單純皰疹病毒型腦炎患者血清AchE、sOX40L水平與認(rèn)知功能的相關(guān)性*

王 莎，賀 龍，李素婷，王東紅，王 靜

1.邯鄲市第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科，河北邯鄲 056002；2.邯鄲市中心醫(yī)院神經(jīng)外三科，河北邯鄲 056002； 3.邯鄲市中心醫(yī)院輸血科，河北邯鄲 056002；4.邯鄲市第一醫(yī)院CT室，河北邯鄲 056002

單純皰疹病毒型腦炎(HSE)是單純皰疹病毒(HSV)感染所誘發(fā)的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，此疾病進(jìn)展快、病情危重、病死率高，且多數(shù)存活患者存在不同程度認(rèn)知功能障礙[1]。頭顱CT、MRI技術(shù)是臨床診斷HSE的主要影像學(xué)技術(shù)，可通過(guò)觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)變化評(píng)估中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷情況，但缺點(diǎn)是影像學(xué)表現(xiàn)相對(duì)滯后，而如何早期評(píng)估病情轉(zhuǎn)歸，指導(dǎo)臨床積極完善治療方案，強(qiáng)化針對(duì)性治療是亟待解決的問(wèn)題之一[2]。乙酰膽堿作為腦重要神經(jīng)遞質(zhì)，是記憶學(xué)習(xí)的生化基礎(chǔ)，有研究證實(shí)，乙酰膽堿酯酶(AchE)可分解突觸間的乙酰膽堿繼而影響個(gè)體學(xué)習(xí)記憶活動(dòng)，而有認(rèn)知障礙的患者血清AchE水平升高[3-4]。可溶性O(shè)X40L(sOX40L)是共刺激因子家族主要成員之一，有研究已證實(shí)，其在病毒性心肌炎、原發(fā)性膽汁性膽管炎等疾病中水平異常，且異常程度與病情關(guān)系密切，但其與HSV病情轉(zhuǎn)歸的關(guān)系鮮見報(bào)道[5-6]。基于上述理論基礎(chǔ)，本研究探討HSE患者血清AchE、sOX40L水平及認(rèn)知功能變化，旨在為臨床完善相關(guān)預(yù)警機(jī)制提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年3月至2020年12月就診于邯鄲市第一醫(yī)院(下稱本院)的63例HSE患者作為觀察組，另選取同期在本院體檢的63例健康者作為對(duì)照組。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)腦脊液PCR反應(yīng)確診為HSE，且病程<7 d；(2)入組前未經(jīng)相關(guān)治療。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)體檢身體健康，無(wú)可能影響本研究結(jié)果的疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴其他神經(jīng)系統(tǒng)感染及自身免疫性疾病患者；(2)其他傳染性疾病患者；(3)腦卒中等其他影響認(rèn)知功能的疾病患者；(4)在治療過(guò)程中病死者。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，受試者對(duì)本研究知情，并簽署知情同意書。兩組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)等比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2方法

1.2.1治療方法 觀察組患者均予以阿昔洛韋(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20046529)抗病毒，酌情使用甘露醇(河北天致藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H13021587)降顱壓，鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(未名生物醫(yī)藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20060052)提供營(yíng)養(yǎng)，苯巴比妥(云南白藥集團(tuán)大理藥業(yè)有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H53021324)抗癲癇等對(duì)癥治療。

1.2.2檢測(cè)方法 觀察組指標(biāo)檢測(cè)均在疾病緩解期進(jìn)行。生化指標(biāo)檢測(cè)：采用非抗凝真空管采集肘靜脈血4 mL，3 500 r/min離心15 min(離心半徑為8 cm)，采集上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)sOX40L水平，試劑盒由上海仁捷生物科技有限公司提供；采用比色法檢測(cè)AchE水平，試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司提供。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作步驟：取血清標(biāo)本，用蒸餾水將原裝洗滌液30 mL稀釋至1 200 mL備用，各取標(biāo)準(zhǔn)品、血清25 μL于樣品孔，每孔加抵抗素試劑25 μL，混勻30 s，室溫孵育30 min；甩盡板內(nèi)液體，每孔加350 μL洗滌液洗板，去水滴，反復(fù)洗3次；每孔加50 μL辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，混勻30 s，室溫孵育30 min；甩盡板中液體，每孔加350 μL洗滌液洗板，去水滴，復(fù)洗3次；每孔加顯色液50 μL，混勻10 s，室溫孵育15 min；每孔加終止液50 μL，混勻30 s，30 min內(nèi)在450 nm處讀取吸光度值，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取樣品水平。比色法操作步驟：取待測(cè)樣品20 μL至樣品孔，加緩沖液(GENMED試劑A)，混勻，室溫靜置1 min，加20 μL 誘導(dǎo)液(GENMED試劑B)，混勻，即刻放進(jìn)540 nm分光光度儀獲得吸光度值，讀取樣品水平。

