ADPN、MCP-1、miRNA-103在老年反復(fù)發(fā)作性尿路感染患者中的表達(dá)及臨床意義*

侯桂平，鄭雪君，李潤奇，崔 利，杜 玄，李 華，孫建宇

張家口市第二醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.骨外科；3.泌尿外科，河北張家口 075000

尿路感染屬于一種較為常見的泌尿系統(tǒng)疾病，多見于老年人，尿路感染的發(fā)生與尿道內(nèi)大量微生物繁殖相關(guān)，而反復(fù)發(fā)作性尿路感染的發(fā)生通常與首診不及時(shí)、首診療程不足等因素相關(guān)，在治療時(shí)較為棘手[1-2]。反復(fù)發(fā)作性尿路感染的發(fā)生與多種細(xì)胞因子表達(dá)異常相關(guān)，有研究發(fā)現(xiàn)，感染性疾病發(fā)生后，患者機(jī)體內(nèi)會(huì)出現(xiàn)不同程度的炎性反應(yīng)，脂聯(lián)素(ADPN)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)在臨床上多用于感染性疾病的診斷，可明確反映患者機(jī)體炎性反應(yīng)程度，有助于疾病的診斷[3]。有研究證實(shí)，尿路感染患者ADPN、MCP-1表達(dá)異常[4]，但二者是否參與此病的進(jìn)展尚不明確。miRNA-103可通過參與調(diào)控炎癥相關(guān)信號通路，誘發(fā)炎癥，與感染性疾病相關(guān)[5]。因此，本研究分析ADPN、MCP-1、miRNA-103在反復(fù)發(fā)作性尿路感染的表達(dá)情況，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年12月本院收治的112例首發(fā)老年尿路感染患者作為首發(fā)組，134例反復(fù)發(fā)作性尿路感染患者作為反復(fù)發(fā)作組，同期選取80例于本院體檢的健康者作為對照組。首發(fā)組、反復(fù)發(fā)作組均符合《尿路感染診斷與治療中國專家共識(shí)(2015版)》[6]《內(nèi)科學(xué)》[7]中對尿路感染及感染程度的診斷標(biāo)準(zhǔn)，伴隨發(fā)熱、尿不盡、腰痛、小腹痛等癥狀，尿白細(xì)胞陽性、尿細(xì)菌培養(yǎng)陽性。反復(fù)發(fā)作組在6個(gè)月內(nèi)發(fā)作≥2次或者1年內(nèi)發(fā)作≥3次。排除標(biāo)準(zhǔn)：因尿路畸形、結(jié)石、惡性腫瘤等器質(zhì)性疾病所致的尿路感染者；合并心、肝、腎等重要器官功能不全者；精神障礙、溝通障礙者；合并敗血癥等其他感染性疾病者。對照組無泌尿系統(tǒng)疾病史，身體健康。3組研究對象均自愿參與本研究，并簽署知情同意書，本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。3組研究對象一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 3組一般資料比較[n(%)或

1.2方法

1.2.1血清ADPN、MCP-1檢測 采集在首發(fā)組、反復(fù)發(fā)作組患者入組后次日及對照組體檢時(shí)清晨空腹靜脈血3 mL，以離心半徑5 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80 ℃保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定血清ADPN、MCP-1表達(dá)水平。ADPN ELISA試劑盒(貨號：SND-H851)由滁州仕諾達(dá)生物科技有限公司提供，MCP-1 ELISA試劑盒(貨號：IB-E10079)由江西艾博因生物科技有限公司提供。

1.2.2外周血單個(gè)核細(xì)胞miRNA-103檢測 采集首發(fā)組、反復(fù)發(fā)作組患者入組后次日及對照組體檢時(shí)清晨空腹靜脈血2 mL，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測定外周血單個(gè)核細(xì)胞miRNA-103表達(dá)水平。使用TRIzol試劑提取總RNA，同時(shí)使用Thermo NanoDrop2000超微量紫外分光光度計(jì)測定標(biāo)本RNA濃度，A260/A280比值范圍在1.8～2.0為純度較好。將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后行PCR，測定miRNA-103的相對表達(dá)水平。miR-103上游引物為5′-AGAGCCTGTGGTGTCCG-3′，下游引物為5′-CATCTTCAAAGCACTTCCCT-3′；內(nèi)參β-Actin上游引物為5′-GCGAGAAGATGACCCACCACC-3′，下游引物為5′-ATGTCACGCACGATTTCCTATTA-3′。采用Veriti7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀行PCR。反應(yīng)體系：上、下游引物各0.2 μL，cDNA模板1.0 μL，SYBR Green 10.0 μL，加蒸餾水至20.0 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 31 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt方法計(jì)算需要檢測的miRNA-103相對表達(dá)水平，每組數(shù)據(jù)各測3次，取平均值。

