鞘內(nèi)注射干擾素調(diào)節(jié)因子8小干擾RNA對(duì)術(shù)后持續(xù)性疼痛大鼠痛閾及脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響*

徐昌順， 林 春， 蔡振宇

(1. 廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院疼痛科， 廈門 361001； 2. 福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 腦老化與神經(jīng)變性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 福建醫(yī)科大學(xué)疼痛研究所， 福州 350108)

外科手術(shù)引起的慢性疼痛仍是一個(gè)備受關(guān)注的臨床問(wèn)題。術(shù)后慢性疼痛的發(fā)生率因人而異，據(jù)報(bào)道，多達(dá)20%～56%的患者在手術(shù)后出現(xiàn)慢性疼痛[1]。手術(shù)后慢性疼痛，也稱為術(shù)后持續(xù)性疼痛(persistent postsurgical pain，PPsP)，即國(guó)際疼痛研究協(xié)會(huì)(International Society for the Study of Pain，IASP)定義的手術(shù)及其鄰近部位持續(xù)3個(gè)月以上乃至數(shù)年的痛覺(jué)過(guò)敏[2]。近來(lái)研究表明[3]，在手術(shù)后急性疼痛持續(xù)化或轉(zhuǎn)為慢性痛的病理生理進(jìn)程中，小膠質(zhì)細(xì)胞的激活被認(rèn)為是中樞敏感化的“發(fā)動(dòng)機(jī)”，與術(shù)后持續(xù)性疼痛的產(chǎn)生及維持有關(guān)[4]。干擾素調(diào)節(jié)因子8(interferon regulatory factor 8，IRF8)是IRF轉(zhuǎn)錄因子家族的成員。已有文獻(xiàn)證實(shí)IRF8在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的小膠質(zhì)細(xì)胞中有特異性表達(dá)，是小膠質(zhì)細(xì)胞活化成反應(yīng)性表型過(guò)程中的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子[5]。為此，本研究擬通過(guò)皮膚/肌肉切開和牽拉(skin/muscle incision and retraction，SMIR)建立術(shù)后持續(xù)性疼痛(PPsP)大鼠模型，探究鞘內(nèi)注射IRF8 SiRNA對(duì)SMIR誘導(dǎo)的PPsP大鼠痛閾改變及脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響，旨在為PPsP的臨床治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)雄性SD大鼠，體重180～250 g，購(gòu)自福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(閩)2016-0007]。動(dòng)物飼養(yǎng)室有良好的通風(fēng)和空氣過(guò)濾系統(tǒng)，大鼠于自然光下飼養(yǎng)，室溫維持在(25±1)℃左右，濕度55%左右，自由攝食水。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備

Von Frey纖維絲(Aesthesio，USA)；微型撐開器(深圳瑞沃德生命科技有限公司)；EL-800多功能酶標(biāo)儀(BIO-TEK，USA)； Mini PROTEAN轉(zhuǎn)模系統(tǒng)(BIO-RAD，USA)；凝膠成像分析系統(tǒng)(上海培清)；流式細(xì)胞儀LSRFortessaX-20(美國(guó)BD公司)；解剖顯微鏡(日本尼康)；透射電子顯微鏡(美國(guó)FEI公司)。

1.3 主要藥品與試劑

鹽酸利多卡因注射液(上海禾豐制藥有限公司)； IRF8 SiRNA(英國(guó)Cohesionbio公司)；Anti-GAPDH(武漢ABclonal生物科技有限公司)；Anti-CD45(PE-Cyanine7，美國(guó)Biolegen)；Anti-CD11b/c(PE，美國(guó)Invitrogen)；Anti-Iba1、Anti-CX3CR1(英國(guó)Abcam)；Alexa Fluor 647標(biāo)記山羊抗兔IgG、DAPI染色液、DEPC水、大鼠IgG、RIPA 裂解液、BCA 試劑盒(碧云天生物技術(shù)有限公司)；MinuteTM新鮮組織單細(xì)胞懸液分離試劑盒(美國(guó)Invent公司)。

