白介素-1受體相關(guān)激酶的免疫調(diào)控及其在炎癥性腸病中的研究進(jìn)展①

段正蘭 馮澤宇 王包晟 劉慧澤 陳玉根 （南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)學(xué)院，南京 210000）

炎癥性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）是一個(gè)慢性、特發(fā)性、復(fù)發(fā)性和組織破壞性疾病，包括克羅恩?。–rohn's disease，CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）［1］。其特征為基因易感個(gè)體對(duì)腸道微生物產(chǎn)生異常免疫應(yīng)答［2］。目前臨床實(shí)踐中，盡管抗腫瘤壞死因子治療不斷發(fā)展，IBD 管理仍然是一個(gè)艱巨的挑戰(zhàn)［3］。傳統(tǒng)IBD 治療方法常導(dǎo)致多重嚴(yán)重的副作用和治療耐藥性［4］。白介素-1受體相關(guān)激酶（interleukin-1 receptor-related kinase，IRAKs）是一類(lèi)與IL-1R 和TLR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，在先天免疫、適應(yīng)性免疫和炎癥的正向或負(fù)向調(diào)節(jié)中均起主要作用。IRAK 家族參與NF-κB 信號(hào)、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和腫瘤壞死因子受體（TNFR）超家族信號(hào)通路。近年研究表明，IRAK 與炎癥疾病、代謝疾病、心血管疾病和腫瘤等有關(guān)［5］。

1 IRAKs結(jié)構(gòu)、定位與表達(dá)

1.1 IRAKs 結(jié)構(gòu) IRAKs 家族有 4 個(gè)成員：IRAK1、IRAK2、IRAKM、IRAK4，具有相似結(jié)構(gòu)域，包括1 個(gè)N 端死亡域（DD）、1個(gè)脯氨酸/絲氨酸/蘇氨酸豐富域（ProST）、1個(gè)激酶/假激酶域和1個(gè)C端域（IRAK4除外）。DD 是蛋白相互作用的基序，與IRAK 與配體蛋白MyD88結(jié)合有關(guān)。C端區(qū)域?qū)φ心己图せ钕掠涡?yīng)因子TNF 受體相關(guān)因子6（TRAF6）具有重要作用［6］。其中 IRAK1、IRAK2、IRAKM 分別具有 3、2、1 個(gè)與TRAF6 相互作用的基序。IRAK4 如何與TRAF6 相互作用尚不清楚，似乎與磷酸化依賴(lài)的IRAK1 作用模式不同，僅有非磷酸化的IRAK4 可與TRAF6 結(jié)合［7］。IRAKM 在其偽激酶結(jié)構(gòu)域中含有1 個(gè)鳥(niǎo)苷環(huán)化酶中心，F(xiàn)REIHAT 等［8］證明野生型IRAKM 能夠通過(guò)其鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶中心產(chǎn)生環(huán)鳥(niǎo)甘酸（cGMP），對(duì)下游先天免疫信號(hào)起抑制作用。

1.2 IRAKs 定位與表達(dá) 人IRAK1 基因定位于染色體Xq28 區(qū)域，是由712 個(gè)氨基酸組成的蛋白，分子量約為 85 kD［9］。IRAK1 是通過(guò)配體與 IL-1R、TLRs 結(jié)合而啟動(dòng)的事件鏈中的重要中介物。鼠IRAK1 基 因 定 位 于 染 色 體 Xq29.52-29.7 區(qū) 域［9］。人和鼠IRAK1 均包含14 個(gè)外顯子和13 個(gè)內(nèi)含子。人IRAK1 廣泛分布于各組織，鼠IRAK1 主要分布于肝臟、腎臟、睪丸［10-11］。

人IRAK2 基因位于染色體3p25.3~3p24 區(qū)域，是由590 個(gè)氨基酸組成的蛋白，分子量為65 kD，與IRAK1 具有相似的序列和功能。小鼠和人IRAK2表現(xiàn)出67%的序列一致性，在人體各組織器官中均有表達(dá)。

