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    A1與A2 β-酪蛋白酸奶產(chǎn)品特性的比較

    2022-09-01 08:01:44徐小爽韓翼宇李逍遙彭秋琦羅文靜于景華
    食品科學(xué) 2022年16期
    關(guān)鍵詞:牛乳酪蛋白質(zhì)構(gòu)

    徐小爽,韓翼宇,李逍遙,彭秋琦,羅文靜,于景華,*

    (1.天津科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,天津 300450;2.中國(guó)飲料工業(yè)協(xié)會(huì),北京 100000)

    乳和乳制品是日常飲食的重要組成部分,可提供高質(zhì)量的蛋白質(zhì)和鈣。牛乳中蛋白質(zhì)主要有兩種:乳清蛋白(20%)和酪蛋白(80%)。其中酪蛋白主要以膠束形式存在,由-酪蛋白、-酪蛋白、-酪蛋白和-酪蛋白組成。酪蛋白在乳制品加工中具有重要作用,主要參與酸奶和奶酪的凝膠化過(guò)程。

    -酪蛋白占酪蛋白的36%,可細(xì)分為A1-酪蛋白、A2-酪蛋白、B-酪蛋白、C-酪蛋白等,導(dǎo)致上述多種蛋白質(zhì)變體的主要原因是基因水平上的差異性。組成-酪蛋白的氨基酸有209 個(gè),基于氨基酸位置的不同,至少有12 種變異。由于外顯子VII發(fā)生點(diǎn)突變,-酪蛋白基因的第6條染色體上胞嘧啶向腺嘌呤轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致第67位的組氨酸(密碼子CAT)取代脯氨酸(密碼子CCT)。這一細(xì)微的差異主要影響了-酪啡肽-7的釋放。在A1-酪蛋白的第67位上,含有組氨酸的化合物可通過(guò)不同的腸胃酶釋放-酪啡肽-7。而在A2-酪蛋白的第67位有脯氨酸,阻礙在此位置上的裂解,因此不能形成-酪啡肽-7。

    -酪蛋白是一種無(wú)序蛋白,具有很強(qiáng)的兩親性。這種兩親性可使其以單體形式存在于溶液中,或自組裝成膠束結(jié)構(gòu)。然而,A2變體中存在額外的脯氨酸,這可能會(huì)增強(qiáng)聚脯氨酸II螺旋的形成,從而改變-酪蛋白自組裝行為,并且可能導(dǎo)致A1和A2-酪蛋白具有不同的功能特性。有關(guān)-酪蛋白不同表型牛奶性質(zhì)的研究顯示,在牛奶自然pH值為6.5~6.7的情況下,與A1-酪蛋白牛奶相比,A2-酪蛋白牛奶的疏水性更小,更易溶解,并且具有更高的伴侶活性。-酪蛋白參與酪蛋白膠束的形成,與牛奶的凝膠化和凝固有關(guān),A2-酪蛋白先前被報(bào)道與凝乳酶凝固性能差的牛奶有關(guān)。此外,有研究指出A2-酪蛋白是非凝固和凝固性差的牛奶樣品中的主要基因型(>70%)。

    本研究分別將含有A1和A2-酪蛋白的牛乳制成酸奶(攪拌型和凝固型),通過(guò)持水力、質(zhì)構(gòu)特性、流變學(xué)特性、微觀結(jié)構(gòu)的測(cè)定對(duì)其產(chǎn)品性質(zhì)進(jìn)行分析和對(duì)比,以期為A2-酪蛋白酸奶的工藝及產(chǎn)品品質(zhì)的優(yōu)化提供一定理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    A1-酪蛋白牛乳(蛋白質(zhì)3.5 g/100 mL、脂肪4.3 g/mL、碳水化合物5.0 g/mL) 天津武清區(qū)百圣奶牛養(yǎng)殖有限公司;A2-酪蛋白牛乳(蛋白質(zhì)3.5 g/100 mL、脂肪4.2 g/mL、碳水化合物5.0 g/mL)北京三元集團(tuán)有限責(zé)任公司;科漢森903菌種 丹麥科漢森公司;均為食品級(jí)。

    氯化鈉、氯化鉀 天津市化學(xué)試劑五廠;磷酸氫二鈉 天津市化學(xué)試劑一廠;磷酸氫二鉀 天津博迪化工股份有限公司;戊二醛 國(guó)能化工有限公司;試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    H1850R臺(tái)式高速冷凍離心 湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司;YXQ-LS-50S11立式壓力蒸汽滅菌器 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;SU1510掃描電子顯微鏡 日本日立公司;MARS 60動(dòng)態(tài)流變儀 德國(guó)哈克公司;TA-XT plus質(zhì)構(gòu)儀 英國(guó)Stable Micro Systems公司。