1.2.3認(rèn)知功能評(píng)價(jià)[7]采用簡(jiǎn)易精神狀態(tài)檢查量表(MMSE)評(píng)估認(rèn)知功能，包括注意力及計(jì)算力、語(yǔ)言能力、回憶力、記憶力、定向力5個(gè)方面，總分范圍0～30分，得分為整數(shù)，以MMSE評(píng)分10～20分為認(rèn)知功能不良組，21～30分為認(rèn)知功能稍差組。質(zhì)量控制：生化指標(biāo)檢測(cè)由資深檢驗(yàn)技師嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明書步驟規(guī)范操作，認(rèn)知功能評(píng)價(jià)由經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)問(wèn)卷調(diào)查人員進(jìn)行，由患者本人自行完成問(wèn)卷填寫，有不懂可進(jìn)行解釋，但不給予任何引導(dǎo)性指導(dǎo)，調(diào)查中采用統(tǒng)一術(shù)語(yǔ)，數(shù)據(jù)統(tǒng)一處理，雙人錄入。

1.3觀察指標(biāo) (1)對(duì)比兩組血清AchE、sOX40L水平、MMSE評(píng)分。(2)對(duì)比觀察組不同MMSE評(píng)分患者血清AchE、sOX40L水平。(3)分析血清AchE、sOX40L水平與MMSE評(píng)分的關(guān)系。(4)分析認(rèn)知功能損害的影響因素。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清AchE、sOX40L水平及MMSE評(píng)分比較 觀察組血清AchE、sOX40L水平均高于對(duì)照組，MMSE評(píng)分低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清AchE、sOX40L水平及MMSE評(píng)分比較

2.2觀察組不同MMSE評(píng)分患者血清AchE、sOX40L水平比較 觀察組患者經(jīng)MMSE評(píng)分，其中10～20分18例，21～26分26例，27～30分19例。不同MMSE評(píng)分患者血清AchE、sOX40L水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；隨MMSE評(píng)分降低，血清AchE、sOX40L水平呈升高趨勢(shì)。見表3。

表3 觀察組不同MMSE評(píng)分患者血清AchE、sOX40L水平比較

2.3分析血清AchE、sOX40L水平與MMSE評(píng)分的關(guān)系 Pearson相關(guān)分析顯示，血清AchE、sOX40L水平與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.675、-0.598，均P<0.001)，見圖1、2。

圖1 血清AchE水平與MMSE評(píng)分關(guān)系

圖2 血清sOX40L水平與MMSE評(píng)分關(guān)系

2.4認(rèn)知功能損害的單因素分析 認(rèn)知功能稍差組及認(rèn)知功能不良組患者性別、年齡、最高學(xué)歷、發(fā)病至入院時(shí)間對(duì)比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；認(rèn)知功能稍差組及認(rèn)知功能不良組患者間確診時(shí)血清白細(xì)胞介素6、C反應(yīng)蛋白、AchE、sOX40L水平及癲癇發(fā)作情況對(duì)比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

2.5認(rèn)知功能損害的多因素分析 將表4有意義項(xiàng)目作為自變量，將MMSE評(píng)分作為因變量納入多元線性逐步回歸分析(賦值：MMSE評(píng)分、白細(xì)胞介素6、C反應(yīng)蛋白、AchE、sOX40L為具體值，“癲癇未發(fā)作”=0，“癲癇發(fā)作”=1)，結(jié)果顯示，校正白細(xì)胞介素6、C反應(yīng)蛋白水平后，AchE、sOX40L水平及癲癇發(fā)作仍是認(rèn)知功能損害的影響因素(P<0.05)。見表5。

表4 認(rèn)知功能損害的單因素分析

續(xù)表4 認(rèn)知功能損害的單因素分析

表5 認(rèn)知功能損害的多因素分析

3 討 論

HSE是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見感染性疾病，占全部腦炎的5%～20%，病毒性腦炎的20%～68%[8]。盡管隨著阿昔洛韋等抗病毒藥物的廣泛應(yīng)用，HSE患者病死率得到顯著控制，但中樞神經(jīng)組織受病毒侵襲及病理生理效應(yīng)影響出現(xiàn)不同程度損傷可致患者認(rèn)知功能損害。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HSE患者中出現(xiàn)認(rèn)知功能損害占比接近71%，與相關(guān)研究近似[9]。因此，臨床急需加強(qiáng)HSE患者預(yù)后相關(guān)影響因素研究，積極完善治療方案，確?；颊吣茏畲蠡@益。