人IRAKM 基因位于染色體12q14.1~12q15 區(qū)域，是由596個(gè)氨基酸組成的蛋白，分子量為68 kD。鼠IRAKM 定位于10 號(hào)染色體。人IRAKM 主要存在于外周血白細(xì)胞，在其他組織中也有少量表達(dá)。多種細(xì)胞系研究中，IRAKM 僅在單核細(xì)胞中被檢測(cè)到，其中巨噬細(xì)胞表達(dá)最高，在嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中也呈高表達(dá)。相反，鼠IRAKM 在所有組織中均有表達(dá)，其中肝臟和胸腺表達(dá)最高。在細(xì)胞水平，鼠IRAM 主要表達(dá)于單核細(xì)胞、B 細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

人 IRAK4 基因位于 12 號(hào)染色體 12p11.22 區(qū)域，由460 個(gè)氨基酸組成，分子量為52 kD。與小鼠IRAK4 有87%相似性，84%同源性。鼠IRAK4 位于15 號(hào)染色體。IRAK4 在多種組織中均有表達(dá)，主要表達(dá)于腎臟和肝臟。

2 IRAKs轉(zhuǎn)錄調(diào)控

病原體相關(guān)分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs），如細(xì)菌脂多糖和病毒RNA（圖1），可與TLRs 胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并啟動(dòng)先天免疫信號(hào)（圖 1）［12-13］。PAMPs 的結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Toll/IL-1R（TIR）域二聚，為下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子招募提供了支架。髓樣分化因子（myeloid differentiation factor，MyD88）由2 個(gè)蛋白-蛋白相互作用域組成，具有 1 個(gè) N-端 DD 和 1 個(gè) Toll/IL-1R 同源（TIR）域［14］。隨后，MyD88和IRAK4、IRAK2通過(guò)死亡域相互作用形成1 個(gè)大的寡聚左旋螺旋信號(hào)復(fù)合物，稱(chēng)為Myddosome［15］。這個(gè)高階復(fù)合體的組裝導(dǎo)致 IRAK4 介導(dǎo)的IRAK1 募集和磷酸化，激活的IRAK1 進(jìn)一步自磷酸化，導(dǎo)致ProST 區(qū)域過(guò)度磷酸化，這種過(guò)度磷酸化誘導(dǎo)IRAK1從Myddosome中解離并與下游效應(yīng)因子腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（TRAF6）結(jié)合［10，16-17］。隨后，IRAK1 和 TRAF6 與受體復(fù)合物分離，并與預(yù)先形成的由轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子激酶1（TAK1）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子激活激酶結(jié)合蛋白1（TAB1）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子激活激酶結(jié)合蛋白2（TAB2）組成復(fù)合物相互作用，這種相互作用誘導(dǎo)TAB2 和TAK1磷酸化，與TRAF6 和TAB1 一起轉(zhuǎn)位至細(xì)胞質(zhì)。在細(xì)胞質(zhì)中，由 TRAF6、TAK1、TAB1 和 TAB2 組成的多聚體蛋白復(fù)合物進(jìn)一步與泛素連接酶Ubc13 和Uev1A 結(jié)合，導(dǎo)致 TRAF6 泛素化，這是觸發(fā) TAK1 激酶活性的關(guān)鍵。激活的TAK1 磷酸化IκB 激酶復(fù)合物（IKKs）和絲裂原活化蛋白激酶（MKKs）。IKKs 磷酸化NF-κB 的抑制因子IκB 使其泛素化而被降解，使NF-κB 核易位激活下游一系列信號(hào)，導(dǎo)致炎癥因子產(chǎn)生，如 IL-1β、TNF-α、IL-6 和 IL-18。激活的MKKs磷酸化并激活MAPK家族成員ERK/JNK/p38，隨后，激活下游效應(yīng)因子AP-1/CREB，促進(jìn)炎癥因子產(chǎn)生。IRAK1 還可與IRF7 相互作用并使其磷酸化，導(dǎo)致IRF7 易位進(jìn)入細(xì)胞核并誘導(dǎo)Ⅰ型IFN 基因轉(zhuǎn)錄［18］。

圖1 IRAKs轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制Fig.1 Transcriptional regulation mechanism of IRAKs