    1.3 方法

    1.3.1 酸奶制備

    制備前將所用到的玻璃器皿在121 ℃高壓蒸汽滅菌15 min。

    1.3.1.1 酸奶制備工藝流程

    攪拌型酸奶制備:-酪蛋白牛乳(A1或A2)→均質(zhì)→接種發(fā)酵劑科漢森903菌種→破乳→發(fā)酵→灌裝→后熟→成品→4 ℃冷藏保存。

    凝固型酸奶制備:-酪蛋白牛乳(A1或A2)→均質(zhì)→接種發(fā)酵劑科漢森903菌種→灌裝→發(fā)酵→后熟→成品→4 ℃冷藏保存。

    得到4 種酸奶樣品:A1-酪蛋白攪拌型酸奶、A2-酪蛋白攪拌型酸奶、A1-酪蛋白凝固型酸奶、A2-酪蛋白凝固型酸奶。

    1.3.1.2 酸奶制備工藝操作要點(diǎn)

    接種:在無(wú)菌條件下,加入準(zhǔn)確稱取的科漢森903菌種(添加量0.04 g/500 g)于已滅菌的-酪蛋白牛乳中。不斷攪拌20 min;發(fā)酵:42 ℃恒溫箱中發(fā)酵6 h至pH≤4.6;破乳:緩慢并充分?jǐn)嚢璋l(fā)酵后的酸奶,降低黏度;后熟:將酸奶放入4 ℃冰箱中,后熟12 h。

    1.3.2 酸奶持水力測(cè)定

    取10 g酸奶(),室溫4 200 r/min離心15 min,棄上清液。離心管倒置10 min后立即稱量(),按式(1)計(jì)算持水力:

    1.3.3 酸奶質(zhì)構(gòu)特性測(cè)定

    將4 種酸奶樣品放入測(cè)定杯中,使樣品高3 cm且表面平整。使用質(zhì)構(gòu)儀測(cè)定硬度、稠度、黏聚性和膠著度,參數(shù)設(shè)定參考廖芬等方法。

    1.3.4 酸奶流變學(xué)特性測(cè)定

    在頻率0.1~10 Hz、應(yīng)變0.5%條件下,用動(dòng)態(tài)流變儀分別測(cè)定4 種酸奶的黏彈性,得到儲(chǔ)能模量(’)和損耗模量(”),參數(shù)設(shè)定參考Li Hongbo等方法。剪切掃描條件:間距1 000 μm;溫度25 ℃;上樣后平衡20 min;穩(wěn)態(tài)所需最長(zhǎng)時(shí)間為2 min;剪切應(yīng)力掃描范圍為0~600 Pa。

    用Herschel-Bulkley模型分析剪切測(cè)試中的曲線,可用式(2)表示:

    式中:為剪切應(yīng)力;為屈服應(yīng)力;為稠度系數(shù);為剪切速率;為流動(dòng)行為指數(shù)。

    1.3.5 酸奶微觀結(jié)構(gòu)測(cè)定

    取酸奶表層1 cm下的凝塊,置于盛有2.5%戊二醛溶液(/)的小燒杯中4 h,用pH 7.2 0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液沖洗10 min。將酸奶凝塊放入平板,封膜扎孔,置于-40 ℃冰箱中冷凍12 h。取出后將酸奶敲成小碎塊,用30%、50%、70%、90%、100%的乙醇溶液(/)梯度洗脫15 min,再用氯仿(體積分?jǐn)?shù)≥99%)脫脂3 次,每次15~20 min。封膜扎孔,真空冷凍干燥12 h。鍍金后于10 kV條件下放大4 000 倍和6 500 倍的掃描電子顯微鏡下觀察酸奶的微觀結(jié)構(gòu)。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同酪蛋白酸奶持水力分析

    圖1 4 種β-酪蛋白酸奶持水力Fig. 1 Water-holding capacity of four yoghurts

    由圖1可知,同種類-酪蛋白的攪拌型和凝固型酸奶在持水力上無(wú)顯著差異,但A2攪拌型酸奶的持水力比其凝固型稍低。此外,在攪拌型酸奶中,A1、A2型的持水力分別為69.19%、65.27%;在凝固型酸奶中,A1、A2型的持水力分別為69.78%、67.68%。不論是凝固型還是攪拌型酸奶,A1型均比A2型有著更高的持水力,說(shuō)明A1-酪蛋白酸奶凝膠網(wǎng)絡(luò)比A2-酪蛋白酸奶凝膠網(wǎng)絡(luò)更為致密,也更為緊實(shí)。有研究表明,蛋白質(zhì)分子主要靠疏水作用和范德華力相互吸引,但這兩種力不能完全克服分子間斥力,所以分子一般會(huì)以單體或者較小的聚集體的形式存在。而酪蛋白種類不同,空間結(jié)構(gòu)不同,會(huì)影響酸奶的持水力。