1.2.3預(yù)后隨訪 對反復(fù)發(fā)作組在本院接受疾病針對性抗菌藥物治療結(jié)束后行為期6個(gè)月的預(yù)后隨訪，其中6個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)為預(yù)后不良，6個(gè)月內(nèi)疾病控制良好無復(fù)發(fā)為預(yù)后良好，分析ADPN、MCP-1、miRNA-103在不同預(yù)后反復(fù)發(fā)作組患者中的表達(dá)差異。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較3組ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。(2)比較不同疾病嚴(yán)重程度反復(fù)發(fā)作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。輕度感染標(biāo)準(zhǔn)：臨床癥狀較輕，偶有膿尿、氣尿、血尿、細(xì)菌尿。中度感染標(biāo)準(zhǔn)：腰痛、尿急、尿頻、尿不盡、尿痛等臨床癥狀明顯，伴有少量膿尿、氣尿、血尿、細(xì)菌尿。重度感染標(biāo)準(zhǔn)：腰痛和尿痛嚴(yán)重，膿尿、氣尿、血尿和細(xì)菌尿量多。(3)比較不同預(yù)后反復(fù)發(fā)作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103水平。(4)分析ADPN、MCP-1、miRNA-103三者之間的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.13組ADPN、MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平比較 與對照組相比，首發(fā)組、反復(fù)發(fā)作組ADPN表達(dá)降低，MCP-1、miRNA-103表達(dá)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與首發(fā)組相比，反復(fù)發(fā)作組ADPN表達(dá)降低，MCP-1、miRNA-103表達(dá)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組ADPN、MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平比較

2.2不同疾病嚴(yán)重程度反復(fù)發(fā)作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平比較 反復(fù)發(fā)作組患者中，隨著患者疾病嚴(yán)重程度加重，ADPN表達(dá)水平逐漸降低，MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平逐漸升高，輕度、中度、重度感染反復(fù)發(fā)作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同疾病嚴(yán)重程度反復(fù)發(fā)作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平比較

2.3不同預(yù)后反復(fù)發(fā)作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平比較 與預(yù)后良好患者相比，預(yù)后不良患者ADPN表達(dá)水平降低，MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同預(yù)后反復(fù)發(fā)作組患者ADPN、MCP-1、miRNA-103表達(dá)水平比較

2.4ADPN、MCP-1、miRNA-103的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析顯示，ADPN與MCP-1呈負(fù)相關(guān)(r=-0.543,P=0.001)，ADPN與miRNA-103呈負(fù)相關(guān)(r=-0.552,P=0.001)，MCP-1與miRNA-103呈正相關(guān)(r=0.649,P=0.001)。

2.5ADPN、MCP-1、miRNA-103對反復(fù)發(fā)作性尿路感染的診斷價(jià)值 ROC曲線顯示，ADPN、MCP-1、miRNA-103三項(xiàng)聯(lián)合對反復(fù)發(fā)作性尿路感染的診斷價(jià)值較高，AUC為0.907(95%CI：0.797～0.989，P<0.05)。見表5、圖1。

表5 ADPN、MCP-1、miRNA-103對反復(fù)發(fā)作性尿路感染的診斷價(jià)值

圖1 ADPN、MCP-1、miRNA-103診斷反復(fù)發(fā)作性尿路感染的ROC曲線

3 討 論

在細(xì)菌感染性疾病中，以尿路感染最為常見。有研究認(rèn)為，尿路感染為由病原微生物引起的尿路炎癥性疾病，目前臨床上多采用尿細(xì)菌培養(yǎng)作為尿路感染的重要標(biāo)準(zhǔn)，但該方法耗時(shí)較長，敏感性差，因此尋找診斷靈敏度高、方便快捷的檢測指標(biāo)對改善患者預(yù)后具有重要意義[8-9]。