3 IRAKs在免疫應(yīng)答中的作用

3.1 先天性免疫 單核細(xì)胞起源于骨髓中央循環(huán)白細(xì)胞，可分化為巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞，是參與適應(yīng)性免疫系統(tǒng)相互作用的抗原呈遞細(xì)胞，IRAKs可調(diào)節(jié)單核細(xì)胞的免疫功能。IRAK1/4抑制劑消除了脂多糖和TLR2 配體Pam3Csk 刺激人髓系白血病單核細(xì)胞（THP-1）誘導(dǎo)的活性氧、IL-1β 生成、NK1/2磷 酸 化 、AP-1 和 caspase-1 激 活［19］。 TLR7/8 配 體R848 刺激人原代單核細(xì)胞后，IL-6、TNF-α 表達(dá)、IRF5 與 CXCL10 結(jié) 合 以 及 NF-κB p65 入 核 均 被IRAK4 抑制劑所逆轉(zhuǎn)［20］。IRAK4-/-單核細(xì)胞 IL-10產(chǎn)生增加，當(dāng)采用同種異體CD8+或CD4+T 細(xì)胞與IRAK4-/-單核細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，CD8+T 細(xì)胞增殖減少。但 中 和 IL-10 可恢 復(fù) CD4+、CD8+T 細(xì) 胞 增 殖［21］。IRAKM 可抑制促炎單核細(xì)胞極化，與野生型單核細(xì)胞相比，IRAKM-/-單核細(xì)胞中JNK1/2、miR-24、CCR5表達(dá)增加，SR-B1 水平降低。IRAKM-/-小鼠使循環(huán)血液中的CD11b+Ly6C+單核細(xì)胞增加，脾細(xì)胞中miR-24 水平升高，血液?jiǎn)魏思?xì)胞中SR-B1 表達(dá)降低［22］。

IRAKs 可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化、遷移和炎癥因子釋放。過(guò)表達(dá)IRAK4 逆轉(zhuǎn)了過(guò)表達(dá)miR-93 引起的RAW264.7 巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子、趨化因子產(chǎn)生和NF-κB 激活減少［23］。敲減 IRAKM 后，巨噬細(xì)胞RAW264.7 NF-κB 激 活 ，誘 導(dǎo) IL-12 和 TNF-α 生成［24-25］。IRAKM-/-巨噬細(xì)胞在LPS、IFN-γ 刺激下，表面標(biāo)志物 CD206 表達(dá)下降，HLA-DR 表達(dá)增加［26］。IRAK1-/-小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞中，CpG、R484、LPS（TLR9、TLR7、TLR4 配體）刺激后 caspase-1 剪切、IRAK1 與 ASC 結(jié)合、IκBα 降解和 IL-18 產(chǎn)生均明顯減少［27］。IRAK1 可與包含 ASC 和 NLRP3 的炎癥小體復(fù)合物共定位［28］。此外，IRAK1 可在小鼠巨噬細(xì)胞中與VASP 共定位。IRAK1-/-小鼠BMMs 遷移減弱，VASP 磷酸化降低［29］。IRAKM 敲除逆轉(zhuǎn)了 LPS刺激BMMs引起的Nox-1、C/EBPβ、C/EBPδ表達(dá)增加及 Rac1、GPX3、過(guò)氧化氫酶、PPARα 和 PGC-1α 激活［30］。表明IRAK1 通過(guò)誘導(dǎo)下游炎癥小體參與巨噬細(xì)胞炎癥、遷移。