    2.2 不同酪蛋白酸奶質(zhì)構(gòu)特性分析

    酸奶中各種化學(xué)鍵結(jié)合及可溶性顆粒聚合影響酸奶的硬度。質(zhì)地柔軟的酸奶不利于儲(chǔ)存和運(yùn)輸,影響酸奶的品質(zhì)。酸奶的黏度主要與蛋白質(zhì)、乳酸菌和胞外多糖有關(guān)。其中,蛋白質(zhì)決定著酸奶的黏度系數(shù);胞外多糖是酸奶的重要產(chǎn)黏物質(zhì),且不同結(jié)構(gòu)對(duì)酸奶的黏度有不同影響。由表1可知,在攪拌型酸奶中,A1型硬度值比A2型高32%,A1型稠度值比A2型高28.8%;在凝固型酸奶中,A1型硬度值比A2型高41.4%,A1型稠度值比A2型高59.8%。說(shuō)明無(wú)論是攪拌型還是凝固型,A1-酪蛋白酸奶硬度和稠度均比A2-酪蛋白酸奶高,且凝固型酸奶的差異更為明顯。酸奶的黏聚性和膠著度也表現(xiàn)出相似的規(guī)律,無(wú)論是攪拌型還是凝固型,A1-酪蛋白酸奶黏聚性與膠著度的絕對(duì)值均比A2-酪蛋白酸奶大,且測(cè)定時(shí)的誤差更小。這些結(jié)果說(shuō)明A2-酪蛋白酸奶的凝膠更細(xì)軟,當(dāng)暴露在消化酶中可能會(huì)更快地分解,但這需要進(jìn)一步驗(yàn)證。此外,也說(shuō)明A2-酪蛋白酸奶的凝膠更容易在外力作用下發(fā)生破裂和變形,在搬運(yùn)和運(yùn)輸A2-酪蛋白酸奶產(chǎn)品時(shí)要小心。

    表1 A1、A2 β-酪蛋白對(duì)酸奶質(zhì)構(gòu)特性的影響Table 1 Effect of A1 and A2 β-casein on texture of yoghurts

    2.3 不同酪蛋白酸奶流變學(xué)特性分析

    2.3.1 不同酪蛋白酸奶頻率掃描分析

    圖2 不同酪蛋白酸奶頻率掃描曲線Fig. 2 Storage and loss moduli of yoghurts as a function of frequency

    由圖2可知,酸奶樣品的’和”都隨著頻率的增加而增加,并且在同種類型的酸奶中,’均大于”。說(shuō)明酸奶樣品具有一定的剛性(彈性行為),呈現(xiàn)出半固體的弱凝膠結(jié)構(gòu),符合酸奶的性質(zhì)。A1型的’和”均大于A2型,說(shuō)明A1-酪蛋白酸奶表現(xiàn)出比A2-酪蛋白酸奶更像固體的行為,A1-酪蛋白酸奶中蛋白質(zhì)的聚集程度、酪蛋白分子間的各個(gè)鍵的結(jié)合能力和蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)(即凝膠形成)都更好一些,所以A2-酪蛋白酸奶的凝膠比A1-酪蛋白酸奶更軟。這與質(zhì)構(gòu)特性的結(jié)果相同。此外,凝固型酸奶的’和”均大于攪拌型酸奶。其中,凝固型酸奶在低頻率下,’和”的變化隨著頻率的變化更為明顯,表現(xiàn)出更高的頻率依賴性。此外,同種酪蛋白凝固型酸奶的’、”差異均較攪拌型更小,說(shuō)明酸奶制備形式在一定程度上會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。

    2.3.2 不同酪蛋白酸奶剪切掃描分析

    圖3 不同酪蛋白酸奶剪切掃描曲線Fig. 3 Shear force of yoghurts as a function of shear rate

    由圖3可知,流動(dòng)性在曲線中都出現(xiàn)滯后回路,顯示出高度的能變性。4 組樣品中A1-酪蛋白酸奶下行曲線上的各剪切速率對(duì)應(yīng)的剪切應(yīng)力均比A2-酪蛋白酸奶樣品的剪切應(yīng)力大,且A2-酪蛋白酸奶剪切曲線較平緩,說(shuō)明在整體趨勢(shì)上A1-酪蛋白酸奶的黏性要比A2-酪蛋白酸奶的黏性高。