尿路感染多伴隨著局部炎性反應(yīng)表現(xiàn)，ADPN屬于一種由脂肪細(xì)胞特異性分泌的生物活性蛋白，其在炎性反應(yīng)、血糖代謝異常、機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)及動(dòng)脈粥樣硬化過程中發(fā)揮重要作用[10]。有研究顯示，在感染性疾病中，ADPN一方面抑制腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、γ-干擾素(IFN-γ)的合成和釋放，另一方面促進(jìn)樹突狀細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞的抗炎因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)、IL-1R拮抗劑(IL-1RA)表達(dá)，修復(fù)內(nèi)皮損傷，發(fā)揮抗炎作用[11-13]。MCP-1屬于一種趨化因子，具有激活和趨化單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的作用，在機(jī)體處于正常狀態(tài)下使其不表達(dá)或者表達(dá)較低，但在機(jī)體發(fā)生炎性反應(yīng)時(shí)表達(dá)異常升高[14-15]。有研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α、IFN-γ等細(xì)胞因子均會(huì)誘導(dǎo)MCP-1的表達(dá)，在多種感染性疾病中均發(fā)現(xiàn)了MCP-1的存在，其水平與機(jī)體炎性反應(yīng)相關(guān)[16-17]。臨床上關(guān)于ADPN、MCP-1與尿路感染的關(guān)系的研究較少。本研究結(jié)果顯示，在反復(fù)發(fā)作性尿路感染中ADPN表達(dá)降低，MCP-1升高，且與患者疾病嚴(yán)重程度、預(yù)后密切相關(guān)。當(dāng)機(jī)體受到外界病原菌侵襲后，ADPN、MCP-1可能經(jīng)介導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞合成分泌炎癥相關(guān)因子，誘發(fā)機(jī)體局部的炎癥級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致尿路感染的發(fā)生。本研究結(jié)果與樓一峰等[4]的研究結(jié)果一致。

miRNA屬于一類大小約22 個(gè)核苷酸的非編碼單鏈小分子，參與多個(gè)生理過程，包括細(xì)胞增殖、凋亡、器官發(fā)育形成等，近年來研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在多種疾病中呈特異性表達(dá)，具有較高的特異性，屬于一種潛在的新型生物標(biāo)志物[18]。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-103廣泛存在于多種組織中，經(jīng)過與靶基因3′非翻譯區(qū)(3′-UTR)特異性結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控靶基因的表達(dá)，在感染性疾病中表達(dá)升高[19]。LI等[20]研究認(rèn)為，miRNA-103可能經(jīng)調(diào)控PI3K/AKT信號通路而介導(dǎo)機(jī)體炎性反應(yīng)最終誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。有研究顯示，前列腺增生癥術(shù)后尿路感染患者miRNA-103表達(dá)升高，但并未明確其具體機(jī)制[21]。鑒于此，本研究分析miRNA-103與老年反復(fù)發(fā)作性尿路感染的關(guān)系，結(jié)果顯示，老年反復(fù)發(fā)作性尿路感染患者的miRNA-103表達(dá)升高，且miRNA-103水平與患者疾病嚴(yán)重程度、預(yù)后密切相關(guān)。miRNA-103可能促進(jìn)炎癥因子的合成和分泌，介導(dǎo)炎性反應(yīng)，參與反復(fù)發(fā)作性尿路感染的發(fā)生、發(fā)展。

本研究中，經(jīng)ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，ADPN≥10.00 μg/mL、MCP-1≥65.98 pg/mL、miRNA-103≥0.82的老年患者更容易發(fā)生反復(fù)發(fā)作性尿路感染。另外，本研究結(jié)果顯示，ADPN與MCP-1呈負(fù)相關(guān)(r=-0.543,P=0.001)，ADPN與miRNA-103呈負(fù)相關(guān)(r=-0.552,P=0.001)，MCP-1與miRNA-103呈正相關(guān)(r=0.649,P=0.001)。

綜上所述，老年反復(fù)發(fā)作性尿路感染患者ADPN表達(dá)降低，MCP-1、miRNA-103表達(dá)升高，且ADPN、MCP-1、miRNA-103水平與患者疾病嚴(yán)重程度、預(yù)后關(guān)系密切，三者聯(lián)合檢測對反復(fù)發(fā)作性尿路感染有較高的診斷價(jià)值。