3.2 適應(yīng)性免疫 IRAKs 可調(diào)節(jié)T 細(xì)胞增殖分化和Th1/Th17/Treg 平衡。IRAK4 抑制劑減少了人CD4+T細(xì)胞增殖，降低了CD4+IFN-γ+、CD4+IL-17+T細(xì)胞數(shù)量，并通過(guò)減少NF-κB、STAT1和STAT3磷酸化降低 CD4+T 細(xì)胞 IL-17、IFN-γ 分泌［31］。IRAK4 缺失的人群中，T 細(xì)胞活化的表面標(biāo)志物CD25 和CD69表達(dá)下調(diào)，T 細(xì)胞分泌的 IL-6 和 IFN-γ 受損，說(shuō)明IRAK4 與 T 細(xì)胞活化有關(guān)［32］。IRAK1-/-小鼠 T 細(xì)胞NFATc2 核水平及NFATc2 和Smad3 相互作用增加導(dǎo)致Treg 標(biāo)志物Foxp3 水平上調(diào)。同時(shí)，IRAK1-/-T細(xì)胞中 IL-17 和 RORγt 表達(dá)減少，表明 IRAK1 通過(guò)NFATc2、Smad3 調(diào)節(jié) Th17/Treg 平衡［33］。IRAK1 通過(guò)上調(diào)IL-23R 和隨后的STAT3 磷酸化促進(jìn)Th17 細(xì)胞產(chǎn)生，還通過(guò)促進(jìn)T-bet產(chǎn)生和減少Treg生成促進(jìn)Th1 分 化［34］。 經(jīng) IRAKM siRNA 處 理 后小 鼠脾 臟CD4+、CD8+T 細(xì)胞增加，凋亡數(shù)減少，IRAKM-/-小鼠肺內(nèi)CD3+CD4+Foxp3+T 細(xì)胞百分比低于野生型小鼠，而 CD3+CD4+IL-17A+T 細(xì)胞、Th1 及 Th17 相關(guān)細(xì)胞因子在IRAKM-/-小鼠肺組織中顯著升高，表明IRAKM負(fù)向調(diào)節(jié)Th1/Th17/Treg平衡［35-36］。

IRAK4 與 B 細(xì)胞活化成熟相關(guān)，IRAKM 影響 B細(xì)胞的功能。 IRAK4 及MyD88 缺陷患者IgM+IgD+CD27+B 細(xì)胞亞群特異性降低，IRAK4 缺陷患者IgM+IgD+CD27+B 細(xì)胞減少不隨年齡增加而得到補(bǔ)償［37］。IRAK4 缺失人群血清中結(jié)合碳水化合物IgM 較正常人顯著降低，補(bǔ)體結(jié)合減少，且IgM 對(duì)肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌的識(shí)別能力下降［38］。IRAK4-/-小鼠在感染弓形蟲(chóng)后卵泡和生發(fā)中心面積減小，總B細(xì)胞、B細(xì)胞活化標(biāo)志物CD86、CD69表達(dá)和 Ki67+B 淋巴細(xì)胞數(shù)減少［39］。IRAKM-/-B 細(xì)胞中CD86、MHC分子Ⅰ-Ab表達(dá)、IκBα降解增加［40］。