sOX40L是機(jī)體免疫應(yīng)答系統(tǒng)協(xié)同刺激分子家族主要成員之一，其主要參與T細(xì)胞活化、增殖、遷移等過(guò)程。有研究證實(shí)，sOX40L在炎性浸潤(rùn)部位T細(xì)胞中表達(dá)明顯升高，而在非炎性部位幾乎無(wú)表達(dá)[10]。本研究對(duì)HSE患者外周血檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HSE患者sOX40L水平較健康人明顯升高(P<0.05)。分析原因可能是，sOX40L在啟動(dòng)T細(xì)胞免疫效應(yīng)后發(fā)揮正性調(diào)控作用，以維持并延續(xù)免疫應(yīng)答，在HSV持續(xù)復(fù)制情況下，隨T細(xì)胞大量生成及凋亡可釋放sOX40L入血[11]。這提示血清sOX40L水平升高可能與HSE發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。但也有研究對(duì)30例病毒性腦炎患兒血清sOX40L水平檢測(cè)，并未見其水平明顯升高[12]。本研究結(jié)論與此不符，可能與病例選取范圍及樣本量不同有關(guān)。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨MMSE評(píng)分降低，血清sOX40L水平呈升高趨勢(shì)，這主要因?yàn)镠SE發(fā)生、發(fā)展除與HSV對(duì)機(jī)體直接侵襲行為有關(guān)外，炎性細(xì)胞因子所誘發(fā)的炎性反應(yīng)亦在其中發(fā)揮重要作用。RODRGUEZ等[13]研究顯示，機(jī)體受病毒侵襲后免疫功能異常可激活變態(tài)反應(yīng)；同時(shí)病毒感染后，免疫系統(tǒng)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫性損害程度甚至超過(guò)病毒對(duì)機(jī)體的直接侵犯，而sOX40L過(guò)表達(dá)可致免疫防御過(guò)度，加重HSE患者認(rèn)知功能損害。

膽堿能系統(tǒng)分布整個(gè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，參與神經(jīng)傳遞及氧化應(yīng)激、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)等多個(gè)生理過(guò)程。目前臨床已證實(shí)，抗膽堿能藥物可通過(guò)減輕氧化應(yīng)激及延緩細(xì)胞凋亡而降低腦梗死后癡呆的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[14]。AchE是膽堿能系統(tǒng)重要調(diào)節(jié)物質(zhì)，其主要功能是終止神經(jīng)遞質(zhì)作用于突觸后膜，參與生物體內(nèi)神經(jīng)信號(hào)傳遞過(guò)程。一項(xiàng)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠血清中AchE水平明顯升高，隨治療進(jìn)行，血清AchE水平降低[15]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清AchE水平高于對(duì)照組(P<0.05)，且血清AchE水平越高的患者，認(rèn)知功能損害越嚴(yán)重。分析此機(jī)制可能是AchE可作為一種特異性神經(jīng)分泌蛋白，調(diào)節(jié)神經(jīng)元增殖及突起長(zhǎng)出，而HSE發(fā)病后隨HSV復(fù)制及機(jī)體免疫異常激活，中樞神經(jīng)細(xì)胞損傷加劇，AchE代償性生成以促進(jìn)損傷組織修復(fù)，但其主要功能是降解乙酰膽堿，終止神經(jīng)遞質(zhì)傳導(dǎo)過(guò)程，當(dāng)其過(guò)度生成時(shí)可直接造成膽堿能神經(jīng)末梢所釋放的乙酰膽堿被破壞，血清AchE水平越高，可能提示神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重，同時(shí)可加劇神經(jīng)傳導(dǎo)障礙，影響認(rèn)知功能[16]。因此，血清AchE水平或可為臨床早期HSE患者預(yù)后提供參考。但還有研究指出，中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染病情轉(zhuǎn)歸是多因素參與的結(jié)果，炎性反應(yīng)、并發(fā)其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病等均與HSE患者預(yù)后發(fā)生認(rèn)知功能障礙有關(guān)[17]。本研究采用多元線性逐步回歸校正白細(xì)胞介素6、C反應(yīng)蛋白水平后發(fā)現(xiàn)，AchE、sOX40L、癲癇發(fā)作與MMSE評(píng)分有關(guān)(P<0.05)，說(shuō)明AchE、sOX40L、癲癇發(fā)作是HSE患者發(fā)生認(rèn)知功能損害的主要因素。但不難看出癲癇發(fā)作仍無(wú)法直觀性評(píng)價(jià)患者認(rèn)知情況，且患者認(rèn)知功能受眾多因素影響，而血清AchE、sOX40L水平變化涉及免疫損害、神經(jīng)傳導(dǎo)等過(guò)程，或可滿足對(duì)認(rèn)知功能評(píng)估的需求，為臨床完善相關(guān)診療機(jī)制提供參考。本研究不足之處在于，樣本量較小，HSE患者血清AchE、sOX40L所測(cè)結(jié)果為病情穩(wěn)定期數(shù)據(jù)，而HSE確診時(shí)數(shù)據(jù)是否可作為此類患者預(yù)后預(yù)測(cè)的指標(biāo)，仍需后期繼續(xù)探討。

綜上所述，血清AchE、sOX40L水平升高是HSE患者認(rèn)知功能損害的相關(guān)因素，可能為臨床完善相關(guān)預(yù)警機(jī)制提供參考。