1.4 模型建立與鞘內(nèi)給藥

雄性SD大鼠120只按隨機(jī)數(shù)字量表法分為：假手術(shù)組(Sham組，SH，n=12)，模型組(SMIR組，SM，n=48)，溶媒組(SMIR +DEPC組，SD，n=12)和IRF8沉默組(SMIR +irf8 SiRNA組，SS，n=48)。其中，模型組大鼠麻醉起效后于后腿中部隱靜脈內(nèi)側(cè)作1.5～2 cm的縱行皮膚切口顯露大腿部肌肉，再于深面股薄肌表面做一長(zhǎng)約7～10 mm的手術(shù)切口，牽拉大腿皮膚和淺層肌肉至2 cm，持續(xù)牽拉1 h，術(shù)畢逐層縫合肌肉和皮膚[6]；而假手術(shù)組僅切開，不做牽拉，余處理與模型組相同；IRF8沉默組實(shí)施鞘內(nèi)插管操作[7]，并于鞘內(nèi)插管后一周建立PPsP大鼠模型，在建模后第5、6日分別通過(guò)鞘內(nèi)導(dǎo)管給予IRF8 SiRNA溶液20 μl(溶于DEPC水中，150 pmol)，溶媒組給予同等劑量的DEPC水。

1.5 疼痛行為學(xué)評(píng)估

采用50%機(jī)械刺激縮爪反應(yīng)閾值(paw withdrawal threshol， PWT)反映大鼠痛閾改變情況。實(shí)驗(yàn)大鼠建模前均實(shí)施PWT測(cè)定作為基礎(chǔ)值，并于建模后 1、3、7、12、22、33 d重復(fù)實(shí)施疼痛行為學(xué)測(cè)量；在鞘內(nèi)置管各組大鼠，還需測(cè)量置管前PWT基礎(chǔ)值。以 “up-and-down” 法測(cè)定推算其50%PWT[8,9]。具體為：Von Frey纖維絲垂直刺激大鼠后足掌部，避開爪墊，持續(xù)時(shí)間≤4 s，大鼠出現(xiàn)抬足或舔足行為視為陽(yáng)性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。測(cè)定首先從2 g開始，當(dāng)該力度刺激不能引起陽(yáng)性反應(yīng)，則給予相鄰大一級(jí)力度刺激；如出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)則給予相鄰小一級(jí)力度刺激，如此連續(xù)進(jìn)行，直至出現(xiàn)陰性反應(yīng)和陽(yáng)性反應(yīng)的騎跨值時(shí)，再連續(xù)測(cè)定4次。最大力度為15 g，大于此值時(shí)記為15 g。每次刺激間隔30 s，每次測(cè)量為同一后足并且纖維絲彎曲弧度相同，確保每次施加的刺激相同。

1.6 大鼠隱神經(jīng)取材及電鏡標(biāo)本制備

建模后第12日，取假手術(shù)組和模型組大鼠各3只，麻醉后，于解剖顯微鏡下截取術(shù)野隱神經(jīng)，保存于電鏡固定液中前固定，再經(jīng)漂洗、后固定、梯度脫水、包埋、修整、切片后進(jìn)行醋酸鈾、檸檬酸鉛染色，制成電鏡標(biāo)本，于TECNAI型透射電鏡下觀察隱神經(jīng)纖維超微結(jié)構(gòu)改變情況。

1.7 Western blot檢測(cè)Iba1蛋白的相對(duì)表達(dá)量

于建模后第12日，疼痛行為學(xué)測(cè)量結(jié)束后，每組隨機(jī)取6只大鼠脊髓L4-6節(jié)段背角組織，稱重后加入RIPA 裂解液充分裂解后勻漿，離心后取上清液，BCA試劑盒測(cè)定總蛋白含量。制備分離膠和濃縮膠，蛋白上樣，凝膠電泳至溴酚藍(lán)跑出分離膠后，將蛋白轉(zhuǎn)移至 PVDF 膜上，5%脫脂奶粉室溫下封閉2 h，根據(jù)目的蛋白分子量裁剪條帶，分別加入稀釋后的兔抗鼠一抗(Iba1,1∶1 000；GAPDH，1∶ 5 000)， 4℃孵育過(guò)夜。次日用 TBST液洗滌條帶 3 次，每次15 min，加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗(1∶2 000)室溫下孵育2 h，TBST 液洗 3 次，每次 15 min，之后進(jìn)行ECL顯影。應(yīng)用 Image J 軟件分析條帶灰度值，根據(jù)目的蛋白和內(nèi)參蛋白(GAPDH)對(duì)應(yīng)灰度值的比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況