4 IRAKs在腸炎中的作用

4.1 IRAK1 IL-1 誘導(dǎo)產(chǎn)生的 GM-CSF+CD4+T 細(xì)胞是一種獨(dú)特T 輔助細(xì)胞群，通過(guò)影響造血系統(tǒng)向粒-單核細(xì)胞分化以及促進(jìn)M1 型巨噬細(xì)胞分化導(dǎo)致結(jié)腸炎，將 WT 和 CSF2-/-小鼠的 CD4+CD45Rbhi細(xì)胞移植到Rag1-/-受體小鼠中誘導(dǎo)結(jié)腸炎，移植CSF2-/-T細(xì)胞后的Rag1-/-小鼠體質(zhì)量下降緩解，組織病理學(xué)顯示炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，病理評(píng)分顯著降低，但移植了WT CD4+T 細(xì)胞的Rag1-/-小鼠在結(jié)腸固有層白細(xì)胞（LPLs）和腸系膜淋巴結(jié)（MLNs）中檢測(cè)到大量GM-CSF+CD4+T 細(xì)胞，IL-17a+和 IFN-γ+T 細(xì)胞顯著增加。在DSS 誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中，GM-CSF 缺乏小鼠腸炎顯著減輕。而GM-CSF+CD4+T 細(xì)胞的產(chǎn)生依賴(lài)IL-1/IRAK1 信號(hào)通路，IL-1β 可促進(jìn) IRAK1 泛素化，導(dǎo)致下游p65 激活，免疫沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p65 可直接結(jié)合至CSF2 基因的啟動(dòng)子區(qū)域。體外培養(yǎng)WT 和IRAK1-/-CD4+T 細(xì)胞時(shí)，IRAK1 缺陷顯著抑制GM-CSF+CD4+細(xì)胞分化，IRAKM 缺失對(duì) IL-1 誘導(dǎo)的GM-CSF 生成無(wú)顯著影響［41］。BERGLUND 等［42］證明IRAK1 缺陷小鼠改善了DSS 處理后小鼠體質(zhì)量、脾臟重量下降。但I(xiàn)RAK1-/-雄性小鼠對(duì)局部結(jié)腸炎和胸腺萎縮具有顯著保護(hù)作用，而雌雄小鼠無(wú)保護(hù)作用，表明IRAK1 在DSS 誘導(dǎo)的結(jié)腸炎中具有性別特異性。JIN 等［43］發(fā)現(xiàn)質(zhì)核糖核蛋白Ⅰ（hnRNPⅠ）上皮特異性敲除的新生小鼠結(jié)腸中IRAK1 蛋白水平異常升高，無(wú)法對(duì)環(huán)境微生物產(chǎn)生免疫耐受，出現(xiàn)早期自發(fā)的結(jié)腸炎，提示hnRNPⅠ可能通過(guò)抑制IRAK1 對(duì)新生兒免疫適應(yīng)、結(jié)腸炎預(yù)防起關(guān)鍵作用。炎癥條件下，IRAK1-/-CD4+T 細(xì)胞在脾、腸系膜淋巴結(jié)、結(jié)腸組織中分化為T(mén)h1 細(xì)胞和Th17 細(xì)胞能力受損，體外轉(zhuǎn)錄組分析顯示IRAK1 促進(jìn)T 細(xì)胞激活和腸道歸巢分子表達(dá)。IRAK1-/-T 細(xì)胞接種至Rag1-/-小鼠后未能上調(diào)表面α4β7 整合素表達(dá)，顯著降低了T 細(xì)胞誘導(dǎo)腸炎的能力，表明IRAK1 通過(guò)調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化、分化和腸道歸巢引發(fā)腸道炎癥［34］。

IRAK1 與UC 患者活動(dòng)期病變中趨化因子和急性期蛋白表達(dá)升高密切相關(guān)，可能與UC 患者病變部位炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加有關(guān)。與正常黏膜相比，UC患者活動(dòng)期病變部位 IL-36α 和 IL-36γ mRNA 表達(dá)明顯增高，CD 患者活動(dòng)期病變中IL-36α 和IL-36γ mRNA表達(dá)有所增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-36α和 IL-36γ 可促進(jìn) MyD88 接頭蛋白和 IRAK1 形成復(fù)合物，從而激活下游信號(hào)通路，誘導(dǎo)結(jié)腸上皮細(xì)胞趨化因子和急性期蛋白表達(dá)，如CXCL1、CXCL2、CXCL3、IL-1β、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體因子B、ICAM-1和IL-32。這些趨化因子的產(chǎn)生與IRAK1/4 通路密切相關(guān)，當(dāng)MyD88、IRAK1、IRAK4、TRAF6 和TAK1 分別被抑制后，IL-36α 和 IL-36γ 誘導(dǎo)的趨化因子表達(dá)顯著下降［44］。