    表2 不同酪蛋白酸奶流變參數(shù)Table 2 Rheological parameters of yogurts

    由表2可知,各樣品相關(guān)指數(shù)均在0.99以上,表明此模型可以很好地?cái)M合酸奶在降速剪切時(shí)的流變特性。攪拌型酸奶中,A1型比A2型的流動(dòng)指數(shù)小8.8%,A1型比A2型的屈服應(yīng)力值大50%,說(shuō)明A1-酪蛋白攪拌型酸奶的抗剪切能力更強(qiáng),酸奶的凝膠結(jié)構(gòu)更加致密,剪切掃描時(shí)呈現(xiàn)出較少的剪切稀化特征。因此,凝膠結(jié)構(gòu)更為緊密的A1-酪蛋白攪拌型酸奶的口感更為堅(jiān)實(shí);而凝膠結(jié)構(gòu)更軟的A2-酪蛋白攪拌型酸奶的口感更為細(xì)膩。在凝固型酸奶中,A1型酸奶比A2型的屈服應(yīng)力大2.6%,流動(dòng)指數(shù)一致,說(shuō)明A1-酪蛋白凝固型酸奶更穩(wěn)定。與攪拌型酸奶相比,A1、A2凝固型酸奶的流動(dòng)指數(shù)分別小7.5%、15.7%,說(shuō)明凝固型酸奶的剪切稀化特性較攪拌型酸奶大,表現(xiàn)出更好的凝膠性質(zhì),在感官口感上更加堅(jiān)實(shí)。

    50 s剪切速率下的表觀黏度能夠更好地反映酸奶食用時(shí)的黏稠感。由表2可知,A1攪拌型酸奶比A2攪拌型酸奶高42.1%;A1凝固型酸奶比A2凝固型酸奶高34.0%。無(wú)論是凝固型還是攪拌型,A1型均大于A2型,表明A1-酪蛋白酸奶比A2-酪蛋白酸奶黏稠,與質(zhì)構(gòu)特性結(jié)果一致。此外,兩種酪蛋白攪拌型酸奶間黏稠感的差異比凝固型酸奶更大。

    滯后回線面積越大,表示樣品恢復(fù)形變的能力越弱。由表2可知,攪拌型酸奶中,A1型滯后回線面積比A2型小14%;凝固型酸奶中,A1型滯后回線面積比A2型小14.6%??梢钥闯?,被破壞后,凝固型酸奶比攪拌型酸奶更不容易恢復(fù);A2-酪蛋白酸奶比A1-酪蛋白酸奶更不容易恢復(fù)。這能夠進(jìn)一步說(shuō)明,A1-酪蛋白酸奶的凝膠結(jié)構(gòu)剛性更強(qiáng),且具有更加緊密的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。

    2.4 不同酪蛋白酸奶凝膠的微觀結(jié)構(gòu)分析

    圖4 A1、A2 β-酪蛋白攪拌型(a、b)及凝固型酸奶(c、d)掃描電鏡圖Fig. 4 Scanning electron microscopic images of stirred (a, b) and set yogurt (c, d) produced from A1 or A2 β-casein milk

    從圖4可以看出,4 種酸奶樣品的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)由酪蛋白鏈和聚集酪蛋白膠束的聚集體組成,并且均呈現(xiàn)出相對(duì)均勻和多孔隙的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。攪拌型和凝固型酸奶中,與A1型相比,A2型的孔洞更大,蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)密度更低,表明A2-酪蛋白牛乳制成的酸奶凝膠強(qiáng)度較弱。

    3 結(jié) 論

    將A1、A2-酪蛋白牛乳分別制成攪拌型及凝固型酸奶,并測(cè)定其持水力、質(zhì)構(gòu)特性、流變學(xué)特性及微觀結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明,蛋白質(zhì)種類的不同,對(duì)酸奶的組織、微觀結(jié)構(gòu)和功能性能有明顯影響。A1攪拌型酸奶硬度值比A2攪拌型酸奶高32%;A1凝固型酸奶硬度值比A2凝固型酸奶高41.4%。A1攪拌型酸奶稠度值比A2攪拌型酸奶高28.8%;A1凝固型酸奶稠度值比A2凝固型酸奶高59.8%。A1攪拌型酸奶滯后回線面積比A2攪拌型酸奶小14%;A1凝固型滯后回線面積較A2凝固型小14.6%。質(zhì)構(gòu)特性、流變學(xué)特性、微觀結(jié)構(gòu)觀察的結(jié)果一致。A1-酪蛋白牛乳所制成的酸奶在黏性和硬度等方面較A2-酪蛋白牛乳制成的酸奶更好。A2-酪蛋白酸奶的’、”與A1-酪蛋白酸奶相比,都更低一些。A2-酪蛋白酸奶蛋白凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)更為稀疏且不均勻。這會(huì)導(dǎo)致A2-酪蛋白酸奶在貯存、運(yùn)輸過(guò)程中易發(fā)生乳清析出,形狀變化,不便于貯存運(yùn)輸。由于實(shí)驗(yàn)條件限制,本研究并未探究A1、A2-酪蛋白酸奶剪切時(shí)間對(duì)酸奶表觀黏度的影響,未來(lái)可針對(duì)此方向進(jìn)一步探索。

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