本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)模型組及鞘內(nèi)給藥組脊髓背角中小膠質(zhì)細(xì)胞的活化情況。取各時(shí)點(diǎn)行為學(xué)測(cè)試后大鼠6只，麻醉后經(jīng)心灌注取術(shù)側(cè)脊髓背角L4-6節(jié)段，按照MinuteTM新鮮組織單細(xì)胞懸液分離試劑盒說(shuō)明書步驟，制備脊髓組織單細(xì)胞懸液并細(xì)胞計(jì)數(shù)。每管取1 ×106cells/100 μl,加大鼠lgG封閉，再依次加入一抗(CD45， 0.25 μg/106； CD11b/c，0.125 μg/106；CX3CR1，1∶10 000)及Alexa Fluor 647標(biāo)記山羊抗兔IgG的二抗(1∶500)，4℃，避光翻滾混勻各30 min，重懸后再轉(zhuǎn)移至流式上樣管后加DAPI 染色液上機(jī)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用 Flowjo-V10軟件處理分析并繪制相關(guān)圖表。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 鞘內(nèi)注射IRF8 SiRNA對(duì)大鼠痛閾的影響

結(jié)果表明，建模前，SM組與SH組大鼠基礎(chǔ)PWT無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與術(shù)前基礎(chǔ)值相比， SM組術(shù)后第1日術(shù)側(cè)后足PWT開始下降，持續(xù)到術(shù)后第22日(P<0.05，P<0.01)，并在術(shù)后第33日恢復(fù)至術(shù)前水平；與SH組相比，SM組術(shù)側(cè)后足PWT在術(shù)后第1日，第3日，第7日，第12日，第22日均顯著下降(P<0.05，P<0.01)，提示SMIR能夠引起術(shù)側(cè)顯著且持久的機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏，這與之前的研究結(jié)果相似[10]；與SD組相比，SS組術(shù)側(cè)后足PWT在術(shù)后第7日，第12日，第22日均顯著增加(P<0.05，P<0.01)；但SS組術(shù)側(cè)后足痛閾恢復(fù)程度上仍未達(dá)到正常水平，與SH組相比，建模后第7日(P<0.01)，第12日(P<0.01)，第22日(P< 0.05，表1)。

Tab. 1 Changes of pain threshold induced by SMIR in each group (g,

2.2 PPsP大鼠隱神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)改變情況

通過(guò)比較SH組與SM組大鼠術(shù)后第12日術(shù)野隱神經(jīng)電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn)：兩組大鼠隱神經(jīng)纖維被厚的髓鞘包繞，髓鞘板層致密、完整，且邊界清晰，未出現(xiàn)神經(jīng)受損時(shí)的脫髓鞘反應(yīng)。髓鞘平均厚度在SH組為(377.0 3±69.60)nm，SM組為(369.50±73.26) nm，兩組間相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖1)，說(shuō)明SMIR并未造成外周神經(jīng)損傷。

Fig. 1 Transmission electron micrograph of the saphenous nerve fiber on the 12th day after SMIR

2.3 鞘內(nèi)注射IRF8 SiRNA對(duì)脊髓背角Iba-1表達(dá)的影響

建模后第12日，脊髓背角Iba-1蛋白相對(duì)表達(dá)量(統(tǒng)一規(guī)化于GAPDH)：SH組為 0.283± 0.058，SM組為 1.101±0.073，與SH組相比，SM組明顯上調(diào)(P<0.01，圖2)；鞘內(nèi)給予IRF8 SiRNA后，SD組為 0.906±0.067，SS組為 0.609±0.074，與SD組相比，SS組Iba-1表達(dá)受到抑制(P<0.05，圖2)，但與SH組相比，SS組Iba-1蛋白的表達(dá)亦上調(diào)(P< 0.05，圖2)；而SM組與SD組之間，Iba-1蛋白的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖2)。

Fig. 2 Expressions of Iba-1 in spinal dorsal horn in each group

2.4 鞘內(nèi)注射IRF8 SiRNA對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

在SM組， PPsP大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化從術(shù)后第1日即開始增加，至第3日達(dá)到高峰，于第7、12日繼續(xù)維持在高水平，直至第22日開始恢復(fù)，并于第33日恢復(fù)至術(shù)前水平(圖3)；與D0相比，小膠質(zhì)細(xì)胞活化比率在術(shù)后第3日、第7日、第12日、第22日均顯著增加(P<0.05，P<0.01，表2)。鞘內(nèi)給藥前，SS組大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化改變模式與SM組基本一致，與建模前相比，SS組術(shù)后第3日達(dá)到高峰(P<0.01)，而在各時(shí)點(diǎn)兩組間相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；鞘內(nèi)給藥后，SS組脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化比率明顯下降，并維持在低水平至術(shù)后第33日，與SM組相比，SS組術(shù)后第7日、第12日均顯著降低(P<0.01，表2，圖3)。

Fig. 3 Flow cytometry scatter diagram of representing activated microglia of spinal dorsal horn at different time points