IRAK1 是腸炎發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵因子，多項(xiàng)研究表明抑制IRAK1 可改善黏膜屏障、降低氧化應(yīng)激水平、減少炎癥因子釋放，從而有效緩解結(jié)腸炎相關(guān)癥狀。WU 等［45］發(fā)現(xiàn)含有 miR-146a 的胞外囊泡（EVs）通過(guò)靶向TRAF6和IRAK1緩解2，4，6-三硝基苯磺酸（trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS）誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎，同時(shí)抑制 p65 和 IκBα 磷酸化，抑制炎癥因子TNF-α、IL6和IL-1β等表達(dá)。此外，多個(gè)天然產(chǎn)物也可通過(guò)抑制IRAK1 相關(guān)通路改善化學(xué)誘導(dǎo)的動(dòng)物腸炎模型。五倍子主要成分penta-O-galloylβ-D-glucose（PGG）通過(guò)抑制MyD88與巨噬細(xì)胞結(jié)合顯著減少腹膜和結(jié)腸巨噬細(xì)胞IRAK1、NF-κB 和MAPKs 激活，抑制 IL-1、TNF-α 和 IL-6 表達(dá)，增加IL-10 表達(dá)?？诜GG 可抑制TNBS 誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸縮短和髓過(guò)氧物酶活性［46］。人參皂苷Re可在體外抑制巨噬細(xì)胞TLR4 與LPS 結(jié)合，減少LPS刺激后巨噬細(xì)胞IRAK1、核因子κB 激酶亞基β（IKKβ）磷酸化和NF-κB 活化，以及LPS 刺激的腹膜巨噬細(xì)胞中IRAK1 和IRAK4 降解，降低促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β表達(dá)。口服人參皂苷Re可明顯抑制LPS誘導(dǎo)的全身炎癥和TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，還可逆轉(zhuǎn)緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、claudin-1 和occludin表達(dá)減少［47］。人參的另一種成分人參皂苷Rb1及其代謝物化合物K也可通過(guò)抑制IRAK1、IKKβ、NF-κB和MAPK（ERK、JNK 和p38）激活有效抑制促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生，降低TNBS 誘導(dǎo)的腸炎小鼠環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase 2，COX-2）和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表達(dá)，減輕結(jié)腸損傷［48］。熊果酸可通過(guò)抑制巨噬細(xì)胞中IRAK1、TAK1、IKKβ 和IκBα 磷酸化和巨噬細(xì)胞遷移，從而抑制 NF-κB 和 MAPKs 活化，導(dǎo)致炎癥因子 IL-1β、IL-6、TNF-α 和 COX-2、iNOS 表 達(dá)以及 前 列腺素（PGE2）和NO 水平下降，從而顯著改善TNBS 誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎［49］。何首烏用于治療各種炎癥性疾病，其甲醇提取物Ph-ME 可抑制腹膜巨噬細(xì)胞中NO、TNF-α 和 PGE2 釋放。Ph-ME 通過(guò)抑制上游炎癥信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，包括Syk、Src 和IRAK1，從而激活NF-κB、激活蛋白（AP-1）和 cAMP 反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）抑制促炎基因，如iNOS、COX-2 和TNF-α mRNA表達(dá)，顯著改善DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎［50］。

一項(xiàng)多中心、雙盲、隨機(jī)研究中，RDP58（一種新型的抗炎d-氨基酸十肽，通過(guò)干擾MAPK 前體和MyD88-IRAK1-TRAF6 蛋白復(fù)合物形成抑制促炎細(xì)胞因子合成）對(duì)UC 治療效果顯著。RDP58 干預(yù)第28 天后，高劑量組（300 mg）臨床活動(dòng)指數(shù)評(píng)分較安慰劑組顯著降低，結(jié)腸組織學(xué)評(píng)分顯著改善［51］。綜上，IRAK1可能是治療IBD的潛在靶點(diǎn)。

