立頸動脈血栓模型。正中切開頸部,鈍性分離右側(cè)頸總動脈。假手術(shù)組用浸有生理鹽水的濾紙(1.0 cm×1.5 cm)包裹頸總動脈,濾紙外用無菌手術(shù)巾(1.0 cm×1.5 cm)包裹。其余各組以浸有20%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))三氯化鐵(FeCl)溶液的濾紙?zhí)娲猩睇}水的濾紙。20 min后取下濾紙,更換新的無菌手術(shù)巾,并用浸有生理鹽水的紗布濕敷暴露的頸動脈。40 min后結(jié)扎與手術(shù)巾等長的血管,并剪下該段頸動脈備蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色。剖胸,暴露心臟,用采血管采血,取100 μL全血用于流式細(xì)胞儀測定血小板-白細(xì)胞聚集體(platelet-leukocyte aggregates,PLA)水平。全血室溫放置1 h,2 500 r/min離心10 min,取其上清液即為血清,-20 ℃保存以備用。

    1.3.2 血管組織形態(tài)學(xué)檢查

    以4%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),下同)多聚甲醛溶液固定1.3.1節(jié)收集的大鼠頸動脈組織,經(jīng)HE染色后置于200 倍光學(xué)顯微鏡下觀察血管腔及血管壁結(jié)構(gòu)變化。

    1.3.3 血清CRP、IL-6、IL-8、MCP-1、ICAM-1和PECAM-1質(zhì)量濃度的測定

    取1.3.1節(jié)得到的血清,分別按照試劑盒說明書用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中CRP、IL-6、IL-8、MCP-1、ICAM-1和PECAM-1質(zhì)量濃度。

    1.3.4 PLA水平的測定

    假手術(shù)組、模型組、阿司匹林組、LUFE高劑量組分別取50 μL大鼠全血置于1.5 mL離心管中,每管加入1 mL的紅細(xì)胞裂解液后避光反應(yīng)10 min。每管以500×離心5 min,棄去上清液,加入500 μL磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)(0.01 mol/L、pH 7.2,下同)洗滌細(xì)胞,再以500×離心5 min。棄去上清液,用PBS定容至100 μL。在細(xì)胞懸液中加入藻紅蛋白(phycoerythrin,PE)標(biāo)記的CD45和異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,F(xiàn)ITC)標(biāo)記的CD61抗體各2 μL,同型對照管中加入FITC標(biāo)記的免疫球蛋白G1。避光孵育20 min后加入預(yù)冷的1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))多聚甲醛溶液。4 h內(nèi)用流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測,按下式計算PLA水平。

    1.3.5 血小板懸液的制備

    取健康志愿者的靜脈血,用臺氏液按照1∶1等體積稀釋全血,同時加入前列腺素E1(prostaglandine 1,PGE1)(終質(zhì)量濃度為50 ng/mL),然后以200×離心15 min,收集上清液后再以1 000×離心10 min,棄去上清液。用1.5 倍體積的臺氏液重懸血小板,并加入PGE1(終質(zhì)量濃度為50 ng/mL)以及乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)(終濃度為1 mmol/L),混勻后850×離心10 min,棄去上清液。用臺氏液重懸血小板,并調(diào)整血小板濃度為3×10個/mL。

    1.3.6 熒光染色法檢測血小板在固化膠原上的黏附

    24 孔板分為空白對照組、正常對照組以及LUFE低、中、高劑量組。將干凈的蓋玻片放入24 孔板中,空白對照組以250 μL 1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),下同)BSA溶液包被,正常對照組以及LUFE不同劑量組以250 μL 5 μg/mL膠原包被,4 ℃靜置12 h后用PBS洗滌,每孔加入1% BSA溶液封閉1 h后吸棄多余的BSA溶液,用PBS洗滌。將1.3.5節(jié)制備的血小板懸液用臺氏液稀釋成2×10個/mL,取血小板懸液分別加入不同劑量的LUFE溶液(終質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0 mg/mL),空白對照組和正常對照組加入等體積臺氏液,在37 ℃孵育5 min。分別取250 μL上述孵育后的各組血小板懸液加到24 孔板對應(yīng)組中,37 ℃孵育1 h。PBS洗滌后用4%多聚甲醛固定15 min,隨后用PBS洗滌。每孔加入200 μL TRITC Phalloidin避光染色1 h,然后用PBS洗滌,采用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察,并用Image J軟件分析計算黏附面積(以相對面積百分比表示)。