Tab. 2 Effects of the activation of microglia in spinal dorsal horn by intrathecal administration of IRF8 SiRNA in PPsP rats n=6)

3 討論

術(shù)后持續(xù)性疼痛，被認(rèn)為是影響患者術(shù)后康復(fù)和生活質(zhì)量的重大健康問(wèn)題，具有重要的法律和醫(yī)療經(jīng)濟(jì)后果。關(guān)于術(shù)后慢性疼痛研究的動(dòng)物模型， Flatters等[6]率先提出了大鼠皮膚肌肉切口牽拉(SMIR)的動(dòng)物模型，很好的模擬了手術(shù)過(guò)程中切口牽拉的外科行為。在本項(xiàng)研究中，我們通過(guò)SMIR誘導(dǎo)了大鼠術(shù)后長(zhǎng)達(dá)30 d的痛覺(jué)過(guò)敏，并在術(shù)后第33日左右恢復(fù)至術(shù)前水平，其術(shù)后疼痛反應(yīng)模式與文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致[10]。并且先前研究還指出，SMIR術(shù)后對(duì)隱神經(jīng)取材切片，發(fā)現(xiàn)各組隱神經(jīng)有髓鞘纖維數(shù)量之間無(wú)顯著差異[6]，同樣地，本研究中我們選取大鼠SMIR后第12日的術(shù)野隱神經(jīng)纖維進(jìn)行透射電鏡觀察結(jié)果也顯示，接受皮膚肌肉切口牽拉的大鼠術(shù)野外周神經(jīng)并未出現(xiàn)神經(jīng)纖維受損時(shí)的脫髓鞘反應(yīng)，電鏡下隱神經(jīng)纖維被厚的髓鞘包繞，髓鞘板層致密、完整，邊界清晰，進(jìn)一步證實(shí)SMIR誘導(dǎo)的PPsP為非神經(jīng)損傷性慢性疼痛。因此，可以認(rèn)為SMIR手術(shù)在神經(jīng)形態(tài)學(xué)層面對(duì)神經(jīng)纖維未產(chǎn)生顯著傷害，它所誘導(dǎo)產(chǎn)生的持續(xù)性術(shù)后痛可能是因?yàn)槌掷m(xù)的物理性牽拉，致使神經(jīng)元內(nèi)發(fā)生分子生物學(xué)層面的改變。故SMIR大鼠模型能夠更好的模擬持續(xù)性術(shù)后疼痛發(fā)生發(fā)展的條件，為研究術(shù)后持續(xù)性痛的分子生物學(xué)機(jī)制提供一個(gè)很好的平臺(tái)。

先前報(bào)道，小膠質(zhì)細(xì)胞在SMIR誘導(dǎo)的PPsP大鼠脊髓背角被活化成反應(yīng)性表型，參與術(shù)后持續(xù)性疼痛的發(fā)生發(fā)展[4]。小膠質(zhì)細(xì)胞作為CNS的常駐免疫細(xì)胞，時(shí)刻監(jiān)視中樞局部微環(huán)境的變化，當(dāng)神經(jīng)受損或促炎細(xì)胞因子釋放增加時(shí)，小膠質(zhì)細(xì)胞迅速被活化增殖，在CNS中提供免疫防御的第一線。本實(shí)驗(yàn)首先采用Western blot檢測(cè)脊髓背角Iba-1蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果表明SMIR促進(jìn) PPsP大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞增殖；其次，再采用不同的小膠質(zhì)細(xì)胞表面分子標(biāo)記，將脊髓背角活化的小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行分選并計(jì)算其所占目標(biāo)細(xì)胞陽(yáng)性百分比。在細(xì)胞表面分子標(biāo)記的選擇上，本實(shí)驗(yàn)選擇CD45、CD11b/c和CX3CR1三種分子表面標(biāo)記物。CD45主要系巨噬-單核細(xì)胞來(lái)源的分子表面標(biāo)記，并由所有造血細(xì)胞表達(dá)[11]，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞完全來(lái)自卵黃囊的巨噬細(xì)胞，所以CD45+標(biāo)記了所有巨噬-單核系來(lái)源細(xì)胞；CD11b/c(OX-42)在靜息及激活的小膠質(zhì)細(xì)胞表面均有表達(dá)，是已知的小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物[12]；CX3CR1也稱為fractalkine受體或GPR13，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，CX3CR1僅在小膠質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)，并作為管家基因參與小膠質(zhì)細(xì)胞的活化及其向突觸神經(jīng)元的遷移[13]。因此，本實(shí)驗(yàn)采用以上三種分子表面標(biāo)記，參照Toledano等[14]介紹的流式細(xì)胞檢測(cè)設(shè)門邏輯，即可標(biāo)記出脊髓背角活化的小膠質(zhì)細(xì)胞，即CD45+細(xì)胞中CD11b/c+和CX3CR1+雙陽(yáng)性細(xì)胞群界定為活化的小膠質(zhì)細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，小膠質(zhì)細(xì)胞的激活于SMIR術(shù)后第3日上調(diào)，至第7日達(dá)高峰并維持至術(shù)后第22日，呈現(xiàn)時(shí)間差異性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與早期的研究一致[4]，但同時(shí)又補(bǔ)充了SMIR誘導(dǎo)的PPsP大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞激活的時(shí)間表達(dá)動(dòng)力曲線。