4.2 IRAKM IRAKM 對(duì)DSS 誘導(dǎo)的結(jié)腸炎及其進(jìn)展具有顯著抑制作用，IRAKM 敲除加重了DSS 誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎，提高結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分和炎癥因子表達(dá)，這是IRAKM 在結(jié)腸炎中作用的第一次研究［52］。作為 TLR 信號(hào)負(fù)調(diào)節(jié)因子的 IRAKM 表達(dá)依賴(lài)于腸道共菌群，在無(wú)菌小鼠中IRAKM 表達(dá)減少，而將共生菌引入無(wú)菌小鼠中可誘導(dǎo)IRAKM 表達(dá)。IL-10-/-IRAKM-/-小鼠腸炎加重，炎癥細(xì)胞因子基因表達(dá)增加，表明IRAKM 在調(diào)節(jié)宿主與腸道菌群的免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用［53］。DASKALAKI 等［54］發(fā)現(xiàn)紅藻中的新大黃三醇及其相關(guān)二萜可抑制巨噬細(xì)胞激活，并通過(guò)誘導(dǎo)IRAKM 表達(dá)促進(jìn)M2 型巨噬細(xì)胞分化。IBD 患者 IRAKM 表達(dá)上調(diào)，IRAKM-/-小鼠對(duì)結(jié)腸炎和結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤具有保護(hù)作用。IRAKM-/-小鼠腸道免疫系統(tǒng)對(duì)消除微生物易位后引起的上皮屏障損傷高度有效，這種作用機(jī)制與腸道相關(guān)淋巴組織增大、中性粒細(xì)胞遷移增加和T 細(xì)胞募集增強(qiáng)有關(guān)［55］。FERNANDES 等［56］發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性UC 和 CD 患者 IRAKM、Bcl-3 水平升高，IBD 可能與TLR-4 和TLR 抑制蛋白IRAKM 顯著變化有關(guān)。GüNALTAY 等［57］還發(fā)現(xiàn) IRAKM 水平在淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎中也升高，可能是機(jī)體的一種應(yīng)激性升高。

4.3 IRAK4 黨參中分離出的Lancemaside A 可改善結(jié)腸炎，IRAK4 參與Lancemside A 的抗炎作用。Lancemaside A 在體外和體內(nèi)均可抑制促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β產(chǎn)生，下調(diào)iNOS和COX-2表達(dá)，抑制IRAK4 及其下游信號(hào)通路激活，從而改善小鼠腸炎［58］。研究表明，IBD 患者 TNF-α 治療無(wú)應(yīng)答者先天免疫功能障礙與TLR-2、TLR-4和TLR-7刺激后無(wú)應(yīng)答者細(xì)胞內(nèi)IRAK4 積累、循環(huán)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)減少和CD4+Treg數(shù)增加有關(guān)，表明IRAK4有望成為預(yù)測(cè)抗TNF-α治療效果的血清學(xué)標(biāo)志物［59］。

5 總結(jié)和展望

近年對(duì)IRAKs 家族在炎癥和自身免疫性疾病中作用的研究不斷深入，尤其是其影響先天免疫和適應(yīng)性免疫的內(nèi)在分子機(jī)制研究證實(shí)IRAKs 在調(diào)節(jié)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T 細(xì)胞等免疫細(xì)胞增殖分化及功能方面發(fā)揮重要作用（圖2）。IRAKs 的4 個(gè)成員從MyD88、TIF 接收到激活信號(hào)后，家族成員可能相互作用或以復(fù)合物形式積累，調(diào)節(jié)下游級(jí)聯(lián)蛋白，但其如何相互作用有待進(jìn)一步研究。因此，同時(shí)雙敲除或三敲除家族成員的研究將進(jìn)一步增加該家族在自身免疫方面的認(rèn)知。

圖2 IRAKs在IBD發(fā)病機(jī)制中的作用假想Fig.2 Hypothetical of IRAKs role in pathogenesis of IBD

深入研究IRAKs在IBD 發(fā)病中的作用或許能為IBD 預(yù)防、診斷和治療提供新的靶標(biāo)。目前，針對(duì)個(gè)體IRAK 的小分子藥物已顯示出對(duì)IBD 的潛在治療作用，但尚缺乏臨床驗(yàn)證，目前已有多種IRAK1/4選擇性抑制劑進(jìn)入臨床試驗(yàn)，包括Pf-06650833（Pfizer）和CA-4948（Curis/Aurigene），前者用于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（NCT02996500），后者用于非霍奇金淋巴瘤（NCT03328078）。但抑制IRAKs 可能導(dǎo)致機(jī)體免疫功能，因此，臨床試驗(yàn)中還需評(píng)估其安全性。此外，大量研究發(fā)現(xiàn)，多種天然化合物可調(diào)節(jié)IRAKs 相關(guān)信號(hào)通路，需要更多研究發(fā)現(xiàn)特異性針對(duì)IRAKs 治療IBD 的安全有效藥物。總之，對(duì)IRAKs 的深入研究將為臨床診斷和治療IBD提供新的思路。