    1.3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板Ca水平

    將1.3.5節(jié)制備的血小板懸液分為4 組:正常對照組、膠原組以及LUFE低劑量(0.5 mg/mL)和高劑量(2.0 mg/mL)組。LUFE低、高劑量組在3×10個/mL的血小板懸液中分別加入終質(zhì)量濃度為0.5、2.0 mg/mL的LUFE溶液,其余2 組的血小板懸液中分別加入等體積的臺氏液,37 ℃孵育5 min。隨后在膠原組和LUFE不同劑量組的血小板懸液中加入終質(zhì)量濃度2 μg/mL的膠原溶液,正常對照組的血小板懸液中加入等體積的臺氏液,在37 ℃孵育5 min。在各組血小板懸液中分別加入Fluo-4 AM染料(終濃度為5 μmol/L),37 ℃避光孵育30 min。在避光條件下,以臺氏液洗滌多余的染料,300×離心5 min。用500 μL臺氏液重懸,用流式細(xì)胞儀測定熒光強(qiáng)度,以表征血小板內(nèi)Ca水平。

    1.3.8 Western blot檢測LAT和PLCγ磷酸化水平

    將1.3.5節(jié)制備的血小板懸液分為5 組:正常對照組、膠原組和LUFE低、中、高劑量組。LUFE低、中、高劑量組在血小板懸液(3×10個/mL)中分別加入終質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0 mg/mL的LUFE溶液,正常對照組和膠原組的血小板懸液中加入等體積臺氏液,在37 ℃孵育5 min。除正常對照組以外的其余4 組分別加入終質(zhì)量濃度2 μg/mL膠原溶液37 ℃孵育5 min。各組血小板懸液中分別加入蛋白裂解液并在冰浴中裂解30 min,然后12 000 r/min離心15 min,取上清液即為血小板蛋白樣品。用BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量。取20 μg蛋白樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE),轉(zhuǎn)模至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜。然后將PVDF膜用5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))脫脂奶粉封閉2 h,分別加入相應(yīng)的一抗,在4 ℃孵育12 h。用TBST洗滌3 次后加入二抗,在室溫孵育2 h,洗滌3 次,然后用凝膠成像儀進(jìn)行分析,用磷酸化蛋白條帶灰度占蛋白條帶灰度的比例表征磷酸化水平。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    實(shí)驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,采用檢驗進(jìn)行顯著性分析,<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 LUFE對動脈血栓大鼠血管組織形態(tài)學(xué)的影響

    如圖1所示,假手術(shù)組頸動脈內(nèi)膜光滑完整,血管內(nèi)皮細(xì)胞排列連續(xù),無血管內(nèi)皮細(xì)胞剝脫,管腔內(nèi)未見血栓形成和炎癥細(xì)胞浸潤。模型組血管內(nèi)膜氧化損傷,內(nèi)膜上未見血管內(nèi)皮細(xì)胞,管腔內(nèi)可見較多的炎癥細(xì)胞和混合血栓的形成。與模型組相比,阿司匹林組和LUFE高劑量組血管內(nèi)膜的損傷程度減輕,血栓形成比較稀疏,血小板聚集程度明顯減少,偶見少量的炎性細(xì)胞。

    圖1 LUFE對頸動脈血栓大鼠血管形態(tài)的影響(200×)Fig. 1 Effect of LUFE on carotid arterial tissue morphology in rats (200 ×)

    2.2 LUFE對動脈血栓大鼠血清IL-8、IL-6和CRP質(zhì)量濃度的影響

    由巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞等分泌的IL-8具有趨化中性粒細(xì)胞的作用,還可以激活中性粒細(xì)胞分泌一些生物活性物質(zhì),促進(jìn)局部的炎癥反應(yīng)。IL-6作為促炎因子,可以誘導(dǎo)高凝狀態(tài),促進(jìn)內(nèi)皮素的生成,引起血管壁的損傷,從而促進(jìn)血栓形成。CRP作為炎癥、感染和組織損傷的非特異性標(biāo)志物,與急性期反應(yīng)相關(guān),可以促進(jìn)血小板活化和血栓形成。如表1所示,模型組大鼠的IL-8、IL-6和CRP質(zhì)量濃度顯著或極顯著高于假手術(shù)組(<0.05、<0.01),提示FeCl作用于血管壁后引起局部組織的炎癥反應(yīng)。與模型組相比,阿司匹林組IL-8、CRP質(zhì)量濃度極顯著下降(<0.01),而LUFE高劑量組IL-8、IL-6和CRP質(zhì)量濃度顯著或極顯著下降(<0.05、<0.01),說明阿司匹林和高劑量的LUFE可以抑制炎癥因子的產(chǎn)生或釋放。