IRF8作為干擾素調(diào)節(jié)因子家族成員(IRF1-9)，在免疫細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)的分化成熟中起著重要的調(diào)控作用[15]。近來(lái)有研究表明，IRF8在外周神經(jīng)損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛中有明顯上調(diào)，并被鑒定為小膠質(zhì)細(xì)胞活化成反應(yīng)性表型過(guò)程中的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子，參與神經(jīng)病理性疼痛的形成[5]。劉榮國(guó)等[16]研究指出, 慢性坐骨神經(jīng)縮窄損傷(chronic constriction injury of sciaticnerve, CCI)所誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性痛模型大鼠，鞘內(nèi)注射IRF8反義寡核苷酸可抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和緩解痛敏行為；反復(fù)冷刺激(repeated cold stress，RCS)可誘導(dǎo)嚙齒類動(dòng)物產(chǎn)生觸覺(jué)異常性疼痛，并激活小鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞，而irf8敲除小鼠未能顯示RCS誘導(dǎo)的PWT降低[17]，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果也顯示，鞘內(nèi)注射IRF8 SiRNA沉默irf8后，SMIR誘導(dǎo)的PPsP大鼠痛閾改變模式發(fā)生改變，表現(xiàn)為PPsP大鼠PWT的降低被逆轉(zhuǎn)，提示鞘內(nèi)給予IRF8 SiRNA可逆轉(zhuǎn)SMIR誘導(dǎo)的PPsP大鼠痛覺(jué)過(guò)敏，值得注意的是，通過(guò)給予IRF8 SiRNA抑制irf8的生物學(xué)功能，鞘內(nèi)給藥組大鼠機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏雖有明顯改善，但其PWT仍無(wú)法完全恢復(fù)到術(shù)前水平。因此，除了IRF8介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化參與，似乎還有其他機(jī)制也參與了SMIR誘導(dǎo)產(chǎn)生的機(jī)械痛敏。例如，已有文獻(xiàn)報(bào)道，SMIR可誘導(dǎo)脊髓合成并釋放P物質(zhì)來(lái)介導(dǎo)中樞敏化[18]。因此，SMIR誘導(dǎo)機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏可能還存在其他機(jī)制，還需要進(jìn)一步探索。本研究的結(jié)果還發(fā)現(xiàn)irf8沉默后，SMIR誘導(dǎo)的PPsP大鼠脊髓背角的小膠質(zhì)細(xì)胞Iba-1蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，并且小膠質(zhì)細(xì)胞的活化也呈抑制狀態(tài)，irf8未沉默前，SMIR誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化不變，表現(xiàn)為SMIR術(shù)后第3日，脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞的活化達(dá)到高峰，隨后于SMIR后第5日、第6日鞘內(nèi)施于IRF8 SiRNA，小膠質(zhì)細(xì)胞的活化比例也隨之降低，但自始至終其活化比例均高于術(shù)前水平，說(shuō)明除了IRF8調(diào)控SMIR誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活，也可能存在有其他機(jī)制，值得進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)SMIR誘導(dǎo)的PPsP大鼠顯著且持續(xù)的機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏為非明顯的外周神經(jīng)損傷所致，可能是基于脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化所介導(dǎo)；并且鞘內(nèi)給予小膠質(zhì)細(xì)胞活化的特異性調(diào)節(jié)基因小干擾RNA可抑制脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，并逆轉(zhuǎn)SMIR誘導(dǎo)的痛覺(jué)過(guò)敏。我們的研究加深了對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞參與術(shù)后持續(xù)性疼痛作用機(jī)制研究的認(rèn)識(shí)，這可望為術(shù)后持續(xù)性疼痛的預(yù)防和治療提供新思路。