    表1 LUFE對IL-8、IL-6和CRP質(zhì)量濃度的影響Table 1 Effect of LUFE on serum levels of IL-8, IL-6 and CRP

    2.3 LUFE對動脈血栓大鼠血清MCP-1、ICAM-1和PECAM-1質(zhì)量濃度的影響

    MCP-1主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞表達(dá),具有趨化激活單核細(xì)胞的作用,在炎癥過程中起重要作用。ICAM-1為跨膜糖蛋白,存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞和外周白細(xì)胞,參與白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附及白細(xì)胞向血管外遷移。PECAM-1是一種在血小板、單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞中表達(dá)的黏附分子,在內(nèi)皮細(xì)胞損傷時促進(jìn)血小板與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附及白細(xì)胞的遷移。如表2所示,模型組大鼠MCP-1、PECAM-1質(zhì)量濃度極顯著高于假手術(shù)組(<0.01)。與模型組相比,經(jīng)阿司匹林或LUFE干預(yù)的大鼠MCP-1、ICAM-1和PECAM-1質(zhì)量濃度極顯著下降(<0.01),提示阿司匹林和LUFE能一定程度地減弱炎癥細(xì)胞的趨化和細(xì)胞間的黏附反應(yīng)。

    表2 LUFE對MCP-1、ICAM-1和PECAM-1質(zhì)量濃度的影響Table 2 Effect of LUFE on serum levels of MCP-1, ICAM-1 and PECAM-1

    2.4 LUFE對動脈血栓大鼠PLA水平的影響

    血小板表達(dá)的黏附分子與活化的中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞相互作用,形成PLA,其水平是反映體內(nèi)炎癥-血栓狀態(tài)的敏感指標(biāo)之一。如圖2所示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠PLA水平顯著升高(<0.05),提示血栓性形成過程中伴有炎癥。與模型組相比,LUFE高劑量大鼠的PLA水平顯著降低(<0.05),提示LUFE具有抑制血栓形成過程中的炎癥反應(yīng)。

    圖2 LUFE對PLA水平的影響Fig. 2 Effect of LUFE on serum levels of PLA

    2.5 LUFE對血小板在固化膠原上黏附的影響

    如圖3所示,空白對照組中見到少量的血小板黏附在BSA表面,其黏附面積為(0.77±0.44)%,說明血小板在BSA表面黏附很少。正常對照組血小板在膠原上的黏附面積為(16.97±2.52)%,與空白對照組相比極顯著增多(<0.01)。LUFE低、中、高劑量組血小板在膠原上的黏附面積分別為(13.79±1.08)%、(9.22±1.77)%、(7.08±1.56)%,與正常對照組相比顯著或極顯著降低(<0.05、<0.01),提示LUFE能抑制血小板在膠原上的黏附。

    圖3 LUFE對血小板在膠原上黏附的影響Fig. 3 Effect of LUFE on platelet adhesion to collagen

    2.6 LUFE對血小板Ca2+水平的影響

    鈣離子熒光探針Fluo-4 AM常用于檢測細(xì)胞內(nèi)的Ca水平。細(xì)胞內(nèi)的酯酶催化Fluo-4 AM裂解后結(jié)合Ca產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光。因此,本實(shí)驗選用Fluo-4 AM染料檢測血小板內(nèi)Ca水平。如圖4所示,膠原組熒光強(qiáng)度為54.26±4.24,與正常對照組(19.76±1.63)相比,熒光強(qiáng)度極顯著升高(<0.01);LUFE低、高劑量組血小板熒光強(qiáng)度分別為52.11±2.34和37.45±3.54,與膠原組相比明顯降低。結(jié)果說明LUFE能夠抑制膠原引起的血小板內(nèi)Ca水平的升高。

    圖4 LUFE對血小板內(nèi)Ca2+水平的影響Fig. 4 Effect of LUFE on Ca2+ levels in platelets

    2.7 LUFE對血小板LAT、PLCγ蛋白磷酸化水平的影響

    如圖5所示,與正常對照組比較,膠原組血小板LAT、PLCγ的磷酸化水平極顯著升高(<0.01);與膠原組相比,LUFE低劑量組血小板PLCγ磷酸化水平顯著下降(<0.05),中、高劑量組血小板LAT、PLCγ磷酸化水平顯著或極顯著降低(<0.05、<0.01),提示LUFE不同程度抑制膠原誘導(dǎo)的LAT、PLCγ的活化。

    圖5 LUFE對血小板LAT、PLCγ磷酸化水平的影響Fig. 5 Effect of LUFE on the phosphorylation levels of LAT and PLCγ in platelets

    3 討 論

    血栓形成是引發(fā)心血管疾病的重要因素之一。文獻(xiàn)報道,血栓形成與炎癥密切相關(guān),而在此過程中血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板和炎癥細(xì)胞之間的相互作用影響其病理進(jìn)程。研究表明,內(nèi)皮細(xì)胞合成的一氧化氮、前列環(huán)素等血管活性物質(zhì),調(diào)節(jié)血管張力和血小板反應(yīng)性,從而防止血栓形成。血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌或表達(dá)的細(xì)胞因子影響血小板的活化及炎癥細(xì)胞在內(nèi)皮上的黏附、滾動及遷移,進(jìn)而影響血栓-炎癥過程。因此,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞在一定程度上可以控制血栓的形成以及炎癥反應(yīng),這對心血管疾病的防治具有重要意義。

    本實(shí)驗以FeCl誘導(dǎo)大鼠頸動脈血栓模型,觀察了LUFE對血管內(nèi)膜損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明,LUFE能減輕血栓形成過程中血管內(nèi)膜的損傷,并降低血清IL-8、IL-6、CRP、MCP-1、ICAM-1和PECAM-1質(zhì)量濃度。這表明LUFE可能通過降低炎癥因子、趨化因子及細(xì)胞黏附分子水平,抑制局部的炎癥反應(yīng)從而保護(hù)血管內(nèi)膜。

    血小板的激活在血栓形成過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。當(dāng)血管內(nèi)膜損傷引起膠原暴露時血小板被活化并黏附于膠原上。另外,活化的血小板通過表達(dá)特定細(xì)胞因子,如P選擇素、趨化因子配體5(chemokine ligand 5,CCL5)和CD40L等,影響細(xì)胞間的黏附及白細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞上的滾動和遷移等過程。在這個過程中白細(xì)胞膜上的P選擇素糖蛋白配體1、CCR5和CD40與血小板上的相應(yīng)配體結(jié)合,形成PLA,進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗結(jié)果顯示,LUFF干預(yù)后動脈血栓大鼠PLA水平降低,說明LUFE可能通過抑制血小板或白細(xì)胞的活化,從而抑制兩者的結(jié)合進(jìn)而減輕血管內(nèi)膜的炎性損傷。前期研究表明,大鼠頸動脈血栓模型中LUFE降低血小板膜CD62P的表達(dá),這與本研究結(jié)果相符。

    另外,本研究采用體外模擬的方法,觀察了血小板黏附膠原過程中LUFE的干預(yù)作用,并檢測了血小板Ca水平的變化。結(jié)果顯示,LUFE能顯著抑制血小板與膠原的黏附,并降低血小板內(nèi)Ca水平,提示LUFE能一定程度地抑制血小板的活化。為了闡明其作用機(jī)制,觀察了LUFE對膠原誘導(dǎo)的血小板膜糖蛋白VI(glycoprotein VI,GPVI)信號通路的調(diào)控作用。當(dāng)膠原作用于血小板膜GPVI受體復(fù)合物時,通過Src家族激酶的作用,激活Fc受體γ的免疫受體酪氨酸激活基序,繼而活化酪氨酸激酶。后者進(jìn)一步激活包括LAT在內(nèi)的下游信號,引起PLCγ的活化,促進(jìn)甘油二酯和三磷酸肌醇的生成。三磷酸肌醇作為第二信使促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)存儲Ca的釋放,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)游離Ca濃度升高,從而促進(jìn)血小板的活化。本研究結(jié)果顯示,LUFE干預(yù)能下調(diào)GPVI信號通路中的LAT和PLCγ蛋白的磷酸化水平,提示LUFE可能通過調(diào)控GPVI信號通路相關(guān)蛋白的激活而影響細(xì)胞內(nèi)Ca水平,進(jìn)而抑制血小板的活化。

    綜上所述,LUFE抑制血栓形成過程中血管內(nèi)膜的損傷,其機(jī)制可能與LUFE的抗炎作用以及抗血小板活化有關(guān)。

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    霧化吸入布地奈德混懸液治療COPD急性加重期的效果觀察
    痰瘀與血管內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)系研究
    膠原ACE抑制肽研究進(jìn)展
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